CC BY
40
УДК 612.115.5: 549.67 М.А. Гагаро
КОРРЕКЦИЯ НАРУШЕНИЙ ГЕМОСТАЗА И ЛИПОПЕРОКСИДАЦИИ ПРИ АКТИВАЦИИ СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ
ГОУ ВПО ХМАО-Югры Ханты-Мансийский государственный медицинский институт
В исследовании показано, что природные цеолиты ограничивают сдвиги плазмокоагуляци и свободнорадикальных процессов в клетках крови при активации гемостаза, вызываемс экзогенной тромбопластинемией
Ключевые слова: гемостаз, липопероксидация, цеолиты, свертывание крови
Необходимость поиска средств направленного воздействия на гемостаз определяется высокой частотой тромбогеморрагических осложнений, возникающих на фоне реакции напряжения [1,2, 3]. Ранее в нашей лаборатории было установлено, что естественные природные цеолиты VII минералогической группы, состоящие из естественных природных микст кристаллических и слоистых алюмосиликатов вулканогенно-иеплового происхождения при пероральном введении оказывают гипокоагулирующий эффект и оптимизирует функциональную активность тромбоцитов [4]. Вместе с тем, известно, что эффект испытуемых субстанций на биологические системы организма наиболее выражено проявляется в условиях реакций напряжения [5].
Цель настоящего исследования — охарактеризовать гемокоагуляцию и состояние свободнорадикальных процессов при введении природных цеолитов в условиях активации свертывания крови (экзогенная тромбопластинемия).
Объект и методы исследования
Исследование проводили на 648 самцах белых лабораторных крыс линии Вистар весом 200+20 г. Животные содержались на смешанном сбалансированном рационе с оптимальным соотношением белков, липидов, углеводов и витаминов. При этом часть животных (опытная группа) 1 раз в сутки перорально получала дополнительно к рациону навеску изучаемой субстанции в виде порошка в дозе 0,25 г/кг массы тела. Группа сравнения получала корм в том же объеме, но без дополнительной добавки препарата. По истечении 10 дней крысы опытной группы и группы сравнения подверглись экзогенной тромбопластине-мии. Взвесь тромбопластина в физиологическом растворе хлорида натрия вводили в количествах, не вызывающих гибель животных (1,5 мг/100 г массы, активность 15 с). Контрольным крысам
(«интактный контроль») вместо тромбопластик в ту же вену вводили 0,9% раствор хлорида н; трия. Забор крови осуществляли из симметри1 ной вены до введения тромбопластина, через 1, и 6 ч после воздействия.
Исследование протромбинового индекс (ПТИ),тромбинового времени (ТВ), активировав ного парциального тромбопластинового времен (АПТВ) и содержания фибриногена /ФГ/ провс дили на коагулографе «АСЬ-200» (Швейцария уровня антитромбина III (АТ-Ш), растворимы комплексов мономерного фибрина (РКМФ
— согласно инструкциям к наборам фирм] «Технология-стандарт» (г. Барнаул, [6]).
Изучение количества тромбоцитов, тромбоцг токрита, анизоцитоза и среднего объема тромбе цитов, а также определение показателей красно крови производили на гематологическом аналг заторе «Соикег-Вектап» АсТ-8 (США).
Содержание первичных и вторичных продук тов пероксидации в клетках крови оценивал спектрофотометрически.
В экспериментах использовали коммерчески препараты тканевого тромбопластина и цитрат натрия («Технология-стандарт», г. Барнаул).
Результаты исследований, имеющие цифре вое выражение, анализировали методом вариа ционной статистики для малых рядов наблюде ний, вычисляя среднюю арифметическую (М' среднюю ошибку средней арифметической (т): среднеквадратичное отклонение (а). Для оценю достоверности отличий вычисляли доверитель ный коэффициент Стъюдента (^ и степень вере ятности (р). Различия считали достоверными пр] значениях степени вероятности (р)<0,05.
Результаты и обсуждение
Как следует из данных таблицы 1, введени тромбопластина животным, не получавшим це олиты, привело через 1 ч к удлинению АЧТ1
(в 1,7 раза) и тромбинового времени (в 2 раза). Протромбиновый индекс снизился в 1,5 раза, уменьшилось содержание антитромбина III (в 1,3 раза) и фибриногена (в 1,5 раза), в 3 раза выросла концентрация продуктов паракоагуляции. Таким образом, в контроле тромбопластин вызвал выраженную гипокоагулемию потребления.
У животных, получавших природные цеолиты, развивающаяся гипокоагулемия была менее выражена (прирост АЧТВ в 1,4 раза, тромбинового времени — в 1,8 раза, снижение ПТИ — в 1,3 раза), в меньшей степени потреблялся антитромбин III (в 1,2 раза), содержание РКМФ возросло лишь в 2,2 раза.
Гемостатические сдвиги, вызванные введением тромбопластина, сохранялись в контрольной группе спустя 3 и 6 часов. На фоне гипокоагуле-мии (по показателям клоттинговых тестов) отмечались признаки свершившегося свертывания крови (прирост РКМФ).
У крыс, получавших цеолиты, к 3 и 6 ч признаки гипокоагулемии также присутствовали, однако были менее выражены, чем в контроле. Удлинение АЧТВ составило 1,2 раза (3 ч) и 1,1 раза (6 ч), в контроле, соответственно — 1,5 и 1,3 раза. Существенно, что к 6 ч в опытной группе уровень РКМФ вернулся к нормальным значениям.
Таким образом, дополнительное введение природных цеолитов повышает устойчивость в тромбопластинемии, что проявляется ограничением вызываемых гемокоагуляционных сдвигов и сокращением периода их нормализации.
У животных описываемых серий одновременно определяли и интенсивность свободнорадикальных процессов.
Изучение состояния ПОЛ в тромбоцитах показало, что введение тромбопластина крысам, не получавшим цеолиты, сопровождается приростом содержания продуктов пероксидации. Уже к 1 ч уровень МДА возрос в 1,5 раза, а к 3 ч превосходил контрольный показатель в 2,2 раза. Содержание диеновых конъюгатов к 3 и 6 ч соответственно выросло в 1,6 и 1,2 раза, к 6 ч снизилось содержание токоферола (Таблица 2).
На фоне применения природных цеолитов прирост первичных и вторичных продуктов пероксидации существенно ограничивался, с чем, вероятно, связано и более выраженное потребление токоферола к 6 ч исследований.
Таким образом, обнаружился параллелизм между гемокоагуляционными изменениями и сдвигами свободнорадикальных процессов, что согласуется с данными литературы [7, 8]. В данном случае ослабление на фоне введения цеолитов реакции на тромбопластинемию сопровождалось
Таблица 1
Состояние плазмокоагуляции у животных, получавших и не получавших природные цеолиты через 1 ч после введения взвеси тромбопластина (по 12 крыс в группе)
Показатели Интактный контроль Тромбопластин вводили
без ПЦ на фоне ПЦ
Через 1 ч
АЧТВ, с 31,7 ± 1,1 53,2± 1,1 * 45,3±0,6*А
ПТИ,% 100,2±1,4 65,0±4,7* 78,0±3,6*А
ТВ, с 8,8±0,8 17,2±0,2* 15,6±0,2*л
АТ-Ш,% 98,0±3,1 76,8±4,2* 84,8±3,3*А
ФГ, г/л 1,9±0,2 1,3±0,1* 1,3±0,1*
РКМФ, мг/100 мл 3,0 ± 0,2 9,4±0,3* 6,6±0,2*А
Через 3 ч
АЧТВ, с 31,7 ± 1,1 46,1 ±2,2* 39,1±1,3*А
ПТИ,% 100,2±1,4 77,0±5,3* 77,5±2,9*
ТВ, с 8,8±0,8 15,5±0,5* 14,8±0,9*
АТ-Ш,% 96,0±3,5 74±2,3* 73,5±1,1*
ФГ, г/л 2,1 ±0,1 0,9±0, * 1,0±0,1*
РКМФ, мг/100 мл 3,1 ±0,2 7,1 ±0,3* 4,2±0,2*А
Через 6 ч
АЧТВ, с 31,2 ± 1,1 40,6±1,6* 35,1±0,6*А
ПТИ,% 99,2±1,1 75,0±2,8* 76,4±2,5*
ТВ, с 8,8±0,8 12,7±0,4* 12,4±0,4*
АТ-Ш,% 98,0±3,1 75,4±2,4* 75,3±0,9*
ФГ, г/л 2,0±0,2 1,1±0,1* 1,2±0,1*
РКМФ, мг/100 мл 3,1 ±0,1 6,1 ±0, * 3,5±0,2Л
Примечание: знаком * отмечены достоверно отличающиеся показатели (р<0,05) по сравнению с интактным контролем, знаком А — по сравнению с показателями 3 колонки.
Таблица 2
Состояние ПОЛ и АО А липидов тромбоцитов у животных, получавших и не получавших природные цеолиты, через 1,3 и 6ч после введения взвеси тромбопластина (по 12 крыс в группе)
Показатели Интактный контроль Тромбопластин вводили
без ПЦ на фоне ПЦ
Через 1 ч
ДК, нмоль/мг 59,6±4,5 67,5±9,7 76,1 ±9,2
МДА, нмоль/мг 5,1 ± 1,0 7,8±1,5* 4,9±1,0А
Е, нмоль/мл 6,1±1,2 6,3+1,3 5,2±0,6
Через 3 ч
ДК, нмоль/мг 60,6+4,0 99,6±8,2* 83,4±4,1*А
МДА, нмоль/мг 5,2± 1 1 11,5±1,0* 5,5±0,9А
Е, нмоль/мл 6,0±0,5 6,8±0,4 6,5±0,7
Через 6 ч
ДК, нмоль/мг 59,7±3,5 69,8+3,2* 54,1±4,8*0
МДА, нмоль/мг 5,0±1,1 1,8±0,4* 1,2±0,3*
Е, нмоль/мл 5,9± 1,2 5,3±0,4 2,8±0,6*
Примечание: Знаком * отмечены достоверно отличающиеся показатели (р<0,05) по сравнению с интактным контролем, знаком А — по сравнению с показателями 3 колонки.
Таблица 3
Тромбоцитограмма у животных, получавших и не получавших природные цеолиты, через 1,3 и 6ч после введения взвеси тромбоплас-тина (по 12 крыс в группе)
Примечание: Знаком * отмечены достоверно отличающиеся показатели (р<0,05) по сравнению с интактным контролем, знаком л — по сравнению с показателями 3 колонки.
уменьшением интенсивности ПОЛ, вызываемого экзогенным воздействием.
Влияние тромбопластинемии на состояние морфологических параметров тромбоцитов представлено в таблице 3.
Тромбопластинемия сопровождалась тромбо-цитопенией потребления. В контроле содержание тромбоцитов к 1 часу упало на 18,5%. Это сопровождалось снижением среднего объема клеток, вероятно, за счет перераспределения соотношения клеточных форм.
На фоне предварительного введения цеолитов содержание тромбоцитов оставалось неизменным до окончания эксперимента. Принципиально отметить разницу содержания тромбоцитов в сравниваемых группах к 1 ч, т.е. на пике коагулопатии потребления.
Известно, что степень потребления тромбоцитов в динамике острого стресса гемокоагуляци-онной природы зависит от степени их активации, связанной с ускорением внутриклеточных свободнорадикальных реакций образования эндопероксидов арахидоновой и других полиненасыщенных жирных кислот [9]. Поэтому можно полагать, что среди механизмов эффекта природных цеолитов при тромбопластинемии особое место занимает ограничение активации и вовлечения клеток крови в свертывающий каскад за счет торможения процессов перекисного окисления липидов.
Для подтверждения этого предположения мы изучили состояние пероксидации в эритроцитах — структурах, наиболее поверженных воздействию оксидантов циркулирующей крови.
Введение тромбопластина животным, не получавшим цеолиты, привело к приросту содержания диеновых конъюгатов (к 3 часу — в 2 раза, к 6 ч — в 1,5 раза) и МДА (к 3 ч — в 1,8 раза), т.е. активировало свободнорадикальные процессы в мембранных структурах.
На фоне введения цеолитов изменения были значительно менее выраженными — лишь к 3 ч уровень первичных продуктов ПОЛ вырос в 1,6 раза, а потребления токоферола не наблюдалось.
В результате изучения морфофункциональных показателей красной крови. Оказалось, что через 1 ч после воздействия содержание эритроцитов в контрольной группе снижалось, возвращаясь к исходному уровню лишь к 3 ч. Это сопровождалось снижением гематокрита, уменьшением среднего объема эритроцитов и увеличением анизо-цитоза. Подобную реакцию следует расценивать как комплекс компенсаторных сдвигов в ответ на цитотоксическое действие инициатора ДВС-син-дрома — тромбопластина [10].
У животных, получавших цеолиты, достоверного снижения уровня эритроцитов к 1 ч не происходило, отсутствовали изменения гематокрита, среднего объема эритроцитов и показателя ани-зоцитоза. В дальнейшем, показатели опытной и контрольной групп не отличались.
Выводы:
1. Предварительное введение природных цеолитов повышает толерантность системы плазмо-коагуляции к тромбопластинемии, ослабляя степень вызываемых гемокоагуляционных сдвигов и сокращая период их нормализации.
2. Природные цеолиты ограничивает потребление тромбоцитов и эритроцитов, а также изменения их морфофункциональных параметров в условиях активации свертывания крови.
3. Протективный эффект природных цеолитов связан с торможением свободнорадикальных процессов в клетках крови и ослаблением коагулопатии потребления.
CORRECTION OF HEMOSTASIS DERANGEMENTS AND LIPOPEROXIDATION AT ACTIVATION OF BLOOD COAGULAITION
M.A. Gagaro
It was established that natural zeolites reduce parameters changes of hemocoagulation и lipoper-oxidation in the blood cells under activation of hemostasis, reproduced on the exogenous model of thromboplastinemia
Показатели Интактный контроль Тромбопластин вводили
без ПЦ на фоне ПЦ
Через 1 ч
PLT,* 109/л 705,0±35,8 575+24,6* 645±46,3
MPV, фл 6,5±0,1 6,1±0,Г 5,7±0,2*
РСТ.% 0,5±0,02 0,4±0,10 0,4±0,06*
PDW,% 16,5+0,2 16,3+0,1 16Д±0,3
Через 3 ч
PLT,* 109/л 690,6±35,8 638±31,6 612±31,2
MPV, фл 6,4±0,1 5,4±0,1* 5,9±0,2*л
РСТ,% 0,5±0,01 0,3±0,03* 0,4±0,02*л
PDW,% 16,4+0,2 16,5±0,2 16,2±0,1
Через 6 ч
РЬТ,*109/л 697,6±35,8 616±49,3 593±46,5
MPV, фл 6,5±0,1 5,4±0,1* 5,5±0,1*
РСТ,% 0,5±0,03 0,3±0,03* 0,3±0,02*
PDW,% 16,5±0,1 16,1 ±0,1 16,1±0,2
Литература
1. Бокарев И.Н. Тромбоэмболия легочной артерии. Что делать? / И.Н. Бокарев, Л.В. Попова // Тромбоз, гемостаз и реология. — 2001. — № 1 (5). — С. 22-25.
2. Особенности нарушений коагуляционно-тромбо-цитарного звена системы гемостаза и процессов липо-иероксидации при гестозе / Т.Н. Глухова, Н.П. Чесно-кова, И.А. Салов, И.Е. Рогожина // Тромбоз, гемостаз и реология. - 2002. — № 3(11). — С. 35-37.
3. Состояние гемостаза у больных врожденными пороками сердца до и после хирургической коррекции / Е.Ф. Козар, М.Г. Плющ, H.H. Самсонова, Л.Г. Климович // Тромбоз, гемостаз и реология. — 2001. — № 2 (6). - С. 26-27.
4. Гагаро М.А. Влияние цеолитов на состояние плаз-мокоагуляции / М.А. Гагаро, В.Г. Соловьев // Научный вестник ХМГМИ. — 2006. — № 1. — С. 32.
5. Бышевский A.I1I. Свертываемость крови при реакции напряжения / А.Ш. Бышевский, В.Н. Кожевников.
— Свердловск, 1986. — С. 52-145.
6. Баркаган З.С. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза / З.С. Баркаган, А.П. Мо-мот.-М., 2001.-С. 70-160.
7. Ралъченко И.В. Роль тромбоцитов, эритроцитов и лейкоцитов в реализации связи между гемостазом и перекисным окислением липидов: Автореф. дис.... д-ра биол. наук / И.В. Ральченко. — Уфа, 1998. — С. 6-27.
8. Умутбаева М.К. Интенсивность постоянного внутрисосудистого свертывания крови при модификации процессов липопероксидации / М.К. Умутбаева // Научн.вестник ТГМА. «Биоантиоксиданты». — 2003.
- № 1. - С. 82-83.
9. Влияние ингибиторов циклооксигеназы на уровень маркеров внутрисосудистого свертывания крови / А.Ш. Бышевский, С.Л. Галян, Р.Г. Алборов и др. // Научн. вестник ТГМА. — 2003. — № 1. — С. 86.
10. Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы. — М., Медицина, 1988. — С. 356-432.
