CC BY
68
Приложение
Заключение. При оценке полученных данных, значимых различий между наличием АГАТ и частотой инфицированности ГИ не получено, длительность циркуляции АГАТ не зависела от наличия маркеров ГИ при длительности нейтропении менее 6 мес. Однако, при сроке циркуляции АГАТ более 6 мес, длительность
циркуляции АГАТ в группе детей с маркерами ГИ была достоверно выше, чем в группе без маркеров ГИ. Более длительная циркуляции АГАТ отмечена у детей с ВГЧ-6 и микст-герпетическими инфекциями, что может свидетельствовать об их более значимом влиянии на развитие аутоиммунного процесса.
KIR-рецепторы естественных киллерных клеток и их HLA-лиганды у больных некоторыми гемобластозами
Е.Г. Хамаганова, Т.П. Чугреева, Е.Н. Паровичникова ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России, Москва
Введение. Естественные киллерные клетки (ЕКК) - эф-фекторные клетки врожденного иммунитета, способные лизировать трансформированные или инфицированные клетки-мишени без предварительного контакта и развития реакции типа иммунного ответа. Ответ ЕКК на клетки-мишени регулируется взаимодействием между их иммуногло-булинподобными рецепторами - KIR (killer Ig-like receptors) и молекулами главного комплекса гистосовместимости (у человека - HLA) класса I. Отсутствие "своей" молекулы HLA на клетке-мишени ведет к активации ЕКК и лизису мишени. C KIR/HLA взаимодействиями связана толерантность ЕКК к собственным здоровым клеткам и элиминация инфицированных и трансформированных клеток с измененной экспрессией HLA-молекул. Имеются сообщения об ассоциациях определенных KIR и KIR/HLA комбинаций с некоторыми гемобластозами [Naumova et al., 2005; Verheyden et al., 2005; Giebel et al., 2008; Middleton et al., 2009; Zhang et al., 2010; Almalte et al., 2011; Karabon et al., 2011]. Целью настоящего исследования явилось изучение распределения KIR/HLA комбинаций у больных некоторыми гемобластозами и здоровых представителей нашей популяции для установления возможных ассоциаций.
Материалы и методы. Исследованы 69 больных, из которых 31 больной острыми миелоидными лейкозами (ОМЛ), 15 - миелодиспластическим синдромом (МДС), 23 -острыми лимфобластными лейкозами (ОЛЛ). Контрольная группа состояла из 65 доноров компонентов крови. HLA и
KIR-генотипирование проводили методом PCR-SSP (полимеразной цепной реакции с сиквенс-специфическими праймерами) на наборах праймеров Invitrogen (WI, США). Прямым подсчетом определяли все возможные KIR/HLA комбинации: KIR2DL2/HLA-C1 (HLA-C1 - аллели HLA-C, несущие аспарагин в позиции 80 пептидсвязывающей бороздки), KIR2DL 3/HLA-C1; KIR2DL1/HLA-C2 (HLA-C2 - аллели HLA-C, несущие лизин в позиции 80); KIR3DL1/HLA-Bw4 и KIR3DL2/HLA-A3 и А11. Статистическую значимость различий показателей определяли с помощью преобразованного критерия Фишера.
Результаты и обсуждение. Не выявлено статистически значимых различий от контрольной группы в распределении KIR-генов, их HLA-d и HLA-С2 лигандов и KIR/HLA-комбинаций у больных ОМЛ и МДС. В группе больных ОЛЛ отсутствовали гомозиготы по HLA-C2 лигандам (C2/C2): 0% против 20% в контрольной группе (р < 0,001), также наблюдалась тенденция к снижению частоты встречаемости комбинации KIR2DL1/HLA-C2 (41% против 60% в контрольной группе). У всех больных ОЛЛ в отличие от контрольной группы имелись комбинации KIR с их HLA-C1 лигандами: KIR2DL2/HLA-C1 и/или KIR2DL3/HLA-C1 (100% против 78%; p < 0,001).
Заключение. У больных ОЛЛ отмечено изменение профиля KIR/HLA комбинаций, характерного для контрольной группы. Гомозиготность по HLA-C2/C2 может быть фактором, способствующим резистентности к развитию ОЛЛ.
Клеточный биочип для одновременного исследования морфологии и иммунофенотипа лимфоцитов периферической крови и костного мозга больных лимфопролиферативными заболеваниями В-клеточного
происхождения
А.Н. Хвастунова 12, А.О. Доронина 13, И.М. Черных 1, О.С. Федянина 2, С.А. Кузнецова 123, Ф.И. Атауллаханов 123
1 Федеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева Минздравсоцразвития России; 2 Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН;
3 ФГБУ Гематологический научный центр Минздравсоцразвития России, Москва
Введение. Основополагающими методами при диагностике онкогематологических заболеваний являются микроскопическое (морфологическое) исследование клеток крови и костного мозга и иммунофенотипирование. Наличие в мазках периферической крови лейкоцитов с патологической морфологией или лейкоцитов, не характерных для нормальной периферической крови, является важнейшей информацией при постановке диагноза. Иммунофенотипирование (определение поверхностных антигенов клеток крови, проводимое обычно с помощью проточной цитофлюориметрии) позволяет обнаружить наличие в образце клеток с редким иммунофенотипом, но не дает возможности морфологического анализа именно той конкретной клетки, которая имеет "подозрительный" иммунофенотип. В настоящий момент успешная диагностика онкогематологических заболеваний базируется на сочетании иммунофенотипирования, морфологического и молекулярно-биологического анализа клеток крови. Однако невозможность проведения анализа поверхностных антигенов и морфологического исследования на одних и тех же клетках может приводить к противоречиям при формулировке диагноза в тех случаях, когда важно определить иммунофенотип клеток, имеющих патологическую или атипичную морфологию.
Материалы и методы. Для решения данной задачи нами разработан клеточный биочип для параллельного
иммунофенотипирования и морфологического исследования лейкоцитов человека. Биочип представляет собой прозрачную подложку размером 22 х 22 мм, на которой иммобилизованы антитела к 35 поверхностным антигенам лейкоцитов. При инкубации биочипа с суспензией лейкоцитов клетки, несущие определенный поверхностный антиген, связываются с иммобилизованными антителами. После отмывки на поверхности биочипа остаются области, покрытые лимфоцитами, несущими тот или иной поверхностный антиген, морфология которых затем исследуется стандартными цитологическими методами. Таким образом, биочип позволяет исследовать морфологию клеток крови, для которых известен один из ее поверхностных CD антигенов.
Результаты и обсуждение. С помощью клеточного биочипа были исследованы периферическая кровь и костный мозг 22 больных хроническим В-клеточным лимфолейкозом (В-ХЛЛ), 11 - волосатоклеточным лейкозом (ВКЛ), 12 - множественной миеломой (ММ), 6 - лимфомой из клеток маргинальной зоны селезенки, 1 - макроглобу-линемией Вальденстрема. Мы показали, что иммунофенотип лимфоцитов, связавшихся с биочипом, соответствует данным проточной цитометрии, и морфология опухолевых клеток хорошо согласуется с данными, полученными стандартными методами морфологических исследований. Биочип позволяет определить иммунофенотип опухолевых
85
