CC BY-NC
4Изменения цитокинового профиля и его коррекция у собак с бактериальным дерматитом.
Верх овце ва Анастасия Андреевна
Аспирант на кафедре Ветеринарная медицина, Мзсковского государственного университета пищэвых
производств
140170, Россия, Мзсковская область, г. Бронницы, ул. Горка, 10, кв. 6
И DocVetVerh@yandex.ru
Статья из рубрики "Ветеринария"
Аннотация.
Предметом исследования явились собаки разного пола, в возрасте от 1 до 7 лет. Всем животным было проведено цитологическое исследование (кокки, нейтрофилы, активный фагоцитоз) + посев - Staphylococcus intermedius. У всех животных диагностирован бактериальный дерматит (с клиническим проявлением в виде мокнущей экземы).Известно, что важной составляющей патогенеза аллергодерматитов сопровождающимся в дальнейшем инфекционным, в частности бактериальным дерматитов, является цитокиновый фактор. Целью данной работы было изучение уровня основных классов цитокинов при бактериальной экземе и влияние на эти показатели препарата Апоквель. Для определения уровня цитокинов сыворотки крови использовали соответствующие наборы ИФА (Canine Interleukin 1, IL-1 ELISA Kit; Dog Interferon y, IFN-Y ELISA Kit; Dog interleukin 4, IL-4 ELISA Kit; Dog Tumor necrosis factor aTNF-a ELISA Kit Cusabio, US; IL-17 Canine IL-17/IL-17A Quantikine ELISA Kit, R&D Systems, Inc.USA Canada). Для учета результатов использовали многофункциональный микропланшетный считыватель Synergy HT (BioTek Inc, США).Статистический анализ проводили с использованием статистического программного обеспечения, STATISTICA версия 10 (StatSoft.Inc., 2011) Основным выводом проведенного исследования является то, что исследуемый препарат (тестируемый) - (Oclacitinib, торговая марка Apoquel) является перспективным иммунотерапевтическим препаратом при гиперактивации Th1 иммунного ответа, т к препарат является ингибитором Янус киназы, селективный для JAK1. Он блокирует трансдукцию сигнала активации JAK киназы и, таким образом, подавляет экспрессию провоспалительных цитокинов.
Ключевые слова: цитокины, интерлейкины, иммунитет, дерматит, Оклацитиниб, Экзема, Фактора некроза альфа, Пирогены, Аллергия, Лимфоциты
DOI:
10.7256/2453-8809.2018.4.28066
Дата направления в редакцию:
27-01-2019
Дата рецензирования:
18-01-2019
Одной из самых частых патологий, с которыми ветеринарный врач сталкивается в практике, являются дерматиты различной этиологии.
По статистике количество обращений пациентов, имеющих дерматологические заболевания, с каждым годом становится все больше. Одним из факторов провоцирующих восприимчивость организма животных к аллергенам являются современные экологические условия.
Лечение кожных инфекционно-аллергических заболеваний домашних животных пока остается проблемой, требующей решения.
Известно, что важной составляющей патогенеза аллергодерматитов сопровождающимся в дальнейшем инфекционным, в частности бактериальным дерматитов, является цитокиновый фактор.
Целью данной работы было изучение уровня основных классов цитокинов при бактериальной экземе и влияние на эти показатели препарата Апоквель.
Материалы и методы.
Обследовано 12 собак разного пола, в возрасте от 1 до 7 лет. Всем животным было проведено цитологическое исследование (кокки, нейтрофилы, активный фагоцитоз) + посев - Staphylococcus intermedius. У всех животных диагностирован бактериальный дерматит (с клиническим проявлением в виде мокнущей экземы).
Все животные получали общепринятое лечение, включающее антибиотикотерапию Синулокс в дозе 20 мг/кг на 14 дней, местные обработки Хлоргексидином 2-4% на 14 дней, Омега-3 1 капсула на 10 кг в течение 21 дня.
5 собак получали только общепринятую терапию и составили контрольную группу (группа 1). 7 собак дополнительно к основной терапии получали препарат Апоквель (Группа 2). Препарат применяли в дозе 0,5 мг на 1 кг массы животного 2 раза в сутки, в течение 7 суток.
При поступлении и через 7 суток от начала лечения в периферической крови определяли уровень основных классов про- и противовоспалительных интерлейкинов (IL-1, IL-4, IL-17, TNFa, IFNy).
Для определения уровня цитокинов сыворотки крови использовали соответствующие наборы И ФА (Canine Interleukin 1, IL-1 ELISA Kit; Dog Interferon y, IFN-y ELISA Kit; Do interleukin 4, IL-4 ELISA Kit; Dog Tumor necrosis factor aTNF-a ELISA Kit, Cusabio, US; IL 17 Canine IL-17/IL-17A Quantikine ELISA Kit, R&D Systems, Inc.USA, Canada). Для учета результатов использовали многофункциональный микропланшетный считыватель Synergy HT (BioTek Inc, США).
Статистический анализ проводили с использованием статистического программного обеспечения, STATISTICA версия 10 (StatSoft.Inc., 2011)
Результаты исследования представлены в таблицах 1-5.
Таблица 1. Уровень IL-1 в периферической крови (пг/мл)
До лечения После лечения
Норма (п=30) 11,6±1,13
Группа 1 (п = 5) 18,7±0,26* 10,43±2,15
Группа 2 (п = 7) 19,5±1,44* 12,17±1.11
Примечание:
* - Статистически достоверно (Р< 0,05) по сравнению с нормой.
Таблица 2. Уровень ^-4 в периферической крови (пг/мл)
До лечения После лечения
Норма (п = 30) 7,44±0,91
Группа 1 (п = 5) 2,15±1,22* 6,45±0,78
Группа 2 (п = 7) 2,32±1,31* 6,76±0.63
Примечание:
* - Статистически достоверно (Р< 0,05) по сравнению с нормой.
Таблица 3. Уровень IFNY в периферической крови (пг/мл)
До лечения После лечения
Норма (п=30) 107,6±1,56
Группа 1 (п = 5) 414,6±22,55* 196,46±22,42#
Группа 2 (п = 7) 427,5±27,2* 103,5±24,5
Примечание:
* - Статистически достоверно (Р< 0,05) по сравнению с нормой.
# - Статистически достоверно (Р< 0,05) по сравнению с группой 1
Таблица 4. Уровень TNFa в периферической крови (пг/мл)
До лечения После лечения
Норма (п = 30) 0,33±0,78
Группа 1 (п = 5) 4,28±0,68* 1,74±0.76*
Группа 2 (п = 7) 3,99±0,46* 0,55±0,96
Примечание:
* - Статистически достоверно (Р< 0,05) по сравнению с нормой.
Таблица 5. Уровень ^-17 в периферической крови (пг/мл)
До лечения После лечения
Норма (п = 15) 5,33±2,44
Группа 1 (п = 5) 98,45±9,44* 47,34±29,22*
Группа 2 (п = 7) 106,76±12,59* 34,78±16,77*#
Примечание:
* - Статистически достоверно (Р< 0,05) по сравнению с нормой.
# - Статистически достоверно (Р< 0,05) по сравнению с группой 1.
Уровень интерлейкина 1 (^-1, табл. 1) при поступлении был достоверно, по сравнению с нормой, повышен у всех животных. После проведения терапии количество цитокина нормализовалось.
Концентрация интерлейкина 4 (^-4, табл.2) была снижена у пациентов обеих групп при поступлении и также нормализовалась после лечения.
Количество интерферона гамма (IFNY, табл.3) резко повышалось в обеих группах при поступлении. После лечения уровень IFNY нормализовался в группе 2 и снижался, но не достигал нормы в группе 1.
Уровень фактора некроза альфа (TNFa, табл. 4) в крови животных обеих групп был повышен при поступлении у всех животных. После лечения нормализовался в группе 2 и имел выраженную тенденцию к нормализации в группе 1, однако, эти изменения достоверно отличались от нормы.
Уровень интерлейкина 17 (^-17, табл.5) при поступлении был повышен у животных обеих групп. Через неделю показатели также были повышены относительно нормы, однако в группе 2 тенденция к снижению была достоверно более выражена, чем в группе 1.
Одно из наиболее существенных свойств ^-1 — это стимуляция пролиферации антиген чувствительных Т-лимфоцитов через усиление экспрессии рецепторов и индукции синтеза ^-2 и ^-4, формирование местной воспалительной реакции и пирогенного ответа на уровне организма при инфекционном поражении [1, с 10°1.
Увеличение продукции ИЛ-1 полученное в нашем исследовании, дает возможность предположить гиперактивацию иммунного ответа и воспаления.
^-4 является плейотропным регулирующим фактором, изменение уровня которого свидетельствует о степени напряжения воспалительных реакций, косвенно - о процессах
гемопоэза и аллергии
В рассматриваемом случае снижение ИЛ-4 указывает на относительный дефицит гуморальных иммунных реакций и преобладании клеточных цитотоксических. То есть баланс Т1т1/Т1п2 зависимого иммунного ответа сдвинут в сторону провоспалительных цитокинов.
IFN-гамма совместно с другими цитокинами принимает участие в регуляции активности Т1т1-клеток и цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ)
Повышение уровня IFN-гамма у животных при поступлении отражение активации (а возможно и гиперактивации) иммунного ответа. Поскольку IFN-гамма обладает свойствами синергизма, можно предположить, что на фоне повышения концентрации провоспалительных цитокинов, их суммарный эффект увеличивается и это, в свою очередь, повышает вероятность развития нежелательных побочных эффектов (гиперактивность воспалительных реакций, дисбаланс регенераторных процессов).
TNFa индуцирует некроз инфицированных вирусом и опухолевых клеток. Эффект TNFa усиливается в присутствии интерферона [1;2].
В рассматриваемом случае повышение уровня TNFa можно связать с активирующим влиянием антигенов микроорганизмов и опосредованным действием других цитокинов, в частности INFY.
Интерлейкин-ll (IL - ll) является провоспалительным цитокином, секретируемым активированными Т-клетками, важное звено в защите хозяина от внеклеточных бактерий
и грибов J^l. Он принимает активное участие в иммуноопосредованных воспалительных
процессах с эпидермальной гиперплазией [3].
Интерлейкин ll - один из ключевых цитокинов в патогенезе зуда^41.
В рассматриваемом случае повышение уровня интерлейкина ll, равно, как и других провоспалительных цитокинов, указывает на активацию цитотоксичности и Thl иммунного ответа. Кроме того, повышение концентрации IL-ll несомненно обусловливает и формирование дисрегенераторных процессов и зудящих дерматозов.
Применение препарата Апоквель во многом способствовало быстрейшей нормализации иммунопатологических сдвигов, что коррелировало с более выраженными положительными клиническими данными.
(Oclacitinib, торговая марка Apoquel) - это синтетический циклогексиламино
пирролопиримидиновый ингибитор Янус киназы, селективный для JAKl^51. Он блокирует трансдукцию сигнала активации JAK киназы и, таким образом, подавляет экспрессию провоспалительных цитокинов. Следует указать, что Оклацитиниб - цитостатик и его применение требует повышенной осторожности в отношении генерализации инфекционного процесса. В рассматриваемом случае использование препарата проводилось на фоне терапии антибиотиками.
Таким образом, при возникновении инфекционной экземы у собак наблюдается дисбаланс цитокинов сыворотки крови, проявляющийся в увеличении уровня IL-l, IL- l, ifny, TNFa, снижении концентрации IL-4. То есть наблюдаются изменения, характерные для дисбаланса Thl/Th2 зависимого иммунного ответа в сторону провоспалительных цитокинов. То, в свою очередь, обусловливает гиперактивность воспалительных реакций, дисбаланс регенераторных процессов, развитие зудящего дерматоза. Использование ингибитора Янус киназы l(JAKl) в значительной степени способствовало нормализации иммунологических показателей, что коррелировало с клиническим улучшением.
(Oclacitinib, торговая марка Apoquel) является перспективным иммунотерапевтическим препаратом при гиперактивации Thl иммунного ответа.
Учитывая цитостатическое действие Оклацитиниба, использование препарата должно проводиться с соблюдением соответствующих предосторожностей в отношении инфекций, в частности, по показаниям, в сопровождении с антибиотикотерапией.
Библиография
1. Абрамов В.В., Абрамова Т.Я., Гонтова И.А., Козлов В.А., Маркова Е.В., Повещенко А.Ф., Pебенко Н.М., Соловьева И.Г., Сорокин О.В. Золотая серия национальных научных достижений. Основы нейроиммунологии.-Москва: 2004.-l00 с.
2. Козлов В.А. Гомеостатическая пролиферация лимфоцитов в аспекте иммунопатогенеза различных заболеваний. // Иммунология. 2006. Т.21, №6. С. 3l8-382.
3. Ann Sophie L0nnberg, Claus Zachariae, and Lone Skov. Targeting of interleukin-ll in the treatment of psoriasis. Clin Cosmet Investig Dermatol. 20l4; l: 25l-259.
4. Dhand Al, Aminoff MJ. The neurology of itch. Brain. 20l4 Feb;l3l(Pt 2):3l3-22. doi:
10.1093/brain/awt158. Epub 2013 Jun 22.
5. Gonzales, AJ; Bowman, JW; Fici, GJ; Zhang, M; Mann, DW; Mitton-Fry, M (August 2014). "Oclacitinib (Apoquel®) Is a Novel Janus Kinase Inhibitor with Activity Against Cytokines Involved in Allergy". Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics. 37 (4): 317-24.
6. Lenarczyk A., Le T.T., Drane D., Malliaros J., Pearse M., Hamilton R., Cox J., Luft T., Gardner J., Suhrbier A. ISCOM based vaccines for cancer immunotherapy // Vaccine. 2004. V. 22, N 8. P. 963-974.
7. Moseley TA, Haudenschild DR, Rose L, Reddi AH. Interleukin-17 family and IL-17 receptors. Cytokine Growth Factor Rev. 2003 Apr;14 (2):155-74.
8. Song R, Kim J, Yu D, Park C, Park J: Kinetics of IL-6 and TNF-a changes in canine models of sepsis induced by endotoxin. Vet Immunol Immunopathol, 146, 143-149, 2012. DOI: 10.1016/j.vetimm.2012.02.008.
