Влияние антагонистов глутаматных рецепторов на эффективность клонирования и метаболизм опухолевых клоногенных клеток Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»



76 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

ного препарата. В связи с этим возникает необходимость Материалы и методы. Методом клонирования in vitro поиска фармакологических агентов, способных избира- опухолевых клеток С6 проведены исследования на модели тельно модулировать глутаматные рецепторы. глутаматной «эксайтотоксичности». Развитие процесса ин-Цель исследования — изучить влияние монотерапии дуцировали добавлением глутамата натрия, L-глутамино-и сочетанного действия агонистов глутаматных рецепторов вой кислоты и NMDA в «эксайтотоксических» дозах (2, 20, и ингибиторов пролиферации на опухолевые клетки в ди- 200 мкМ; 20, 200 мМ; 100 мкМ соответственно) в моно-намике. слойную культуру на стадии логарифмического роста. Спу-Материалы и методы. Работа выполнена на клеточной стя 24 ч (время удвоения популяции клеток С6) одна часть линии глиомы крысы С6 (экпериментальная модель муль- клеточной популяции была расклонирована на чашки тиморфной глиобластомы человека). Использовали мето- Петри, а другая — субкультивирована во флаконах и в ло-ды культивирования клеток in vitro, цитологический, ста- гарифмической фазе роста популяция клеток была раскло-тистический. Пролиферацию опухолевых клеток глиомы нирована. Оценивали эффективность клонирования опу-крысы С6 оценивали по митотическому индексу (МИ, %), холевых клоногенных клеток. количеству генераций популяции клеток (Г), времени уд- Результаты. Установлено, что инкубирование опухо-воения популяции (ВУП, ч), а также оценивали ингибиру- левых клеток с агонистами глутаматных рецепторов — ющую активность изучаемых веществ. Агонисты глутаматных глутаматом натрия и L-глутаминовой кислотой приводит рецепторов — а-глутаминовая кислота в дозах 10 и 1000 мкМ; к гибели клеток по отношению к контролю. Показано, ингибиторы пролиферации — темозоломид 10, 100, 1000 мкг/мл; что угнетение пролиферации клоногенных клеток С6 со-цисплатин 0,4; 4; 40 мкг/мл. храняется после субкультивирования клеток, подвер-Результаты. Митотическая активность опухолевых кле- гшихся действию глутамата натрия в дозе 2 мкМ (ЛД79), ток in vitro в условиях острого и пролонгированного дейст- L-глутаминовой кислоты в дозе 200 мМ (ЛД90). В услови-вия на них а-глутаминовой кислоты в дозах 10 и 1000 мкМ ях воздействия глутамата натрия и L-глутаминовой кис-снижается по сравнению с контролем. В условиях кратко- лоты на клоногенные клетки в клонах наблюдается их ре-временного (6 ч) воздействия а-глутаминовой кислоты зистентность. L-глутаминовая кислота в дозах ниже пролиферация клеток снижается на 60 и 54 % соответст- «эксайтотоксических» (10 мкМ) не влияет на пролифера-венно, а при более длительном воздействии (72 ч) на 74 цию клоногенных клеток. Также показано, что клоноген-и 81 % по сравнению с контролем. Ингибирующая актив- ные клетки в клонах резистентны к воздействию агониста ность темозоломида сильнее выражена при сочетанном глутаматных рецепторов NMDA ^-метил^-аспартат) воздействии с а-глутаминовой кислотой на клетки С6 в дозе 100 мкМ. и эффект сохраняется в течение 48 ч. В условиях раздельно- Заключение. Возможно, в механизме нарушения эф-го действия темозоломид в дозе 1000 мкг/мл подавляет фективности клонирования опухолевых клеток лежит ак-пролиферацию клеток на 82 %, а при воздействии на фоне тивация реакции глутаматной «эксайтотоксичности». а-глутаминовой кислоты пролиферативная активность восстанавливается до контрольного уровня. Ингибирую- Л.Н. Николаевич. К.Н. Саунина, О.И. Голубович, щая активность цисплатина также возрастает на фоне из- Т.А. Хрусталёва, Е.Ф. Полукошко, Е.С. Барашкова менения функционального состояния глутаматных рецеп- ВЛИЯНИЕ АНТАГОНИСТОВ ГЛУТАМАТНЫХ торов при действии а-глутаминовой кислоты в дозе 10 мкМ. РЕЦЕПТОРОВ НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ Заключение. Нарушения функционального состояния КЛОНИРОВАНИЯ И МЕТАБОЛИЗМ ОПУХОЛЕВЫХ глутаматных рецепторов опухолевых клеток С6 а-глутами- КЛОНОГЕННЫХ КЛЕТОК новой кислотой усиливает действие цитостатических пре- ГНУ«Институт физиологии НАНБеларуси», Минск, паратов темозоломида и цисплатина на пролиферацию Республика Беларусь клеток и активирует их гибель. Введение. Внутриопухолевая гетерогенность, свойственная большинству злокачественных новообразований Л.Н. Николаевич. К.Н. Саунина, человека, является основной преградой на пути высоко-О.И. Голубович, Е.Ф. Полукошко эффективной диагностики онкологических заболеваний, КЛОН-ИНДУЦИРОВАННАЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ к успешному прогнозу и лечению. ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ Цель исследования - изучить влияние фенитоина и ла-ГЛУТАМАТНОЙ «ЭКСАЙТОТОКСИЧНОСТИ» IN VITRO мотригина на эффективность клонирования и метаболизм ГНУ «Институт физиологии НАН Беларуси», Минск, опухолевых клоногенных клеток. Республика Беларусь Материалы и методы. Работа выполнена на перевива-Введение. Одним из подходов разработки способов емой линии клеток глиомы крысы С6. В исследовании регуляции пролиферации клеток являются изучение кло- использовали цитологический метод (анализ эффектив-нальной гетерогенности популяции опухолевых клеток ности клонирования клеток С6 в клонах), методы куль-в условиях моделирования глутаматной «эксайтотоксич- тивирования и клонирования клеток in vitro, биохимиче-ности» и использование в качестве лекарственных средств ский (определение активности щелочной фосфатазы естественных возбуждающих медиаторов. (ЩФ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ)), статистический. Цель исследования — изучить клон-индуцированную В качестве антагонистов глутаматных рецепторов приме-чувствительность опухолевых клеток при моделировании няли фенитоин (5,5-дифенил-гидантоин, Sigma, США) глутаматной «эксайтотоксичности» in vitro. в дозах 1, 10, 100, 1000 мкг/мл и ламотригин (6-(2,3-ди-

№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

77

хлорфенил)-1,2 триазин-3,5-диамин, Sigma, США) в дозах 10-4, 10-5, 10-6, 10-7 М.

Результаты. Изучено влияние фенитоина и ламотри-гина на пролиферацию клоногенных клеток при воздействии на монослой и при введении в клоны. Показано, что при воздействии фенитоина в дозах 1000 и 100 мкг/мл на гетерогенную популяцию клеток С6 достоверно снижается эффективность клонирования (ЭК) клеток. При низких дозах фенитоина (10 и 1 мкг/мл) ЭК клеток превышает контрольный уровень. В условиях воздействия фенитоина в дозе 1000 мкг/мл на клоногенные клетки в клонах ЭК достоверно снижается по сравнению с контролем. Также наблюдается увеличение доли неклоногенных клеток. Регистрируется низкая ингибирующая активность ламотри-гина в дозе 10-4 М на клоногенные клетки в клонах. В условиях воздействия фенитоина и ламотригина на монослой клеток и клоногенные клетки в клонах достоверно снижается активность ЩФ и ЛДГ по сравнению с контролем.

Заключение. При воздействии фенитоина и ламотри-гина на клоногенные клетки в монослое клеток С6 и в клонах снижается ЭК клоногенных клеток и активность ферментов метаболизма. Можно предположить, что блокировка глутаматными антагонистами активного ионного тока через цитоплазматическую мембрану может быть именно тем механизмом, который обусловливает антипролифера-тивный эффект.

А.А. Николина, Н.Ю. Кульбачевская, О. И. Коняева, Н.П. Ермакова, В.А. Чалей, А.А. Сергеев, К.А. Сережин, В.М. Бухман СУБХРОНИЧЕСКАЯ ТОКСИЧНОСТЬ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА НА ОСНОВЕ ГЛИКОЗИДНОГО ПРОИЗВОДНОГО ИНДОЛОКАРБАЗОЛА НА СОБАКАХ ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва

Введение. ЛХС-1208 — новый противоопухолевый препарат на основе гликозидного производного индолокарба-зола, разработанный в лаборатории химического синтеза РОНЦ им. Н. Н. Блохина. Данная работа является продолжением токсикологических исследований ЛХС-1208.

Цель исследования — изучение субхронической токсичности нового противоопухолевого лекарственного средства ЛХС-1208 на собаках.

Материалы и методы. Работа проводилась на 4 собаках (3 самки и 1 самец) породы английский бигль, полученных из разведения РОНЦ им. Н. Н. Блохина. Препарат (серия 110414) растворяли в воде для инъекций до получения рекомендованной концентрации — 3,0 мг/мл. ЛХС-1208 вводили собакам ежедневно внутривенно 15-кратно в 2 суммарных дозах 20 и 30 мг/кг. Дозы были рассчитаны исходя из данных, полученных в результате изучения субхронической токсичности на крысах. Собаки были выведены из эксперимента на 3-и и 60-е сутки после окончания курса введения ЛХС-1208.

Результаты. Установлено, что ЛХС-1208 при внутривенном ежедневном 15-кратном применении в суммарных дозах 20 и 30 мг/кг не вызывал гибели животных. У всех собак наблюдались внешние проявления интоксикации

и изменения поведенческих реакций только после первого введения препарата в течение 5 мин: собаки трясли головой, наблюдались акты дефекации и мочевыделения, состояние оглушенности, ступора, жажды, сокращения мышц живота, подергивание лап. Установлено, что ЛХС-1208 в исследованных дозах вызывал недозозависимое уменьшение количества тромбоцитов; оказывал недозозависимое влияние на углеводный обмен и функцию поджелудочной железы, что проявлялось тенденцией к снижению уровня глюкозы в сыворотке крови с 7-х суток и до конца наблюдения; оказывал недозозависимое влияние на синтезирующую функцию печени, что проявлялось тенденцией к снижению количества общего белка и альбумина с 21-х суток и до конца наблюдения; но не вызывал нарушения барьерной функции печени (уровни аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, лактатдегидрогеназы, общего билирубина колебались в пределах физиологической нормы для данного вида), а также не оказывал влияния на функциональное состояние почек. Установлено, что препарат ЛХС-1208 вызывал количественные и качественные изменения электрической активности сердца: увеличение интервалов РТ и PQ, инверсию зубца Т и появление глубокого зубца Q.

Заключение. На основании полученных данных по изучению субхронической токсичности препарата ЛХС-1208 при 15-кратном ежедневном внутривенном введении собакам в суммарных дозах 20 и 30 мг/кг установлены лимитирующие виды токсичности, ограничивающие клиническое применение препарата: гематотоксичность (тромбоцитопе-ния), гепатотоксичность и кардиотоксичность.

Д.В. Новиков1, С.Г. Фомина1, Н.Н. Турина1, Н.В. Красногорова1, А.Д. Перенков2, Р. Г. Пегов2, Л.Б. Луковникова2, В.В. Новиков1, А.Ю. Барышников3 СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА УРОВНЕЙ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ В ОПУХОЛЯХ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И ТОЛСТОЙ КИШКИ

ФТАОУ ВО «ННГУ им. Н.И. Лобачевского», Нижний Новгород; 2ГБОУВПО НижГМА Минздрава России, Нижний Новгород; ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва

Введение. Развитие и прогрессия злокачественных опухолей тесно связаны с изменением экспрессии генов иммунной системы. Одним из модуляторов транскрипционных изменений в раковой клетке является MUC1 (CD227), участвующий в передаче сигналов, приводящих к изменениям метаболизма, адгезии, пролиферации и апоптоза. Экспрессия MUC1 опухолевыми клетками эпителиального происхождения ассоциирована с плохим прогнозом течения заболевания и негативным ответом на терапию.

Цель исследования — характеристика экспрессии генов иммунной системы IL32, Fas, ICAM1, FoxP3, FCRIII в MUC1-позитивных (MUC1+) и MUO-негативных (MUC1- ) опухолевых очагах больных раком молочной железы (РМЖ) и раком толстой кишки (РТК).

Материалы и методы. В образцах опухолевых очагов 40 больных РМЖ и 58 больных РТК исследовали уровни мРНК MUC1, IL32, Fas, ICAM1, FoxP3, FCRIII и FCRIII

№1 / том 15 / 2016

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ