CC BY
21УДК 620.193.82
изучение действия «строительных
биоцидов» в отношении stachybotrys sp. и
aspergillus niger
Доршакова Е.В. (н.с.)*, Елинов Н.П. (проф. кафедры), Павлова И.Э. (н.с.), Выборнова И.В. (н.с.)
НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина, СевероЗападный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова, Санкт-Петербург, Россия
©Коллектив авторов, 2015
В связи с негативным воздействием на здоровье людей микро-мицетов-биодеструкторов возникает необходимость борьбы с ними как потенциальными патогенами и токсигенами. Ранее мы изучали 8 «строительных биоцидов» в отношении Stachybotrys spp., синтезирующих опасные для людей микотоксины. Представляет интерес сравнить эффективность их действия для подтверждения активности в отношении различных родов микромицетов (Stachybotrys spp., Aspergillus niger).
Ключевые слова: биодеструкция, биоциды, фунгицидное действие, фунгистатическое действие
the study of the «building biocides» action in relation to
stachybotrys sp. and
aspergillus niger
Dorshakova E.V. (scientific collaborator), Elinov N.P. (professor of the chair), Pavlova i.E. (scientific collaborator), Vybornova i.V. (scientific collaborator)
Kashkin Research Institute of Medical Mycology of NorthWest State Medical University named after I.I. Mechnikov, St. Petersburg, Russia
©Collective of authors, 2015
There is necessity a straggle with micromycetes-biodestructors in connection and their negative action at people. They are the potential pathogens and toxygens. Previously, we studied 8 «building biocides» against Stachybotrys spp., synthesizing dangerous for people mycotoxins. It is interest to compare their effectivity of action in relation to several geni of micromycetes (Stachybotrys spp., Aspergillus niger) to confirm their activity.
Key words: biocides, biodestruction, fungicidal action, fungistatic action
Контактное лицо: Доршакова Евгения Владимировна, тел.: (812) 303-51-40
ВВЕДЕНИЕ
На сегодняшний день имеет место необходимость борьбы с микромицетами-биодеструкторами в связи с их негативным воздействием на здоровье людей: их ролью как потенциальных патогенов, антигенными свойствами и токсигенной активностью. Ранее нами было изучено действие восьми «строительных биоцидов» в отношении Stachybotrys spp., синтезирующих мико-токсины, оказывающие на организм цитотоксическое, нейротоксическое действия [1-5]. Представляет интерес сравнение эффективности действия «строительных биоцидов» в отношении различных родов микро-мицетов, наиболее часто встречающихся в помещениях. Также необходимо проведение повторных исследований действия биоцидов в отношении Stachybotrys spp. в целях подтверждения их активности. В исследование были взяты биоциды «Макросепт» (состав антисептический) фирмы «Tury» и «Антиплесень» фирмы «Лакра», обладающие наибольшими показателями эффективности в отношении Stachybotrys spp. Действие данных биоцидов изучали в отношении Stachybotrys sp. и Aspergillus niger, выявленных в одном из общественно-производственных зданий в 2015 году.
Цель исследования - оценить чувствительность Stachybotrys sp. и A. niger к действию противогрибковых средств, ранее испытанных в отношении Stachybotrys spp.
МАТЕРИАЛЫ
1. Техногенные субстраты помещений (отделочные материалы).
2. Культуры Stachybotrys sp. и A. niger из Российской коллекции патогенных грибов (РКПГ).
3. Для оценки антифунгальной активности были выбраны следующие «строительные биоциды»: «Макросепт» (состав антисептический) фирмы «Tury» и «Антиплесень» фирмы «Лакра».
В исследование биоциды были взяты в виде рабочих растворов, рекомендованных производителями.
4. Использовали следующие питательные среды: Сусло-агар («НИЦФ»); картофельный агар (картофель - 300 г, вода дистиллированная - 1 л, глюкоза - 2 г, агар-агар - 20 г); агар Сабуро; бульон Сабуро; картофельный отвар (картофель - 300 г, вода дистиллированная - 1 л, глюкоза - 2 г).
МЕТОДЫ
1. Выделение культур Stachybotrys spp. из техногенных субстратов
Взятие проб с пораженных микромицетами поверхностей осуществляли ватным тампоном, смоченным в стерильном 0,9% растворе натрия хлорида, а с грубого и шероховатого - скальпелем. Образцы помещали в герметичные упаковки с сопроводительными этикетками и засевали на питательные среды (сусло-агар и Сабуро-агар) в лабораторных условиях. Посевы инкубировали в термостатах при +28 °С и +37 °С в течение 14 суток [6], затем идентифицировали колонии Stachybotrys sp. и A. niger по морфологическим и куль-туральным признакам.
Выделение Stachybotrys sp. в чистые культуры из ассоциаций с другими микромицетами осуществляли путем пересева колоний микробиологической иглой на картофельный агар, A. niger - на агар Сабуро.
■
ПРОБЛЕМЫ МЕДИЦИНСКОЙ МИКОЛОГИИ, 2015, Т.17, №4
Видовую идентификацию культур проводили по морфологическим признакам.
2. Метод определения антифунгальной (фунги-цидной и фунгистатической) активности строительных биоцидов
Действие «строительных биоцидов» изучали методом серийных разведений в жидкой питательной среде (картофельном отваре - для Stachybotrys зр., бульоне Сабуро - для A. niger). В исследование были взяты рабочие растворы «строительных биоцидов», предварительно разведенные в 15 или 100 раз. Для каждого биоцида были поставлены ряды пробирок. В первые пробирки каждого ряда исследуемые вещества вносили в минимальном разведении, затем проводили их титрование до 8 пробирки путем двукратного разведения. В пробирки с питательной средой и биоцидом соответствующего разведения вносили взвеси спор микромицетов в количестве 0,1 мл.
Для приготовления взвесей спор культуры микро-мицетов выращивали в течение 7 дней при +28 °С в пробирках на сусло-агаре (Stachybotrys зр.) и агаре Сабуро (A. niger). С поверхностей культур брали смывы конидий с постепенным добавлением 0,85% стерильного раствора натрия хлорида до густоты рабочих взвесей 1 ЕД по МакФарланду.
В исследовании каждого биоцида ставили 3 пробы контроля:
1 - контроль культуры (1 мл питательной среды + 0,1 мл рабочей взвеси тест-культуры);
2 - контроль питательной среды (1 мл питательной среды);
3 - контроль препарата (0,5 мл питательной среды + 0,5 мл исходного раствора препарата).
Все ряды подготовленных разведений с культурами и образцами контроля выдерживали при 28 °С в течение 7-10 суток до появления роста гриба в первом контроле. Минимальной фунгистатической (подавляющей) концентрацией (МПК) препарата считали концентрацию в последней пробирке ряда (максимальное разведение), в которой отсутствовал визуально определяемый рост микромицетов.
Для определения фунгицидного действия препарата делали высев штрихами микробиологической петлей на секторы агаризованной среды сусло в чашках Петри из каждой пробирки, в которой визуально отсутствовал рост тест-культуры, а также из первой контрольной пробирки. Чашки с высевами ставили в термостат при 28 °С на срок до появления роста колоний в контрольном секторе, после чего вели учет роста микроскопических грибов во всех секторах.
Минимальной фунгицидной концентрацией (МФК) считали минимальную концентрацию (максимальное разведение) препарата в пробирке, высев из которой на плотную питательную среду не давал роста Stachybotrys зрр. Проводили расчет МПК и МФК в объемных процентах для соответствующих активных разведений.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Проведено исследование антифунгальной активности рабочих растворов новых партий строительных биоцидов: «Антиплесень» фирмы «Лакра» и «Макросепт» (состав антисептический) фирмы «Тигу» в отношении A. niger и Stachybotrys зр., выявленных в одном
из офисных помещений г. Санкт-Петербурга. Обнаружено, что состав антисептический «Макросепт» оказывает фунгистатическое действие на A. niger и Stachybotrys зр. при разведениях 1:80 и 1:160, фунги-цидное - в обоих случаях - 1:160. Фунгистатическое действие биоцида «Антиплесень» фирмы «Лакра» в отношении A. niger было выявлено при разведении биоцида в соотношении 1:160, фунгицидное - 1:80; в отношении Stachybotrys зр. как статическое, так и цидное действия рабочего раствора этого биоцида отмечали при разведении 1:1280 (табл. 1).
Таблица 1
Фунгицидная и фунгистатическая активности строительных
биоцидов по отношению 3(эсЬуЬо(гуз sp. и А. тдвг
Наименование строительного биоцида
Принадлежность к роду/виду микромицета «Антиплесень» (фирмы Лакра) «Макросепт» (состав антисептический) фирмы «Тигу»
Минимальные активные разведения
МПК МФК МПК МФК
$\асЬуЬоку$ $р. 1:1280 1:1280 1:160 1:160
А. тдвг 1:160 1:80 1:160 1:80
Обращает на себя внимание значительно более эффективное действие биоцида «Антиплесень» в отношении Stachybotrys зр., в отличие от такового «Макросепт». В отношении A. niger активность взятых в исследование биоцидов не отличалась.
В исследованиях, проведенных ранее в отношении 16 штаммов Stachybotrys зрр., было показано, что «Антиплесень» фирмы «Лакра» обладает активностью в диапазоне разведений 1:1000 - 1:8000 [7], при этом МПК (% об.) данного средства составляло 0,02-0,1, МФК (% об.) - 0,025-0,2. «Макросепт» (состав антисептический) фирмы «Тигу» в отношении 16 штаммов Stachybotrys зрр. проявлял эффективное действие в диапазоне разведений 1:400-1:3200, его МПК (% об.) составляла 0,031-0,25, МФК (% об.) - 0,0625-0,25 [7]. Выявленные в текущем исследовании значения МПК (% об.) и МФК (% об.) «строительных биоцидов» в отношении Stachybotrys зр. - 0,07 («Антиплесень») и 0,625 («Макросепт») находятся в пределах таковых значений предыдущего исследования (табл. 2).
Таблица 2
Активность строительных биоцидов по отношению к
3(эсЬуЬо(гуз sp. и А. тдвг (в объемных % рабочего раствора)
Наименование строительного биоцида
Принадлежность к роду/виду микромицета «Антиплесень» (фирмы Лакра) «Макросепт» (состав антисептический) фирмы «Тигу»
МПК МФК МПК МФК
5\асЬуЬоку$ $р. 0,07 0,07 0,625 0,625
А. тдвг 0,625 1,25 0,625 1,25
Таким образом, была подтверждена высокая эффективность новых партий строительных биоцидов «Антиплесень» фирмы «Лакра» и «Макросепт» (состав антисептический) фирмы «Тигу» в отношении Stachybotrys зрр. Показана большая устойчивость A. niger, чем Stachybotrys зр., к обоим противогрибковым средствам. Выявлено значительно более эффективное действие биоцида «Антиплесень» фирмы «Лакра», чем Макросепт» (состав антисептический) фирмы «Тигу» в отношении потенциального токсинопродуцента Stachybotrys зр.
ВЫВОДЫ
1. Наибольшей эффективностью против роста Stahybotrys зрр. являются вещества - производные гуа-нидина - основные действующие компоненты биоцида «Антиплесень» фирмы «Лакра».
2. Биоциды - «Антиплесень» фирмы «Лакра» и «Макросепт» (состав антисептический) фирмы «Тигу» обладают высокой активностью в отношении микро-мицетов, их целесообразно применять в качестве биостатических и биоцидных средств при обработке помещений.
ЦИТИРОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА
1. Pestka J.J., Yike I., Dearborn D.G., et al. Stachybotrys chartarum, trichothecene mycotoxins and damp building - relatedillness: new insights into a public health enigma// Toxicological sciences. - 2008. - Vol. 104. - P. 4-26.
2. Cameron D.G. Toxicity prifile of Stachybotrys chartarum //A thesis in environmental toxicology/ submitted to the graduate faculty of texas tech university in partial fulfillment of the requirements for the degree of master of science. - 2009.
3. Scott A.M. Stachybotrys chartarum (or S. atra or S. alternans): review of toxicological literature. Integrated Laboratory Systems, Inc. Research Triangle Park, North Carolina. - 2004.
4. Hossain M.A., Ahmed M.S. and Ghannoum M.A. Attributes of Stachybotrys chartarum and its association with human disease// J. Allergy Clinro Immunol. - 2004. - Vol. 113. - P. 200-208.
5. Васильева Н.В., Елинов Н.П. Микроорганизмы - контаминанты и патогены - индукторы процессов старения больничных зданий и помещений медицинского назначения, а также возбудители некоторых заболеваний людей (учебное пособие) /Под ред. Н.П. Елинова. - СПб.: КОСТА, 2009. - 224 с.
6. Доршакова Е.В., Павлова И.Э., Богомолова Т.С. и др. Чувствительность штаммов Stachybotrys spp. к некоторым строительным биоцидам// Проблемы медицинской микологии. - 2014. - Т. 16, №3. - С. 87-90.
7. Доршакова Е.В., Павлова И.Э., Елинов Н.П. и др. Антифунгальная активность «строительных биоцидов» в отношении Stachybotrys spp.// Проблемы медицинской микологии. - 2013. - Т.15, №3. - С.60-63.
Поступила в редакцию журнала 02.12.2015
Рецензент: Г.Е. Афиногенов
