Синергические эффекты агонистов глутамата и цитостатических лекарственных препаратов Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

75

вой кислоты, потенциального противоопухолевого соединения.

Работа выполнена при финансовой поддержке РНФ (грант № 14-13-01077).

Л. Л. Николаева1, А.В Ланцова1, Е.В. Санарова1, И.Д. Гулякин1, Н.А. Оборотова1,2, Е.В. Игнатьева1, Н.А. Дмитричева1, И. В. Ярцева1, Н.Д. Бунятян2, В. В. Мусияк3, Г. Л. Левит3, В. П. Краснов3 КАЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ ОРМУСТИНА В ЛИОФИЛИЗИРОВАННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЕ

ФГБУ «РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва;

2ГБОУ ВПО «Первый МГМУим. И.М. Сеченова»

Минздрава России, Москва;

3ФГБУН «ИОС им. И. Я. Постовского УрО РАН»,

Екатеринбург

Введение. Тонкослойная хроматография (ТСХ) является одним из основных методов в таких фармацевтических исследованиях, как установление подлинности препаратов, определение количественного содержания действующего вещества и посторонних нелетучих примесей, контроль высвобождения и т. п. В РОНЦ им. Н.Н. Блохина была разработана лиофилизированная лекарственная форма препарата из класса нитрозомочевин — Ормустин. Для идентификации активного вещества в лекарственной форме возможно использование ТСХ-анализа.

Цель исследования — подбор системы растворителей для определения Ормустина в лиофилизированной лекарственной форме методом ТСХ.

Материалы и методы. Ормустин, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 125 мг (РОНЦ им. Н.Н. Блохина), субстанция Ормустина (ИОС им. И.Я. Постовского УрО РАН), различные органические растворители: этанол, пропанол-2, бутанол, аммиак водный, ледяная уксусная кислота, этилацетат, этиловый эфир, хлороформ. Хроматографическое разделение компонентов проводили на пластинках "8огЬШ" 10 х 15 см (Россия). Лиофилизат Ормустина регидратировали водой для инъекций. Стандартный раствор Ормустина получали растворением субстанции Ормустина водой для инъекций. На линию старта наносили раствор препарата и стандарта. После достижения фронтом растворителей линии финиша пластинку вынимали из камеры, подсушивали на воздухе и проявляли раствором нингидрина.

Результаты. В ходе проведенного эксперимента изучены значения величины подвижной фазы в 12 различных системах растворителей. Наиболее четкая идентификация субстанции Ормустина получена в 3 системах: 1) н-бутанол— ледяная уксусная кислота—вода (12:3:5), 2) пропанол-2— аммиак водный (6:4), 3) этанол—аммиак водный (6:4).

Заключение. Проведен подбор систем растворителей для идентификации Ормустина в лекарственной форме. Полученные результаты указывают на возможность применения ТСХ-анализа для идентификации Ормустина в лио-филизате.

Работа выполнена в рамках Государственного контракта № 13411.1008799.13.163 «Доклинические исследования противоопухолевого лекарственного средства класса нитрозомочевин».

Л. Л. Николаева1, И. Д. Гулякин1, А. В Ланцова1, Е.В. Санарова1, Н.А. Оборотова1,2, Е.В. Игнатьева1, Н.А. Дмитричева1, И. В. Ярцева1, Н.Д. Бунятян2 ОПРЕДЕЛЕНИЕ KOLLIDON 17 PF В ЛИОФИЛИЗИРОВАННЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ

ФГБУ «РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва; 2ГБОУВПО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова» Минздрава России, Москва

Введение. Kollidon 17 PF относится к водорастворимым поливинилпирролидонам, по своим физиологическим свойствам он аналогичен альбумину крови и при введении в кровеносное русло оказывает благоприятное воздействие на системную гемодинимику и микроциркуляцию. Его используют при производстве таблеток, для повышения растворимости активных фармацевтических субстанций, а также при создании инъекционных лекарственных форм, для формирования структуры лиофилиза-та в процессе сублимационной сушки, и в других областях фармацевтической промышленности. Поскольку Kollidon 17 PF входит в состав множества современных лиофили-зированных лекарственных форм, то разработка метода его идентификации является актуальной задачей. Метод тонкослойной хроматографии (ТСХ) достаточно прост в применении, обеспечивает быстрое разделение компонентов, поэтому его применяли для определения Kollidon 17 PF.

Материалы и методы. Kollidon 17 PF (BASF, Германия), ЛХС-1208, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 9 мг (РОНЦ им. Н.Н. Блохина), Ормустин, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 125 мг (РОНЦ им. Н.Н. Блохина), органические растворители: этанол, пропанол-2, бутанол, аммиак водный, ледяная уксусная кислота, этилацетат, этиловый эфир, хлороформ, н-гексан, бензол, ацетон, метанол. В качестве неподвижной фазы использовали пластинки "Sorbfil" 10 х 15 см (Россия). Хроматографирование проводили восходящим способом. Когда расстояние фронта растворителей достигало 12 см, пластинку вынимали из камеры и подсушивали на воздухе. Идентифицировали парами йода (желтое пятно).

Результаты. В ходе эксперимента использованы несколько различных систем растворителей. В 28 случаях Kollidon 17 PF проявлялся на линии старта. Только в 2 системах удалось оторвать исследуемый компонент от стартовой линии — пропанол-2: аммиак водный (6:4) и этанол: аммиак водный (6:4).

Заключение. Подобраны системы растворителей для идентификации Kollidon 17 PF в составе лекарственных форм.

Л.Н. Николаевич, О.И. Голубович, К.Н. Саунина СИНЕРГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ АГОНИСТОВ ГЛУТАМАТА И ЦИТОСТАТИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

ГНУ «Институт физиологии НАН Беларуси», Минск, Республика Беларусь

Введение. В клинической практике для лечения злокачественных заболеваний применяют агонисты глутамата в комбинации с существующими химиотерапевтическими препаратами. Это позволяет достичь большего цитостати-ческого эффекта по сравнению с применением только од-

№1 / том 15 / 2016

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

76 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

ного препарата. В связи с этим возникает необходимость Материалы и методы. Методом клонирования in vitro поиска фармакологических агентов, способных избира- опухолевых клеток С6 проведены исследования на модели тельно модулировать глутаматные рецепторы. глутаматной «эксайтотоксичности». Развитие процесса ин-Цель исследования — изучить влияние монотерапии дуцировали добавлением глутамата натрия, L-глутамино-и сочетанного действия агонистов глутаматных рецепторов вой кислоты и NMDA в «эксайтотоксических» дозах (2, 20, и ингибиторов пролиферации на опухолевые клетки в ди- 200 мкМ; 20, 200 мМ; 100 мкМ соответственно) в моно-намике. слойную культуру на стадии логарифмического роста. Спу-Материалы и методы. Работа выполнена на клеточной стя 24 ч (время удвоения популяции клеток С6) одна часть линии глиомы крысы С6 (экпериментальная модель муль- клеточной популяции была расклонирована на чашки тиморфной глиобластомы человека). Использовали мето- Петри, а другая — субкультивирована во флаконах и в ло-ды культивирования клеток in vitro, цитологический, ста- гарифмической фазе роста популяция клеток была раскло-тистический. Пролиферацию опухолевых клеток глиомы нирована. Оценивали эффективность клонирования опу-крысы С6 оценивали по митотическому индексу (МИ, %), холевых клоногенных клеток. количеству генераций популяции клеток (Г), времени уд- Результаты. Установлено, что инкубирование опухо-воения популяции (ВУП, ч), а также оценивали ингибиру- левых клеток с агонистами глутаматных рецепторов — ющую активность изучаемых веществ. Агонисты глутаматных глутаматом натрия и L-глутаминовой кислотой приводит рецепторов — а-глутаминовая кислота в дозах 10 и 1000 мкМ; к гибели клеток по отношению к контролю. Показано, ингибиторы пролиферации — темозоломид 10, 100, 1000 мкг/мл; что угнетение пролиферации клоногенных клеток С6 со-цисплатин 0,4; 4; 40 мкг/мл. храняется после субкультивирования клеток, подвер-Результаты. Митотическая активность опухолевых кле- гшихся действию глутамата натрия в дозе 2 мкМ (ЛД79), ток in vitro в условиях острого и пролонгированного дейст- L-глутаминовой кислоты в дозе 200 мМ (ЛД90). В услови-вия на них а-глутаминовой кислоты в дозах 10 и 1000 мкМ ях воздействия глутамата натрия и L-глутаминовой кис-снижается по сравнению с контролем. В условиях кратко- лоты на клоногенные клетки в клонах наблюдается их ре-временного (6 ч) воздействия а-глутаминовой кислоты зистентность. L-глутаминовая кислота в дозах ниже пролиферация клеток снижается на 60 и 54 % соответст- «эксайтотоксических» (10 мкМ) не влияет на пролифера-венно, а при более длительном воздействии (72 ч) на 74 цию клоногенных клеток. Также показано, что клоноген-и 81 % по сравнению с контролем. Ингибирующая актив- ные клетки в клонах резистентны к воздействию агониста ность темозоломида сильнее выражена при сочетанном глутаматных рецепторов NMDA ^-метил^-аспартат) воздействии с а-глутаминовой кислотой на клетки С6 в дозе 100 мкМ. и эффект сохраняется в течение 48 ч. В условиях раздельно- Заключение. Возможно, в механизме нарушения эф-го действия темозоломид в дозе 1000 мкг/мл подавляет фективности клонирования опухолевых клеток лежит ак-пролиферацию клеток на 82 %, а при воздействии на фоне тивация реакции глутаматной «эксайтотоксичности». а-глутаминовой кислоты пролиферативная активность восстанавливается до контрольного уровня. Ингибирую- Л.Н. Николаевич. К.Н. Саунина, О.И. Голубович, щая активность цисплатина также возрастает на фоне из- Т.А. Хрусталёва, Е.Ф. Полукошко, Е.С. Барашкова менения функционального состояния глутаматных рецеп- ВЛИЯНИЕ АНТАГОНИСТОВ ГЛУТАМАТНЫХ торов при действии а-глутаминовой кислоты в дозе 10 мкМ. РЕЦЕПТОРОВ НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ Заключение. Нарушения функционального состояния КЛОНИРОВАНИЯ И МЕТАБОЛИЗМ ОПУХОЛЕВЫХ глутаматных рецепторов опухолевых клеток С6 а-глутами- КЛОНОГЕННЫХ КЛЕТОК новой кислотой усиливает действие цитостатических пре- ГНУ«Институт физиологии НАНБеларуси», Минск, паратов темозоломида и цисплатина на пролиферацию Республика Беларусь клеток и активирует их гибель. Введение. Внутриопухолевая гетерогенность, свойственная большинству злокачественных новообразований Л.Н. Николаевич. К.Н. Саунина, человека, является основной преградой на пути высоко-О.И. Голубович, Е.Ф. Полукошко эффективной диагностики онкологических заболеваний, КЛОН-ИНДУЦИРОВАННАЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ к успешному прогнозу и лечению. ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ Цель исследования - изучить влияние фенитоина и ла-ГЛУТАМАТНОЙ «ЭКСАЙТОТОКСИЧНОСТИ» IN VITRO мотригина на эффективность клонирования и метаболизм ГНУ «Институт физиологии НАН Беларуси», Минск, опухолевых клоногенных клеток. Республика Беларусь Материалы и методы. Работа выполнена на перевива-Введение. Одним из подходов разработки способов емой линии клеток глиомы крысы С6. В исследовании регуляции пролиферации клеток являются изучение кло- использовали цитологический метод (анализ эффектив-нальной гетерогенности популяции опухолевых клеток ности клонирования клеток С6 в клонах), методы куль-в условиях моделирования глутаматной «эксайтотоксич- тивирования и клонирования клеток in vitro, биохимиче-ности» и использование в качестве лекарственных средств ский (определение активности щелочной фосфатазы естественных возбуждающих медиаторов. (ЩФ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ)), статистический. Цель исследования — изучить клон-индуцированную В качестве антагонистов глутаматных рецепторов приме-чувствительность опухолевых клеток при моделировании няли фенитоин (5,5-дифенил-гидантоин, Sigma, США) глутаматной «эксайтотоксичности» in vitro. в дозах 1, 10, 100, 1000 мкг/мл и ламотригин (6-(2,3-ди-

№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ