CC BY
64
ЭЛИМИНАЦИЯ КОРИ
одной прививочнои до-
10 000 до 20 000 ТЦД50 зе лишь с 2000 года.
3. Напряженный поствакцинальный иммунитет к вирусу краснухи у детей, ответивших выработкой специфических антител, сохранялся неизменным на протяжении 5 лет (срок наблюдения).
4. Уровень коллективного иммунитета к вирусу краснухи у детей 1 - 14 лет с неизвестным инфекционным и прививочным анамнезом с возрастом увеличивался. Наличие специфических антител в высоких титрах у подавляющего большинства серопозитивных детей (99,6%), не имевших данной инфекции в анамнезе, свидетельствует о перенесении ими в прошлом краснухи, прошедшей под другими диагнозами, и необходимости лабораторного подтверждения не только всех случаев кори, но и всех случаев краснухи. Среди детей старшего возраста (11 - 14 лет) серонегативными к вирусу краснухи оставалось 44,7% обследованных.
Литература
1. Бойко О.И. Эпидемиологический надзор за паротитом в условиях плановой иммунизации // Актуальные вопросы эпидемиологии инфекционных болезней. М., 1999. С. 137 - 139.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Данилова В.В., Забродин H.A., Тыцкая Э.И. и др. Эпидемиологический надзор за коревой инфекцией в Удмуртской Республике // Актуальные вопросы эпидемиологии инфекционных болезней. М., 2001. С. 216 - 218.
Заргарьянц А.И., Титова Н.С., Раенгулов Б.М. и др. Гуморальный иммунитет к краснухе и кори у детского населения коренной национальности ЯНАО // Актуальные вопросы эпидемиологии инфекционных болезней. М., 2001. С. 231 - 237.
Кондратенко Т.А., Швагер М.М., Говорухина М.В. и др. О состоянии заболеваемости коревой инфекцией и результатах серологического мониторинга в Ростовской области // Материалы VII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. М., 1997. С. 129 - 130.
Писарева В.А., Панина Р.М., Русакова Е.В. и др. Эпидемиологические закономерности эпидемического паротита в период его массовой вакцинопрофилактики // Актуальные вопросы эпидемиологии инфекционных болезней. М.,
2001. С. 225 - 228.
Титова Н.С., Сухинин М.В., Заргарьянц А.И. и др. Мониторинг гуморального иммунитета к вирусам эпидемического паротита и краснухи у детей и взрослых перед ревакцинацией // Эпидемиологический надзор и социально-гигиенический мониторинг. М., 2002. С. 107 - 108.
Тихонова Н.Т., Герасимова А.Г., Мамаева Т.А. Программа элиминации кори в Российской Федерации // Вакцинация.
2002. 5 (23). С. 6 - 7.
Исследование иммунизирующих свойств живых вакцин против кори и эпидемического паротита на некоторых лабораторных животных
С.К. Александер1, В.А. Ляшенко1, Н.В. Юминова1, А.А. Михайлова2
'ГУ «НИИ вирусных препаратов им. О.Г. Анджапаридзе РАМН», ^Институт биоорганической химии РАН
О
последние годы появился ряд аналитических работ, касающихся побочного действия живой коревой вакцины (ЖКВ) и поверхностных антигенов вируса кори.
Было установлено, что наряду с иммунизирующим действием ЖКВ обладает и иммуномодулирующими свойствами. Более того, при определенных ус-
ловиях ЖКВ может вызывать у детей раннего возраста (до 6 месяцев) неспецифическую иммунодепрессию [2, 8, 9 - 11], механизм которой был отчасти моделирован в эксперименте [3, 4, 16, 17]. В связи с всеобщей вакцинацией детей ЖКВ настоятельно требуется модель, на которой можно было бы проверять как иммунизирующее, так и побочное действие дан-
[Эпидемиология и Вакиинопрофилактика 25 (24)/2005
Эпидемиология и Вакиинопрофилактика <5 (24)/2005
ной вакцины. Поскольку ЖКВ уже применяется в комбинации с живой вакциной против эпидемического паротита (ЖПВ), необходимо оценить и пригодность экспериментальной модели для исследования действия последней. Конкретной задачей проведенной работы было исследование особенностей иммунного ответа белых крыс и морских свинок на ЖКВ и ЖПВ, включая и ответ на комбинацию вакцин.
В обычных условиях вирусы кори и паротита не вызывают заболевания у мелких лабораторных животных, хотя инфекция может быть воспроизведена специальными методами, например при заражении морских свинок вакцинным вирусом кори через переднюю камеру глаза и хлопковых крыс - интраназально [7, 15].
Учитывая эти обстоятельства, на первом этапе работы было проведено сравнение чувствительности к вакцинации ЖКВ и ЖПВ двух видов лабораторных животных - белых крыс и морских свинок. Исследование чувствительности животных к иммунизации было интересно, в частности, потому, что иммунный ответ на ЖКВ и ЖПВ у человека происходит только в условиях размножения вакцинных вирусов в организме в первые дни после вакцинации. Синтез антител в принципе можно индуцировать у животных убитым вирусом или вирусным белком, но для этого обычно нужно прибегать к двукратной иммунизации. Одной из задач работы был подбор условий, при которых ЖКВ или ЖПВ вызывают синтез антител у животных после их однократного введения.
Материалы и методы
В проведенных опытах была испытана способность белых нелинейных крыс и морских свинок отвечать на однократную инъекцию ЖКВ или ЖПВ, а также на введение ассоциированной вакцины «корь-паротит». Во всех опытах были использованы дозы препаратов, применяемые при вакцинации человека (не менее 1000 ТЦД50 ЖКВ или 20 000 ТЦД50 ЖПВ на животное).
В отдельной группе опытов ЖКВ вводили совместно с иммуномодулирующим препаратом МП-2 (миело-пептид, синтезированный в Институте биоорганиче-ской химии РАН [5]), дозы которого были подобраны эмпирически и составляли 0,02 или 0,1 мг/кг веса морской свинки. Вес подопытных животных (самок) составлял для крыс - 150 г, для морских свинок - 200 г.
Вакцины вводили в мышцу бедра, кровь для исследования получали, перерезая под эфирным наркозом пучок шейных сосудов. Содержание антител в сыворотке животных определяли в РТГА (торможение вирусной агглютинации эритроцитов обезьян), имму-ноферментным анализом (тест-система «корь-скрин» и «паротит-скрин» производства ЗАО «Биосервис», Москва, - с применением конъюгатов антител против IgG морской свинки и крысы) и в реакции нейтрализации цитопатогенного действия вакцинных вирусов in vitro (РН).
Кровь у животных брали через 7, 14, 28 дней после однократной иммунизации, через 7 или более дней - после двукратной, причем интервал между
первой и бустер-инъекиией составлял 28 дней. Обычно в каждой группе подопытных животных было не менее 8 голов, что позволяло сравнивать группы, используя средние геометрические обратных титров антител (log2 1/разведение).
Результаты исследований
Первые серии исследований привели к заключению, что белые крысы отвечают на введение ЖКВ и ЖПВ по-разному. Однократная иммунизаиия их комбинированной вакииной «корь-паротит» вызывала синтез антител только к вирусу паротита. Синтез антител к вирусу кори возникал только после двукратного применения комбинированной вакиины «корь-паротит».
Эти результаты позволяют предположить, что вакиинный вирус паротита (или его антигены) иирку-лирует в организме крысы в течение достаточного для индукиии синтеза спеиифических антител периода времени.
Следующая серия, включающая три эксперимента, ставила иелью исследовать ответ белых крыс на живую коревую вакиину вне ее комбинаиии с вакииной против паротита. Крыс иммунизировали живой коревой вакииной в дозе, соответствующей человеческой, однократно или двукратно, с интервалом 28 дней и с исследованием сывороток через 11 дней после иммунизаиии.
Данные опыты полностью подтвердили приведенное выше наблюдение: ЖКВ вызывала у крыс образование антител только при двукратном введении. Результат тем более убедителен, что антитела титровали не только в реакиии нейтрализаиии вируса, но также и в РТГА с определением антител, спеиифических к важнейшему вирусному антигену - гемагглю-тинину (табл. 1).
Таким образом, было установлено, что белые крысы реагируют на ЖКВ только вторичным иммунным ответом. Это означает, что вирус живой коревой вакиины не размножается и не сохраняется в организме крыс сколько-нибудь длительное время.
Совершенно иная картина была при иммуниза-иии живой коревой вакииной морских свинок. Однократная иммунизаиия в этом случае приводила к развитию длительного синтеза коревых антител, нарастающего от 14-го до 56-го дня опыта. Нарастание титра коревых антител было показано во всех трех тестах параллельно: в РТГА, ИФА и реакиии нейтрализаиии вируса in vitro. Результаты, полученные в различных тестах, оказались очень близкими (табл. 2). Таким образом, удалось продемонстрировать длительный иммунный ответ на коревую вакиину у морских свинок. Можно предположить, что вирус коревой вакиины или его антигены длительно сохраняются в организме этих животных.
Второй этап работы включал попытку воздействия иммуномодулятора МП-2 на действие живой коревой вакиины in vivo. Ранее было показано, что МП-2 снижает неблагоприятное воздействие ЖКВ на лимфоииты человека in vitro, а именно возвращает
Таблица 1.
Результаты иммунизации крыс живой коревой вакциной (ЖКВ)
о опыта Схема иммунизации Количество крыс Титр антител
реакция нейтрализации РТГА
і Однократная 15 0 Нет данных
Двукратная 15 5,1 ± 1,26 Нет данных
2 Однократная 19 0 0
Двукратная 19 5,6 ± 2,0 3,95 ± 1,1
3 Однократная 8 0 0
Двукратная 8 7,4 ± 2,78 4,7 ± 2,52
В опыте использована реакция нейтрализации цитопатогенного леиствия вируса коревой вакцины Л-16 в культуре клеток Vero, а также РТПГ (см. в разлеле «Метолы исслелования»),
Таблица 2.
Линамика титров коревых антител у морских свинок,
олнократно иммунизированных внутримышечно живой коревой вакциной
Тест титрования антител Срок исследования Кол-во животных Средний титр Sn Показатель нарастания титра (Р)
РТГА 14 дней 8 2,6 ± 1,9 0,78 -
28 дней 8 5,37 ± 1,6 0,71 > 0,05
56 дней 8 ,4 ± 6, 0,6 < 0,05
ИФА 14 дней 8 6,75 ± 0,46 0,2 -
28 дней 8 8,0 ± 2,0 0,86 > 0,05
56 дней 8 9,37 ± 1,6 0,69 < 0,05
РН 14 дней 8 4,37 ± 1,1 0,48 -
28 дней 8 6,12 ± 1,8 0,78 > 0,05
56 дней 8 7,37 ± 1,5 0,65 < 0,05
Титр антител: срелняя log2 1/развеление.
Sn - срелнее квалратическое отклонение срелнего титра.
Р - показатель вероятности различия межлу срелними титрами в первый (14-й лень опыта) и послелуюшие лни забора крови у свинок.
им способность отвечать бласт-трансформацией на воздействие фитогемагглютинина [1, 4, 5]. Следующая группа опытов включала одновременное воздействие ЖКВ и МП-2 на морских свинок. Препараты вводили внутримышечно, используя обычную дозу ЖКВ с добавлением МП-2 в дозе 0,1 или 0,02 мг/кг. Препарат был одинаково активен в обеих дозах, что позволило суммировать результаты нескольких опытов. Основной результат проведенной серии заключался в том, что МП-2 в том или ином варианте достоверно стимулировал образование коревых антител морскими свинками, причем его действие, по-видимому, затрагивало ранние этапы индукции синтеза антител (табл. 3).
Титр коревых антител во всех случаях был определен тремя методами: РТГА с эритроцитами обезь-
ян, ИФА на планшетах с лиофилизированной культурой вируса и реакцией нейтрализации вируса in vitro (влияние антител на уровень поражения клеток перевиваемой культуры Vero). Во всех системах уровень антител в случае введения МП-2 был выше контрольного на 14-й, но не на 28-й день опыта (контрольные свинки получали только инъекцию ЖКВ).
Результаты и обсуждение
Важнейшим итогом исследования является обнаружение того факта, что морские свинки могут отвечать на инъекцию ЖКВ штамма А-16 длительным, постепенно нарастающим синтезом коревых антител. Как известно, примерно в те же сроки после вакцинации нарастает титр коревых антител у человека. Результаты, полученные при одновременном введении
[Эпидемиология и Вакцинопрофилактика 25 (24)/2005
Эпидемиология и Вакиинопрофилактика <5 (24)/2005
Таблица 3.
Влияние миелопептила-2 на синтез коревых антител у морских свинок, получивших живую коревую вакцину
Тип реакции Время взятия крови Препараты Кол-во свинок Средний титр антител Sn Р
РТГА 14 дней ЖКВ 16 3,25 ± 0,54 0,23 < 0,05
ЖКВ + МП2 24 4,3 ± 0,42 0,18 < 0,05
28 дней ЖКВ 16 5,56 ± 0,43 0,19 > 0,05
ЖКВ + МП2 24 6,41 ± 0,36 0,16 > 0,05
ИФА 14 дней ЖКВ 8 6,75 ± 0,33 0,15 < 0,05
ЖКВ + МП2 16 7,44 ± 0,4 0,18 < 0,05
28 дней ЖКВ 8 8,0 ± 0,67 0,29 > 0,05
ЖКВ + МП2 16 7,8 ± 0,34 0,15 > 0,05
РН 14 дней ЖКВ 15 3,86 ± 0,4 0,18 < 0,05
ЖКВ + МП2 24 5,25 ± 0,42 0,19 < 0,05
28 дней ЖКВ 15 6,87 ± 0,59 0,26 > 0,05
ЖКВ + МП2 24 6,5 ± 0,34 0,15 > 0,05
Срелние титры: log2 1/развеление антител.
Sn - срелнее квалратическое отклонение срелнего титра.
Р - показатель лостоверности различия межлу срелними титрами антител у морских свинок, получивших только ЖКВ или ЖКВ + МП-2 в указанные сроки наблюления. PH - реакция нейтрализации вируса коревой вакцины in vitro.
морским свинкам ЖКВ и МП-2, приниипиально важны, так как демонстрируют возможность усиления иммунизирующего действия ЖКВ иммуномодулятором с изученным механизмом действия. Ранее было показано, что МП-2 возвращает способность к размножению лимфоиитам, функиии которых были подавлены, например, интоксикаиией, обусловленной проиессом злокачественного роста [14, 18].
С другой стороны, исследования различных авторов были посвящены коревой иммунодепрессии, которая, в частности, реализуется на уровне остановки размножения активированных лимфоиитов в фазе G1. Живая коревая вакиина также обладает способностью индуиировать эту форму иммунодепрессии [12, 13]. Иммунизирующее (синтез спеиифических антител) и иммунодепрессивное (неспеиифическое) действие коревой вакиины может реализоваться одновременно, и нейтрализаиия иммунодепрессивного действия должна усиливать индукиию спеиифиче-ского иммунного ответа на вакиину.
Полученные результаты - активаиия иммунного ответа на ЖКВ при одновременном воздействии МП-2 в эксперименте - служат первым подтверждением данного предположения. Способность МП-2 восстанавливать размножение лимфоиитов человека в присутствии вируса коревой вакиины in vitro [1, 4, 5] соответствовала способности того же препарата ускорять развитие иммунного ответа на коревую вакиину у морских свинок in vivo. Данные о возможной причинной связи между двумя наблюдаемыми явле-
ниями должны быть получены на следующем этапе исследования. Усиление коревой вакиины путем включения в ее состав иммуномодулятора, снижающего уровень побочного, иммунодепрессивного действия вируса коревой вакиины, позволяет в перспективе использовать препарат, усиленный МП-2, для вакиинаиии иммунокомпрометированных контингентов (облучение, хронические соматические заболевания или инфекиии, включая ВИЧ). Для данных контингентов дополнительное воздействие иммунодепрессивного фактора живого вируса коревой вакиины может быть опасным, и его функииональная нейтрализаиия иммуномодулятором - высокоперспективна.
Исследование выполнено при поддержке РФФИ РАН. Проект <03-04-48200.
Литература
1. Белецкая Р.Г. Миелопептид-2 - эндогенный иммуномодулятор, корригирующий функиии поврежденных Т-лимфо-иитов / Белеикая Р.Г., Калюжная М.В., Ляшенко В.А. и др. // Аллергия, астма и клиническая иммунология. 2003. Т. 7. <9. С. 63-67.
2. Ляшенко В.А. Коревая иммунодепрессия при инфекиии или вакиинаиии // Иммунология. 1996. <2. С. 3-6.
3. Ляшенко В.А. Иммунодепрессивное действие вируса кори in vitro/ Ляшенко В.А., Лавров В.Ф., Юминова Н.В. и др. // Вопросы вирусологии. 1999. <1. С. 39-41.
4. Ляшенко В.А. Ранние проявления иммуномодулирующего
действия коревой вакиины в эксперименте in vitro/ Ляшенко В.А., Александер С.К., Ковалева Л.Г. и др. // Медииин-ская иммунология. 2002. Т. 4. С. 21-27.
I 1РАК1ИКА
5. Ляшенко B.A. Оценка раннего иммунолепрессивного действия вируса кори и его коррекции in vitro на примере живой коревой вакцины / Ляшенко B.A., Михайлова A.A., Юмино-ва H.B. и др. // Биопрепараты. 2002. <4 (8). С. 10-12.
6. Петров P.B. Миелопептиды / Петров P.B., Михайлова A.A., Фонина Л.Я. и др. // М.: Наука, 2000. - 180 с.
7. Розина Э.Э. Сравнительные клинико-морфологические исследования коревой и паротитной инфекций в эксперименте на морских свинках / Розина Э.Э., Худавердян О.Е., Штейн-берг Л.Ш. // Bопросы вирусологии. 1988. <3. С. 342-347.
8. Aaby P. Child mortality after high-titer measles vaccine in Senegal / Aaby P., Samb B., Simindon F. et al. // Lancet 1991; 338:1518-1520.
9. Garenn M. Child mortality after high-titer measles vaccine: prospective studies in Senegal / Garenn M., Leroy O., Beau J.P. // Lancet 1991; 338: 903-907.
10. Griffin D.E. Pathogenesis of measles virus infection: an hypothesis for alterd immune response / Griffin D.E., Ward B.J., Esolen L.M. // J. Infect. Dis. 1994; 170 (suppl. 1): 24-31.
11. Leon M.E. Hith-titer measles immunization in Peruvian Children / Leon M.E., Ward B., Kanashiro R. et al. // J. Infect. Dis.1993; V.168:1097-1104.
12. Mc Chesney M.B. Measles virus infection of B-lymphocytes permits celllular activation but blocks progression through the cell cycle / Mc Chesney M.B., Kehrl J.H., Valsamakis A. et al. // J. Virol. 1987; 61: 3441-3447.
Эпидемиологическая характеристика краснушной инфекиии в период проведения селективной вакиинопрофилактики и оиенка эффективности работы консультативнодиагностического иентра по профилактике врожденной краснухи
В.В. Семериков1, И.В. Фельдблюм2,
И.В. Казакова3, А.Г. Трушков1
Управление здравоохранения администрации города Перми, 2ГОУ «ВПО «Пермская государственная медицинская академия», Территориальное управление Роспотребнадзора по Пермской области
Введение мость. Заболеваемость краснушной инфекцией ха-
Краснуха в России приобрела в последние годы растеризуется высоким уровнем и повсеместным
особую эпидемиологическую и социальную значи- распространением [1, 5]. На фоне увеличения врож-
13. Mc Chesney M.B.Suppression of T-lymphocytes function by measles virus is due to cell cycle arrest in G1 / Mc Chesney M.B., Altmann A., Oldstone M.B.A. // J.Immunol. 1988; 140: 1269-1273.
14. Mikhailova A.A. Peculiarities of immunocorrective effects of the bone marrow regulatory peptides (myelopeptides) / Mikhailova A.A., Fonina L., Kirilina E. et al. // Regulatory peptides, 2003. V.114. P.183-187.
15. Niewiesk S. Measles Virus-Induced Suppression in the Cotton Rat (Sigmodon hispidus) Model Depends on Viral Glicoproteins / Niewiesk S., Eisenhuth I., Fooks A. et al. // J. Of Virology 1997; V. 71, (4): 7214- 7219.
16. Sanches-Lanier M.P. Measles-unduced suppression of lymphocytes proliferation / Sanches-Lanier M.P., Guerlin P., Mc Laren L.C. et al. // Cell. Immunol. 1988; 116: 367- 381.
17. Schlender J. Surface interaction of measles virus glycoproteins is necessary and sufficient for the induction of proliferative inhibition of human periferal blood mononuclear cells / Schlender J., Schnorr J.J., Cattomen T. et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996; 93: 13194-13199.
18. Strelkov L.A. The bone marrow peptide (myelopeptide-2) abolishes induced by human leukemia HL-60 cell suppression of T-lymphocytes / Strelkov L.A., Mikhailova A.A., Sapozhnikov A.M. et al. // Immunology letters 1996, V. 50, P. 143-147.
[Эпидемиология и Вакиинопрофилактика 25 (24)/2005
