CC BY
29
Приложение 1
Результаты. Исследование показало, что наиболее информативными параметрами для характеристики фенотипа лейкоцитов при окрашивании клеток флюорохромом Rhodamin B являются Contrast, Difference Entropy, Difference Variance, Inverse Difference Moment. С помощью данной методики выявлены количественные различия морфологии лейкоцитов при заболеваниях острым миелобластным лейкозом (формы М1, М2, М3 и М4), острым лимфобластным лейкозом, хроническим миелобластным лейкозом и хроническим лимфо-
бластным лейкозом. Полученные характеристики текстурных параметров клеток в целом соответствуют морфологическим особенностям лейкоцитов, известным из литературы.
Заключение. Полученные результаты позволяют заключить, что компьютерный анализ изображений лейкоцитов после окрашивания флюорохромом Rhodamin В может быть использован для дополнительной характеристики различных форм лейкозов в диагностических и прогностических исследованиях.
KIR/HLA-ассоциации у взрослых больных острыми лимфобластными лейкозами
Хамаганова Е.Г., Кузьминова Е.П., Юшкова А.А., Е.Н. Паровичникова ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва
Введение. Распознавание HLA-лигандов KIR-рецеп-торами (иммуноглобулинподобными рецепторами натуральных киллеров - NK) опосредует толерантность NK к собственным клеткам с нормальной экспрессией HLA-молекул. Функционально компетентными (лицензированными) являются NK, для KIR-рецепторов которых существует соответствующий(е) НЬА-лиганд(ы) в геноме собственного организма. В основном лигандами KIR являются молекулы HLA-С. Имеются противоречивые сообщения об ассоциациях между генами KIR и предрасположенностью к ОЛЛ у детей (Z.Almalte и соавт., 2011; F.Babor и соавт., 2012). ОЛЛ у взрослых отличается от ОЛЛ у детей многими биологическими характеристиками.
Цель работы. Изучение распределения KIR-генов и их HLA-лигандов у взрослых больных ОЛЛ и доноров компонентов крови для установления возможных ассоциаций.
Материалы и методы. KIR- и HLA-генотипированы 60 взрослых больных ОЛЛ (возраст 18-58 лет, медиана 35,3 года) и 93 неродственных донора компонентов крови в возрасте от 19 до 55 лет, медиана возраста 32,1 года (контрольная группа). Генотипирование проводили методом PCR-SSP наборами Invitrogen (США) в соответствии с рекомендациями производителя. Статистическую значимость различий показателей между группами определяли с помощью х2, вычисляли относительный риск (RR) развития заболевания и доверительный интервал (CI).
Результаты и обсуждение. HLA-С молекулы диморфны по позиции 80 пептидсвязывающей бороздки: аллели, не-
сущие аспарагин, относятся к группе HLA-C1 и являются лигандами KIR2DL2/3; аллели, несущие лизин, относятся к группе HLA-C2 и являются лигандами KIR2DL1. Среди больных ОЛЛ по сравнению со здоровыми донорами снижено число пациентов, гомозиготных по БЬА-С2/С2 (10 против 24%; р = 0,033; RR = 0,358; CI = 0,136-0,945), и имеется тенденция к увеличению числа гетерозигот БЬА-С1/С2 (57 против 45%). По сравнению с донорами у больных ОЛЛ не установлено отклонений в распределении частот KIR-генов, однако при анализе лицензированных KIR выявлено снижение числа больных с единственным лицензированным KIR-рецептором - KIR2DL1 (без лицензированного KR2DL2/3) - 8 против 19% у доноров компонентов крови (р = 0,063; RR = 0,37; CI = 0,132-1,08), а также тенденция к повышению числа больных ОЛЛ с двумя лицензированными KIR-рецепторами - KIR2DL1 + KR2DL2/3 (54 против 44% у доноров).
Заключение. Полученные данные позволяют предполагать наличие ассоциаций между KIR-генами, их HLA-лигандами и предрасположенностью/резистентностью к развитию ОЛЛ во взрослом возрасте. Схожие KIR/ HLA-ассоциации отмечаются при некоторых так называемых вирусассоциированных опухолях. Гомозиготность по БЬА-С2/С2 (отсутствие HLA-d-лигандов) является фактором, ассоциирующимся с резистентностью к развитию ОЛЛ у взрослых. Другой возможный протектор развития ОЛЛ у взрослых - носительство только одного функционально активного KIR-рецептора 2DL1.
Использование клеточного биочипа в диагностике волосатоклеточного лейкоза
Хвастунова А.Н.1,2, Аль-Ради Л.С.3, Луговская С.А.4, Капранов Н.А.2, Горгидзе Л.А.3, Джулакян У.Л.3, Атауллаханов Ф.И. 12,3, Кузнецова С.А. 1,2,3 'ФНКЦ детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Д.Рогачева Минздрава России; 2ФГБУН Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН; 3ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России; 4ГБОУ ДПО Российская медицинская академия
последипломного образования Минздрава России, Москва
Введение. Для диагностики волосатоклеточного лейкоза (ВКЛ) необходимо определение иммунофенотипа особой популяции лимфоцитов с ворсинчатой морфологией. Проточная цитометрия не позволяет оценить морфологию исследуемых лимфоцитов.
Цель работы. Исследование чистой популяции опухолевых лимфоцитов пациентов с подозрением на ВКЛ и параллельное исследование их иммунофенотипа и морфологии или активности кислой фосфатазы с помощью биочипа на основе анти-CD-антител.
Материалы и методы: Биочип представляет собой прозрачную пластиковую подложку, на которой иммобилизованы антитела к 32 основным поверхностным дифференцировоч-ным антигенам лейкоцитов, каппа и ламбда легким цепям ^ и контроль. Биочип инкубируется с суспензией клеток, выделенных из периферической крови в градиенте плотности
Histopaque-1077. Лимфоциты, несущие определенный поверхностный антиген, связываются с иммобилизованными на биочипе антителами. После отмывки неспецифически связавшихся клеток на подложке остаются области, покрытые лимфоцитами, несущими тот или иной поверхностный антиген. После этого биочип высушивают и к связавшимся с ним клеткам применяют стандартные методы морфологической или цитохимической окраски, разработанные для стандартных мазков.
Результаты. Исследованы образцы крови 60 пациентов с подозрением на ВКЛ, у 49 был подтвержден ВКЛ, у 7 была диагностирована лимфома из клеток маргинальной зоны селезенки, у 1 - хронический лимфолейкоз, у 3 онкогематологиче-ских нарушений не было. Ворсинчатые лимфоциты больных ВКЛ составляли от 1 до 97% лимфоцитов и имели характерный иммунофенотип CD11c (100%), CD19 (100%), CD20 (100%), CD22 (100%), CD25 (96%), CD103 (96%), CD200 (96%), CD10
Гематол. и трансфузиол., 2014, т. 59, № 1
(8%), CD2 (20%), CD5 (6%), CD23 (%6), каппа (65%), ламбда (35%). Совпадение диагнозов с данными проточной цитоме-трии составляет 98%. Цитохимическое определение тартра-тустойчивой кислой фосфатазы было положительным во всех исследованных случаях классического ВКЛ.
Заключение. Клеточный биочип на основе анти-CD-антител совмещает анализ иммунофенотипа, морфологии лимфоцитов и цитохимическое исследование, что позволяет применять его в дифференциальной диагностике лимфопро-лиферативных заболеваний.
Сравнение костного мозга и периферической крови для мониторинга минимальной остаточной болезни при остром лимфобластном лейкозе у детей первого года жизни, получающих терапию по протоколу MLL-Baby
Цаур Г.А.1,2, Попов А.М.1,2, Наседкина Т.В.3, Кустанович А.М.4, Ригер Т.О.1,2, Стренева О.В.1,2, Шориков Е.В.1,2, Солодовников А.Г.2,5,
Савельев Л.И.1,2,5, Л.Г.Фечина 1,2
1 ГБУЗ СО Областная детская клиническая больница №1; 2 ГБУЗ ТО Институт медицинских клеточных технологий, Екатеринбург; 3 ФГБУН Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН, Москва; 4 ГУ Республиканский научно-практический центр детской онкологии, гематологии и иммунологии, Минск, Беларусь; 5 ГБОУ ВПО Уральский государственный медицинский университет, Екатеринбург
Цель работы. Сравнение прогностического значения вы- ответственно; p = 0,001). В однофакторном анализе возраст явления минимальной остаточной болезни (МОБ) в костном младше 6 мес, инициальный лейкоцитоз выше 100 • 109/л,
мозге (КМ) и периферической крови (ПК) у детей первого года жизни с острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ) и наличием перестроек гена MLL при терапии по протоколу МЬЬ-ВаЬу, разработанному Л.Г.Фечиной.
Материалы и методы. В исследование включены 53 больных с медианой возраста 5,3 мес. МОБ выявляли методом ПЦР в режиме реального времени путем детекции различных химерных транскриптов с участием гена MLL. Образцы КМ были взяты на 15-й (точка наблюдения 1 - ТН1) и 36-й (ТН2) дни индукционной терапии и далее после каждого курса полностью транс-ретиноевой кислоты (ТН3-ТН9).
Результаты. При исследовании КМ наиболее информативной являлась ТН4. В этой ТН БСВ в группе МОБ-негативных больных была статистически значимо выше, чем у больных с наличием МОБ (75,9 ± 8 и 13,6 ± 7,3% со-
инициальная нейролейкемия и сохранение МОБ в ТН4 были связаны с неблагоприятным прогнозом (р < 0,05). Однако в многофакторной модели пропорционального риска Кокса единственным значимым фактором осталось сохранение МОБ в ТН4 (ОО = 5,216; 95% ДИ 2,044-13,3066; р = 0,001). ПК давала качественно сопоставимые с КМ результаты в 68% случаев. Наибольшая конкордантность между выявлением МОБ в КМ и ПК зафиксирована в ТН2, наименьшая - в ТН5. МОБ в ПК при ее отсутствии в КМ выявлена только в 1 образце. Преимуществ использования ПК перед КМ не найдено.
Заключение. В отличие от ПК результаты определения МОБ в КМ имеют важное прогностическое значение при МАА-позитивном ОЛЛ у детей первого года жизни, получающих терапию по протоколу МЬЬ-ВаЬу.
Эффективность долгосрочного лечения ритуксимабом больных с резистентной аутоиммунной
гемолитической анемией
Цветаева Н.В., Никулина О.Ф., Шурхина Е.С. ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва
Введение. Аутоиммунная гемолитическая анемия (АИГА) с положительной прямой пробой Кумбса в 20-30% случаев проявляет резистентность к стандартной терапии.
Цель работы. Оценить эффективность и оптимальный режим терапии ритуксимабом (РТМ) у 26 резистентных больных АИГА.
Материалы и методы. РТМ в разовой дозе 375 мг/м2 вводили 22 больным АИГА с тепловыми гемагглютининами и 4 больным со смешанным типом антител (холодовые и тепловые гемагглютинины с клинически выраженной реакцией на холод). Курсовую дозу определяли по степени элиминации В-лимфоцитов (СD19+, СD20+) перед вторым введением РТМ: при количестве В-лимфоцитов менее 0,5-1% ограничивались вторым введением препарата на 8-й день, при количестве В-лимфоцитов более 1% проводили общепринятый курс из 4 введений РТМ. До начала лечения концентрация гемоглобина колебалась от 37 до 86 г/л, ретикулоцитоз 8-23%о, непрямой билирубин 45-85 мкмоль/л, прямая проба Кумбса 1:4-1:32, титр холодовых антител 1:1064-1:16 000.
Результаты. Ответ на терапию РТМ: полная ремиссия отмечена у 17 (68%) больных (НЬ > 120 г/л, ретикулоциты < 20%о, исчезновение других признаков гемолиза), частичная - у 7 (28%) больных (сохранялась положительная прямая Кумбса 1:4, холодовые аутоантитела 1:560). Продолжительность ремиссии составила от 4 до 36 мес. При выявлении минимальных признаков возврата гемолиза РТМ вводили в том же режиме, с достижением повторного ответа, продолжительность которого увеличивалась (12-18 мес). У 15 больных проведено 2-4 курса, предупреждающих рецидивы АИГА. Увеличения частоты инфекционных осложнений не отмечено.
Заключение. Терапия ритуксимабом в редуцированных дозах под контролем CD19, CD20 позволяет достичь клини-ко-гематологической ремиссии у большинства больных с ранее резистентной АИГА. При выявлении первых признаков гемолиза высокочувствительными лабораторными методами возможно повторное введение препарата с пролонгацией ремиссии.
Возможность прерывания терапии ингибиторами тирозинкиназ у больных хроническим миелолейкозом
с полным молекулярным ответом
Челышева Е.Ю.1, Туркина А.Г.1, Гусарова Г.А.1, Быкова А.В.1, Кузнецов С.В.1, Горячева С.Р.1, Соколова М.А.1, Новицкая Н.В.2 1ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России; 2Городской гематологический стационар им. С.П.Боткина, Москва
Введение. Возможность ведения больных хроническим (ПМО) без терапии показана в рамках клинических иссле-миелолейкозом (ХМЛ) с полным молекулярным ответом дований. Накопленный опыт наблюдения больных ХМЛ с
