CC BY
13
УДК 579.8.04:si5.28l:546.2l5|.0s
М. И. Леей, Л. Б. Пирятинский, Л. И. Андреева, М. М. Лившиц,
Н. Б. Азадова
ВЛИЯНИЕ АКТИВАЦИИ ПЕРЕКИСИ ВОДОРОДА НА ПОВЫШЕНИЕ БАКТЕРИЦИДНОСТИ ДЕЗИНФЕКЦИОННЫХ
РАСТВОРОВ
Центральная контрольно-исследовательская лаборатория дезинфекционной станции,
Москва
На протяжении многих лет перекись водорода (обычно 3—6 % раствор) употребляется в практике для целей дезинфекции {2]. Нередко этому препарату оказывают предпочтение ввиду отсутствия побочных явлении, если не считать коррозирующего эффекта. Однако препарат дефицитен, в связи с чем предпринимались усилия по конструированию комплексных дезинфицирующих препаратов, в которых можно было бы снизить концентрацию перекиси водорода. Так, например, нередко рекомендуют использовать смесь 3 % раствора перекиси н 3 % раствора едкой щелочи [ 1 ].
В настоящей работе установлена эффективность смеси перекиси водорода и йодистого калия; последний служит для ускорения разложения перекиси и выделения активированных форм кислорода (гидроксильпый, супероксидный, пероксидный радикалы, синглетный кислород) [3].
Изучали действие смеси И202 и KI на вегетативные формы St. aureus (штамм 906), Е. coli (штамм 3369) и споры В. stearotherrnophilus, а также на бактериофаг Е. coli. Для вегетативных форм избрали экспозицию 10 мин в водяной бане при 20°С, а для спор и бактериофага кишечной палочки (дикий штамм), которые более устойчивы к дезинфектантам,— 15 мин при 37 °С, после чего делали высев разведений смеси на пластины с мясопептонным агаром. Чашки Мегри оставляли на сутки в термостате при 37°С, после чего подсчитывали среднее число выросших колоний.
К 0,1 мл суспензии клеток в водяной бане приливали по 1 мл раствора перекиси водорода (контроль) или по 1 мл смеси перекиси водорода и йодистого калия в соотношении 1:1. Исследовали концентрации перекиси водорода и йодистого калия от 0,0075 до 0,5 %• В качестве отдельного контроля к суспензии клеток приливали по 1 мл забуференного физиологического раствора. Экспозиция для смесей составила 10 мин при 20 °С для вегетативных форм микробов н 15 м«н при 37 "С для спор с периодическим перемешиванием. На чашки Петри с мясопептонным агаром после экспозиции высевали по 0.1 мл смеси, предварительно разведенной 1:1, 1 : 10 и 1 : 100 (разведением одновременно устраняли влияние остаточных количеств дезинфектанта). В каждом случае подсчитывали
Рис. 2. Бактерицидная и спороцидная активность смеси перекиси водорода и йодистого калия по отношению к стафилококку (а), кишечной палочке (б) и спорам термофила (в).
По оси абсцисс — концентрация перекиси водорода, но оси ординат — процент выживших микроорганизмов, / — перекиси водорода: 2 — смесь перекиси водорода с йодистым калием. Исходная концентрация: о — 8.С-101 микробных тел/мл: б — 9.7-10' микробных
тел/мл; к — 15-10Л спор/мл.
Рис. 1. Кинетика разложения перекиси водорода при смешении с йодистым калием.
По оси абсцисс — время, мин; по оси ординат — концентрация перекиси водорода. %. /-—кинетика перекиси водорода; 2 — кинетика перекиси водорода в смеси с йодистым калием.
среднее число выросших колоний. В опытах с бактериофагом число негативных колоний учитывали, используя метод Грацна. Варьировали концентрацию перекиси водорода, причем йодистый калий брали в тон же процентной концентрации, что и перекись водорода, за исключением опытов с бактериофагом (см. ниже). В предварительных опытах установлено, что применявшиеся концентрации йодистого калия (без перекиси водорода) бактерицидного действия не оказывали.
— 7G -
Кинетику разложения перекиси водорода при смешении с йодистым калием изучали с помощью титрования перман-ганатом калия. Для этого к раствору перекиси водорода добавляли серную кислоту, а затем 0,5 н. КМп04 до появления слабой розовой окраски. Процентное содержание перекиси водорода рассчитывали по количеству израсходованного раствора перманганата калия.
♦ На рис. 1 представлены данные об изменении концент-
рации перекиси водорода в смеси с йодистым калием во времени. Заметное разложение перекиси наступает уже в первые минуты после добавления йодистого калия, в связи с чем для опытов с микроорганизмами мы избрали экспозицию (0—15 мин.
На рис. 2 представлены результаты изучения выживаемости микроорганизмов в смеси перекиси водорода с йодистым калием. Вегетативные формы микроорганизмов в избранной концентрации (около 104 микробных клеток в 1 мл) погибали в контроле, т. е. в растворах перекиси водорода без йодистого калия, при концентрации Н202 0.5— 0,25%. В случае использования смеси Н20з+К1 гибель микроорганизмов наступала при концентрации 0,025 %. т. е. в 10—20 раз более низкой. В опытах со спорами В. 51еаго1Ьеппор1и'111з эффективность смеси Н2Ог+К1 была значительно ниже, но и в этом случае различия между опытом и контролем были заметны.
а В опытах с бактериофагом кишечной палочки (исход-
ная концентрация 4.5-1010 в 1 мл) концентрации перекиси водорода от 6 до 0,75% не подавляли размножения 10 000
и более фаговых частиц. Однако те же концентрации перекиси в смеси с йодистым калием (5%) подавляли активность даже исходного бактериофага кишечной палочки, и лишь концентрации перекиси 0,5 % и ниже оказались неактивными. При использовании йодистого калия в 1 % концентрации для активации перекиси водорода 11 опытах с бактериофагом подавление активности последнего не отмечалось.
Таким образом, активация перекиси водорода йодистым калием приводит к ускоренному разложению дезннфектан-та и усилению его бактерицидного действия, выражающегося в том, что для вегетативных форм стафилококка и кишечной палочки губительными оказались в 10—20 раз и более низкие концентрации перекиси водорода. Для спорового микроорганизма и бактериофага активированная перекись водорода также оказалась более эффективной.
Литература
1. Голосова Т. В.. Скочилова И. И., Побединская И. N.. Калинин Н. Н. // Дезинфекция и стерилизация: Перспективы развития. — Волгоград, 1983. — С. 30—31.
2. Козлов И. М., Лярский П. П. Руководство по дезинфекции, дезинсекции и дератизации. — М„ 1983.
3. Федорова Л. С., Глейберман С. П.. Панкратова Г. П. и др.//Дезинфекция стерилизации: Перспективы развития. — Волгоград, 1983.— С. 135—136.
Поступила [4.07.87
УДК 613.636:582.282.23]-07:516-056.1
С. М. Спивак, И. А. Гукасян, А. В. Ермолаев, А. Н. Устиненко, Л. А. Антоновича, И. Я. Квятковская
ИССЛЕДОВАНИЕ СЕНСИБИЛИЗИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ ДРОЖЖЕПОДОБНЫХ ГРИБОВ РОДА CANDIDA В ПРОИЗВОДСТВЕ КОРМОВОГО БЕЛКА
ВНИИ биотехнологии, Москва; Рижский медицинский институт
Производство кормового белка паприна на основе дрож-жеподобных грибов рода Candida создает возможность загрязнения окружающей среды продуктами микробиологического синтеза. Последние могут вызывать у лиц, связанных с производством, иммунологическую перестройку ^ организма, сопровождающуюся в некоторых случаях развитием гиперчувствительности к кандидозным антигенам [3. 4].
Штаммы, используемые в настоящее время на заводах белково-витаминных концентратов, апатогенны, но поскольку они относятся к разным видам дрожжеподобных грибов рода Candida, то могут различаться своей сенсибилизирующей способностью. Кроме того, интенсивное развитие микробиологической промышленности предусматривает постоянное совершенствование технологии получения паприна, в частности за счет внедрения новых промыш-ленно ценных штаммов грибов рода Candida. Однако до сих пор нет единого методического подхода, позволяющего сравнить сенсибилизирующую способность различных штаммов.
Задача настоящего исследования — дать количественную оценку сенсибилизирующей способности штаммов — продуцентов паприна на примере штамма С. maltosa (С. т.).
Исследования выполнены на 181 морской свинке светлой и пестрой масти обоего пола массой 200—250 г. Для сенсибилизации использовали живую культуру С. т. штамм А, полученную из коллекции ВНИИ биосинтеза щ белковых веществ. Штамм выращивали в стерильных условиях при температуре 34 °С и постоянном шуттелиро-ванин в течение 16—18 ч на среде следующего состава (в г/л): Н3РО4 (70 %)—0,87 мл; КС1 — 0.82; MgSO„X Х7Н-.0 —1,2; FeS0,-7H,0 —0,11; ZnS0,-7H20 — 0,03; MnSÔ< • 7HjO — 0,012; NaMgO, — 0,0016; CaCl2 — 0,273;
№25Ю3 — 0,037; глюкоза—1 %. Биомассу отделяли от культуральной жидкости центрифугированием, отмывали физиологическим раствором и вводили морским свинкам в смеси с полным (ПАФ) или неполным (НАФ) адъюван-том Френнда в соотношении 1:1 в дозах от 102 до 10* микробных клеток субплантарно и подкожно в область спины (общий объем 0,5 мл).
Аллерготестнрование осуществляли путем введения внутрнкожно и внутрисердечно препарата поверхностных антигенов (ППА), полученного обработкой лиофнлизиро-ванной биомассы С. т. штамм А 0,02 М раствором (5-мер-каптоэтнламина при комнатной температуре в течение 1,5 ч. При иммунологическом исследовании ПГ1А в реакции иммуноднффузии по Оухтерлони (2) с использованием в качестве специфического реагента поливалентной аптисы-воротки к штамму А выявлены его антигенная гетерогенность и наличие в составе препарата 3 антигенных компонентов.
Для внутрнкожпого аллерготестирования, которое выполняли на 12-й или 21-й день от начала опыта, на ин-тактных морских свинках была отработана «рабочая» доза ППА, для чего была найдена максимальная ареактоген-ная доза препарата при внутрикожном введении. Эта доза для ннтактных морских свинок составила 200 мкл ППА в 0.1 мл физиологического раствора. Кожную реакцию у 140 сенсибилизированных морских свинок учитывали через 30 мин—1,5 ч, 3—5 и 24 ч. оценивали в баллах и считали положительной, если диаметр зоны гиперемии был не менее 5 мм. Регистрировали количество животных с положительной реакцией в каждой опытной группе и рассчитывали среднеаллергенную дозу (ОА1$») штамма методом пробнт-анализа (1].
Для внутрисердечного аллерготестирования предварительно на интактных морских свинках также была оттит-
