CC BY
9
Кинетику разложения перекиси водорода при смешении с йодистым калием изучали с помощью титрования перман-ганатом калия. Для этого к раствору перекиси водорода добавляли серную кислоту, а затем 0,5 н. КМп04 до появления слабой розовой окраски. Процентное содержание перекиси водорода рассчитывали по количеству израсходованного раствора перманганата калия.
♦ На рис. 1 представлены данные об изменении концент-
рации перекиси водорода в смеси с йодистым калием во времени. Заметное разложение перекиси наступает уже в первые минуты после добавления йодистого калия, в связи с чем для опытов с микроорганизмами мы избрали экспозицию (0—15 мин.
На рис. 2 представлены результаты изучения выживаемости микроорганизмов в смеси перекиси водорода с йодистым калием. Вегетативные формы микроорганизмов в избранной концентрации (около 104 микробных клеток в 1 мл) погибали в контроле, т. е. в растворах перекиси водорода без йодистого калия, при концентрации Н202 0.5— 0,25%. В случае использования смеси Н20з+К1 гибель микроорганизмов наступала при концентрации 0,025 %. т. е. в 10—20 раз более низкой. В опытах со спорами В. 51еаго1Ьеппор1и'111з эффективность смеси Н2Ог+К1 была значительно ниже, но и в этом случае различия между опытом и контролем были заметны.
а В опытах с бактериофагом кишечной палочки (исход-
ная концентрация 4.5-1010 в 1 мл) концентрации перекиси водорода от 6 до 0,75% не подавляли размножения 10 000
и более фаговых частиц. Однако те же концентрации перекиси в смеси с йодистым калием (5%) подавляли активность даже исходного бактериофага кишечной палочки, и лишь концентрации перекиси 0,5 % и ниже оказались неактивными. При использовании йодистого калия в 1 % концентрации для активации перекиси водорода 11 опытах с бактериофагом подавление активности последнего не отмечалось.
Таким образом, активация перекиси водорода йодистым калием приводит к ускоренному разложению дезннфектан-та и усилению его бактерицидного действия, выражающегося в том, что для вегетативных форм стафилококка и кишечной палочки губительными оказались в 10—20 раз и более низкие концентрации перекиси водорода. Для спорового микроорганизма и бактериофага активированная перекись водорода также оказалась более эффективной.
Литература
1. Голосова Т. В.. Скочилова И. И., Побединская И. N.. Калинин Н. Н. // Дезинфекция и стерилизация: Перспективы развития. — Волгоград, 1983. — С. 30—31.
2. Козлов И. М., Лярский П. П. Руководство по дезинфекции, дезинсекции и дератизации. — М„ 1983.
3. Федорова Л. С., Глейберман С. П.. Панкратова Г. П. и др.//Дезинфекция стерилизации: Перспективы развития. — Волгоград, 1983.— С. 135—136.
Поступила [4.07.87
УДК 613.636:582.282.23]-07:516-056.1
С. М. Спивак, И. А. Гукасян, А. В. Ермолаев, А. Н. Устиненко, Л. А. Антоновича, И. Я. Квятковская
ИССЛЕДОВАНИЕ СЕНСИБИЛИЗИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ ДРОЖЖЕПОДОБНЫХ ГРИБОВ РОДА CANDIDA В ПРОИЗВОДСТВЕ КОРМОВОГО БЕЛКА
ВНИИ биотехнологии, Москва; Рижский медицинский институт
Производство кормового белка паприна на основе дрож-жеподобных грибов рода Candida создает возможность загрязнения окружающей среды продуктами микробиологического синтеза. Последние могут вызывать у лиц, связанных с производством, иммунологическую перестройку ^ организма, сопровождающуюся в некоторых случаях развитием гиперчувствительности к кандидозным антигенам [3. 4].
Штаммы, используемые в настоящее время на заводах белково-витаминных концентратов, апатогенны, но поскольку они относятся к разным видам дрожжеподобных грибов рода Candida, то могут различаться своей сенсибилизирующей способностью. Кроме того, интенсивное развитие микробиологической промышленности предусматривает постоянное совершенствование технологии получения паприна, в частности за счет внедрения новых промыш-ленно ценных штаммов грибов рода Candida. Однако до сих пор нет единого методического подхода, позволяющего сравнить сенсибилизирующую способность различных штаммов.
Задача настоящего исследования — дать количественную оценку сенсибилизирующей способности штаммов — продуцентов паприна на примере штамма С. maltosa (С. т.).
Исследования выполнены на 181 морской свинке светлой и пестрой масти обоего пола массой 200—250 г. Для сенсибилизации использовали живую культуру С. т. штамм А, полученную из коллекции ВНИИ биосинтеза щ белковых веществ. Штамм выращивали в стерильных условиях при температуре 34 °С и постоянном шуттелиро-ванин в течение 16—18 ч на среде следующего состава (в г/л): Н3РО4 (70 %)—0,87 мл; КС1 — 0.82; MgSO„X Х7Н-.0 —1,2; FeS0,-7H,0 —0,11; ZnS0,-7H20 — 0,03; MnSÔ< • 7HjO — 0,012; NaMgO, — 0,0016; CaCl2 — 0,273;
№25Ю3 — 0,037; глюкоза—1 %. Биомассу отделяли от культуральной жидкости центрифугированием, отмывали физиологическим раствором и вводили морским свинкам в смеси с полным (ПАФ) или неполным (НАФ) адъюван-том Френнда в соотношении 1:1 в дозах от 102 до 10* микробных клеток субплантарно и подкожно в область спины (общий объем 0,5 мл).
Аллерготестнрование осуществляли путем введения внутрнкожно и внутрисердечно препарата поверхностных антигенов (ППА), полученного обработкой лиофнлизиро-ванной биомассы С. т. штамм А 0,02 М раствором (5-мер-каптоэтнламина при комнатной температуре в течение 1,5 ч. При иммунологическом исследовании ПГ1А в реакции иммуноднффузии по Оухтерлони (2) с использованием в качестве специфического реагента поливалентной аптисы-воротки к штамму А выявлены его антигенная гетерогенность и наличие в составе препарата 3 антигенных компонентов.
Для внутрнкожпого аллерготестирования, которое выполняли на 12-й или 21-й день от начала опыта, на ин-тактных морских свинках была отработана «рабочая» доза ППА, для чего была найдена максимальная ареактоген-ная доза препарата при внутрикожном введении. Эта доза для ннтактных морских свинок составила 200 мкл ППА в 0.1 мл физиологического раствора. Кожную реакцию у 140 сенсибилизированных морских свинок учитывали через 30 мин—1,5 ч, 3—5 и 24 ч. оценивали в баллах и считали положительной, если диаметр зоны гиперемии был не менее 5 мм. Регистрировали количество животных с положительной реакцией в каждой опытной группе и рассчитывали среднеаллергенную дозу (ОА1$») штамма методом пробнт-анализа (1].
Для внутрисердечного аллерготестирования предварительно на интактных морских свинках также была оттит-
Таблица 1
Зависимость способности С. maltosa штамм А индуцировать ГЗТ от сенсибилизирующей дозы культуры
День наблюдения Доза культуры клеток грибов С. т. Размер эритемы. баллы Число всего животных с положительной реакцией Dau„, число клеток грибов С. ш.
12-й 5,0-103 0,9 10 0 1,2-10«
2,4-104 0,9 6 0 (7,5-10?—1,8.10е)
1,2-10* 0,9 10 0
0,6-10« 1,8 10 2
1,3-10« 2,3 10 5
3,0-10° 3,7 11 11
1,2-10® 4,0 10 10
1,9-10« 4,0 10 10
21-й 10* 1,0 9 9 DA1S0 рассчитать
103 1,3 9 9 не удалось
104 1,8 9 9
10ь 2,3 9 9
10б 2,1 9 9
10' 2,8 9 9
10« 3,0 9 9
рована «рабочая» доза ППА, которая составила 20 мг в 1 мл стерильного физиологического раствора. Подопытным животным вводили эту дозу или 10 мг в 0,5 мл физиологического раствора, учитывали наличие признаков анафилаксии, оценивали тяжесть последней в баллах, после чего определяли БА^ культуры, а также ЕОя, — дозу культуры, сенсибилизация которой вызывает гибель 50 % животных от анафилактического шока.
При внутрикожном разрешении ППА на 12-й день опыта у животных, сенсибилизированных культурой С. т. в дозах 103, 104 и 105 клеток грибов, кожная реакция не развивалась. У остальных животных отмечали положительную кожную реакцию, которая, однако, появлялась не ранее 8 ч наблюдения и достигала максимума через 18—24 ч, т. е. протекала как гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ). Способность С. т. нндуцирозать ГЗТ и выраженность кожно-аллергической реакции зависели от дозы культуры, введенной при сенсибилизации (табл. 1). ОА!^ культуры составила при этом 1,2-Ю6 клеток.
При внутрикожном разрешении ППА на 21-й день опыта положительную кожную реакцию, появлявшуюся не
ранее 8-го часа от начала аллерготестирования, регистрировали у всех подопытных животных, что не позволило в данном случае рассчитать ВА!^. Однако выраженность ГЗТ (в баллах) также зависела от сенсибилизирующей дозы культуры.
В опытах с внутрисердечным введением ППА использованы 104 морские свинки. Часть из них подвергали предварительному (на 21-й день) внутрнкожному аллер-готестированию, а на остальных ставили опыты по оценке анафилактической реакции.
Наличие гиперчувствительностн немедленного типа (ГНТ) у животных, сенсибилизированных указанными выше дозами С. т., удалось выявить на 21-й день опыта при внутрисердечном введении ППА. ГНТ в этой модельной системе проявлялась развитием общей анафилактической реакции, а способность С. т. штамм А индуцировать ГНТ зависела от дозы культуры, введенной при сенсибилизации, и снижалась с уменьшением этой дозы.
Так, при введении ППА внутрисердечно спустя 24 ч после внутрикожного разрешения (I серия опыта) у подопытных животных удалось выявить признаки ГНТ и показать зависимость наблюдаемого эффекта (количество животных с анафилактической реакцией) от дозы культуры, вводимой при сенсибилизации (табл. 2). ОА!«, культуры составила при этом Ю^Ю3—105) дрожжевых клеток. Индекс анафилаксии возрастал с увеличением дозы культуры, не превышая, однако величины, равной 3. Максимальная гибель от анафилактического шока зафиксирована в группе животных, сенсибилизированных самой большой дозой культуры—108 клеток С. т., и составила 60%.
В то же время введение ППА внутрисердечно морским свинкам, не подвергавшимся предварительному аллерготе-стированию с помощью внутрикожных проб (II серия опыта), вызвало у них более выраженную ответную реакцию на повторное введение антигена. В этом случае признаки ГНТ наблюдали у всех подопытных животных, сенсибилизированных живой культурой в дозе от 4,2-105 до 1,2'10е клеток С. т., индекс шока при аналогичных дозах культуры был выше, чем в предыдущем случае, а гибель животных от анафилактического шока в группе морских свинок, сенсибилизированных максимальной дозой культуры, достигла 63,6 %. ЕОм в этом опыте оказалась равной 4,5-107 клеток С. ш.
Полученные результаты свидетельствуют об увеличении тяжести общей анафилактической реакции у морских свинок во II серии опытов. Возможно, это связано с использованием ПАФ, включающего микробные клетки БЦЖ, а также с более высокой дозой вводимого внутрисердечно аллергена. Не исключено, что предварительное внутри-
Таблица 2
Оценка способности С. maltosa индуцировать ГНТ в опытах по моделированию общей анафилактической реакции у морских свинок
Условия опыта
О X
х а-о « о т
Ja § ¿
С О Q. .
*** .
TÍ О о я Л н
со а
доза вводимого внутрисердечного аллергена
гипосенсибилиза-ция
Число животных в группе
с признаками ан афилаксни
абс.
погибших от анафилактического шока
абс.
%
Характеристика сенсибилизирующей способности с. П). штамм А
НАФ
II.
ПАФ
102 103 10« 10s 10е 10' 10е 4-10ь 4,8-10« 1,3.10е
10 мг в 0,5 мл стерильного физиологического раствора
2С мг в 1 мл стерильного физиологического раствора
Предварительное введение ППА на 20-й день опыта
Без гипосенси-билизации
0 0
0,77 0,44 1,0 1,0 3,0 1,9 2,7 3,6
9 9 9 9 9 9 10 20 9 11
2
4 6
5 8 8
10 20 9
22,0
48.6
66.7 55,6 88,9 88,9
100,0 100,0 100,0 100,0
11,1
22,2 40,0 5,0 22,2 63,6
DAIjo = 103 клеток грибов
EDjo = 4,5-10' (9,0-10е—2,2-108) клеток грибов
кожное введение подопытным животным в I серии опытов небольшой дозы ПГТА приводило к частичной гнпосенси-билизации организма и несколько уменьшало тяжесть общей анафилактической реакции, развивавшейся при повторном воздействии специфического аллергена.
Таким образом, условия сенсибилизации, созданные нами в эксперименте (парентеральное введение с адъю-вантом больших доз культуры), обеспечивают развитие как ГЗТ, выявляемой в кожно-аллергическом тесте, так и ГНТ, которая обнаруживается при внутрисердечном введении ППА. Последнее обстоятельство может быть обусловлено тем, что вырабатываемые к С. т. антитела избирательно связываются тучными клетками слизистой оболочки дыхательных путей, индуцируя при повторном попадании антигена непосредственно в кровяное русло развитие общей анафилактической реакции по типу поражения бронхолегочного аппарата.
Резюмируя изложенное, можно заключить, что с помощью относительно простых тестов нам удалось дать количественную характеристику аллергенной активности С. ш. штамм А. Сходный методический подход может быть использован для сравнительной оценки сенсибилизирующей способности других штаммов — продуцентов паприна. Не исключено, что этим способом можно будет осуществ-
лять для микробиологического производства отбор про-мышленно ценных штаммов с наименее выраженными аллергенными свойствами и, таким образом, в значительной степени снизить неблагоприятное воздействие микробного фактора на организм работающих. Очевидно также, что гигиеническое нормирование содержания клеток подобных грибов рода Candida в воздухе производственной зоны при микробиологическом синтезе паприна должно проводиться с учетом индивидуальных аллергенных свойств штамма — продуцента кормового белка.
Литература
1. Беленький М. Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. — Л., 1963.
2. Бе.п Э. // Иммунологические методы: Пер. с англ. — М, 1979.-С. 31—37.
3. Колло Р. М., Кальченко К- И., Платонова Т. А. и др. // Микотическая инфекция и сенсибилизация. — Л.. 1982. —-С. 72—74.
4. Никифоров Ю. Ф-, Яробкова Н. Д. //Микотическая инфекция и сенсибилизация. — Л., 1982. — С. 82—86.
Поступила 28.0Ь.вв
~ УДК «15.477.8.074
Р. А. Степаненко, П. В. Изотова, Г. М. Шмутер, В. И. Погорелова,
О. В. Лебедева
МАТЕРИАЛЫ ГИГИЕНИЧЕСКОГО ИЗУЧЕНИЯ НОВЫХ ОБРАЗЦОВ РЕЗИН МЕДИЦИНСКОГО НАЗНАЧЕНИЯ
Киевский медицинский институт
Целью настоящей работы явилось гигиеническое изучение 6 новых образцов резин, предназначенных для изготовления маточных колец. В состав изучаемых образцов (МК-1; МК-1а; МК-2; МК-2а; 52-МК-5-4 и 52-МК-З-З) входят натуральный и синтетический каучук, тиурам, сульфенамид, каптакс, цинковые белила, масло индустриальное, стеарин, литопон и другие компоненты.
Исследования образцов проводили в соответствии с «Методическими указаниями по санитарно-гигиенической . оценке резиновых изделий, применяемых в медицине» [8]. Они включали оценку внешнего вида образцов, исследование органолептнческих свойств материалов и вытяжек пз них. Изучали миграцию компонентов резин в модельную среду, влияние вытяжек из образцов на организм экспериментальных животных.
На исследование образцы поступали в виде пластин. По внешнему виду они соответствовали требованиям, предъявляемым к изделиям из синтетических и полимерных материалов [6]. Поверхность нх была гладкой, сухой, блестящей, без посторонних включений. После внешнего осмотра образцы подвергали предварительной обработке (кипячению в течение 30 мин в 2 % растворе соды, а затем 30 мин в дистиллированной воде) в соответствии с условиями по эксплуатации готовых изделий. Обработанные таким образом пластины не изменили своего первоначального цвета, формы, оставались гладкими, блестящими, эластичными. В качестве модельной среды использовали дистиллированную воду. Образцы предварительно обрабатывали, как было указано выше, помещали в дистиллированную воду из расчета 2 мл воды на 1 см2 поверхности материала и выдерживали в термостате при 40 °С в течение 1—10 сут, причем каждые сутки модельную среду заменяли на свежую. После контакта с изуча-? емыми материалами модельная среда оставалась бесцветной, прозрачной, без видимого осадка. Запах вытяжек не превышал 3 баллов. Образцы резин после соответствующей экспозиции в модельной среде полностью сохраняли присущие им свойства.
Результаты изучения миграции компонентов резин в водные вытяжки представлены в таблице. Для изучения миграции химических веществ применяли общепринятый метод тонкослойной хроматографии на бумаге и спектро-фотометрию [6].
Как видно из таблицы, в водных вытяжках из образцов МК-1, МК-1 а, МК-2, МК-2а содержание всех изучаемых компонентов, кроме ионов цинка, незначительно. Не которые из них не обнаруживаются вовсе или их мигра-
Содержание (в иг/л) в водных вытяжках веществ, входящих в состав резин
Наименование изучаемого материала
Вещество ÚÍ £ о« а СМ i «Л c'l «о ОО со ? <м «о
1-е сутки
Каптакс 0,01 0,02 0.075 0,05 0,20 0,20
Альтакс 0,05 0,05 0,075 0,05 0.15 0.10
Сульфенамид Ц — — 0,01 0,01 — —
Тиурам 0,02 0,05 0.05 0.05 0,15 0.15
Цирам — 0,025 0,025 0,02 — —
Цинк 8,00 6,00 2,00 1,00 0,60 0.50
■и сутки
Каптакс _ _ 0.05 _ 0,10 0.15
Альтакс — — 0,075 0.05 — —
Сульфенамид Ц — — — — — —
Тиурам — — 0,015 0.01 0.10 0.05
Цирам — — — — — —
Цинк 1,0 0,50 0,50 4,00 0.50 0.50
