Клон-индуцированная чувствительность опухолевых клеток при моделировании глутаматной «Эксайтотоксичности» in vitro Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»



76 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

ного препарата. В связи с этим возникает необходимость Материалы и методы. Методом клонирования in vitro поиска фармакологических агентов, способных избира- опухолевых клеток С6 проведены исследования на модели тельно модулировать глутаматные рецепторы. глутаматной «эксайтотоксичности». Развитие процесса ин-Цель исследования — изучить влияние монотерапии дуцировали добавлением глутамата натрия, L-глутамино-и сочетанного действия агонистов глутаматных рецепторов вой кислоты и NMDA в «эксайтотоксических» дозах (2, 20, и ингибиторов пролиферации на опухолевые клетки в ди- 200 мкМ; 20, 200 мМ; 100 мкМ соответственно) в моно-намике. слойную культуру на стадии логарифмического роста. Спу-Материалы и методы. Работа выполнена на клеточной стя 24 ч (время удвоения популяции клеток С6) одна часть линии глиомы крысы С6 (экпериментальная модель муль- клеточной популяции была расклонирована на чашки тиморфной глиобластомы человека). Использовали мето- Петри, а другая — субкультивирована во флаконах и в ло-ды культивирования клеток in vitro, цитологический, ста- гарифмической фазе роста популяция клеток была раскло-тистический. Пролиферацию опухолевых клеток глиомы нирована. Оценивали эффективность клонирования опу-крысы С6 оценивали по митотическому индексу (МИ, %), холевых клоногенных клеток. количеству генераций популяции клеток (Г), времени уд- Результаты. Установлено, что инкубирование опухо-воения популяции (ВУП, ч), а также оценивали ингибиру- левых клеток с агонистами глутаматных рецепторов — ющую активность изучаемых веществ. Агонисты глутаматных глутаматом натрия и L-глутаминовой кислотой приводит рецепторов — а-глутаминовая кислота в дозах 10 и 1000 мкМ; к гибели клеток по отношению к контролю. Показано, ингибиторы пролиферации — темозоломид 10, 100, 1000 мкг/мл; что угнетение пролиферации клоногенных клеток С6 со-цисплатин 0,4; 4; 40 мкг/мл. храняется после субкультивирования клеток, подвер-Результаты. Митотическая активность опухолевых кле- гшихся действию глутамата натрия в дозе 2 мкМ (ЛД79), ток in vitro в условиях острого и пролонгированного дейст- L-глутаминовой кислоты в дозе 200 мМ (ЛД90). В услови-вия на них а-глутаминовой кислоты в дозах 10 и 1000 мкМ ях воздействия глутамата натрия и L-глутаминовой кис-снижается по сравнению с контролем. В условиях кратко- лоты на клоногенные клетки в клонах наблюдается их ре-временного (6 ч) воздействия а-глутаминовой кислоты зистентность. L-глутаминовая кислота в дозах ниже пролиферация клеток снижается на 60 и 54 % соответст- «эксайтотоксических» (10 мкМ) не влияет на пролифера-венно, а при более длительном воздействии (72 ч) на 74 цию клоногенных клеток. Также показано, что клоноген-и 81 % по сравнению с контролем. Ингибирующая актив- ные клетки в клонах резистентны к воздействию агониста ность темозоломида сильнее выражена при сочетанном глутаматных рецепторов NMDA ^-метил^-аспартат) воздействии с а-глутаминовой кислотой на клетки С6 в дозе 100 мкМ. и эффект сохраняется в течение 48 ч. В условиях раздельно- Заключение. Возможно, в механизме нарушения эф-го действия темозоломид в дозе 1000 мкг/мл подавляет фективности клонирования опухолевых клеток лежит ак-пролиферацию клеток на 82 %, а при воздействии на фоне тивация реакции глутаматной «эксайтотоксичности». а-глутаминовой кислоты пролиферативная активность восстанавливается до контрольного уровня. Ингибирую- Л.Н. Николаевич. К.Н. Саунина, О.И. Голубович, щая активность цисплатина также возрастает на фоне из- Т.А. Хрусталёва, Е.Ф. Полукошко, Е.С. Барашкова менения функционального состояния глутаматных рецеп- ВЛИЯНИЕ АНТАГОНИСТОВ ГЛУТАМАТНЫХ торов при действии а-глутаминовой кислоты в дозе 10 мкМ. РЕЦЕПТОРОВ НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ Заключение. Нарушения функционального состояния КЛОНИРОВАНИЯ И МЕТАБОЛИЗМ ОПУХОЛЕВЫХ глутаматных рецепторов опухолевых клеток С6 а-глутами- КЛОНОГЕННЫХ КЛЕТОК новой кислотой усиливает действие цитостатических пре- ГНУ«Институт физиологии НАНБеларуси», Минск, паратов темозоломида и цисплатина на пролиферацию Республика Беларусь клеток и активирует их гибель. Введение. Внутриопухолевая гетерогенность, свойственная большинству злокачественных новообразований Л.Н. Николаевич. К.Н. Саунина, человека, является основной преградой на пути высоко-О.И. Голубович, Е.Ф. Полукошко эффективной диагностики онкологических заболеваний, КЛОН-ИНДУЦИРОВАННАЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ к успешному прогнозу и лечению. ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ Цель исследования - изучить влияние фенитоина и ла-ГЛУТАМАТНОЙ «ЭКСАЙТОТОКСИЧНОСТИ» IN VITRO мотригина на эффективность клонирования и метаболизм ГНУ «Институт физиологии НАН Беларуси», Минск, опухолевых клоногенных клеток. Республика Беларусь Материалы и методы. Работа выполнена на перевива-Введение. Одним из подходов разработки способов емой линии клеток глиомы крысы С6. В исследовании регуляции пролиферации клеток являются изучение кло- использовали цитологический метод (анализ эффектив-нальной гетерогенности популяции опухолевых клеток ности клонирования клеток С6 в клонах), методы куль-в условиях моделирования глутаматной «эксайтотоксич- тивирования и клонирования клеток in vitro, биохимиче-ности» и использование в качестве лекарственных средств ский (определение активности щелочной фосфатазы естественных возбуждающих медиаторов. (ЩФ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ)), статистический. Цель исследования — изучить клон-индуцированную В качестве антагонистов глутаматных рецепторов приме-чувствительность опухолевых клеток при моделировании няли фенитоин (5,5-дифенил-гидантоин, Sigma, США) глутаматной «эксайтотоксичности» in vitro. в дозах 1, 10, 100, 1000 мкг/мл и ламотригин (6-(2,3-ди-

№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ