CC BY
17
Изучение металлосодержащих экспериментальных нанокомпозитов в качестве иммуномодуляторов
В.В. Войткова, В.И. Дубровина ([email protected]), С.А. Витязева, Т.П. Старовойтова, С.В. Балахонов
ФКУЗ «Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока» Роспотребнадзора
Резюме
В работе представлены данные о влиянии проявляющих цитотоксические, иммуномодулирующие и бактерицидные свойства экспериментальных металлополимерных нанокомпозитов на основе аргенто-поли-1-винил-1,2,4-триазола и аргентогалак-томаннана на гемопоэз. Показана способность этих препаратов при подкожном введении мышам стимулировать пролиферацию клеток костного мозга гранулоцитарного, лимфоцитарного и моноцитарного ростков гемопоэза со сдвигом баланса Т-лимфоцитов в сторону Т-хелперов.
Ключевые слова: костный мозг, субпопуляционный состав, нанокомпозит, аргентогалактоманнан, аргенто-поли-1-винил-1,2,4-триазол
Experimental Study of Metal Nanocomposites as Immunomodulators
V.V. Voytkova, V.I. Dubrovina ([email protected]), S.A. Vityazeva, T.P. Starovoitova, S.V. Balakhonov
Irkutsk Antiplague Research Institute of Siberia and Far East of Federal Service on Customers' Rights Protection and Human Well-Being
Surveillance, Irkutsk, Russia
Abstract
Experimental data about the effect of metal-polymer nanocomposites based on argento-poly-1-vinyl-1,2,4-triazole (2-N-HTP-Ag) and argentogalactomannan (GM-Ag) on hemopoiesis are presented in this article. These drugs stimulate the proliferation of bone marrow cells such as granulocytes, lymphocytes and monocytes by subcutaneous introduction of mice. We registered shift the balance of T-lymphocytes towards the T-helper cells.
Key words: bone marrow, subpopulation structure, nanocomposite, argentogalactomannan, argento-poly-1-vinyl-1,2,4-triazole
Введение
В настоящее время в Российской Федерации, а также в других странах мира большое внимание уделяется вопросам биологической безопасности, которая предусматривает разработку вакцин против возбудителей особо опасных инфекций [1, 2]. Актуальность усовершенствования вакцинных препаратов и создания новых связана прежде всего с содержанием нежелательных примесей, а также с ограничением использования живых вакцин при сопутствующей антибиотикотерапии.
Вакцинные препараты, создаваемые на основе высокоочищенных и нетоксичных бактериальных антигенов, соответствуют стандартам безопасности, предъявляемым Всемирной организацией здравоохранения [3, 4]. Однако многие из таких антигенов характеризуются сниженной иммуноген-ностью, что приводит к необходимости включения в состав вакцин веществ, способных стимулировать иммунный ответ (адъюванты, иммуномодуляторы). В последние годы выявлено много соединений, обладающих иммуномодулирующей активностью.
Однако в связи с широким спектром побочных эффектов лишь немногие из них получили распространение [2, 5]. Особый интерес представляют металлосодержащие нанокомпозиты, такие как аргентогалактоманнан и аргенто-поли-1-винил-1,2,4-триазол, проявляющие цитотоксические, иммуномодулирующие и бактерицидные свойства [6, 7]. Для установления механизмов действия и особенностей влияния нанокомпозитов на макроорганизм актуальным направлением исследований является изучение субпопуляционного состава органов иммунной системы.
Цель исследования - изучить влияние арген-тогалактоманнана и аргенто-поли-1-винил-1,2,4-триазола на субпопуляционный состав клеток костного мозга экспериментальных животных.
Материалы и методы
В работе использовали 50 сертифицированных (НПО «Вектор», Новосибирск) беспородных белых мышей, стандартных по условиям содержания и весу (массой 18 - 20 г).
В качестве объектов исследования использовали два полимерных нанокомпозита: аргенто-галактоманнан (ГМ-Ag) и аргенто-поли-1-винил-1,2,4-триазол (2-H-nBT-Ag), любезно предоставленные сотрудниками Иркутского института химии им. А.Е. Фаворского СО РАН. Препараты вводили подкожно в правую заднюю лапу в дозе 2 мг/кг массы тела в 0,5 мл забуференного физиологического раствора (ЗФР, рН 7,2). Контролем служили белые мыши, получившие ЗФР в объеме 0,5 мл. Учет результатов проводили на 3-и, 7-е, 14-е и 21-е сутки. Животных выводили из эксперимента в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденных Приказом МЗ СССР от 12.08.1977 г. № 755 и Приложением к Приказу МЗ РФ от 19.06.2003 г. № 267 «Об утверждении правил лабораторной практики».
Суспензию клеток костного мозга получали по общепринятой методике [8]. Клетки подсчитывали в камере Горяева и доводили до концентрации 2 107кл/мл ЗФР. Оценку клеточного состава костного мозга проводили в панели CD45^^ CD3-FITC/CD4-Alexa-700/CD8-APC-Cy7/CD19-PE-Cy7 [9].
Анализ осуществляли на проточном цитофлуори-метре BD FACSCanto™ II в программе BD Diva 6.0. В каждой пробе собирали 100 000 CD45+-клеток, которые фенотипировали на графике SSC/CD45 по четыре гематопоэтическим линиям: гранулоциты, моноциты, лимфоциты и бластные формы клеток (рис. 1). Процентное содержание Т-лимфоцитов (CD3+), Т-хелперов (CD3+ CD4+), цитотоксических Т-лимфоцитов (CD3+ CD8+), В-лимфоцитов (CD3-
CD19+), CD3+ CD4+ CD8+- и CD3+ CD4- CD8--клеток рассчитывали от общего числа лимфоцитов.
Статистическую обработку данных проводили при помощи стандартного пакета прикладных программ Statistica, версия 6 (Copyright StatSoft, Inc. 19842001, ИПЧИ 31415926535897) с использованием непараметрических тестов U-критерия Ман-на-Уитни и критерия Спирмена (rs). Для каждой выборки вычисляли М - среднее арифметическое и s - среднее квадратичное отклонение. Различия считали достоверными при уровне значимости Р < 0,05.
Результаты и обсуждение
Известно, что при дифференцировке и созревании клеток иммунной системы основная роль отводится микроокружению костного мозга (фибробла-сты, остеоциты и все клетки, образованные в костном мозге), которое регулирует гемопоэз путем секреции цитокинов и межклеточного взаимодействия. Вместе с тем важное значение в активации гемопоэза также играют периферические стимулы, возникающие в стрессовых ситуациях, таких как инфекция, воспаление или введение иммуномоду-ляторов [10, 11].
Ранее нами было показано, что нанокомпози-ты (ГМ-Ag, 2-H-nBT-Ag) в дозах от 1 до 100 мг/кг массы тела безвредны и не токсичны для белых мышей. Тем не менее у экспериментальных животных при введении этих препаратов в концентрации 100 мг/кг отмечена аллергическая реакция, сопровождающаяся увеличением по сравнению с контролем количества эозинофилов в 2 и 4 раза соответственно [6].
Рисунок 1.
Фенотипирование клеток костного мозга на графике SSC/CD45
При иммунофенотипировании клеток костного мозга установлено, что введение мышам ГМ-Ag и 2-H-nBT-Ag приводит к увеличению содержания основных популяций клеток (см. рис. 1). Так, у животных опытных групп на 3-и, 7-е и 14-е сутки наблюдения отмечалось достоверное повышение клеток гранулоцитарного ростка костномозгового гемопоэза в среднем в 1,2 раза по сравнению с контролем (табл. 1). Максимальные значения этого показателя у мышей, иммунизированных ГМ-Ag, зарегистрированы на 14-е сутки, а в случае применения 2-H-nBT-Ag - на 3-и и 7-е сутки (Р < 0,05). Достоверное увеличение клеток моноцитарной и лимфоцитарной гемопоэтических линий, по сравнению с контролем, зарегистрировано на 3-и и 7-е сутки. К 21-м суткам показатели содержания гранулоцитов, лимфоцитов и моноцитов в опытных группах соответствовали таковым в контроле.
Таким образом, иммунофенотипирование клеток костного мозга подтверждает полученные ранее нами данные [6] о способности нанокомпозитов ГМ-Ag и 2-H-nBT-Ag активировать пролиферацию клеток гранулоцитарного, лимфоцитарного и моноцитарного ростков гемопоэза.
Известно, что предшественниками клеток всех ростков кроветворения являются бластные формы клеток, поэтому оценка их содержания является необходимым этапом при изучении влияния метал-лосодержащих нанокомпозитов на гемопоэз.
Нами показано, что у мышей, иммунизированных металлосодержащими композитами, наблюдалось два пика (3-и и 14-е сутки) повышения содержания бластных форм клеток (рис. 2). Следует отметить, что у животных контрольной группы подобных изменений не отмечалось. Имеет место отрицательная корреляционная связь бластных форм клеток с гранулоцитами (rs = -0,75, P = 0,02), лимфоцитами (rs= -0,89, P = 0,01) и моноцитами (rs = -0,82, P = 0,03), что указывает на зависимость между образованием бластных форм клеток и их дифференцировкой в более зрелые.
Установлено, что основная часть лимфоцитов костного мозга у мышей опытных групп представлена клетками CD3- CD19+, к которым относятся
ранние B-лимфоциты, про-В-лимфоциты, пре-В-лимфоциты, а также зрелые В-клетки [12]. У мышей, иммунизированных 2-H-nBT-Ag, выявлено достоверное снижение значений содержания В-лимфоцитов во все сроки наблюдения (рис. 3), при введении ГМ-Ag - на 3-и и 14-е сутки наблюдения в среднем в 1,2 раза по сравнению с контрольной группой, однако на 7-е и 21-е сутки отмечалась тенденция к изменению данного показателя (Р = 0,08). Полученные нами результаты, возможно, указывают на выход клеток в системную циркуляцию и активацию их дифференциров-ки. Подобный эффект может быть связан со стимулирующим действием нанокомпозитов на периферические B-клетки, контролирующие содержание лимфоцитов CD19+ в костном мозге [13]. Следует отметить, что 2-H-nBT-Ag оказывает большее влияние на данный показатель по сравнению с ГМ-Ag (Р < 0,05).
Поскольку зрелые Т-лимфоциты вовлечены в поддержание нормального гемопоэза при воспалении [14, 15], следующим этапом наших исследований явилась оценка динамики содержания зрелых Т-клеток в костном мозге экспериментальных животных.
Показано, что препараты приводили к увеличению содержания ^3+-клеток на 3-и и 7-е сутки наблюдения по сравнению с контролем (табл. 1). При анализе субпопуляций Т-лимфоцитов установлено увеличение Т-хелперов у мышей, иммунизированных ГМ-Ag - 3-и и 7-е сутки; 2-H^B^ Ag - 3-и и 14-е сутки наблюдения по сравнению с интактными животными. По данным J.P. Monteiro и соавт. (2004), именно активированные клетки CD3+ CD4+ посредством секреции гематопоэтинов и интерлейкинов, а также взаимодействия с гемо-поэтическими клетками участвуют в поддержании оптимального гемопоэза, в то время как у клеток CD3+ CD8+ подобных функций не выявлено [15]. Примирование лимфоцитов CD3+ CD4+ антигеном, как правило, происходит в лимфоидных органах, после чего эти клетки мигрируют в костный мозг. Следует отметить, что активация наивных антиген-специфических Т-лимфоцитов может происхо-
Таблица 1.
Изменение показателей миелограммы у мышей, иммунизированных ГМ-Ag и 2-Н-ПВТ-Ag (M ± s)
Показатель, % Контроль Препарат Сроки наблюдения, сутки
3 7 14 21
Гранулоциты 53,8 ± 2,6 ГМ-Ag 61,6 ± 2,1* 63,9 ± 4,0* 70,7 ± 0,6* 60,3 ± 4,6
2-Н-ПВТ^ 67,5 ± 1,4* 66,2 ± 5,6* 60,6 ± 4,0* 56,8 ± 7,9
Моноциты 2,3 ± 0,8 ГМ-Ag 4,2 ± 0,8* 4,2 ± 0,8* 3,6 ± 0,5 2,1 ± 0,3
2-Н-ПВТ^ 5,3 ± 0,2* 4,9 ± 0,9* 2,7 ± 0,1 2,2 ± 0,3
Лимфоциты 13,8 ± 2,2 ГМ-Ag 18,8 ± 0,8* 17,4 ± 1,1* 11,0 ± 1,2 15,0 ± 1,3
2-Н-ПВТ^ 16,9 ± 1,5* 13,9 ± 1,9 12,8 ± 0,8 13,0 ± 0,6
Примечание: *Р < 0,03 по сравнению с контролем
Рисунок 2.
Показатели содержания бластных форм клеток в костном мозге мышей, иммунизированных ГМ-Ag и 2-Н-ПВТ-Ag (M ± s)
□ ГМ-Ag □ 2-Н-ПВТ^
15 _,
12 _ ___II
£
£ 9 _ -
ф
^ _
^ -
6 — 3 _
0 _1__и__I__и__I__и__I__1__
3 7 14 21
Сроки наблюдения, сутки
Примечания: *Р < 0,05; **Р < 0,03 по сравнению с контролем
Рисунок 3.
Оценка процентного содержания В-лимфоцитов в костном мозге у мышей после инъекции ГМ-Ag и 2-Н-ПВТ-Ag (M ± s)
Примечание: *Р < 0,03 по сравнению с контролем
дить непосредственно в костном мозге [16]. По нашему мнению, увеличение клеток с фенотипом CD3+ CD4+ обусловлено притоком активированных клеток с периферии. Важная роль этих клеток в активации гемопоэза в ответ на введение ГМ^ и 2-Н-ПВТ^ подтверждается наличием корреляционных связей между содержанием Т-хелперов и моноцитов (гз = 0,64, Р = 0,02), гранулоцитов (гз= 0,66, Р = 0,03). У мышей, иммунизированных ГМ^, на 21-е сутки выявлено достоверное снижение лимфоцитов CD3+ CD4+.
Динамика изменения содержания цитотоксических Т-лимфоцитов у мышей опытных групп представлена в
таблице 1. Обращает на себя внимание снижение содержания клеток CD3+ CD8+ на 14-е - 21-е сутки.
В суспензии клеток костного мозга мышей, получивших ГМ^, отмечено фазное изменение содержания клеток с фенотипом CD3+ CD4- CD8- с пиком на 7-е и 21-е сутки, что соответствует раннему этапу созревания Т-лимфоцитов (рис. 4). У особей, стимулированных 2-Н-ПВТ^, достоверное увеличение содержания этих клеток выявлено во все сроки наблюдения. При введении ГМ^ и 2-Н-ПВТ^ у экспериментальных животных содержание клеток CD3+ CD4+ CD8+ достоверно снижалось на 3-и и 7-е сутки с последующим увеличением до макси-
Рисунок 4.
Содержания лимфоцитов с фенотипами CD3+ CD4- CD8- и CD3+ CD4+ CD8+ -клеток в суспензии клеток костного мозга у мышей после инъекции ГМ-Ag и 2-Н-ПВТ-Ag (M ± s)
□ ГМ-Ag □ 2-Н-ПВТ^
4,0
3,5 — , %3,0
* 2,5 _
ер
ъ2 2,0 —
1,5 —
1,0 —
0,5 _ _
0,0 J—-U-—I—-U-—I—-U-—I—-L_
3 7 14 21
Сроки наблюдения, сутки
Примечания: *Р < 0,05; **Р < 0,03 по сравнению с контролем
мальных значений к 14-м суткам наблюдения. Следует отметить, что роль клеток CD3+ CD4+ CD8+ и CD3+ CD4- CD8- в костном мозге не определена. Тем не менее известно, что Т-лимфоциты проходят дифференцировку не только в тимусе, но и в костном мозге [17]. Как показал М.Е. Garca-Ojeda с соавт. [18], в процессе созревания Т-лимфоцитов важное значение имеет микроокружение костного мозга, которое обеспечивает необходимыми сигналами клетки-предшественники, при этом особая роль в регуляции этого процесса отводится зрелым Т-клеткам. Наличие корреляционных связей клеток CD3+ CD4- CD8- с клетками CD3+ CD4+ CD8+ (ге = -0,54, Р = 0,03) и CD3+ CD4+ CD8+ - CD3+ CD4+ (rs = -0,64, Р = 0,001) может свидетельствовать о созревании Т-хелперов в костном мозге.
Выводы
1. Таким образом, нами показано, что экспериментальные препараты ГМ^ и 2-Н-ПВТ^ ак-
Литература
1. Зверев В.В., Семенов Б.Ф., Хаитов Р.М., ред. Вакцины и вакцинация: национальное руководство. Москва: ГЭОТАР-Медиа; 2011.
2. Медуницин Н.В. Вакцинология. 3-е изд., перераб. и доп. Москва: Триада-Х; 2010.
3. Ада Г., Рамсей А. Вакцины, вакцинация и иммунный ответ. Москва: Медицина; 2002.
4. Quality assurance of pharmaceuticals: a compendium of guidelines and related materials. Good manufacturing practices and inspection. World Health Organization. 2 Updated ed. Geneva; 2004.
5. Петров РВ., Хаитов Р.М. Иммуногены и вакцины нового поколения. Москва: ГЭОТАР-Медиа; 2011.
6. Витязева С.А., Старовойтова Т.П., Дубровина В.И., Коновалова Ж.А. Оценка действия аргентогалактоманнана и поли-1-винил-1,2,4-триазола на популяционный состав костного мозга экспериментальных животных. Бюллетень Восточно-Сибирского научного центра СО РАМН. 2012; 5 - 2: 103 - 106.
7. Поздняков А.С. Полифункциональные (со)полимеры 1-винил-1,2,4-триазола и нанокомпозиты на их основе: Автореф. дис. ... канд. хим. наук. Иркутск; 2011.
8. Кондратьева И.А., Ярилин А.А., ред. Практикум по иммунологии: Учебное пособие. 2-е изд., испр. и доп. Москва: Издательский центр «Академия»; 2004.
9. Войткова В.В., Дубровина В.И., Колесникова О.Б. и др. Выявление фосфатидилсерина на лимфоцитах крови мышей с помощью проточного цитофлюориметра BD FACSCanto™ II.: Методические рекомендации. Иркутский НИИ противочум. ин-т Сибири и ДВ; Иркутск; 2010.
10. Torok-Storb B. Cellular interactions. Blood. 1988; 72 (2): 373 - 385.
11. Zhu J., Emerson S.G. Hematopoietic cytokines, transcription factors and lineage commitment. Oncogene. 2002; 21 (21): 3295 - 3313.
тивируют в костном мозге пролиферацию клеток гранулоцитарного, лимфоцитарного и моно-цитарного ростков гемопоэза.
2. Установлено, что наноструктурированные серебросодержащие галактоманнан и поли-1-винил-1,2,4-триазол стимулируют пролиферацию клеток 003+ С04+, что подтверждается сдвигом баланса Т-лимфоцитов в сторону Т-хелперов и наличием корреляционных связей между их содержанием и количеством моноцитов, гранулоцитов (г8 = 0,66, Р = 0,03). 8
3. У мышей, иммунизированных ГМ^, имеет место увеличение содержания Т-хелперов, а также клеток лимфоцитарного гейта в большей степени, чем в случае введения мышам 2-Н-ПВТ^. Данное обстоятельство может свидетельствовать о формировании более интенсивного иммунного ответа под действием аргентогалактоманнана.
12. Hardy R.R., Hayakawa K. B-cell development pathways. Annu. Rev. Immunol. 2001; 19: 595 - 621.
13. Marcos M.A.R. et al. Peritoneal B-cells regulate the numbers of allotype-matched pre-B and B-cells in bone marrow. Immunology. 1991; 88 (22): 9944 - 9948.
14. Di Rosa F., Pabst R. The bone marrow: a nest for migratory memory T-cells. Trends Immunol. 2005; 26 (7): 360 - 366.
15. Monteiro J.P., Benjamin A., Costa E.S. et al. Normal hematopoiesis is maintained by activated bone marrow CD4+ T-cells. Blood. 2004; 105 (4): 1484 - 1491.
16. Feuerer M. et al. Bone marrow as aprimingsite for T-cell responses to blood-borne antigen. Native Medicine. 2003; 9 (9): 1151 - 1157.
17. Makino Y., Koseki H., Adachi Y. et al. Extrathymic differentiation of a T-cell bearing invariant V alpha 14J alpha 281 TCR. Int. Rev. Immunol. 1994; 11 (1): 31 - 46.
18. Garcia-Ojeda M.E., Dejbakhsh-Jones S., Weissman I.L. et al. An alternate pathway for T cell development supported by the bone marrow microenvironment: recapitulation of thymic maturation. J. Exp. Med. 1998; 187 (11): 1813 - 1823.
References
1. Zverev V.V., Semenov B.F., K. Khaitov R.M., eds. Vaccines and vaccination: a national guide. Moscow: GEOTAR-Media; 2011 (in Russian).
2. Medunicin N.V. Vaccinology. 3rd ed., revised and enlarged. Moscow: Triada-X; 2010 (in Russian).
3. Ada G., Ramsay A. Vaccine, vaccination and immune response. Translation from English. Moscow: Medicine; 2002 (in Russian).
4. Quality assurance of pharmaceuticals: a compendium of guidelines and related materials. Good manufacturing practices and inspection. World Health Organization. 2 Updated ed. Geneva; 2004.
5. Petrov R.V., Khaitov R.M. Immunogens and vaccines of new generation. Moscow: GEOTAR-Media; 2011 (in Russian).
6. Vityazeva S.A., Starovojtova T.P., Dubrovina V.I., Konovalova Zh.A. Assessment of the action argentogalactomannan and poly-1-vinyl-1,2,4-triazole on the population composition of a bone brain of experimental animals. Bulletin of the East-Siberian scientific center. 2012; 5 - 2: 103 - 106 (in Russian).
7. Pozdnyakov A.S. Polyfunctional (co)polymers 1-vinyl-1,2,4-triazole and nanocomposites based on them. PhK of chem. sci. diss. Irkutsk; 2011 (in Russian).
8. Kondratiev I.A., Yarilin A.A., eds. Workshop on immunology: textbook for students, corr. and supplementary. Moscow: Publishing center «Academy»; 2004: (in Russian).
9. Voytkova V.V., Dubrovina V.I., Kolesnikova O.B. et al. Identification phosphatidylserine in blood lymphocytes of mice using the flowing cytometry BD FACS-Canto™ II.: The methodical recommendations. Irkutsk: Irkutsk Institute of Plagued; 2010 (in Russian).
10. Torok-Storb B. Cellular interactions. Blood. 1988; 72 (2): 373 - 385.
11. Zhu J., Emerson S.G. Hematopoietic cytokines, transcription factors and lineage commitment. Oncogene. 2002; 21 (21): 3295 - 3313.
12. Hardy R.R., Hayakawa K. B-cell development pathways. Annu. Rev. Immunol. 2001; 19: 595 - 621.
13. Marcos M.A.R. et al. Peritoneal B-cells regulate the numbers of allotype-matched pre-B and B cells in bone marrow. Immunology. 1991; 88 (22): 9944 -9948.
14. Di Rosa F., Pabst R. The bone marrow: a nest for migratory memory T-cells. Trends Immunol. 2005; 26 (7): 360 - 366.
15. Monteiro J.P., Benjamin A., Costa E.S. et al. Normal hematopoiesis is maintained by activated bone marrow CD4+ T-cells. Blood. 2004; 105 (4): 1484 - 1491.
16. Feuerer M. et al. Bone marrow as aprimingsite for T-cell responses to blood-borne antigen. Native Medicine. 2003; 9 (9): 1151 - 1157.
17. Makino Y., Koseki H., Adachi Y. et al. Extrathymic differentiation of a T-cell bearing invariant V alpha 14J alpha 281 TCR. Int. Rev. Immunol. 1994; 11 (1): 31 - 46.
18. Garcia-Ojeda M.E., Dejbakhsh-Jones S., Weissman I.L. et al. An alternate pathway for T cell development supported by the bone marrow microenvironment: recapitulation of thymic maturation. J. Exp. Med. 1998; 187 (11): 1813 - 1823.
АНОНС КНИГИ
Вышла в свет книга Э.И. Коренберга, В.Г. Помеловой, Н.С. Осина «Природноочаго-вые инфекции, передающиеся иксодовыми клещами» (под редакцией академиков РАМН А.Л. Гинцбурга и В.Н. Злобина; рецензенты - член-корреспондент РАМН, профессор Ю.В. Ананьина и академик РАМН, профессор И.В. Тарасевич), созданная в рамках серии специализированных изданий, предусмотренных Федеральной целевой программой «Национальная система химической и биологической безопасности Российской Федерации (2009 - 2014 гг.).»
В книге обобщены результаты работ по узловым аспектам проблемы, обозначенной в ее названии, которые были осуществлены несколькими поколениями исследователей. В ней через призму общих представлений о природной очаговости инфекций нашли отражение вопросы эпизоотологии, эпидемиологии, профилактики и лабораторной диагностики клещевого энцефалита, иксодовых клещевых боррелиозов, гранулоцитарного анаплазмоза человека, моноцитарного эрлихиоза человека, а также современные представления о природной очаговости инфекций и сведения о микст-инфекциях, передающихся иксодовыми клещами.
Авторы издания отмечают, что в процессе подготовки рукописи они стремились к согласованию взглядов, в особенности по тем вопросам эпидемиологии и клинико-лабораторной диагностики описываемых инфекций, которые представляются принципиально важными. Тем не менее не исклю-
чено, что внимательный читатель может обнаружить в отдельных частях книги некоторые незначительные различия в позициях авторов. Это вполне естественно, поскольку сложный раздел 7, посвященный целям, задачам, а также традиционным, более современным и перспективным методам лабораторной диагностики, написан В.Г. Помеловой и Н.С. Осиным, а остальные разделы, включая 7.4.4. — Э. И. Коренбергом. Ему же принадлежат общий план и рубрикация книги, за исключением раздела 7, структура которого предложена В.Г. Помеловой.
Собственный разносторонний исследовательский и практический опыт, в полной мере использованный авторами при подготовке монографии, дает им право на неординарное видение некоторых узловых проблем эпизоотологии, эпидемиологии, диагностики и профилактики инфекций, передающихся иксодовыми клещами. Их точка зрения, которая нередко отличается от широко распространенных в литературе взглядов и не всегда обоснованных утверждений, порой высказана в остро дискуссионной форме. Независимо от степени правоты авторов в каждом конкретном случае это, несомненно, обнажает еще слабо изученные стороны проблемы в целом и будет способствовать пониманию ее сложности и современного состояния.
Книга предназначена для специалистов, работающих в области эпизоотологии, эпидемиологии, профилактики, диагностики и терапии заболеваний, передающихся иксодовыми клещами.
