CC BY
45
№ 6 (40)
А, UNIVERSUM: /YV\ медицина и фарг
ФАРМАКОЛОГИЯ
июнь, 2017 г.
МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ
КЛИНИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ХЕЛИКОБАКТЕРИОЗА: ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИТЕЛ КЛАССА IG G К АНТИГЕНУ H. PYLORI В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ПАЦИЕНТОВ РАЗЛИЧНЫХ ВОЗРАСТНЫХ ГРУПП
Тилинина Зоя Петровна
врач клинической лабораторной диагностики клинико-диагностической лаборатории
ОГБУЗ «Городская детская больница г. Белгорода» 308014, РФ, г. Белгород, улица Садовая, дом 1А E-mail: tilinina. zoja@yandex. ru
LABORATORY DIAGNOSTICS OF HELICOBACTERIOSIS:
THE STUDY OF IG G ANTIBODIES TO H. PYLORI ANTIGENS IN THE BLOOD SERUM OF PATIENTS OF DIFFERENT AGE GROUPS
Zoya Tilinina
the doctor kliniko-diagnostic laboratory Belgorod City Children's Hospital, Regional State Public-Financed Healthcare Institution 308014, Russia, Belgorod, Sadovaya str. 1A
АННОТАЦИЯ
В статье рассматривается метод твердофазного иммуноферментного анализа для качественного определения концентрации антител класса IgG к антигенам Helicobacter pylori в сыворотке крови пациентов различных возрастных групп для диагностики инфицирования H. pylori и выявления зависимости между возрастом пациента и инфицированием. Установлено, что возраст существенно влияет на показатели исследования. Выявленные возрастные особенности содержания антител IgG к антигену H. pylori в сыворотке крови должны приниматься во внимание при интерпретации результатов лабораторных анализов. Иммуноферментный анализ на выявление специфических IgG антител является минимально инвазивным, быстрым, высокочувствительным и информативным методом диагностики инфицирования H. pylori.
ABSTRACT
The article considers a method of enzyme-linked immunosorbent assay for the qualitative detection of the concentration of Ig G class antibodies to Helicobacter pylori antigens in the blood serum of patients of different age groups for diagnostics of H. pylori infection and revealing the relationship between the patient's age and infection. It has been established that the age significantly affects the indicators of the study. The revealed age peculiarities of Ig G antibodies to H. pylori antigen in serum should be taken into account when interpreting the results of laboratory tests. Immunoenzyme analysis for specific Ig G antibodies detection is a minimally invasive, fast, highly sensitive and informative method of H. pylori infection diagnostics.
Ключевые слова: Антиген Н. pylori, антитела класса IgG, диагностика, инфекция, иммуноферментный анализ.
Keywords: antigen Н. pylori, Ig G antibodies, diagnostics, infection, enzyme-linked immunosorbent assay.
Введение. Хеликобактериоз является наиболее распространенной хронической бактериальной инфекцией человека и основной причиной развития хронической гастродуоденальной патологии (ХГДП) у пациентов различных возрастных групп [3, 5, 7, 8,
9, 11]. Наличие Н. pylori считается важнейшим этио-патогенетическим фактором развития хронического гастрита, ассоциированного с Н. pylori, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, га-стродуоденита, а также железодефицитной анемии и
Библиографическое описание: Тилинина З.П. Лабораторная диагностика хеликобактериоза: исследование антител класса Ig G к антигену H. pylori в сыворотке крови пациентов различных возрастных групп // Universum: Медицина и фармакология: электрон. научн. журн. 2017. № 6(40). URL: http://7universum.com/ru/med/archive/item/4889
№ 6 (40)
тромбоцитопенической пурпуры [1, 3, 5, 7, 8, 9, 11, 12]. Исследователями многих стран показана взаимосвязь степени инфицирования населения от общего экономического развития страны, уровня жизни и образования, а также санитарно-гигиенических условий проживания [7]. Существует два варианта распространенности H. pylori. Согласно первому, характерному в основном для развивающихся стран (Нигерия, Чили, Бразилия и др.), H. pylori выявляется с высокой частотой уже в детском возрасте (до 90%), а к 30-ти годам инфицировано почти все население. В развитых странах Западной Европы, в США и Японии идет постепенное нарастание инфицированности с возрастом человека: 5-15 % у детей и 20-65% у взрослых [6, 7, 10].
Установлено, что в различных регионах России H. pylori выявляется у 73-91% взрослых [10]. Результаты эпидемиологических исследований распространенности HP-инфекции среди детей и подростков в Сибири говорят о том, что заражение Н. pylori начинается в раннем детском возрасте, достигая 33,3% к 10 годам и 56,3% - к 17-летнему возрасту. По данным других авторов, в Санкт-Петербурге выявлено 48% инфицированных в возрасте 15-19 лет, в Москве у детей, проживающих в районах высокой антропогенной загрязненности, распространенность Н. pylori составила 69% [9, 11]. Такая высокая степень обсеме-ненности у детей может объясняться тем, что исследования проводились (в силу их дороговизны и сложности) в основном у детей с различными гастроэнтерологическими жалобами. При обследовании детей независимо от наличия диспепсии или болей в животе число инфицированных значительно меньше [10, 11]. Тем не менее частота выявления Н. pylori среди российских подростков существенно выше, чем в развитых странах. Например, доля серо-позитивных детей в возрасте 10-15 лет составляет 6,6% в Новой Зеландии, 11% в Великобритании, 13,4% в Италии, 16,1% в Швеции и 17,9% в США. В развивающихся странах ситуация иная: в Албании инфицированы 96% подростков, в Индии - 84%, в Китае - 67%, в Чехии - 63%, в Мексике - 55,3% [9].
Несмотря на высокий процент инфицирования населения H. pylori, подавляющее большинство бактерионосителей (более 70%) не имеют клинических проявлений на момент диагностики, но представляет собой группу риска, в которой с течением времени развиваются различные HP- ассоциированные га-стродуоденальные заболевания [6, 10, 11].
Результаты многочисленных исследований говорят о том, что инфекция Н. pylori является причиной наиболее тяжелых форм гастродуоденальной патологии у детей [9, 10, 11]. Наиболее часто Н. pylori обнаруживается при эрозивном (86%) и гипертрофическом (82%) гастритах, несколько реже при других формах гастрита: субатрофическом (60%), атрофиче-ском (58%) и поверхностном (49%). При язвенной болезни двенадцатиперстной кишки Н. pylori выделяют чаще (91-100%), чем при язвенной болезни желудка (70-100%) [9].
июнь, 2017 г.
Таким образом, инфекция Н. pylori имеет глобальное значение и широко распространена среди детской популяции во всем мире [5, 9].
В число первоочередной задачи системы здравоохранения входит проведение скрининговых эпидемиологических исследований с целью установления инфицированности Н. pylori населения разных возрастных и социальных групп в различных регионах Российской Федерации, частоты перехода инфици-рованности в манифестные формы, что позволит определить медико-социальное и экономическое значение хеликобактериоза для нашей страны [4].
Диагностика хеликобактер-ассоциированных заболеваний осуществляется с помощью многих лабо-раторно-клинических методов исследования, но ни один из них не может быть использован как полностью надежный [12]. Исследования, требующие активного сотрудничества ребенка, такие как УДТ, являются более трудными для выполнения у младенцев, детей ясельного возраста или физически неполноценных детей. С целью повышения точности диагностики H. pylori-инфекции следует использовать комбинацию различных методов. Оптимальное сочетание методов для достоверного выявления Н. pylori остается предметом обсуждения.
Наиболее распространенным серологическим методом диагностики инфекции H. pylori является метод иммуноферментного анализа, который позволяет обнаружить специфические антитела классов Ig А, IgM и чаще всего Ig G к антигенам H. pylori в сыворотке крови пациентов. Он наиболее информативен и незаменим для выявления инфицирования больших групп населения при проведении эпидемиологических обследований или в случае установленной болезни для первичной диагностики инфекции H. pylori, так как при высокой чувствительности и специфичности является минимально инвазивным и коммерчески доступным тестом [2, 5, 6, 12].
Но иммуноферментный анализ не может использоваться самостоятельно для выполнения диагностики H. pylori - инфекции или контролировать успех терапии, что обусловлено длительной циркуляцией специфических антител даже после полной ликвидации инфекционного процесса в организме. У детей его ценность ограничена также из-за возрастных особенностей и слабости иммунного ответа [12].
Чувствительность большинства исследований значительно ниже при использовании у детей, чем при использовании у взрослых в одном географическом регионе. Использование пороговых значений, полученных в ходе проверки исследований у взрослых, приводит к неспособности обнаружить большую часть инфицированных детей, особенно детей в возрасте до 6-8 лет. A. M. R. Oliveira и соавт. обнаружили низкую чувствительность у 44% детей в возрасте 2-6 лет. Чувствительность увеличивалась до 77% у детей в возрасте 7-11 лет и до 93% у подростков, что сопоставимо с результатами у взрослых [12].
Основной вопрос для всех исследований, проведенных у детей, - зависит ли точность примененного метода от возраста ребенка. Необходимо учитывать данные в различных возрастных группах: младенцы,
А, UNIVERSUM: /уу\ медицина и фарг
ФАРМАКОЛОГИЯ
№ 6 (40)
малыши, дошкольный и школьный возраст, подростки. Большинство подтвержденных исследований у детей проводились только на нескольких H. pylori -инфицированных детях и у детей ясельного возраста. Таким образом, информация в отношении возрастной чувствительности для выявления антител класса Ig G к H. pylori ограничена [12].
Цель исследования. Оценка частоты инфицирования Helicobacter pylori детей различных возрастных групп и взрослых при различных вариантах ХГДП для определения зависимости между возрастом пациента и инфицированием на основании выявления уровня антител Ig G к антигенам H. pylori в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа.
Материалы и методы. Исследования выполнены на базе клинико-диагностической лаборатории
июнь, 2017 г.
ОГБУЗ «Городская детская больница г. Белгорода» на иммуноферментном анализаторе ««Bio - Rad» методом твердофазного иммуноферментного анализа в сыворотке крови. В работе представлены результаты определения уровня антител класса Ig G к H. pylori в 405 образцах сыворотки крови. Основную массу наблюдений составили 362 пациента с обострением H. pylori-ассоциированных заболеваний, находившиеся на излечении в гастроэнтерологическом отделении городской детской больницы г. Белгорода в 2015 г. (табл. 1). В отдельную группу вошли 43 взрослых пациента с наличием клинико- морфологических признаков ХГДП. Критерием включения для участия в исследовании являлось добровольное согласие пациентов или их родителей.
А, UNIVERSUM: /уу\ медицина и фарг
фармакология
Таблица 1.
Распределение пациентов по нозологическим группам (n = 382)(n = 3)
№ п/п Наименование нозологии Число пациентов
Абс %
1 Язва 12-ти перстной кишки 3 0,8
2 Неинфекционный гастроэнтерит и колит 59 16,3
3 Хронический гастрит 76 21
4 Гастродуоденит 198 54,7
5 Диспепсия 10 2,8
6 Болезнь желудка и 12-перстной кишки 16 4,4 4
Наиболее частой нозологической формой явился гастродуоденит - 54,7% (n=198). Диагноз хронический гастрит был установлен у 21% пациентов (n=76), неинфекционный гастроэнтерит и колит у 16,3% (n=59), болезнь желудка и 12-перстной кишки у 4,4% (n=16), диспепсия у 2,8% (n=10) и язва 12-ти перстной кишки у 0,8% (n=3) пациентов.
Для решения поставленной задачи все дети были распределены на 6 групп, различающихся по возрасту. В I группу вошли 7 детей в возрасте до 3 -х лет, во II группу - 87 в возрасте 3 - 6 лет, в III - 58 в возрасте 7-9 лет, в IV - 86 в возрасте 10 -12 лет, в V - 81 в возрасте 13 - 15 лет, в VI - 43 в возрасте 16 - 18 лет. Отдельную группу составили 43 взрослых пациента.
Серологические исследования на антитела класса Ig G к Helicobacter pylori проводили в сыворотке крови, полученной путем пункции локтевой вены. Для взятия крови использовались стерильные одноразовые вакуумные пробирки с активатором свертывания. Образцы сыворотки исследовали на
иммуноферментном анализаторе «Bio - Rad» (Великобритания, США, Дания) качественным методом с использованием диагностического набора реактивов «Helicobacter pylori Ig G - ИФА» производства ООО «Хема» (г. Москва).
Критерии оценки серопозитивности и серонега-тивности исследуемых образцов сыворотки указаны в табл. 2. Индекс позитивности (ИП, %) Ig G антител к антигенам H. pylori в исследуемых образцах рассчитывали по формуле ИП = ОП образца / Cut off.
Образец рассматривали как качественно позитивный на наличие специфических Ig G антител, если отношение между средним значением образца и Cut off > 1,1; отрицательным, если отношение < 0,9; неопределенным, если ИП образца > 0.9 и < 1,1. По количественному критерию результат считали положительным при показателе оптической плотности > 0,6 оптических единиц (ОЕ), отрицательным - не выше 0,15 ОЕ во всех лунках. В случае получения неопределенных результатов образцы считали отрицательными.
Таблица 2.
Интерпретация результатов
Результат исследования детских сывороток Результат исследования сывороток взрослых
ИП образца>0,9 положительный ИП образца >1,1 положительный
0,8<ИПобразца<0,9 неопределенный 0,9< ИП образца <1,1 неопределенный
ИП образца <0,8 отрицательный ИП образца <0,9 отрицательный
Результаты исследования и их обсуждение. Ре- иммуноферментным методом в образцах сыворотки зультаты определения антител класса Ig G к H. pylori крови у пациентов различных возрастных групп
№ 6 (40)
представлены в табл. 3. Проанализировано частотное распределение по уровню выявления антител (число положительных, отрицательных и неопределенных
июнь, 2017 г.
результатов) в каждой возрастной группе. Проведена оценка процентной доли участников исследования с положительным результатом определения.
Таблица 3.
А, UNIVERSUM: /уу\ медицина и фарг
фармакология
Результаты исследования антител класса Ig G к H. pylori в сыворотке крови пациентов различных
возрастных групп
Возрастной Распределение Из них с Из них с Из них с поло- Доля поло-
диапазон паци- проб по груп- отрицат. ре- неопредел. ре- жит. результа- жит.
ентов, годы пам, n =405 зультатом зультатом том проб,%
< 3 7 7 - - 0
3 - 6 87 81 1 5 5,7
7 - 9 58 51 - 7 12,1
10 - 12 86 63 3 20 23,3
13 - 15 81 53 3 25 30,9
16 - 18 43 24 - 19 44,2
Взрослые 43 15 - 28 65,1
Исходя из полученных результатов установлено, что у детей в возрасте меньше 3-х лет инфицирование не было подтверждено, в группах более старших детей доля положительных проб увеличивалась с возрастом: в группе 3-6 лет антитела класса Ig G к H. pylori обнаружены у 5 детей (5,7%), в группе 7-9 лет - у 7 детей (12,1%), в группе 10-12 лет - у 20 детей (23,3%), в группе 13-15 лет - у 25 детей (30,9%), в группе 16-18 лет - у 19 (44,2%). Из 43 взрослых пациентов положительный результат зарегистрирован у 28 (65,1%).
Таким образом, сопоставление данных исследования возрастной динамики уровня антител класса Ig G к H. pylori позволило выявить следующие особенности: возрастные различия значимо влияли на частоту инфицированности H. pylori, которая прогрессивно увеличивалась с каждым годом жизни пациента от 0% у детей раннего возраста до 44,2% у подростков и была наиболее выражена у взрослых -65,1%.
Выводы. В статье приводятся результаты исследования образцов сыворотки крови пациентов различных возрастных групп на наличие антител класса Ig G к H. pylori. При анализе лабораторных данных выявлено статистически значимое повышение титра специфических антител с увеличением возраста ребенка. Следует отметить, что низкий уровень антител у детей раннего возраста объясняется низкой чувствительностью их выявления и слабостью иммунного ответа у детей в возрасте до 6-8 лет [5, 12]. К 16-
18 годам показатели выявления антител приближаются к уровню взрослых и согласуются с результатами эпидемиологических исследований распространенности HP-инфекции в других регионах России [2, 6, 9, 10]. Уровень антител в сыворотке крови взрослых в нашем исследовании достигает 65,1%, что сопоставимо с данными других авторов, отмечающих значительное увеличение уровня инфицированности у пациентов старше 18 лет [2, 6, 10,11, 12].
Результаты исследования позволяют усовершенствовать диагностику хронических воспалительных заболеваний верхних отделов желудочно-кишечного тракта, ассоциированных с H. pylori у детей различного возраста и обосновать дифференциальный подход при интерпретации результатов лабораторных исследований.
Определение антител класса Ig G к H. pylori в сыворотке крови методом ИФА - минимально инвазив-ный, высокочувствительный и информативный метод для эпидемиологических и скрининговых исследований. Он может быть использован для удешевления процесса первичной диагностики H. pylori - инфекции, так как положительный результат теста в ясной клинической картине позволяет исключить дорогостоящее эндоскопическое исследование, а также использование методов непосредственной диагностики. Простота и невысокая стоимость анализа расширяет круг обследуемых лиц и позволяет своевременно выявлять группу риска возникновения опасных осложнений.
Список литературы:
1. Барышникова Н.В., Денисова Е.В., Корниенко Е.А. Эпидемиологическое исследование резистентности Helicobacter pylopi к кларитромицину у жителей Санкт-Петербурга с язвенной болезнью. // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - 2009. - № 5. - С. 73 - 76.
2. Гастроэнтерология. Национальное руководство. Краткое издание. // Под ред. В.Т. Ивашкина: М. ГЭОТАР -Медиа, 2008. - С. 41-42.
3. Гуз Н.В., Налетов А.В. Взгляд гастроэнтеролога на непрофильного больного через призму неинвазивных методов исследования // Медицинский алфавит. Практическая гастроэнтерология. - 2015. - Т. 2, № 15 (256). - С. 20 - 22.
4. Жебрун А.Б. Инфекция H. pylori // СПб.: Феникс. - 2006. - 380 с.
№ 6 (40)
UNIVERSUM
МЕДИЦИНА И
фармакология
июнь, 2017 г.
5. Кишкун А.А. Современные методы диагностики и оценки эффективности лечения инфекции, вызванной Helicobacter pylopi (обзор литературы) // Клиническая Лабораторная Диагностика. - 2002. - №8. - С. 41 - 46.
6. Кудрявцева, Л.В., Щербаков П.Л., Иваников И.О., Говорун В.М. Helicobacter pylopi - инфекция: современные аспекты диагностики и терапии: Пособие для врачей. - М.: - 2004. - 41 с.
7. Маев И.В., Кучерявый Ю.А., Андреев Д.Н. Причины неэффективности антихеликобактерной терапии. // Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии. - 2013. - № 6. - С. 62 - 72.
8. Налетов А.В. Влияние вирулентных штаммов Helicobacter pylopi на тяжесть течения хронической гастродуо-денальной патологии в детском возрасте // Сибирское медицинское обозрение. - 2015. - № 3 (93). -
9. Урсова Н.И. Хеликобактерная инфекция у детей: проблема, анализ обобщенных данных. //Лечащий врач. -
2009. - № 6. - С. 14 - 17.
10. Циммерман Я.С. Клиническая гастроэнтерология. Избранные разделы. - М.: ГЭОТАР - Медиа, 2009. - С. 170
11. 11. Щербаков П.Л. Особенности хеликобактериоза у детей России // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - 2008. - № 8. - С. 46 - 52.
12. Щербаков А.П., Щербаков П.Л. Ведение хеликобактерной инфекции у детей (научно обоснованные рекомендации ESPGHAN и NASPGHAN 2010 года) // Лечащий врач. - 2011. - № 6. - С. 46 - 58.
С. 57 - 61.
- 173.
