CC BY
4
ники). Это связано с участием аскорбиновой кислоты в защитных реакциях организма и процессах детоксикации избыточного ацетилхолина.
В качестве интегрального показателя общего состояния организма и его работоспособности мы использовали физическую нагрузку — плавание животных. Длительность плавания крыс, получавших Антио в дозах 6,2, 3,1 и 1,55 мг/кг, соответственно составляла 7,18 и 20 мин.; у животных, которым вводили препат в меньших дозах (0,77 и 0,38 мг/кг), она составляла 30—60 мин. Контрольные крысы плавали 60—75 мин.
Пороговой в длительном эксперименте является доза Антио 0,38 мг/кг, так как токсическое влияние этой дозы было выражено меньше, чем других доз, и проявлялось в угнетении активности холинэстеразы сыворотки и эритроцитов крови на 1-ми 3-м месяцах опыта и мозга на 10-м месяце исследования.
Основываясь на пороговой дозе Антио, установленной в 10-месячном эксперименте и составляющей 0,38 мг/кг, а также гигиенической оценке продуктов, полученных от культур, которые в период вегетации подвергались обработке этим пестицидом, мы предложили допустимые остаточные количества Антио в растительных продуктах питания (фрукты), равные 0,2 мг препарата на 1 кг веса продукта. Этот норматив утвержден Главным санитарно-эпидемиологическим управлением Министерства здравоохранения СССР.
Поступила 8/11 1971 г.
HYGIENIC STANDARDIZATION OF MAXIMAL PERMISSIBLE AMOUNTS OF ANTIO
PESTICIDE
N. M. Vorobieva, V. S. Lapchenko
Due to the absence of published data on the toxicity of the phosphororganic pesticide «Antio», acute, subacute and chronic laboratory poisoning tests were carried out with various doses of the investigated compound. Besides the specific test (effect on the cholinesterase activity) the author performed a hexanal test, studied the state of the protein fractions of blood and the vitamin content in the organs. A dose of 0.38 mg/kg was found to be of threshold value for «Antio» in inhibiting the cerebral cholinesterase activity.
УДК 618.981.25-022.38-039:616.3-008.1-078
К МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ СТАФИЛОКОККОВЫХ токсикозов
Канд. мед. наук Г. К■ Кацитадзе, Д. Г. Мерабишвили, Н. А. Папава
Научно-исследовательский институт санитарии и гигиены им. Г. М. Натадзе Министерства здравоохранения Грузинской ССР, Тбилиси
Нами изучено 44 штамма стафилококков, выделенных при пищевых отравлениях как от пострадавших (рвотные массы, промывные воды желудка и т. д.), так и из продуктов питания. Исследовали следующие свойства: морфология, пигментообразование, биохимическая активность, гемолитич-ность, способность коагулировать плазму.
Каждый штамм (по 5 субкультур) типировали стафилококковыми типовыми фагами, изготовленными в ИЭМ им. Гамалеи АМН СССР.
Морфологически изученные штаммы оказались идентичными — мелкие, нежные, грамположительные кокки. 43 штамма образовывали золотистый пигмент. 1 штамм — белый; 3 штамма не давали гемолиза, 2 не ферментировали маннит, причем у 1 штамма одновременно осутствовали эти свойства. Кардинальным признаком патогенности — плазмокоагулирующей способностью — обладали все штаммы.
Особый интерес представлял результат фаготипирования, поскольку этот метод остается единственным критерием установления источника инфекции и прослеживания эпидсвязей. Из 44 штаммов 14 типовыми фагами
не лизировались; остальные принадлежали III фагогруппе, представители которой чаще выделяются при пищевых отравлениях. Л. И. Петрушина (1966) отмечает, что большая часть нетипирующихся штаммов относится к стафилококкам, источником выделения которых служат животные, большей частью коровы, и предлагает дополнительный набор соответствующих фагов. Учитывая это обстоятельство, мы отослали нетипирующиеся штаммы в микробиологический отдел Института питания АМН СССР, где и было произведено их типирование международным набором типовых фагов и «животными» фагами (Л. И. Петрушина). Однако и после этого фаготип 8 штаммов определить не удалось.
20 штаммов были испытаны на энтеротоксичность по Столмаковской (1963) с использованием белых мышей. Однако статистическая обработка результатов повторных опытов показала, что патологические явления обнаруживаются незакономерно и достоверность полученных данных недостаточна.
Единственными модельными животными для воспроизведения стафи-локкового токсикоза остаются обезьяны и котята, как правило, недоступные для лабораторий практической сети.
Для изучения высокодисперсных антигенов, в частности токсинов, в лабораторной практике все шире используется метод диффузионной преципитации в геле, характеризующийся простотой, высокой чувствительностью и четкостью результатов; однако этот метод применим лишь в том случае, если имеется соответствующая антисыворотка с достаточно высоким титром.
Так, О. Н. Сиротинина с успехом использовала реакцию преципитации для определения стафилококкового энтеротоксина в пищевых продуктах; при этом автор брал антиэнтеротоксическую сыворотку, полученную путем иммунизации кроликов. Д. П. Шреер указывает на возможность установления токсигенности (но не энтеротоксигенности) стафилококков в реакции преципитации с применением стафилококковой антитоксической сыворотки.
Не располагая моновалентной антитоксической сывороткой к стафилококковому энтеротоксину, мы попытались воспользоваться стафилококковой антитоксической сывороткой, изготовленной в ИЭМ им. Гамалеи АМН СССР, рассчитывая на то, что в ней должны были находиться антитела, соответствующие энтеротоксину. Поскольку сыворотка не была моновалентной, нам оставалось изолировать из цельного стафилококкового токсина энтеро-токсин, что в определенной степени облегчалось термостабильностью последнего. В основном мы использовали методику, предложенную Bergdoll и соавт. В опыт было взято 6 штаммов стафилококка, среди которых энте-ротоксин продуцировал 4, что было подтверждено в биологическом опыте. От этих штаммов получены препараты энтероксина, которые брали в опыт в 3 вариантах: нативный токсин; токсин, прогретый при 100° в течение 4 часов; токсин, прогретый при 100° в течение 15 мин. Реакцию ставили по методу Оухтерлони; 1 часть агара растворяли в 30 частях горячей воды и затем лреципитировали 0,5% раствором СаС12. Осадок удаляли. Застывший агар измельчали и промывали в течение 72 часов; добавляли мертиолят натрия (1 : 10 000).
Перед опытом агар расплавляли и охлаждали до 45—50°; добавляли 50% сыворотки и наливали тонким слоем на чашку Петри. На чашках устанавливали специальные металлические формы — трубочки и заливали другой порцией агара. После застывания его и извлечения трубочек на нем оставались лунки. В центральную лунку вносили антитоксическую сыворотку, а в периферийные — токсин. В качестве контроля брали среду, на которой приготовляли токсин. Чашки оставляли на ровной поверхности в течение 5 часов, а затем держали на холоду. Наблюдения велись до 14-го дня. В случае положительной реакции вокруг лунок с антигеном появлялись более или менее четкие зоны преципитации.
Наблюдения дали следующие результаты. При использовании в качестве антигена нативных токсинов вокруг лунок появлялось несколько зон преципитации (по 4 у 3 штаммов и по 3 у других 3 штаммов). В опытах с прогретыми при 100° в течение 15 мин. препаратами токсинов, полученных от тех же энтеротоксигенных штаммов, вокруг их лунок образовалось по 1 зоне преципитации, тогда как препараты 2 штаммов не дали никакого результата.
При испытании препаратов токсинов всех штаммов, прогретых при 100° в течение 4 часов, преципитация не отмечена ни в одном случае.
Изучена также пригодность культур некоторых тканей как для установления токсигенности стафилококков, так и для определения энтероток-сина. Приготовленные описанным выше способом токсины испытывали на культурах следующих тканей: «L» (фибробласты мышиной подкожной соединительной ткани), Нер-2 (клетки злокачественного образования), ПЭБ (клетки почек эмбриона барана). Схема опытов была следующей. В пробирках с 1 мл среды № 199 и 10% бычьей нормальной сыворотки (БНС) вносили 150 000—200 000 клеток и культивировали в течение 48 часов. В среду предварительно добавляли мономицин — 100 ед. на 1 мл. Полученный монослой отмывали в среде № 199 троекратно, после чего на него наносили испытуемый препарат в объеме 0,2 мл и добавляли среду № 199 и 2,5% БНС, без антибиотика. В контрольных пробирках на монослой наносили 0,2 мл среды, на которой изготовлялся токсин. Пробирки просматривали через 24 и 48 часов; цитотоксическое действие определяли микроскопическим путем (слущивание, деформация клеток) и оценивали по четырехбалльной системе.
Результаты наблюдения показали, что цитотоксическое действие нативных препаратов токсина в достаточной степени проявляется на всех испытанных культурах тканей, но наиболее яркая картина получена на культуре «L» (Е. И. Беляев также указывает на наибольшую чувствительность к цельному стафилококковому токсину культуры фибробластов). Четко выраженное цитотоксическое действие получено при воздействии на культурах тканей прогретыми при 100° в течение 15 мин. препаратами токсинов их штаммов. Что касается серии опытов, в которых использованы препараты токсина, прогретые при 100° в течение 4 часов, то слабый цитопа-тогенный эффект отмечен лишь в 1 случае.
Выводы
1. Фаготипирование стафилококков, являясь незаменимым методом микробиологического и эпидемиологического анализа, безусловно, требует усовершенствования за счет расширения' набора типовых фагов.
2. Для установления энтеротакСичности стафилококка с успехом может быть использован метод диффузионной преципитации в геле; в той же целью целесообразно использовать культуры тканей, поскольку метод достаточно прост, удобен и более доступен, чем биологическая проба.
ЛИТЕРАТУРА
Беляев Е. И. Ж- микробиол., 1964, № 10, с. 32. — С и р о т и н и н а О. Н. Там же, 1962, № 1, с. 90. — Ш р а е р Д. П. Лабор. дело, 1967, № 3, с. 171. — В е г g-d о 1 I M. G., S u g i y a m a H., Hibnick H. E., Arch. Biochem., 1956, v. 85, p. 62.
Поступила 12/1 1971 г.
THE MICROBIOLOGICAL DIAGNOSIS OF STAPHYLOCOCCAL TOXICOSES G. K. Katsitadze, D. G. Merabishvili, N. A. Papava
A greater number of identification phages is required for a wider use of phage typing. The enterotoxicity of staphylococcal strains may be determined by means of diffusion pre-
cipitation in gelatine with a staphylococcal antitoxic serum. The staphylococcal enterotoxin produces a pronounced cytotoxic effect on a culture of fibroblasts of the mouse subcutaneous connective tissue.
УДК 613.63:615.9.015
К ВОПРОСУ О НЕКОТОРЫХ ЗАКОНОМЕРНОСТЯХ ДЕЙСТВИЯ ПРОМЫШЛЕННЫХ ЯДОВ-НЕЭЛЕКТРОЛИТОВ, ПОСТУПАЮЩИХ В ОРГАНИЗМ ОДНОВРЕМЕННО С ВОДОЙ И ВОЗДУХОМ
Канд. биол. наук С. М. Павленко
Московский научно-исследовательский институт гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана
В условиях все усиливающейся интенсификации химического окружения человек в течение всей жизни и трудовой деятельности может подвергаться одновременному воздействию одних и тех же веществ, но поступающих в организм разными путями (например, с водой и воздухом). Это действие может быть охарактеризовано как комплексное.
До последнего времени при гигиенических и токсикологических исследованиях влияния на организм факторов малой интенсивности уделялось мало внимания вопросу возможности комплексного действия промышленных ядов. При этом некоторые авторы (Hopkins, 1961, и др.) необоснованно отождествляют комплексное действие веществ с комбинированным действием без соответствующей экспериментальной проверки. А между тем можно предположить, что комплексное действие будет иметь свои особенности.
Изучение особенностей комплексного действия требует постановки специальных экспериментальных исследований прежде всего в отношении наиболее распространенных и токсичных химических веществ, которые могут встречаться в производстве органического синтеза.
Известно, что все органические яды-растворители являются неэлектролитами. К ним относится большинство органических токсических веществ. Неэлектролиты имеют свою классификацию, разработанную (Н. В. Леза-рев) по их физико-химическим свойствам, и разделяются на 9 групп. Эти группы объединяют три типа действия (тип бензола, тип спиртов, а также промежуточный тип эфиров), отличающихся не только физико-химическими свойствами, но также и действием на организм (в том числе наркотическими свойствами).
В связи с этим целью настоящей работы явилось выявление в хроническом эксперименте характера и особенностей комплексного действия органических промышленных веществ — основных типов действия системы неэлектролитов: типа спиртов (этиловый и метиловый спирты); промежуточного типа (циклогексанон), типа бензола) (бензол).
При постановке хронического эксперимента мы ориентировались на уровни тех концентраций и доз, которые могут присутствовать в воздухе рабочих помещений и в воде водоемов. Схема постановки хронических опытов при изучении комплексного действия предусматривала проверку существующих пороговых и недействующих концентраций исследуемых веществ при их раздельном введении. Для всех изучаемых веществ в опытах на 124 крысах были проведены ранее принятые предельно допустимые концентрации (ПДК) в воде водоемов и в воздухе рабочей зоны (табл. 1).
Наши рекомендации по пересмотру ПДК бензола и спиртов в воде водоемов и в воздухе рабочей зоны были приняты в 1968 г. соответствующими секциями при Проблемных комиссиях Министерства здравоохранения СССР.
В дальнейшем изучали комплексное действие рассматриваемых веществ в хроническом шестимесячном опыте (табл. 2). При этом каждое вещество изучалось на уровне: а) пороговых (1-я группа животных); б) недействую-
