Kir/hla-ассоциации у взрослых больных острыми лимфобластными лейкозами Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Приложение 1

Результаты. Исследование показало, что наиболее информативными параметрами для характеристики фенотипа лейкоцитов при окрашивании клеток флюорохромом Rhodamin B являются Contrast, Difference Entropy, Difference Variance, Inverse Difference Moment. С помощью данной методики выявлены количественные различия морфологии лейкоцитов при заболеваниях острым миелобластным лейкозом (формы М1, М2, М3 и М4), острым лимфобластным лейкозом, хроническим миелобластным лейкозом и хроническим лимфо-

бластным лейкозом. Полученные характеристики текстурных параметров клеток в целом соответствуют морфологическим особенностям лейкоцитов, известным из литературы.

Заключение. Полученные результаты позволяют заключить, что компьютерный анализ изображений лейкоцитов после окрашивания флюорохромом Rhodamin В может быть использован для дополнительной характеристики различных форм лейкозов в диагностических и прогностических исследованиях.

KIR/HLA-ассоциации у взрослых больных острыми лимфобластными лейкозами

Хамаганова Е.Г., Кузьминова Е.П., Юшкова А.А., Е.Н. Паровичникова ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва

Введение. Распознавание HLA-лигандов KIR-рецеп-торами (иммуноглобулинподобными рецепторами натуральных киллеров - NK) опосредует толерантность NK к собственным клеткам с нормальной экспрессией HLA-молекул. Функционально компетентными (лицензированными) являются NK, для KIR-рецепторов которых существует соответствующий(е) НЬА-лиганд(ы) в геноме собственного организма. В основном лигандами KIR являются молекулы HLA-С. Имеются противоречивые сообщения об ассоциациях между генами KIR и предрасположенностью к ОЛЛ у детей (Z.Almalte и соавт., 2011; F.Babor и соавт., 2012). ОЛЛ у взрослых отличается от ОЛЛ у детей многими биологическими характеристиками.

Цель работы. Изучение распределения KIR-генов и их HLA-лигандов у взрослых больных ОЛЛ и доноров компонентов крови для установления возможных ассоциаций.

Материалы и методы. KIR- и HLA-генотипированы 60 взрослых больных ОЛЛ (возраст 18-58 лет, медиана 35,3 года) и 93 неродственных донора компонентов крови в возрасте от 19 до 55 лет, медиана возраста 32,1 года (контрольная группа). Генотипирование проводили методом PCR-SSP наборами Invitrogen (США) в соответствии с рекомендациями производителя. Статистическую значимость различий показателей между группами определяли с помощью х2, вычисляли относительный риск (RR) развития заболевания и доверительный интервал (CI).

Результаты и обсуждение. HLA-С молекулы диморфны по позиции 80 пептидсвязывающей бороздки: аллели, не-

сущие аспарагин, относятся к группе HLA-C1 и являются лигандами KIR2DL2/3; аллели, несущие лизин, относятся к группе HLA-C2 и являются лигандами KIR2DL1. Среди больных ОЛЛ по сравнению со здоровыми донорами снижено число пациентов, гомозиготных по БЬА-С2/С2 (10 против 24%; р = 0,033; RR = 0,358; CI = 0,136-0,945), и имеется тенденция к увеличению числа гетерозигот БЬА-С1/С2 (57 против 45%). По сравнению с донорами у больных ОЛЛ не установлено отклонений в распределении частот KIR-генов, однако при анализе лицензированных KIR выявлено снижение числа больных с единственным лицензированным KIR-рецептором - KIR2DL1 (без лицензированного KR2DL2/3) - 8 против 19% у доноров компонентов крови (р = 0,063; RR = 0,37; CI = 0,132-1,08), а также тенденция к повышению числа больных ОЛЛ с двумя лицензированными KIR-рецепторами - KIR2DL1 + KR2DL2/3 (54 против 44% у доноров).

Заключение. Полученные данные позволяют предполагать наличие ассоциаций между KIR-генами, их HLA-лигандами и предрасположенностью/резистентностью к развитию ОЛЛ во взрослом возрасте. Схожие KIR/ HLA-ассоциации отмечаются при некоторых так называемых вирусассоциированных опухолях. Гомозиготность по БЬА-С2/С2 (отсутствие HLA-d-лигандов) является фактором, ассоциирующимся с резистентностью к развитию ОЛЛ у взрослых. Другой возможный протектор развития ОЛЛ у взрослых - носительство только одного функционально активного KIR-рецептора 2DL1.

Использование клеточного биочипа в диагностике волосатоклеточного лейкоза

Хвастунова А.Н.1,2, Аль-Ради Л.С.3, Луговская С.А.4, Капранов Н.А.2, Горгидзе Л.А.3, Джулакян У.Л.3, Атауллаханов Ф.И. 12,3, Кузнецова С.А. 1,2,3 'ФНКЦ детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Д.Рогачева Минздрава России; 2ФГБУН Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН; 3ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России; 4ГБОУ ДПО Российская медицинская академия

последипломного образования Минздрава России, Москва

Введение. Для диагностики волосатоклеточного лейкоза (ВКЛ) необходимо определение иммунофенотипа особой популяции лимфоцитов с ворсинчатой морфологией. Проточная цитометрия не позволяет оценить морфологию исследуемых лимфоцитов.

Цель работы. Исследование чистой популяции опухолевых лимфоцитов пациентов с подозрением на ВКЛ и параллельное исследование их иммунофенотипа и морфологии или активности кислой фосфатазы с помощью биочипа на основе анти-CD-антител.

Материалы и методы: Биочип представляет собой прозрачную пластиковую подложку, на которой иммобилизованы антитела к 32 основным поверхностным дифференцировоч-ным антигенам лейкоцитов, каппа и ламбда легким цепям ^ и контроль. Биочип инкубируется с суспензией клеток, выделенных из периферической крови в градиенте плотности

Histopaque-1077. Лимфоциты, несущие определенный поверхностный антиген, связываются с иммобилизованными на биочипе антителами. После отмывки неспецифически связавшихся клеток на подложке остаются области, покрытые лимфоцитами, несущими тот или иной поверхностный антиген. После этого биочип высушивают и к связавшимся с ним клеткам применяют стандартные методы морфологической или цитохимической окраски, разработанные для стандартных мазков.

Результаты. Исследованы образцы крови 60 пациентов с подозрением на ВКЛ, у 49 был подтвержден ВКЛ, у 7 была диагностирована лимфома из клеток маргинальной зоны селезенки, у 1 - хронический лимфолейкоз, у 3 онкогематологиче-ских нарушений не было. Ворсинчатые лимфоциты больных ВКЛ составляли от 1 до 97% лимфоцитов и имели характерный иммунофенотип CD11c (100%), CD19 (100%), CD20 (100%), CD22 (100%), CD25 (96%), CD103 (96%), CD200 (96%), CD10