CC BY
40
ЙР
ИССЛЕДОВАНИЯ / Препараты животного происхождения
Исследование терапевтических свойств
препарата «Колимак» на лабораторных животных
И. М. Чернуха, доктор техн. наук, Л. А. Люблинская, канд. хим. наук, Л. В. Федулова, канд. техн. наук, Е. Р. Василевская,
ГНУ ВНИИМП им. В.М. Горбатова Россельхозакадемии,
А. Н. Макаренко, доктор мед. наук,
Киевский национальный университет им. Т. Шевченко
Индустрия производства мяса в России в последние годы активно развивается. По данным Федеральной службы государственной статистики (Росстат) объём производства мяса и пищевых субпродуктов убойных животных в Российской Федерации в начале 2013 года вырос на 23,6% по сравнению с аналогичным показателем 2012 года и составил 230 тысяч тонн.
УДК 637.66: 615.24
Ключевые слова: «Колимак», крысы, моделирование заболеваний, желудочно-кишечный тракт, диарея, хроническая эндогенная интоксикация.
^ При этом в процессе убоя и первичной переработки скота на долю мясного сырья и субпродуктов первой категории приходится лишь 50% всех продуктов убоя, остальную часть составляет побочное сырье. В настоящее время сбор и переработку побочного сырья осуществляют только на ряде крупных предприятий. Фактически собирается только около 30% всего объема. В то же время следует отметить, что побочное сырье - это источник ценного животного белка и различных биологически активных веществ [1].
Побочное сырье является ценным продуктом убоя и может использоваться не только в пищевых целях, но и при производстве различных органопрепаратов. Все большее количество препаратов животного происхождения применяется для профилактики и лечения различных заболеваний. Представленные на рынке препараты животного происхождения, в основном, изготавливаются из биомолекул и биофакторов органов и тканей здоровых сельскохозяйственных животных и их эмбрионов. Кроме того, в современной биомедицине и гомеопатии применяются различные виды
потенцированных тканевых препаратов, производство которых осуществляется из побочного сырья. Стоит отметить, что качество и эффективность лечебного действия препаратов напрямую зависит от способа выделения и получения из внутренних органов животных биологически актив -ных веществ в виде экстрактов. Причём, воздействие на организм человека либо животного происходит путем непосредственного влияния на патогенетические факторы возникновения заболевания.
В институте мясной промышленности имени В.М. Горбатова на базе Экспериментальной кли-
ники-лаборатории биологически активных веществ животного происхождения была предпринята попытка создания комплексного препарата из животного сырья с выраженными терапевтическими и протекторными свойствами при развитии желудочно-кишечных заболеваний у свиней, в частности, у поросят-сосунов и отъемы-шей. Разрабатываемый препарат представляет собой лиофильно высушенные водные экстракты внутренних органов желудочно-кишечного тракта свиней: пило-рического и фундального отделов желудка, поджелудочной железы, двенадцатиперстной кишки. За счет уникальной технологии при-
Препараты животного происхождения / ИССЛЕДОВАНИЯ
готовления, препарат содержит большое количество проферментов и биологически активных пептидных комплексов [2]. Ранее проведенные исследования показали, что препарат «Колимак» не обладает токсическим действием при введении как нормальных, так и максимально увеличенных доз, отрицательных побочных явлений, признаков интоксикации при применении препарата не обнаружено.
Данная статья посвящена исследованию терапевтических свойств тканевого препарата «Колимак» на лабораторных животных с поражением желудочно-кишечного тракта и хроническим эндогенным токсикозом (ХЭТ).
Материалы и методы
Эксперименты проводили на половозрелых белых крысах самцах стока Wistar (масса тела 200±50 г, колебание по группе ±8 г). Содержание, питание животных, уход за ними и выведение их из эксперимента осуществляли в соответствии с требованиями «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных», а также основывались на положениях Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации от 1964 года, дополненной в 1975, 1983 и 1989 гг.
Животные содержались при сходных условиях температуры, влажности, освещения и рациона питания.
За 7 дней до начала эксперимента из животных сформировали группы и содержали изолированно от остальных лабораторных животных вивария. Для проведения экспериментов было сформировано 5 групп животных:
1. Животные с моделью анти-биотик-ассоциированной диареи (контрольная группа 1).
2. Животные с моделью анти-биотик-ассоциированной диареи, которым после развития заболевания вводили препарат «Колимак».
3. Животные с моделью ХЭТ (контрольная группа 2).
4. Животные с моделью ХЭТ, которым после развития заболевания вводили препарат «Колимак».
5. Интактные животные.
Диарею у лабораторных животных моделировали путем соче-танного воздействия на организм антибиотиков (тетрациклина и окситетрациклина гидрохлорида), избытка в рационе клетчатки, стрессовым воздействием. Во время моделирования антибио-тик-ассоциированной диареи в течение 10 дней животным вводили раствор тетрациклина (из расчета 35 мл на голову). Одновременно в течение 10 дней внутримышечно вводили раствор ок-ситетрациклина гидрохлорид из расчета 7 мг/кг [3 ].
Хронический эндогенный токсикоз (ХЭТ) с преимущественным поражением печени моделировали на протяжении 120 суток [4]: в течение пяти дней лабораторным животным внутрибрю-шинно вводили 30% масляный раствор тетрахлорметана из расчета 0,5 мл/кг/сут. На 6-е сутки и далее 1 раз в неделю на протяжении трех месяцев внутрибрю-шинно вводили раствор ЛПС S. Thyphimurium (набор «Sigma» 6511L) из расчета 0,2 мг/кг массы тела.
Исследование терапевтических эффектов препарата «Колимак» проводили путем внутрижелудочного введения лабораторным животным исследуемого препарата (из расчета: 0,0023 мг/100 г веса животного) на протяжении 14 суток после окончания моделирования заболевания.
По окончании эксперимента животных оглушали в камере для эвтаназии фирмы VetTech с помощью углекислого газа, после чего производили патологоанато-мическое исследование и забор крови на исследования. Общее клиническое исследование проб крови проводили на полностью автоматическом ветеринарном гематологическом анализаторе Aba-cusjuniorvet 2.7 (Diatron Messtechnik GmbH, Австрия), используя наборы реактивов компании Diatron. Биохимические исследования проводили на полуавтоматическом биохимическом анализаторе BioChem SA (USA), используя наборы реактивов High
Technology (USA). В крови животных определяли 11 показателей: общий белок, альбумин, креатинин, мочевина, АсАТ, АлАТ, щелочная фосфатаза, гамма глутамилтранспептидаза, лактатдегидрогеназа, холестерин, триглицериды.
Результаты исследования
Состояние животных до начала экспериментов находилось в пределах физиологической нормы. Крысы были подвижны и активны; мышцы в тонусе; тактильная реакция сохранена; шерсть плотно прилегает к телу, не взъерошенная, гладкая, чистая, блестящая, кожный покров эластичный, без нарушения целостности; видимые слизистые оболочки бледно-розового цвета, истечений и других признаков воспалительных реакций нет. Глаза ярко-красного цвета. Акты мочеиспускания и дефекации находились в пределах физиологической нормы. Крысы активно поедали корм. В течение всего эксперимента у интактных животных (5-я группа) не отмечалось каких-либо различий в поведенческих реакциях. Сохранность подопытных животных в контрольных и экспериментальных группах была полной (100%).
На 6-8 сутки моделирования диареи у крыс без лечения (контрольная группа 1) отмечались следующие симптомы: снижение аппетита (поедаемость корма снижалась до 70%), изменение частоты дефекации (диарея, запор или их чередование), изменение консистенции каловых масс, снижение веса (на 10-й день моделирования заболевания крысы теряли в весе до 25-30 г). На 89 сутки и вплоть до завершения эксперимента у животных обнаруживались следы белка в моче. Копрологические синдромы сохранялись у некоторых животных до 16-18 суток.
У подопытных животных, получавших исследуемый препарат, характерные клинические симптомы расстройства пищеварения были менее выражены и исчезали на 10-12 сутки эксперимента, при этом животные продолжали наби-
№ 5 октябрь 2013 ВСЁ О МЯСЕ
41
ISP
ИССЛЕДОВАНИЯ I Препараты животного происхождения
рать массу тела.
При биохимическом исследовании сыворотки крови наблюдалась следующая картина: у животных, получавших препарат, показатель общего белка практически приблизился к норме; отмечено снижение уровней мочевины, АлАТ, АсАТ, холестерина и триглицеридов у животных. По остальным показателям значимых специфических положительных изменений не выявлено.
При микроскопическом исследовании проб кала на 8-9 сутки отмечено, что у животных, которым вводили препарат «Ко-лимак», признаки нарушения пищеварения и всасывания были менее выражены по сравнению с крысами, не получавшими лечение. На 10-12 сутки общие и биохимические показатели фекалий крыс были в пределах физиологической нормы.
При патологоанатомическом исследовании животных с моделью диареи обнаружено катаральное воспаление желудка и тонкого отдела кишечника. В других органах признаков воспалений не обнаружено. Патологоанатомиче-ское исследование животных, получавших после моделирования препарат «Колимак», не продемонстрировало каких-либо внешних проявлений воспалительных или иных патологических процессов во внутренних органах: пищеварительном тракте, поджелудочной железе и печени, дыхательной системе, органах кровообращения и кроветворения, мочевыдели-тельной системе.
В результате проведения эксперимента на лабораторных животных с ХЭТ было установлено, что у животных, которые не получали лечение масса снижалась в течение всего эксперимента до 50 г (контроль 2), в случае введения препарата «Колимак» у жи-
вотных отмечали менее выраженные колебания массы тела.
При анализе динамики биохимических параметров эндогенной интоксикации у крыс были получены данные, свидетельствующие об усилении токсического поражения печени с увеличением степени тяжести эндотоксикоза. Биохимические изменения по всем изученным позициям на всем протяжении эксперимента у всех подопытных животных имели одну направленность и степень выраженности. Лабора-торно определялось значительное повышение активности АсАТ, гамма глутамилтранспептидазы, лактатдегидрогеназы на фоне ги-попротеинемии, что свидетельствует о печеночной недостаточности и угнетении белковообра-зовательной функции печени.
На 120-е сутки биохимические показатели крови у животных, получавших препарат, находились в пределах референсных значений, что указывает на положительное лечебно-профилактическое действие препарата «Коли-мак» при лечении хронической эндогенной интоксикации после моделирования заболевания.
При патологоанатомическом исследовании животных с моделью ХЭТ отмечены поражения преимущественно тканей печени, в незначительной степени почек. Отметено, что у животных, получавших в качестве лечения препарат «Колимак», изменения во внутренних органах менее выражены.
На основании комплексной и сравнительной оценки влияния исследуемого препарата на основные метаболические и патогенетические процессы при хронической эндогенной интоксикации гепато-ренального генеза. Можно сделать вывод, что включение в комплексное лечение позволяет
предупредить развитие осложнений, способствует регрессу деструктивных изменений в тканях.
Обсуждение результатов
В результате выполненных исследований на лабораторных животных доказано, что препарат «Колимак» при развитии диареи у лабораторных животных, способствует нормализации пищеварительных функций желудочно-кишечного тракта. Введение препарата оказывает корригирующее и протекторное действие на патогенные факторы заболеваний желудочно-кишечного тракта. Происходит нормализация обмена веществ и патологически измененных показателей крови в более короткие сроки (на 2-е сутки лечения). У животных отмечено полное восстановление аппетита и максимальные привесы, менее выраженные колебания массы тела, наблюдается нивелирование морфофункциональных изменений в органах и тканях.
В связи с этим, можно сделать вывод о том, что препарат «Коли-мак» запускает в организме местные реакции адаптивного характера, позволяющие нивелировать патологические процессы как в органах, так и в макроорганизме, стабилизировать и улучшить состояние важнейших систем жизнеобеспечения, предупредить развитие осложнений__и
Контакты:
Ирина Михайловна Чернуха
+7 (495) 676-7211
Людмила Ароновна Люблинская
+7 (495) 676-6451
Лилия Вячеславовна Федулова
Екатерина Романовна Василевская
+7 (495) 676-9211
Александр Николаевич Макаренко 8-103 (809) 620-9611
Литература
1. Лисицын А.Б. Перспективы и пути повышения эффективности первичной переработки CKaTa:http://www.myaso-portal.ru/analitika/perspektivy-i-puti-povysheniya-effektivnosti-pervichnoy-per-erabotki-skota/
2. Чернуха И.М., Люблинская Л.А.,Федулова Л.В., Макаренко А.Н., Тимохина Е.А. Изучение природыдействующего вещества препарата «Колимак» // Все о мясе. №4. 2013. С. 14-18.
3. Шараева Э.Н. Морфофункциональное состояние желудка белых крыс при экспериментальных язвах. Автореферат диссертации к.б.н., 2006, Улан-Удэ
4. Новочадов В.В., Писарев В.Б.Эндотоксикоз: моделирование и органопатология. Монография. Волгоград: Изд-во ВолГМУ, 2005. 240 с.
