CC BY
47
Приложение
Заключение. При оценке полученных данных, значимых различий между наличием АГАТ и частотой инфицированности ГИ не получено, длительность циркуляции АГАТ не зависела от наличия маркеров ГИ при длительности нейтропении менее 6 мес. Однако, при сроке циркуляции АГАТ более 6 мес, длительность
циркуляции АГАТ в группе детей с маркерами ГИ была достоверно выше, чем в группе без маркеров ГИ. Более длительная циркуляции АГАТ отмечена у детей с ВГЧ-6 и микст-герпетическими инфекциями, что может свидетельствовать об их более значимом влиянии на развитие аутоиммунного процесса.
KIR-рецепторы естественных киллерных клеток и их HLA-лиганды у больных некоторыми гемобластозами
Е.Г. Хамаганова, Т.П. Чугреева, Е.Н. Паровичникова ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России, Москва
Введение. Естественные киллерные клетки (ЕКК) - эф-фекторные клетки врожденного иммунитета, способные лизировать трансформированные или инфицированные клетки-мишени без предварительного контакта и развития реакции типа иммунного ответа. Ответ ЕКК на клетки-мишени регулируется взаимодействием между их иммуногло-булинподобными рецепторами - KIR (killer Ig-like receptors) и молекулами главного комплекса гистосовместимости (у человека - HLA) класса I. Отсутствие "своей" молекулы HLA на клетке-мишени ведет к активации ЕКК и лизису мишени. C KIR/HLA взаимодействиями связана толерантность ЕКК к собственным здоровым клеткам и элиминация инфицированных и трансформированных клеток с измененной экспрессией HLA-молекул. Имеются сообщения об ассоциациях определенных KIR и KIR/HLA комбинаций с некоторыми гемобластозами [Naumova et al., 2005; Verheyden et al., 2005; Giebel et al., 2008; Middleton et al., 2009; Zhang et al., 2010; Almalte et al., 2011; Karabon et al., 2011]. Целью настоящего исследования явилось изучение распределения KIR/HLA комбинаций у больных некоторыми гемобластозами и здоровых представителей нашей популяции для установления возможных ассоциаций.
Материалы и методы. Исследованы 69 больных, из которых 31 больной острыми миелоидными лейкозами (ОМЛ), 15 - миелодиспластическим синдромом (МДС), 23 -острыми лимфобластными лейкозами (ОЛЛ). Контрольная группа состояла из 65 доноров компонентов крови. HLA и
KIR-генотипирование проводили методом PCR-SSP (полимеразной цепной реакции с сиквенс-специфическими праймерами) на наборах праймеров Invitrogen (WI, США). Прямым подсчетом определяли все возможные KIR/HLA комбинации: KIR2DL2/HLA-C1 (HLA-C1 - аллели HLA-C, несущие аспарагин в позиции 80 пептидсвязывающей бороздки), KIR2DL 3/HLA-C1; KIR2DL1/HLA-C2 (HLA-C2 - аллели HLA-C, несущие лизин в позиции 80); KIR3DL1/HLA-Bw4 и KIR3DL2/HLA-A3 и А11. Статистическую значимость различий показателей определяли с помощью преобразованного критерия Фишера.
Результаты и обсуждение. Не выявлено статистически значимых различий от контрольной группы в распределении KIR-генов, их HLA-d и HLA-С2 лигандов и KIR/HLA-комбинаций у больных ОМЛ и МДС. В группе больных ОЛЛ отсутствовали гомозиготы по HLA-C2 лигандам (C2/C2): 0% против 20% в контрольной группе (р < 0,001), также наблюдалась тенденция к снижению частоты встречаемости комбинации KIR2DL1/HLA-C2 (41% против 60% в контрольной группе). У всех больных ОЛЛ в отличие от контрольной группы имелись комбинации KIR с их HLA-C1 лигандами: KIR2DL2/HLA-C1 и/или KIR2DL3/HLA-C1 (100% против 78%; p < 0,001).
Заключение. У больных ОЛЛ отмечено изменение профиля KIR/HLA комбинаций, характерного для контрольной группы. Гомозиготность по HLA-C2/C2 может быть фактором, способствующим резистентности к развитию ОЛЛ.
Клеточный биочип для одновременного исследования морфологии и иммунофенотипа лимфоцитов периферической крови и костного мозга больных лимфопролиферативными заболеваниями В-клеточного
происхождения
А.Н. Хвастунова 12, А.О. Доронина 13, И.М. Черных 1, О.С. Федянина 2, С.А. Кузнецова 123, Ф.И. Атауллаханов 123
1 Федеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева Минздравсоцразвития России; 2 Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН;
3 ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России, Москва
Введение. Основополагающими методами при диагностике онкогематологических заболеваний являются микроскопическое (морфологическое) исследование клеток крови и костного мозга и иммунофенотипирование. Наличие в мазках периферической крови лейкоцитов с патологической морфологией или лейкоцитов, не характерных для нормальной периферической крови, является важнейшей информацией при постановке диагноза. Иммунофенотипирование (определение поверхностных антигенов клеток крови, проводимое обычно с помощью проточной цитофлюориметрии) позволяет обнаружить наличие в образце клеток с редким иммунофенотипом, но не дает возможности морфологического анализа именно той конкретной клетки, которая имеет "подозрительный" иммунофенотип. В настоящий момент успешная диагностика онкогематологических заболеваний базируется на сочетании иммунофенотипирования, морфологического и молекулярно-биологического анализа клеток крови. Однако невозможность проведения анализа поверхностных антигенов и морфологического исследования на одних и тех же клетках может приводить к противоречиям при формулировке диагноза в тех случаях, когда важно определить иммунофенотип клеток, имеющих патологическую или атипичную морфологию.
Материалы и методы. Для решения данной задачи нами разработан клеточный биочип для параллельного
иммунофенотипирования и морфологического исследования лейкоцитов человека. Биочип представляет собой прозрачную подложку размером 22 х 22 мм, на которой иммобилизованы антитела к 35 поверхностным антигенам лейкоцитов. При инкубации биочипа с суспензией лейкоцитов клетки, несущие определенный поверхностный антиген, связываются с иммобилизованными антителами. После отмывки на поверхности биочипа остаются области, покрытые лимфоцитами, несущими тот или иной поверхностный антиген, морфология которых затем исследуется стандартными цитологическими методами. Таким образом, биочип позволяет исследовать морфологию клеток крови, для которых известен один из ее поверхностных CD антигенов.
Результаты и обсуждение. С помощью клеточного биочипа были исследованы периферическая кровь и костный мозг 22 больных хроническим В-клеточным лимфолейкозом (В-ХЛЛ), 11 - волосатоклеточным лейкозом (ВКЛ), 12 - множественной миеломой (ММ), 6 - лимфомой из клеток маргинальной зоны селезенки, 1 - макроглобу-линемией Вальденстрема. Мы показали, что иммунофенотип лимфоцитов, связавшихся с биочипом, соответствует данным проточной цитометрии, и морфология опухолевых клеток хорошо согласуется с данными, полученными стандартными методами морфологических исследований. Биочип позволяет определить иммунофенотип опухолевых
85
Гематол. и трансфузиол., 2012, т. 57, № 3
клеток даже в тех случаях, когда их количество невелико (ворсинчатые лимфоциты при ВКЛ), а также определить наличие на поверхности опухолевых клеток необычных для данной опухоли поверхностных антигенов. Так, у 1 из 22 больных В-ХЛЛ и у 4 из 11 больных ВКЛ опухолевые клетки экспрессировали CD2, у 1 из 11 больных ВКЛ опу-
холевые клетки экспрессировали CD10, у 2 из 12 больных ММ часть опухолевых клеток экспрессировала CD33, а у 1 больного - CD7.
Заключение. Клеточный биочип может быть использован для предварительной диагностики лимфопролиферативных заболеваний В-клеточного происхождения.
Резистентность к иматинибу у больных Ph-негативным BCR-ABL-позитивным хроническим миелолейкозом
Г.А. Цаур 12, О.М. Плеханова \ А.М. Попов 12, Ю.А. Яковлева 12, Т.О. Ригер 12, А.С. Иванова 12,
Б.А.3 Бакиров, М.Е. Голубева4, Т.С. Константинова 5, И.В. Крылова 5, С.В. Мересий 4, В.М. Пепеляева 6, М.В. Шумкова 7,
Е.В. Шориков 12, Л.И. Савельев 128, Л.Г. Фечина12
1 ГБУЗ СО Областная детская клиническая больница №1; 2 ГБУЗ СО Институт медицинских клеточных технологий, Екатеринбург; 3 ГБУЗ Республиканская клиническая больница им. Г.Г. Куватова, Уфа; 4 МУЗ Клиническая медико-санитарная часть №1, Пермь; 5 ГБУЗ СО Свердловская областная клиническая больница №1 Екатеринбург; 6 ГБУЗ Пермская краевая клиническая больница, Пермь; 7 ГБУ Курганская областная клиническая больница, Курган; 8 ГБОУ ВПО Уральская государственная медицинская академия, Екатеринбург
Введение. У 1-2% больных хроническим миелолейкозом (ХМЛ) на момент диагностики заболевания при стандартном цитогенетическом исследовании (СЦИ) не выявляется транслокация t(9;22)(q34;q11), однако при проведении флюоресцентной гибридизации in situ (FISH) и полимеразной цепной реакцией (ПЦР) у них обнаруживается химерный ген BCR-ABL (так называемый Ph-негативный ХМЛ). Исходы терапии в этой группе больных остаются неясными. Цель работы -оценка эффективности терапии иматинибом у больных Ph-негативным ХМЛ.
Материалы и методы. В исследование был включен 251 больной ХМЛ, в том числе 182 - в ранней хронической фазе (ХФ), 65 - в поздней ХФ, и 4 - в фазе акселерации. Все больные получали иматиниб 400 или 600 мг 1 раз в сутки. СЦИ, а также качественная и количественная ПЦР были выполнены всем пациентам. Анализ методом FISH проводили при отсутствии метафаз, а также во всех случаях Ph-негативных ХМЛ. Исследовали не менее 200 интерфазных ядер с применением Dual-Colour Dual-Fusion BCR-ABL Translocation Probe ("Abbott Molecular", США). У большинства больных СЦИ и FISH проводили 1 раз в 6 мес. Ответ на терапию оценивали согласно рекомендациям European LeukemiaNet (M. Baccarani et al., JCO, 2009). У больных Ph-негативным ХМЛ под полным цитогенетическим ответом (ЦГО) понимали величину, меньшую чем 1% BCR-ABL-позитивных интерфазных ядер при исследовании костного мозга методом FISH. ЦГО и частичный ЦГО в данной группе больных не оценивали из-за отсутствия корреляции между данными СЦИ и FISH (N. Tes-toni et al., Blood, 2009). Относительную экспрессию BCR-ABL измеряли методом количественной ПЦР в режиме реального времени каждые 3-6 мес. Определение мутаций в тирозинкиназном домене ABL проводили прямым секвенированием ПЦР-продуктов в двух направлениях. Результаты терапии оценивали по уровню общей выживаемости (ОВ) и выживаемости без неудачи терапии (БНВ) согласно рекомендациям European LeukemiaNet (M. Baccarani et al., JCO, 2009).
Результаты и обсуждение. В зависимости от наличия транслокации t(9;22)(q34;q11), выявленной во время первичной диагностики при СЦИ, все больные были разделены на 2 группы: 244 больных Ph-позитивным ХМЛ и 7 - Ph-негативным. Группы не различались между собой по возрасту, полу, распределению групп риска по Sokal, стадии заболевания на момент диагностики, типам химерных транс-криптов BCR-ABL, уровню BCR-ABL/ABL в момент установления диагноза. У больных Ph-негативным ХМЛ выявлено 3 типа распределения флюоресцентных сигналов: 2R1G1F (n = 4), что было интерпретировано как криптическая вставка гена ABL в BCR с образованием химерного гена на 22-й хромосоме; 1R2G1F (n = 2), являющийся следствием скрытой вставки гена BCR в ABL с образованию химерного гена на 9-й хромосоме; 1R1G1F (n = 1) - субмикроскопическая делеция 5’-конца гена ABL и 3’-конца BCR на 9-й хромосоме с образованием химерного гена на 22-й хромосоме. Медиана времени наблюдения составила 54 мес. Несмотря на то, что 6 из 7 больных Ph-негативным ХМЛ достигли полного гематологического ответа, из них только 1 больной достиг полного ЦГО, что было статистически значимо ниже, чем в группе с Ph-позитивным ХМЛ (р < 0,001). У 2 больных Ph-негативным ХМЛ развился бластный криз, что было чаще, чем в группе с Ph-позитивным ХМЛ (р = 0,036). Ни у одного из больных Ph-негативным ХМЛ не выявлено мутаций в гене ABL, дупликации или амплификации BCR-ABL. БНВ у больных Ph-негативным ХМЛ была ниже, чем у больных с выявленым Ph-позитивным ХМЛ: 0,14 ± 0,13 и 0,62 ± 0,03 (р = 0,007), в то время как ОВ была сопоставима в обеих группах: 0,70 ± 0,15 и 0,85 ± 0,02 соответственно (р = 0,47).
Заключение. Исходы терапии в группе больных Ph-негативным ХМЛ, получавших иматинибы, были хуже, чем у больных Ph-позитивным ХМЛ. Однако увеличение дозировки или перевод на ингибиторы тирозинкиназ второго поколения предотвращало дальнейшие прогрессирование и/или смерти, ассоциированные с ХМЛ.
Исходы беременности у больных хроническим миелолейкозом, получающих терапию ингибиторами
тирозинкиназ
Е.Ю. Челышева1, А.Г. Туркина1, Т.И. Колошейнова1, Г.А. Гусарова1, М.А. Соколова1, С.Р. Горячева1, Т.В. Иванова1, О.Ю. Виноградова1, О.В. Лазарева1, М.В. Галайко1, З.З. Ясакова2, Г.Б. Кучма3, М.А. Любченко4, М.Е. Голубева5, И.В. Гребенщикова6, О.Д. Сердюк7,
В.Н. Черткова8, С.А. Волкова9, А.С. Лямкина10, С.Н. Меньшакова11, Е.С. Полушкина12, Р.Г. Шмаков12, Н.Д. Хорошко 1
1 ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России, Москва; 2 Республиканское лечебно-диагностическое реабилитационное объединение, Грозный; 3 Областная клиническая больница, Оренбург; 4 Областная клиническая больница, Челябинск; 5 Городской гематологический центр, Пермь; 6Хакасская республиканская больница, Абакан; 7Клинический онкологический диспансер №1 Департамента здравоохранения Краснодарского края; 8 Областная клиническая больница, Курск; 9Областная клиническая больница, Нижний Новгород;
10 Новосибирский государсвенный медицинский университет; 11 Областная клиническая больница, Тверь; 12 ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И. Кулакова Минздравсоцразвития России, Москва
Введение. Беременность при хроническом миелолейкозе (ХМЛ) - актуальный вопрос для больных детородного возраста в связи с высокой общей выживаемостью и хорошим качеством жизни при терапии ингибиторами тирозинкиназ (ИТК). Необходима информация о возможных исходах беременности, о риске проведения терапии при беременности и риске рецидива ХМЛ при возможном прерывании лечения на
период беременности. Цель работы - проанализировать данные об исходах беременности и тактике терапии у больных ХМЛ, получавших терапию ИТК в Российской Федерации.
Материалы и методы. Суммарно собраны сведения о 33 случаях беременности у 28 женщин, из них у 26 больных с хронической фазой (ХФ) ХМЛ, у 2 - с фазой акселерации (ФА) на момент диагноза. У 5 женщин было по 2 повтор-
86
