CC BY
18
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2017 УДК 579.843.1:577.21.08
Водопьянов А.С., Водопьянов С.О., Мишанькин Б.Н., Олейников И.П., Дуванова О.В.
корреляция между наличием области вариабельного тандемного повтора VCB И ОСТРОВКОМ ПАТОГЕННОСТИ ypi-1 У VIBRIO CHOLERAE
ФКУЗ «Ростовский-на-Дону противочумный институт» Роспотребнадзора, 344002, Ростов-на-Дону
С помощью сконструированных праймеров установлена корреляция между наличием области вариабельного тандемного повтора VcB, находящегося на хромосоме II Vibrio cholerae, с островком патогенности VPI-1, расположенного на хромосоме I. Показано, что изучаемая область делеции фланкирована прямыми повторами, содержит в своем составе ген уропатогенного белка, относящегося к системе секреции VI типа, и гены транс-позазы и интегразы. Найденное позволяет предположить, что данная область является не описанным ранее островком пато-генности.
Ключевые слова: холера; Vibrio cholerae; tcp; VcB; VNTR; VPI.
Для цитирования: Водопьянов А.С., Водопьянов С.О., Мишанькин Б.Н., Олейников И.П., Дуванова О.В. Корреляция между наличием области вариабельного тандемного повтора VcB и островком патогенности VPI-1 у Vibrio cholerae. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2017; 35 (2): 49-52. DOI 10.18821/0208-0613-2017-35-2-49-52
Несмотря на очевидные успехи в развитии здравоохранения, особенности географического расположения России, глобализация и усиление международных связей с разными странами, интенсификация миграционных потоков населения остаются предпосылками для возможного заноса холеры на территорию Российской Федерации из стран с эндемичными очагами. До сих пор существует реальный риск возникновения эпидемий и вспышек холеры и холероподобных заболеваний, вызванных токсигенными (ctx+ tcp+) или нетоксигенными (ctx- tcp+) штаммами [1-3]. Примером реальности такой угрозы явилась сопровождавшаяся высокой смертностью вспышка холеры на острове Гаити [3], что объясняет необходимость проведения постоянного мониторинга за возбудителем. Одним из инструментов мониторинга возбудителей опасных инфекционных заболеваний, показавших свою эффективность на практике, является метод определения числа вариабельных тандемных повторов (VNTR-анализ) [4]. Для возбудителя холеры разработан метод VNTR-типирования, который получил широкое распространение у нас в стране и за рубежом [5-7].
Используемый при VNTR-типировании холерных вибрионов вариабельный тандемный повтор VcB локализован на C-конце гена VCA0283 (CDS25) хромосомы II V. Ло1егае, кодирующего гипотетический белок с неизвестной функцией и мол массой 47 кДа. В ходе проведения мониторинга за холерой выявлено, что часть штаммов вибрионов, выделяемых, как правило, из объектов внешней среды, не содержала участка ДНК с повтором VcB [6]. Позднее, при компьютерном анализе результатов полногеномного секвенирования штаммов холерного вибриона, изолированных во время вспышки на острове Гаити в 2010 г., установлена четкая корреляция между присутствием гена пилеобразования tcpA и наличием тандемного повтора VcB [8]. Особый интерес при этом вызвал тот факт, что кластер генов, детерми-
Для корреспонденции: Водопьянов Алексей Сергеевич, рук. группы вирусологии, канд. мед. наук, e-mail: [email protected]
нирующих синтез токсинкорегулируемых пилей (TCP), входит в состав острова патогенности VPI-1, расположенного на хромосоме I [9], в то время как локус тандемного повтора VcB локализован в составе хромосомы II [5, 7]. Механизм, обусловливающий отсутствие этого локуса VcB у апилированных штаммов вибрионов, до настоящего момента не установлен.
Цель работы заключалась в экспериментальной проверке сделанного ранее предположения о существовании строгой корреляции между наличием области вариабельного тандемного повтора VcB (VNTR VcB) и островка VPI-1 на примере представительной коллекции штаммов Vibrio cholerae различных биоваров и се-роваров.
Материал и методы В работе использовано 2 штамма V cholerae О1 классического биовара, содержащих гены ctxÁ и tcpÁ, 111 штаммов V cholerae О1 eltor (53 штамма ctxA- tcpA-13 штаммов ctxA- tcpA+, 45 штаммов ctxA+ tcpA+) и 28 штаммов V cholerae О139 (18 штаммов ctxA- tcpA- и 10 штаммов ctxA+ tcpA+). Штаммы были выделены от человека и из объектов внешней среды в разных регионах мира в 1942-2013 гг. и хранились в лиофилизированном состоянии в музее живых культур Ростовского-на-Дону научно-исследовательского противочумного института.
Для проведения ПЦР из выращенных на агаре Мартена при рН 7,5 18-часовых агаровых культур готовили 1 млрдн. взвеси, ДНК из которых получали путем тепловой денатурации клеток при 100оС в течение 30 мин. Амплификацию проводили, как описано ранее [5, 6]. Режим амплификации: денатурация - 94оС, 20 с, отжиг - 63оС, 25 с, синтез - 72оС, 35 с (всего - 35 циклов). Характеристика и дизайн использованных праймеров приведены в табл. 1.
В качестве канонической использовали информацию о структуре полного генома обеих хромосом штамма V. cholerae MJ-1236 (GenBank accession numbers СР001485, СР001486).
Результаты и обсуждение Поскольку описанный нами ранее негативный результат при выявлении вариабельного тандемного повтора VcB, локализованного в дистальном участке гена VCA0283 [6], мог быть обусловлен мутационными изменениями в области локализации праймеров, для дополнительного подтверждения отсутствия гена CDS25 была сконструирована «проверочная» пара праймеров (CDS-25A и CDS25B - на N-конец и VcB1 и VcB2 - на его С-область). Отрицательный результат в ПЦР с прай-мерами на С- и N-концы гена CDS25 подтвердил его отсутствие у апилированных (tcpA-) штаммов вибрионов.
Для дальнейшей экспериментальной проверки результатов компьютерного анализа были сконструированы праймеры VcB-delA и VcB-delB, фланкирующие с двух сторон гипотетическую область делеции. При наличии полноценного протяженного локуса VcB получаемый ампликон (участок ДНК, ограниченный прямым
МОЛЕКУЛЯРНАЯ ГЕНЕТИКА, МИКРОБИОЛОГИЯ И ВИРУСОЛОГИЯ №2, 2017
Таблица 1
Праймеры, использованные в настоящей работе
Наименование Последовательность Ген (размер продукта, п.о.) Ссылка
праймера
ctx A ctcagacgggatttgttaggcacg dx (301) [10]
ctx В tctatctctgtagcccctattacg
tcpEa gaagaagtttgtaaaagaagaacac tcpA (472) [11]
tcpEb gaaaggaccttctttcacgttg
tcpJa gttcgtattgctcgggcttta tcpJ (171) [12]
tcpJb gccgcaaaaccaccaataata
VcB delA gcttattagcaaaggaagggaaa фланкирующие праймеры (6200/339) Данная работа
VcB delB ttgggcaacttcgagagtagata
usp1A attccaaacctaaacatccacct CDS26 (177) Данная работа
usp1B aaattgaacttggtgcaggagta
CDS25 A ctggtgggaaagtatctgtcaag CDS25 N-конец (193) Данная работа
CDS25 B tggaaagatttgcgataggtaaa
VcB 1 gcctcctcagaagttgagaatc CDS25 C- конец (*) Данная работа
VcB 2 ccgatgaactctctgaactgg
Примечание. * - размер специфического ампликона варьировал в зависимости от числа тандемных повторов локуса VcB у исследуемого штамма.
и обратным праймерами) теоретически должен был бы иметь расчетный размер свыше 6200 п.о. (рис. 1, В). В случае отсутствия фрагмента ДНК, содержащего в том числе и локус VcB, например, как у штамма V. cholerae EM-1676A (GenBank accession number APFY01000097), размер получаемого ампликона должен составить 339 п.о. (см. табл. 1, рис. 1, А).
Изученные штаммы в зависимости от серовара (О1 или О139) и сочетания двух факторов вирулентности -гена холерного токсина (ctxA) и генов пилеобразования, входящих в островок VPI-1, сформировали шесть групп (табл. 2). В случае штаммов биовара eltor и О139 отсутствие оперона пилеобразования подтверждали в ПЦР с использованием двух пар праймеров, выявляющих гены tcpA и tcpJ, расположенных на разных концах оперона пилеобразования (расстояние между локализацией этих праймеров на примере штамма V cholerae MJ-1236 составило более 10 000 п.о.). В случае штаммов классического биовара наличие оперона пилеобразования под-
Определение границ делеции локуса VcB, расположенного на второй хромосоме V сЬо1егае, по результатам ПЦР со специфическими праймерами
Генотип и серовар V cholerae, (число Результат ПЦР с праймерами к гену:
исследованных штаммов) ctxA tcpA Eltor tcpJ Eltor + class VcB delA* CDS25 uspl VcB**
О1 class ctx+ tcp+ (2) + - + - + + +
О1 eltor ctx- tcp- (53) - - - + - - -
О1 eltor ctx- tcp+ (13) - + + - + + +
О1 eltor ctx+ tcp+ (45) + + + - + + +
О139 ctx- tcp- (18) - - - + - - -
О139 ctx+ tcp+ (10) + + + - + + +
Примечание. * - положительный результат c праймерами VcB delA и VcB delB - наличие ампликона с массой 339 п.о., отрицательный результат - отсутствие этого фрагмента; ** - размер специфического ампликона варьировал в зависимости от числа локусов тандемного повтора VcB у исследуемого штамма.
тверждали положительным результатом ПЦР с праймерами к гену tcpJ.
Обнаружено, что все изученные штаммы вибрионов, содержащие в своем геноме VPI-1, независимо от серовара или токсигенности не образовывали ампликон размером 339 п.о. с праймерами группы VcB del. В то же время все исследованные VcB-негативные tcp- штаммы формировали специфический фрагмент, указывающий на отсутствие в их геноме протяженного фрагмента ДНК массой 6200 п.о. Дополнительным контролем служило отсутствие положительного результата с праймерами к соседнему гену CDS26 у всех изученных апи-лированных штаммов, лишенных локуса VcB и островка VPI-1 (рис. 2, см. табл. 2).
Полученный результат экспериментально подтвердил факт отсутствия протяженного фрагмента хромосомы II размером 6200 п.о. у всех изученных измененных (ctxA- VPI-1-) штаммов холерного вибриона, выделенных в различных регионах мира в 1942-2013 гг. В то же время все изученные эпидемически значимые ctxA+ tcpA+ (VPI-1+) штаммы О1 и О139 серогрупп этот фрагмент содержали. Штаммы ctxA- tcpA+ серовара О1 также содержали исследуемый участок ДНК (см. табл. 2). В литературе имеются противоречивые мнения о эпидемической значимости ctxA- tcpA+ вибрионов, однако вспышка заболевания, вызванного холерными вибрионами со сходным генотипом, описана в литературе достаточно подробно [1]. Полученные результаты позволяют сделать вывод о четкой корреляции наличия у холерных вибрионов островка патогенности VPI-1, расположенного на хромосоме I, и фрагмента хромосомы II размером 6200 п.о.
Из данных литературы следует, что присутствующие у патогенных всегда и часто отсутствующие у непатогенных микроорганизмов участки ДНК с кластерами структурных и регуляторных генов называют островами, или островками патогенности [13]. Поскольку фрагменты ДНК размером до 10 000 п.о. обозначают как островки патогенности, полученный результат позволяет предположить, что участок в 6200 п.о., содержащий вариабельный тандемный повтор VcВ, может оказаться островком патогенности возбудителя холеры в составе хромосомы II. Небезынтересно, что все описанные до сих пор острова патогенности холерного вибриона, VPI-1, VPI-2, VSP-I и VSP-II локализованы в составе хромосомы I [14]. Выявленная корреляция между наличием VPI-1 и фрагментом ДНК с тандемным повтором VcB хромосомы II представляется важной как с точки зрения единства генома клетки, так и поиска новых островков патогенности. Важно отметить, что ген thrS,
Таблица 2
примыкающии к рассматриваемому островку патогенности, детерминирует продукцию треонил-тРНК синтетазы, который, наряду с другими генами различных транспортных РНК, часто соседствует с островами патогенности [13, 14]. Немаловажным является тот факт, что предполагаемый островок фланкирован прямыми
Таблица 3
Характеристика открытых рамок считывания, находящихся внутри предполагаемого островка патогенности с повтором VcB V. cholerae
Обозначение Размер (п.о.) Ген, продукт Процент GC
CDS23 972 Интеграза* 46
CDS24 981 ISVch5 транспозаза* 52
CDS25 1242 Гипотетический белок, содержит вариабельный тандемный повтор VcB 38
CDS26 531 Уропатогенный белок* 41
CDS27 672 Гипотетический белок 39
CDS28 351 Гипотетический белок 38
Предполагаемый островок патогенности 42
Фрагмент ДНК 5000 п.о. справа от островка 49
Фрагмент ДНК 5000 п.о. слева от островка 43
Хромосома II 46
Примечание. * - установлен по сходству с последовательностями штамма Vibrio cholerae MJ-1236.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10111213141516171819
VcB del uspl
Рис. 2. Результаты анализа штаммов V. cholerae в ПЦР с прай-мерами, фланкирующими участок VcB (лунки 1-9) и праймера-ми к гену uspl (CDS26) (лунки 11-19). 1,11 - штамм серовара О139 № 17625; 2,12 - О139 № 17627; 3,13- О1 № 17473; 4,14- № 18325 (все штаммы ctx- tcp-); 5,15-О1 № 286 (ctx- tcp+); 6,16- О139 № 16069; 7,17- О1 № 569В; 8,18- О1 № 5879 (ctx+ tcp+); 9,19 - О1 № 15026 (ctx- tcp-). Лунка 10 содержит маркеры молекулярной массы (472, 255, 204, 156 и 116 п.о.).
повторами и содержание GC (42%) отличается от среднего показателя GC во II хромосоме (46%) (табл. 3).
Оказалось, что в составе предполагаемого островка патогенности с повтором VcB расположены 6 открытых рамок считывания CDS23 - CDS28 (см. рис. 1, А, табл. 3). Функция двух генов установлена на основании анализа нуклеотидного состава - они кодируют интегразу фага (CDS23) и ^5-транспозазу (CDS24), что характерно для мобильных элементов, включая холерный вибрион [13, 15]. Функция 4 оставшихся генов пока не ясна, но ген CDS26 у штамма 2010EL-1786 кодирует уропато-генный белок (uropathogenic specific protein, usp). Этот белок, ранее обнаруженный у кишечной палочки, обладает свойствами бактерицин-подобного генотоксина и способствует развитию пиелонефритов и простатитов у больных [16]. Интересно, что кодирущий уропатоген-
ЕЭ Общие гены (есть в Гены, которые I Праймеры,
у всех штаммов) присутствуют только ' фланкирующие
у tcp+ штаммов область делеции
Рис. 1. Сравнительный анализ участка второй хромосомы апилированного (tcpA-) штамма EM-1676A (а) и токсигенного (rtx+ tcpA+) штамма Vibrio cholerae 2010EL-1786 (б).
Показаны открытые рамки считывания, участки локализации прямого и обратного праймеров, фланкирующих область делеции, и расположение локуса вариабельного тандемного повтора VcB. Островок патогенности с повтором VcB имеется только в составе второй хромосомы штамма Vibrio cholerae 2010EL-1786 и содержит открытые рамки считывания CDS23-CDS28.
ный белок ген включают в состав маленького в 4,5 кВ острова патогенности уропатогенных E. coli [17]. Это дает основание рассматривать данный белок, детерминируемый геном CDS26 в составе островка патогенности с повтором VcB, в качестве возможного нового потенциального фактора патогенности, действующего синергидно пилям ТСР.
Другим объяснением важности функционирования генов островка VcB может стать тот факт, что продукт гена CDS26 (у штамма V. cholerae eltor N16961 этот ген описан как VCA0284) является PAAR-протеином, задействованным в функционировании системы секреции VI типа, ответственной за транслокацию через мембрану патогена токсичных для клеток макроорганизма компонентов [18].
Таким образом, на примере большой коллекции штаммов холерного вибриона показана корреляция находящихся на разных хромосомах островка VPI-1 с кластером генов токсинкорегулируемых пилей (первая хромосома) и фрагментом в 6200 п.о. с повтором VcB (хромосома II) и группой генов (CDS23-CDS25), предположительно входящих в состав нового островка па-тогенности второй хромосомы возбудителя. Детальные дополнительные исследования позволят пролить свет на возможную роль продуктов генов островка патогенно-сти с повтором VcB в реализации патогенных свойств вибрионов.
ЛИТЕРАТУРА (пп. 3, 4, 7, 9-11, 14-18 см. REFERENCES)
1. Онищенко Г.Г., Ломов Ю.М., Москвитина Э.А., Подосинникова Л.С., Водяницкая С.Ю., Прометной В.И. и др. Холера, обусловленная Vibrio cholerae 01 ctxAB- tcpA+. Журн. микробиол., эпи-демиол. и иммунобиол. 2007; (1): 23-9.
2. Профилактика холеры. Общие требования к эпидемиологическому надзору за холерой на территории Российской Федерации: Санитарно-эпидемиологические правила СП 3.1.1.252109: Утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 09.09.2009. Бюллетень нормативных актов федеральных органов исполнительной власти. 2009; № 33.
5. Водопьянов А.С., Водопьянов С.О., Мишанькин М.Б., Сучков И.Ю., Мишанькин Б.Н. Вариабельные тандемные повторы, выявленные при компьютерном анализе генома Vibrio cholerae. Биотехнология. 2001; (6): 85-8.
6. Мишанькин Б.Н., Водопьянов А.С., Ломов Ю.М., Водопьянов
МОЛЕКУЛЯРНАЯ ГЕНЕТИКА, МИКРОБИОЛОГИЯ И ВИРУСОЛОГИЯ №2, 2017
С.О. Вариабельные тандемные нуклеотидные повторы (VNTR-анализ) у Vibrio cholerae 0139, выделенных от людей и из воды поверхностных водоемов России. Журн. микробиол. 2004; (1): 29-34.
8. Водопьянов А.С., Водопьянов С.О., Мишанькин Б.Н., Олейников И.П. Алгоритм компьютерного VNTR-типирования на основе неполных сиквенсов ДНК штаммов Vibrio cholerae, выделенных на Гаити в 2010. Здоровье населения и среда обитания. 2013; (3): 28-31.
12. Кисличкина А.А., Степаншина В.Н., Низова А.В., Майская Н.В., Мухина Т.Н., Миронова Р.И., Шемякин И.Г. Паспортизация штаммов Vibrio cholerae. Журн. микробиол. 2012; (3): 22-6.
13. Бондаренко В.М. «Острова» патогенности бактерий. Журн. микробиол. 2001; (4): 67-74.
REFERENCES
1. Onishсhenko G.G., Lomov Yu.M., Moskvitina E.A., Podosinnikova L.S., Vodyanitskaya S.Yu., Prometnoy V.l. et al Holera, obuslovlen-naja Vibrio cholerae 01 ctxAB- tcpA+. Zhurn. mikrobiol. 2007; (1): 23-9. (in Russian)
2. Profilaktika kholery. Obshchie trebovaniya k epidemiologicheskomu nadzoru za kholeroy na territorii Rossiyskoy Federatsii: Sanitarno-epidemiologicheskie pravila SP 3.1.1.2521-09: Utv. Glavnym gosu-darstvennym sanitarnym vrachomRF 09.09.2009. Byulleten' norma-tivnykh aktov federal'nykh organov ispolnitel'noy vlasti. 2009; № 33. (in Russian)
3. Hasan N.A., Choi S.Y., Eppinger M., Clark P.W., Chen A., Alam M. Genomic diversity of 2010 Haitian cholera outbreak strains. Proc. Natl. Acad. Sci. US A. 2012; 109 (29): E2010-7.
4. Van Belkum A., Sherer S., van Leeuwen W., Willemse D., van Al-phen L., Verbrugh H. Variable number of tandem repeats in clinical strains of Haemophilus influenzae. Infect. and Immun. 1997; 65: 5017-27.
5. Vodop'yanov A.S., Vodop'yanov S.O., Mishan'kin M.B., Suchkov I.Yu., Mishan'kin B.N. Biotekhnologiya. 2001; (6): 85-8. (in Russian)
6. Mishan'kin B.N., Vodop'yanov A.S., Lomov Yu.M., Vodop'yanov S.O. Zhurn. mikrobiol. 2004; (1): 29-34. (in Russian)
7. Danin-Poleg Y., Cohen L.A., Gancz H., Broza Y.Y., Goldshmidt H., Malul E. Vibrio cholerae strain typing and phylogeny study based on simple sequence repeats. J. Clin. Microbiol. 2007; 45: 736-46.
8. Vodop'yanov A.S., Vodop'yanov S.O., Mishan'kin B.N., Oleynikov I.P. Zdorov'e naseleniya i sreda obitaniya. 2013; (3): 28-31.
9. Faruque S.M., Asadulghani J.Zhu, Kamruzzaman M., Mekalanos J.J. Examination of diverse toxin-coregulated pilus-positive Vibrio chol-erae strains fails to demonstrate evidence for Vibrio pathogenicity island phage. Infect. and Immun. 2003; 71: 2993-9.
10. Basu A., Garg P., Datta S., Chakraborty S., Bhattacharya T., Khan A. et al. Vibrio cholerae O139 in Calcutta, 1992-1998: incidence, anti-biograms, and genotypes. Emerg. Infect. Dis. 2000; 6 (2): 139-47.
11. Keasler S., Hall R.H. Detecting and biotyping Vibrio cholerae O1 with multiplex polymerase chain reaction. Lancet. 1993; 341: 1661.
12. Kislichkina A.A., Stepanshina V.N., Nizova A.V., Mayskaya N.V., Mukhina T.N., Mironova R.I., Shemyakin I.G. Zhurn. mikrobiol. 2012; (3): 22-6. (in Russian)
13. Bondarenko V.M. Zhurn. mikrobiol. 2001; (4): 67-74. (in Russian)
14. Murphy R.A., Boyd E.F. Three pathogenicity islands of Vibrio chol-
erae can excise from the chromosome and form circular intermediates. J. Bacteriol. 2008; 190 (2): 636-47.
15. Van Belkum A., Sherer S., van Leeuwen W., Willemse D., van Al-phen L., Verbrugh H. Variable number of tandem repeats in clinical strains of Haemophilus influenzae. Infect. and Immun. 1997; 65: 5017-27.
16. Yamamoto S., Nakano M., Terai A., Yuri K., Nakata K., Nair G.B., Kurazono H., Ogawa O. The presence of the virulence island containing the USP gene in uropathogenic Eschericia coli is associated with urinary tract infection in an experimental mouse model. J. Urol. 2001; 165: 1347-51.
17. Zaw M.T., Yamasaki E., Yamamoto S., Nair G.B., Kawamoto K., Kurazono H. Uropathogenic specific protein gene, highly distributed in extraintestinal uropathogenic Escherichia coli, encodes a new member of H-N-H nuclease superfamily. Gut Pathog. 2013; 5 (1): 13. doi: 10.1186/1757-4749-5-13.
18. Shneider M.M., Buth S.A., Ho B.T., Basler M., Mekalanos J.J., Lei-man P.G. PAAR-repeat proteins sharpen and diversify the type VI secretion system spike. Nature. 2013; 500 (7462): 350-3. doi: 10.1038/ nature12453. Epub 2013 Aug 7.
Поступила 16.11.15
Vodop'ianov A.S., Vodop'ianov S.O., Mishan'kin BN, Oleinikov I.P., Duvanova O.V.
CORRELATION BETWEEN REGIONS OF VARIABLE TANDEM REPEAT VCB AND VIBRIO PATHOGENICITY ISLAND (VPI-1) OF THE VIBRIO CHOLERAE
Rostov-on-Don Anti-Plague Institute, Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing, 344002, Rostov-on-Don, Russian Federation
Specially designed primers were used to establish correlation between the presence of a region of variable tandem repeat VcB located on a small chromosome and Vibrio pathogenicity island VPI-1 located on a large chromosome. It was shown that the investigated region of deletion was flanked by direct repeats and contained uropathogenic protein gene related to the secretion system type VI and transposase and integrase genes. The results of this work suggest that this region can be a new pathogenicity island of Vibrio cholerae.
Key words: cholera, Vibrio cholerae, tcp, VcB, VNTR, VPI
For citation: Vodop'ianov A.S., Vodop'ianov S.O., Mishan'kin B.N., Oleinikov I.P., Duvanova O.V. Correlation between Regions of Variable Tandem Repeat VcB and Vibrio Pathogenicity Island (VPI-1) of the Vibrio cholerae. Molekulyarnaya Genetika, Mikrobiologiya i Virusologiya (Molecular Genetics, Microbiology and Virology 2017; 35(2):49-52. (Russian). DOI 10.18821/0208-0613-2017-35-2-49-52.
For correspondence: AlekseiSergeevich Vodop'ianov, Candidate of Medical Sciences, Head of virology research group, Rostov-on-Don Anti-Plague Institute, Federal Service for Surveillance on Consumer Rights Protection and Human Wellbeing, 344002, Rostov-on-Don, Russian Federation; E-mail: [email protected]
Acknwledgments. The study had no sponsor support. Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
