CC BY
57
А.А. Степочкин [и др.] // Механизмы и закономерности индивидуального развития человека и животных: матер. междунар. науч.-практич. конф., посвящ. 75-летию заслуженного деятеля науки Российской Федерации, доктора биологических наук, профессора Леонида Петровича Тель-цова. Саранск, 2013. С. 188 - 194.
9. Наука биология развития — практике ветеринарной медицины / Л.П. Тельцов, И.Г. Музыка, А.А. Степочкин
[и др.] // Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных: матер. междунар. науч.-практич. конф., посвящ. 80-летию каф. анатомии и гистологии сельскохозяйственных животных, 110-летию со дня рождения профессора Н.И. Акаевского и 15-летию кинологического центра. Троицк, 2009. С. 109 — 114.
Кандидоз желудочно-кишечного тракта свиней
ЕО.Рысцова, к.с.-х.н, ФГАОУ ВО РУДН; Т.С.Кубатбеков,
д.б.н., профессор, ФГБОУВО РГАУ-МСХА; НЛ. Сачивкина, к.б.н., ЕВ. Куликов к.б.н., ОВ.Березняк, магистрант, ФГАОУ ВО РУДН
Свиноводство в Российской Федерации является динамично развивающейся отраслью животноводства [1 — 4]. При этом заболеваемость микозами ежегодно растёт в связи с содержанием животных на ограниченных площадях, увеличением числа и спектра патогенных убиквитарных микроорганизмов, распространением иммунодефицитных состояний, возросшего числа вирусных и бактериальных инфекций, безразборным приёмом антибиотиков и т.д. [5, 6]. Множество патогенных грибов, а также дрожжеподобные грибы рода Candida, принадлежат к 4-й группе — условно-патогенных. В большинстве случаев кандидоз вызывают такие представители рода Candida как С. albicans, С. parapsilosis, С. tropicalis, С. glabrata, С. krusei. Чаще всего они выглядят под микроскопом в виде почкующихся клеток, некоторые имеют псевдомицелий.
С. albicans — паразитирующий грибок, имеющий возможность образовывать как истинный мицелий, так и псевдомицемий с хламидоко-нидиями. Этот грибок наиболее распространён в организме животных [7, 8], причём одним из уязвимых мест локализаций при развитии канди-доза служит желудочно-кишечный тракт (ЖКТ). Ситуацию могут усугублять острые и хронические заболевания слизистой ротовой полости, болезни ЖКТ (хронические гастриты, воспалительные заболевания кишечника, синдром раздражённого кишечника, травматизация слизистой оболочки), приём антибиотиков, которые ликвидируют все бактерии, в том числе и здоровую микрофлору пищеварительного тракта [9, 10].
Патогенез кандидоза ЖКТ патологии определяется соотношением факторов патогенности микроорганизма и снижением резистентности макроорганизма. Патогенность С. Albicans определяют следующие факторы [11]:
— изменчивость за счёт генетических и регу-ляторных механизмов: полиморфизм, «феномен переключения»;
— способность к грибковой адгезии: к фибриногену, ламинину, фибронектину, системе комплимента;
— активные протеиназы, фосфолипаза, гиалуро-нидаза, гемолитический фактор, благодаря которым грибы проникают сквозь защитный гликопротеи-новый слой слизистой оболочки ЖКТ
По наличию факторов патогенности С. albicans превосходит все прочие виды Candida. Анализ генетических детерминант некоторых штаммов C.albicans показал широкую распространённость генов резистентности к препаратам-антимикотикам [11 — 12]. Доказано существование 10 генов, секре-тирующих аспартат-протеиназы (SAP1 — 4, SAP6 7, SAP9 — 10 и др.), ведущих к прогрессированию заболевания. Неспецифическая резистентность ЖКТ представлена в основном иммунной системой, ассоциированной с кишечником. Интраэпителиаль-ные лимфоциты, препятствующие проникновению Candida через lamina propria и агрегации в пейеровых бляшках, а также В-лимфоциты кишечника — продуценты секреторных IgA и IgM, которые блокируют способность грибов к адгезии, составляют клеточную часть этой системы. Т-клетки вырабатывают интерферон, усиливают фагоцитоз, активируют Т-цитотоксические лимфоциты. CD4 и CD8 участвуют в реакциях местного иммунитета. Фагоцитоз (макрофагальный и нейтрофильный) препятствует диссеминации кандидоза инфекции. Нейтрофилы благодаря собственной «киллерной» субстанции через специфический механизм запускают активацию комплемента, который усиливает фагоцитоз [11, 13]. Защитными факторами, препятствующими проникновению грибов Candida, становятся также физиологически протекающие процессы в ЖКТ полноценная регенерация эпителиоцитов, кислотно-ферментативный барьер, достаточная перистальтическая активность. Значительную роль, снижающую неспецифическую резистентность, играет длительная кислото-супрессия в желудке. В этих условиях появляются вегетирующие формы, Candida активирует патогенные свойства, образуется псевдомицелий или мицелий, повреждающий слизистую оболочку.
Представители постоянной микрофлоры желудочно-кишечного тракта (аэробные лактоба-
циллы, анаэробные бифидум-бактерии, нормальная кишечная палочка и др.), которые выполняют барьерную функцию, уменьшают возможность кандид к инактивации лизоцима и образованию биопленки. Выражается кандидоз ЖКТ тем, что рост дрожжеподобных грибов зачастую наблюдается в многослойном плоском эпителии полости рта и пищевода, менее всего — в однослойном цилиндрическом эпителии кишечника. В верхних отделах ЖКТ происходит инвазия грибов СаМ1йа, а в нижних отделах — колонизация. При этом в кишечнике даже на стадии адгезии могут наблюдаться клинические проявления неинвазивного кандидоза.
В клинической практике оптимальной является классификация кандидоза по локализации и уровню (глубине) поражения. Кандидоз ЖКТ относят к глубоким микозам и выделяют перечисленные ниже локализации:
— орофарингеальный кандидоз;
— кандидозный эзофагит;
— кандидоз желудка;
— кандидоз тонкого и толстого отделов кишечника:
— секреторная диарея, ассоциированная с кан-дидозом.
Среди осложнений кандидоза выделяют кишечную перфорацию, пенетрацию язв в окружающие ткани и системы, кровотечения, генерализации с поражением паренхиматозных органов и развитием грибкового сепсиса.
Исследование проведено с целью определения отделов ЖКТ свиней, в которых превалирует обнаружение кандид, выявления их видовой принадлежности.
Материал и методы исследования. На станции по борьбе с болезнями животных Северного административного округа г. Москвы за период 2018 — май 2019 гг. были исследованы туши свиней с признаками грибкового заболевания ЖКТ. Осмотр и оценка органов и тканей ЖКТ были произведены специалистами согласно «Правилам ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов» (утв. Минсельхозом СССР 27.12.1983 г. в ред. от 16.02.2018 г.).
Лабораторную диагностику туши на наличие инфекционных агентов проводили согласно «Порядку санитарно-микробиологического контроля при производстве мяса и мясных продуктов» (утв. Минсельхозпродом России 15.12.1995). Обращали внимание на случаи, когда в ротовой полости слизистая оболочка была покрыта белой рыхлой пленкой; слизистая пищевода покрыта толстым белым налётом, который легко снимается, наблюдается катарально-геморрагическое воспаление; в желудке на стенках находится серовато-жёлтая плёнка, под которой обнаруживается гиперемия слизистой оболочки; в тонком отделе кишечника слизистая оболочка утолщена, набухшая, отёчная,
гиперемированная, с кровоизлияниями и покрыта творожисто-подобными наложениями или слизью; пейеровы бляшки и солитарные фолликулы увеличены; слизистая оболочка толстого отдела набухшая, с белым рыхлым налётом, а под ним — кровоизлияния и изъявления, иногда покрыта слизью, фибринозными плёнками, с некротическими участками. Особое внимание привлекали увеличенные лимфатические узлы органов брюшной полости, а именно желудочные и брыжеечные.
Желудочные лимфатические узлы (Inn. Gastrici) — один — пять, разной величины, лежат на малой кривизне желудка. Лимфу собирают с желудка, поджелудочной железы, пищевода. Отток лимфы осуществляется в чревный ствол.
Брыжеечные лимфатические узлы (Inn. Mesenteriales) лежат в виде цепи из большого количества узлов в брыжейке всей тонкой кишки, между извилинами ободочной кишки и в короткой брыжейке прямой кишки. Лимфу собирают с соответствующих отделов тонких и толстых кишок, с поджелудочной железы. Отток лимфы осуществляется в поясничную цистерну.
Для уточнения характера заболевания осуществляли микроскопию тканей с разрезов лимфоузлов, фрагментов творожистых наложений со слизистых оболочек с окраской гематоксилин-эозином или генцианвиолетом. Забор материала со слизистых оболочек осуществляли стерильными ватными тампонами. Посев производили на агаризированную среду Сабуро, содержащую 2-процентную глюкозу и хлорамфеникол. Чашки Петри инкубировали при t=35°C в течение четырёх суток, ежедневно просматривая их. При появлении роста проводили микроскопию по Граму, выделение чистой культуры и видовую идентификацию — с помощью масс-спектрометра MALDI-TOF (Bruker Daltonics, США) в соответствии с протоколом исследования компании Bruker). Культуру каждого штамма Candida spp. суспендировали сначала в 300 мкл деионизированной воды, затем добавляли 900 мкл 100-процентного этанола, встряхивали и центрифугировали (15000 об., 2 мин). Надосадочную жидкость сливали и центрифугировали при тех же показателях. К осадку добавляли по 50 мкл 70-процентной муравьиной кислоты и ацетони-трила, перемешивали и снова центрифугировали (15000 об., 2 мин). Супернатант парно наносили по 1 мкл на 96-местную стальную пластину, сушили при комнатной температуре и затем наносили по 1 мкл матрицы (насыщенный раствор а-циано-4-гидроксикоричной кислоты).
Результаты исследования. Из исследованных нами туш свиней в выбранный период времени было доказано 47 случаев кандидоза ЖКТ, причём грибы Candida spp. были выделены из ротовой полости в 28% (n=13) случаев, в тонком отделе кишечника — 49% (n=23) и в толстом отделе кишечника — 23% (n=11). Частота встречаемости
дрожжеподобных грибов рода Candida в тканях и органах иммунной системы коррелировала с выявлением этого возбудителя в пищеварительном тракте. В лимфоузлах отмечали диссеминированный тромбоз, периваскулярный отёк, признаки застойной гиперемии. Как правило, отмечалась гиперплазия лимфатических узлов, пейеровы бляшки и соли-тарные фолликулы были набухшие, серо-красного цвета. Мезентериальные и брыжеечные лимфатические узлы на разрезе были серо-красного, тёмно-бордового цвета, с мелкими кровоизлияниями (рис. 1); между корковой и мозговой зоной не выявляли чётко очерченных границ. Корковое вещество имело тёмную окраску, обнаруживались близкорасположенные лимфоциты, объём ядра преобладал над объёмом цитоплазмы. Мозговое вещество светлое, лимфоциты имели бобовидные ядра и широкий ободок цитоплазмы, в строме — участки разрежения, а также скопления плазматических клеток.
Для обнаружения возбудителя болезни проводили микроскопические исследования фрагментов творожистых наложений со слизистых оболочек и срезов лимфатический узлов, сделанных микротомом. При окрашивании генцианвиолетом отчётливо различались крупные овальные дрожжевидные клетки, иногда псевдомицелий, и отторгнутые, дистрофически изменённые клетки
Культуральный микологический метод основан на посеве биоматериалов со слизистых оболочек на среду Сабуро с дальнейшим поэтапным выделением чистой культуры. В настоящее время в арсенале современных лабораторий имеется несколько диагностических систем для определения видовой принадлежности грибов — от культуральных и биохимических до молекулярно-генетических. Однако при идентификации Candida spp. методами MALDI-TOF MS результаты получают достаточно быстро и менее трудоёмко.
В результате идентификации частота выделения C. albicans составляла 81% (n=38), далее следовали С. parapsilosis — 9% (n=4), C. tropicalis — 4% (n=2), С. glabrata — 2% (n=1). Также была зарегистрирована сочетанная контаминация albicans — parapsilosis и albicans — glabrata по одному случаю (по 2%).
Выводы. При микробиологическом мониторинге, проведённом в течение 2018 — 2019 гг., установлено, что случаи диагностирования кандидоза
разных отделов пищеварительного тракта свиней были зафиксированы и в ротовой полости (28%), и в тонком (49%), и в толстом отделах кишечника (23%). Причём преобладало выделение вида С. albicans (81%). Специалистами было принято решение: поскольку кандидоз не относится к категории особо опасных инфекций и законодательных нормативов по распределению таких туш нет, то с мясом следует поступить как в случаях с аспер-гиллёзом. A именно, все внутренние органы были утилизировали, а мясо в виде полутуши было отправлено на реализацию.
Литература
1. Перевойко ЖА., Косилов В.И. Основные биохимические показатели крови хряков и свиноматок крупной белой породы || Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2014. № 5 (49). С. 196 - 199.
2. Косилов В.И., Перевойко ЖА. Воспроизводительные качества свиноматок крупной белой породы при сочетании с хряками разных линий || Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2014. № 6 (50). С. 122 - 127.
3. Перевойко ЖА., Косилов В.И. Воспроизводительная способность свиноматок крупной белой породы и её двух-трёхпородных помесей || Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2014. № 6 (50). С. 161 - 163.
4. Косилов В.И., Перевойко ЖА. Биохимические показатели сыворотки крови молодняка свиней крупной белой породы разных генотипов || Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2015. № 3 (53). С. 194 — 196.
5. Сергеев Л.Ю., Сергеев Ю.В. Кандидоз. Природа инфекции, механизмы агрессии и защиты, лабораторная диагностика, клиника и лечение. М.: Триада-X, 2001. 472 с.
6. Сачивкина Н.П. Влияние микробного фермента литиказы на развитие экспериментального кандидозного вагинита: дис. ... кан,д. биол. наук. М., 2010. 117 с.
7. Abdullahi, Umar Faruk. Intrigues of biofilm: A perspective in veterinary medicine | Veterinary Worl. 2016. 9(1): 12 — 18.
8. Сачивкина Н.П., Ленченко Е.М., Лисейцев A^. Диагностика кандидоза у свиней || Ветеринария. 2018. № 11. С. 26 — 30.
9. Карамян Д.С., Савочкина Д.Ю., Ватников ЮА. НПВП-индуцированные гастроэнтеропатии || Международный научно-исследовательский журнал. 2016. № 11 — 5 (53). С. 24 - 26.
10. Чеботарь И.В., Паршиков В.В. Исследование действия анти-микотических препаратов на биопленки, сформированные грибами рода Сandida || Лкушерство и гинекология. 2013. № 5. С. 98 - 102.
11. Козлова И.В. Кандидоз желудочно-кишечного тракта |И.В. Козлова, Л.И. Лекарева, Д.П. Быкова [и др.] || Экспериментальная клиническая гастроэнтерология. 2016. № 3 (127). С. 40 - 46.
12. Ramage G., Vande Walle K., Wickes B.L., Lpez-Ribot J.L. Standardized method for in vitro antifungal susceptibility testing of Candida albicans biofilms. Antimicrob. Agents Chemother. 2001. 45(9): 2475 - 2479.
13. Бурова СА. Современные представления о кандидозе пищеварительного тракта || Успехи медицинской микологии. 2006. № 8. С. 113 - 116.
