CC BY
9
УДК 616-0is.l-092:575.224.23]-02:6l3.632)-07
Л. А. Комиссарова, Л. С. Еремеева
ИЗУЧЕНИЕ МУТАГЕННЫХ СВОЙСТВ РЯДА ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ НА ДРОЗОФИЛЕ
Львовский медицинский институт
Интенсивная химизация сельского .хозяйства, увеличение производства-хлмяческих веществ, получивших широкое при-и>енение во многих отраслях народного хозяйства и в быту ведут к накоплению и циркуляции в биосфере биологически активных веществ.
В настоящее время предложено немало схем тестирования химических веществ на их мутагенную активность с целью гигиенического регламентирования. Одним из звеньев таких тест-систем является выявление генных мутаций на плодовой мушке дрозофиле (1—6].
Цель настоящей работы состояла в изучении возможности ряда химических веществ индуцировать рецессивные, сцепленные с полом летальные мутации в зародышевых клетках дрозофилы.
Использовали вновь синтезированные химические вещества, предназначенные для применения в процессах нефтедобычи, лакокрасочной промышленности и быту.
Характерными особенностями всех изученных поверхност-но-активных веществ (ПАВ) являются их хорошая растворимость в воде и дысокая степень биохимического распада в сточных-ббдах. Полимеры ОК5-ОРР-49 и пушер-700 образуют при растворении в воде клейкую прозрачную массу, а полимеры КМЭ, СНПХ-82 и АСС хорошо растворимы в воде. Вещества группы силанолов и лаков растворяются преимущественно в органических растворителях, не обладают резким специфическим запахом.
Изучение мутагенной активности указанных веществ проводили но стандартному методу Меллер-5, предусматривающему обнаружение и учет рецессивных летальных мутаций, возникающих под влиянием изучаемого агента в половой Х-хромосоме самцоз дрозофилы. Рецессивные летальные мутации учитывали по числу культур второго поколения без диких самцов и общему числу культур с обязательной постановкой контрольного эксперимента. В качестве нормальной линии была использована линия Д-32, а в качестве тестерной ■— линия М-5.
Считается, что наиболее чувствительными ко всем физическим и большинству химических мутагенов являются зрелые половые клетки — сперматозоиды и сперматиды, поэтому для обработки исследуемыми препаратами мы брали взрослых насекомых, которых скрещивали с виргин-ными самками М-5. Число исследуемых культур максимально приближалось к 10С0 для каждого изучаемого препарата.
Пероральное поступление веществ в организм насекомых обеспечивали путем содержания самцов на стеклянных фильтрах, погруженных в бюксы с исследуемыми концентрациями препаратов. Контрольных насекомых выдерживали на 5 % растворе сахарозы.
Обработку насекомых в газовой фазе осуществляли в трехлитровом эксикаторе, на дно которого помещали определенную навеску вещества. В эксикаторе находились также
Результаты исследований мутагенных свойств химических веществ на имаго дрозофилы
Исследуемые вещества Концентрация Экспозиция, ч Число изученных Рецессивные леталии
раствора, % хромосом абс. %
Поверхностно-активные вещества
ИСП-1 20 72 975 5 0,51+0.22
Нефтяной сульфонат натрия 20 72 986 5 0,50±0.22
Олифинсульфонат натрия 20 96 965 5 0,51 ±0.27
Сульфослд-31 20 96 996 6 0,60±0,24
Демульфер 0,1 72 985 8 0,81±0,28
Неонол АФ-14 0,1 96 1007 8 0,79+0.27
Т1?5-10 0,1 96 1005 9 '0,90+0,29
\ Полимеры
ОК5-ОНР-49 0,025 120 1029 6 0,58+0,23
Пушер-700 0,025 120 955 5 0,52±0,24
КМЭ 20 72 968 7 0,72ч-0,27
СНПХ-82 20 96 1004 9 0,89±0,29
АСС 10 72 950 6 0,63+0,24
Контроль — 1887 9 0,47±0,16
Лаки и спланолы
Ацетоксим 15 24 940 4 0,42±0,21
Модификатор 113-63 Газовая фаза 48 1012 7 0,69+0,26
Лак КО-075 » » 1,5 873 4 0,46+0,23
Силанол лака КО-075 » » 1,8 950 5 0,53+0,24
Лак КО-921 » » 1,1 995 5 0,50+0,22
Силанол лака КО-921 » » 0,9 1002 6 0,59+0,24
Силанол лака КО-116 » » 0,8 906 6 0,66±0,26
Контроль — — 1612 8 0,49+0,17
закрытые капроновой сеткой пробирки с самцами линии Д-32.
Данные, представленные в таблице, свидетельствуют о том, что в результате проведенных экспериментов не выявлено достоверное повышение спонтанного мутирования у дрозофилы при воздействии изучаемых веществ.
Следовательно, в описанных условиях опытов препараты не вызывают наследственных изменений в Х-хромосоме половых клеток плодовой мушки, т. е. они не оказывают мутагенное действие на дрозофилу.
Л итература
1. Бочков И. П., Шоам Р. Я. и др.//Генетика. — 1975. — Т. 11, № 10, —С. 156—169.
2. Гжегоцкий М. И., Комиссарова Л. А.. Ребрин В. Г. // Гигиена населенных мест. — Киев, 1984. — Вып. 23. — С. 53—55.
3. Демченко С. И., Авруцкая Т. Б. и др. // Европейское об-во по мутагенам внешней среды: Ежегодная конф., 14-я: Тезисы докладов.— 1984. — С. 45—46.
4. Журков В. С.// Медицинские проблемы охраны окружающей среды. — М., 1981. — С. 36—42.
5. Курччный А. Я.//Всесоюзный съезд генетиков и селекционеров, 4-й: Тезисы докладов. — Кишинев, 1982.— Ч. 4, —С. ИЗ.
6. Пилинская М. А. // Гигиена, токсикология пестицидов в клинике отравлений. — Киев, 1967. — Вып. 5. — С. 305— 311.
Поступила 12.06.87
УДК 616-018.1-008.931:577.1.52.|]-02:615.285.7-092.9
Л. П. Сычева, Н. П. Бурмантова, В. С. Журков
МОДИФИКАЦИЯ МУТАГЕННОГО ЭФФЕКТА ЦИКЛОФОСФАМИДА ПРИ ДЛИТЕЛЬНОЙ ИНДУКЦИИ СИСТЕМЫ МИКРОСОМАЛЬНЫХ МОНООКСИГЕНАЗ
НИИ общей и коммунальной гигиены им. Л. Н. Сыснна АМН СССР, Москва
Многочисленные соединения, загрязняющие окружаю-ищо среду, не являясь мутагенами или канцерогене«*; могут-тгодпфнцнровать эффекты генотоксических агентов, что подтверждается экспериментальными [2, 3] и эпидемиологическими исследованиями [7]. Одним из основных механизмов модификации является изменение системы метаболизма мутагенов, в частности системы микросомаль-ных монооксигеназ (СММ). Ранее [2] в подострсм эксперименте показано, что усиление цитогенстпческого эффекта циклофосфамида возможно даже на фоне минимальной статистическг значимой индукции СММ.
Целыо настоящей работы явилась оценка мутагенного эффекта циклофосфамида при длительной индукции СММ фенобарбиталом в условиях хронического эксперимента.
Эксперименты проведены нз 171 самце неинбредных крыс массой 200—250 г. Животных на протяжении всего опыта содержали в пластиковых клетках на стандартной диете.
В качестве мутагена применяли циклофосфамид («Jenapharm», ГДР) — хорошо изученный препарат, относящийся к группе алкилнруюших соединений, мутаген непрямого действия, активность которого определяется метаболитами, образующимися при участии СММ.
В качестве модификатора применяли фенобарбитал натрия («Farmacon». ЧССР) — классический индуктор СММ, не обладающий мутагенной активностью в соматических клетках млекопитающих [11].
Крысы получали питьевую воду с фенобарбиталом в концентрациях 8, 40 и 200 мг/л, что соответствовало средним дозам 0.4, 2 и 10 мг/кг. Состояние СММ оценивали в группах животных (по 6—8 крыс на группу), получавших индуктор в течение 5, 30 и 120 сут. Группы животных вводили в эксперимент по схеме, при которой забой всех животных был проведен приблизительно в одно время. Это позволило избежать влияния возрастного и сезонного факторов.
Состояние СММ оценивали по содержанию цитохромов Р-450 и ¿5 [13]. Фракцию микросом печени получали путем ультрацентрнфугнрованпя постмитохондриальпого на-досадка в центрифуге VAC 601 при 105 000 g в течение 1 ч. Определение содержания цитохромов проводили на двулу-чевом двухволновом спектрофотометре «Хитачи-556». Содержание микросомального белка оценивали по Лоурн [1?1.
Нагрузка мутагеном проведена после 120-суточного воздействия индуктора. Использована схема полного двух--факторного эксперимента, в котором одним фактором бы-
ла доза циклофосфамида (0, 5, 10 и 20 кг/кг), другим — доза индуктора. За 5 дней до конца потребления фенобарбитала крысам вводили циклофосфамид внутрижелудоч-но 5-кратно с интервалом 24 ч между введениями. Животных забивали через 6 ч после последнего введения мутагена. В каждой группе было по 6 животных. Определяли частоту метафаз с аберрациями хромосом в клетках костного мозга крыс. Цитогенетнческий анализ проводили на зашифрованных препаратах. Анализировали по 100 метафаз от каждого животного. Учитывали одиночные и парные фрагменты, обмет хромосомного и хроматидного типов. Для сравнения долей аберрантных метафаз использовали /-критерий Стьюдента с предварительным преобразованием данных по каждому животному (для стабилизации дисперсии) по формуле: Z-arc — sin р, где р — доля метафаз с аберрациями хромосом [5]. Регрессионный анализ проводили по методу наименьших квадратов.
По данным цитогенетического анализа (табл. 1) фенобарбитал во всех испытанных дозах не индуцировал аберрантные метафазы. Циклофосфамид при изолированном введении увеличивал частоту клеток с аберрациями хромосом до 3 % (5 мг/кг), 7,7 % (10 мг/кг) и 11% (20 мг/кг). Зависимость частоты метафаз с аберрациями хромосом как при изолированном, так и при. совместном с фенобарбиталом действии (во всех вариантах) описывается линейным4«« уравнением: у=а+Ьх, где у — доля метафаз с аберрациями хромосом: х — доза мутагена, а и Ь — коэффициенты уравнения. Коэффициент Ь характеризует нарас-
Таблица 1
Частота клеток с аберрациями Vj.qmocom в костном мозге крыс при действии равных доз циклофосфамида и фенобарбитала
Количество клеток с аберрациями, %
0 5 10 20
0,67±0,49 3,0±0,55 7,67±1,05 П,0±1,06
1,50±0,81 4,0±0,52 8,13±1,20 11 ,17± 1,20
1,33+0,21 3,50±0,67 8,0±1,18 16,0± 1,79
1,33±0,42 2,83±0,79 4,5О±0,76 Ю,33±1,26
