CC BY
94
64
Тихоокеанский медицинский журнал, 2010, № 1
6. Папилломавирусная инфекция — клиника, диагностика, лечение: пособие для врачей / Молочков В.А., Кисилев В.И., Рудых И.В., Щербо С.Н. М. : Мирада Вива, 2005. 32 с.
7. Папилломавирусная инфекция гениталий у женщин: учебное пособие / под ред. В.И. Кулакова и др. М: Изд-во НЦАГ и ПРАМН, 2007. 48 с.
8. Роговская С.И. Папилломавирусная инфекция у женщин и патология шейки матки: руководство для практикующего врача. М: ГЭОТАР-Медиа, 2005. 144 с.
9. Русакевич П.С., Литвинова Т.М. Заболевания шейки матки у беременных: диагностика, лечение, мониторинг, профилактика М.: Медицинское информационное агентство, 2006. 144 с.
10. Сидорова И.С., Леваков С.А. Фоновые и предраковые процессы шейки матки. М.: Медицинское информационное агентство, 2001. 100 с.
11. Эпителиальные дисплазии шейки матки: диагностика и лечение / Подистов Ю.И., Лактинов К.П, Петровичев
Н.Н., Брюзгин В.В. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. 136с.
Поступила в редакцию 20.04.2009.
CLINICAL AND IMMUNOLOGICAL SUBSTANTIATION OF TOPICAL THERAPY FOR WOMEN’S GENITAL TRACT PAPILLOMAVIRUS INFECTION WITH ALPHA INTERFERON
N.B. Sereda1, E.V. Markelova2, V.G. Sereda3
1 Medical Centre “Innomed-plus” (10 2nd Krugovaya St.
Vladivostok 690002 Russia), 2 Vladivostok State Medical University (2 Ostryakova Av. Vladivostok 690950 Russia),
3 Vladivostok First Aid Station (155 Okeanskiy Av. Vladivostok 690002 Russia)
Summary — Clinical immunological examination of 72 women with cervical pseudoectropion and papillomavirus infection revealed disorders in T-cell component of the immune response. The authors suggest applying a topical treatment method via recombinant interferon alfa as part of the comprehensive treatment. This will ensure good clinical effect, reduction of treatment period, suppression of the papillomavirus replication, and abatement of immunological imbalance of human organism. Key words: papillomavirus, cervical ectropion, immunity, immunotherapy.
Pacific Medical Journal, 2010, No. 1, p. 60—64.
УДК 576.851.45:616.981.455-085.33:582.28
А.М. Шариков1, Н.В. Пашенова2, Д.А. Нешумаев1, И.А. Новицкий1
1 Институт медицинских проблем Севера СО РАМН (660022 г. Красноярск, ул. Партизана Железняка, 3г),
2 Институт леса им. В.Н. Сукачева СО РАН (660036 г. Красноярск, Академгородок № 50, стр. 28)
ИССЛЕДОВАНИЕ АНТИБИОТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ГРИБА ЧАГИ В ОТНОШЕНИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ ТУЛЯРЕМИИ
Ключевые слова: метаболиты высших грибов, бактерицидное действие.
Изучали влияние метаболитов гриба-чаги Inonotus оЬ^иш РИМ методом лунок на штамм Francisella Ш1агеюк линии 15 НИИЭГ Обнаружен бактерицидный эффект, сохранявшийся при значительном разведении. Для идентификации компонентов, ингибировавших рост возбудителя туляремии, требуются дальнейшие исследования.
Антибиотическая активность высших грибов была показана в 70-е годы прошлого века [1], но поиск и выделение мощных антибиотиков из метаболитов некоторых макромицетов представляется актуальным и в наши дни [7]. Антибиотические вещества гриба 1тпо1ш оЬЩиш РПа! мало изучены, хотя антимикробная активность препаратов чаги упоминается в специальной и популярной литературе [4].
Широкое распространение природных очагов туляремии в нашей стране требует совершенствования средств профилактики, диагностики и лечения данного заболевания. В настоящее время описаны некуль-тивируемые формы Francisella tularensis, длительно персистирующие в макроорганизме [3, 8, 9]. Установлен факт перехода возбудителя в авирулентную форму с изменением его антигенной структуры [5].
Целью данной работы явился анализ влияния метаболитов гриба I. оЬЩиш РПа! на штамм F. tularensis линии 15 НИИЭГ.
Шариков Андрей Михайлович — научный сотрудник лаборатории клеточно-молекулярной физиологии и патологии НИИ МПС СО РАМН; тел. +7 (913) 529-01-63.
Материал и методы. Использовали сибирский изолят I. оЬЩиш, выделенный в 2004 г. из пораженной древесины березы в окрестностях Красноярска. Посевной материал чаги выращивали в чашках Петри на сусло-агаре (4°Б). Грибной мицелий выращивали в жидкой среде — неохмеленное пивное сусло (4°Б) с рН 5,13. Жидкие среды засевали агаровыми блоками с выращенным мицелием (диаметр — 9 мм), вырезанными из края грибной колонии пробочным сверлом. В каждую колбу помещали по пять блоков.
Засеянные колбы инкубировали в термостате при 22—24°С в течение 32 дней. Одновременно инкубировали колбы со стерильной средой (контроль). Культивирование повторяли трижды. После измерения объема и уровня водородного показателя собранную культуральную жидкость упаривали в фарфоровых чашках в токе теплого воздуха до состояния густого сиропа. Для проведения теста на антибиотическую активность брали чашку с упаренной средой (сусло) и чашку с культуральной жидкостью (сусло + чага). Содержимое каждой чашки растворяли в дистиллированной воде (рН 6,18), доводя конечный объем до 100 мл. Полученные растворы сусла (контроль 1) и культуральной жидкости гриба I. оЬЩиш (опыт) разводили стерильно в пробирках в 10, 100 и 1000 раз.
Вакцинный штамм F. tularensis 15 НИИЭГ засевали на FТ-агар, инкубировали в течение 3 суток в термостате при 37°С. Выросшие изолированные
Оригинальные исследования
65
Таблица
Величина зон отсутствия роста штамма Т. Ш1агвтк 15 НИИЭГ вокруг лунок, содержащих растворы культуральной жидкости гриба I. оЫциш Pilat
Разведения Ширина зон отсутствия роста, мм
культуральной жидкости 4-е сутки 8-е сутки 12-е сутки
Конц. раствор 33,3±5,8 33,3±5,8 33,3±5,8
1:10 29,8±0,5 30,0±0,0 30,3±0,6
1:100 28,5±0,5 29,3±1,2 29,0±2,7
1:1000 27,0±2,6* 27,0±2,6* 28,7±3,5*
* Разница с конц. раствором статистически значима.
типичные колонии отбирали петлей и суспензировали в пробирках со стерильным физиологическим раствором (1,5х108 КОЕ/мл) по стандарту мутности. Полученную суспензию засевали отжатым ватным тампоном в трех направлениях на пластины подсушенного FТ-агара, разлитого толстым слоем. После подсушивания посевов в чашках стерильным пробочным сверлом делали лунки.
В лунки FТ-агара с посевом F. tularensis 15 НИИ-ЭГ вносили микропипеткой со сменными стерильными носиками по 0,1 мл культуральной жидкости: концентрированную и в разведениях 1:10, 1:100 и 1:1000. Кроме того, в отдельные лунки вносили по 0,1 мл дистиллированной воды (контроль 2), использованной для разведения упаренных растворов сусла и культуральной жидкости. Посевы проводили пятикратно. Засеянные чашки с лунками, заполненными культуральной жидкостью, суслом или водой, помещали в термостат, не переворачивая, и инкубировали при 37 °С в течение 12 суток. За ростом тест-культур наблюдали после 3 суток инкубации каждые 2-е сутки до окончания эксперимента.
При статистической обработке рассчитывали среднее значение и среднеквадратичное отклонение. Достоверность различий определяли, используя непараметрический критерий Манна-Уитни.
Результаты исследования и обсуждение полученных данных. Заметный рост культуры F. tularensis обнаруживался на 3-и сутки инкубирования. Вокруг лунок в агаре, содержащих дистиллированную воду (контроль 2), концентрированные и разбавленные растворы сусла (контроль 1) отсутствовали признаки угнетения бактериального роста. Вокруг лунок, содержащих растворы культуральной жидкости чаги различной концентрации, зоны отсутствия роста возникали уже на 3-и сутки. Ширина зон в течение всего периода наблюдения (12 суток) варьировала незначительно и в среднем достигала 30 мм. Разбавление культуральной жидкости не оказывало большого значения на величину стерильных зон вокруг лунок (табл.).
Выполненные исследования показали, что при росте гриба I. оЬЩиш на пивном сусле в культураль-
ной жидкости накапливались вещества, оказывающие ингибирующее действие на рост штамма F. tula-rensis 15 НИИЭГ.
Для многих базидиомицетов установлено, что мицелий, выращенный на жидких средах in vitro, в большей или меньшей степени соответствует биохимическому составу плодовых тел грибов [2]. Как известно, препараты чаги, полученные из сырья, собранного в природе, содержат широкий спектр биологически активных веществ (фенолы, флавоно-иды, щавелевая кислота), известных своей антибактериальной активностью [4, 6]. Для идентификации компонентов, ингибировавших рост штамма F. tula-rensis 15 НИИЭГ, требуются дальнейшие исследования.
Литература
1. Белова Н.В. Природа биологической активности высших грибов // Успехи медицинской микологии: мат. I Всерос. конгр. по мед. микологии / под ред. Ю.В. Сергеева. М.: Нац. акад. микологии, 2003. Т.1. С. 230—233.
2. Бухало А.С. Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре. Киев: Наукова думка, 1988. 165 с.
3. Романова Л.В., Мишанькин Б.Н., Пичурина Н.Л. и др. Не-культивируемые формы Francisella tularensis // Журн. мик-робиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2000. № 2. С. 11—15.
4. Саакян К.Р., Ващенко К.Ф., Дармограй Р.6. Чага (черный березовый гриб) Fungus betulinus. Аналитический обзор // Интернет-журнал «Провизор». URL: www.provisor.com.ua/ archive/2004/N16/art_16.htm.
5. Сухарь В.В. Химическая и биологическая характеристика антигенов туляремийного микроба: автореф. дис. ... канд. мед. наук. Ростов-на-Дону, 1988. 24с.
6. Шиврина А.Н. Химическая характеристика действующих начал чаги // Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. М.—Л.: Наука, 1966. С. 49—57.
7. Яковлев В.П., Яковлев С.В. Перспективы создания и внедрения новых антимикробных препаратов // Инфекц. и антимикроб. химиотерапия. 2002. № 4 (2). С. 1—5.
8. Mishankin B.N., Romanova L.V., Pichurina N.L. Noncultur-able forms of Francisella tularensis and their possible epidemiological significance // Vojenske zdravotnicke listy. 1997, suppl. Vol. 66, No 1. P. 25.
9. Romanova L.V., Mishankin B.N., Pichurina N.L. Transfer of Francisella tularensis to the nonculturable state: Induction and conditions favourable for reversion // The 3rd Int. conf. on tularemia. Umea, 2000. P. 25.
Поступила в редакцию 31.01.2008.
STUDYING ANTIBIOTIC ACTIVITY OF SHELF FUNGUS AGAINST TULAREMIA GERM A.M. Sharikov1, N.V. Pashenova2, D.A. Neshumaev1,
I.A. Novitskiy1
1 Research Institute of Medical Problems of the North, Siberian branch of the RAMS (3g Partizan Zheleznyak St. Krasnoyarsk 660022 Russia), 2 V.N. Sukachev Institute of Forest, Siberian Branch of the RAMS (28-50Akademgorodok Krasnoyarsk 660036)
Summary — The authors have studied effects of shelf fugus-de-rived metabolites (Inonotus obliquus Pilat) via “basins on Fran-cisella tularensis strain” method (line 15 NIIEG) and detected bactericidal effect tended to remain, if diluted. The studies should be proceeded to identify components responsible for inhibition of the tularemia germ growth.
Key words: higher fungi metabolites, bactericidal effect.
Pocific Medical Journal, 2010, No. 1, p. 64—65.
