МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
103
иммунных привилегий СК, влияние на поддержание стволового статуса клеток и удержание их в покоящемся состоянии и влияние на активацию СК при репаративном запросе. Показано, что Т-регуляторные клетки нелимфо-идных тканей по секретому и транскриптому напоминают стволовые клетки, что позволило выделить их в отдельный класс иммунных клеток стволовых ниш.
Суммарно можно говорить о значительном взаимном влиянии иммунной системы и СК, происходящем в стволовых нишах тканей взрослого организма. Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда № 22-25-00459.
Литература:
1. Karpenko D.V., Kapranov N.M., Bigildeev A.E., Front Cell Dev
Biol. 2022, doi: 10.3389/fcell.2022.993056.
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ САМОИНАКТИВИРУЮЩИХСЯ ЛЕНТИВИВЕКТОРОВ ТРЕТЬЕГО ПОКОЛЕНИЯ ДЛЯ АНАЛИЗА КЛОНАЛЬНОГО РАЗНООБРАЗИЯ И РАЗМЕРА КЛЕТОЧНЫХ КЛОНОВ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК НА МОДЕЛИ ОЧАГОВ ЭКТОПИЧЕСКОГО КРОВЕТВОРЕНИЯ У МЫШЕЙ
Д.В. Карпенко1, А.С. Артюхов2, А.Е. Бигильдеев1
1 ФГБУ НМИЦ гематологии Минздрава России, Москва, Россия
2 Центр высокоточного редактирования
и генетических технологий для биомедицины, РНИМУ им. Н.И. Пирогова, Москва, Россия
e-mail: d_@list.ru
Ключевые слова: лентивирусный вектор, LeGO, МСК, сайт интеграции, индекс-хоппинг, КОЕф, маркирование клеток, очаг эктопического кроветворения.
Важным аспектом применения лентивирусных векторов для генной и клеточной терапии с генетически модифицированными клетками является понимание эффективности заражения различных видов клеток, особенно стволовых, а также информация о сайтах интеграции (СИ) провирусов. Это необходимо для оценки ассоциированных рисков. С другой стороны, лентивирусные векторы применяются для индивидуального маркирования различных популяций клеток и анализа клональной динамики в них. Однако клональное устройство некоторых типов тканей млекопитающих, в частности, стромы костного мозга (КМ), до сих пор остается недостаточно изученным. Продвижение в этом направлении позволит более эффективно применять регенеративный потенциал мезенхимных стволовых клеток (МСК) для восполнения ими функций органов и тканей.
Стромальный подслой длительной культуры костного мозга декстеровского типа (ДККМ) мыши (n = 10) транс-дуцировали самоинактивирующимся лентивирусным вектором 3 поколения системы LeGO на основе HIV-1. Трансдуцированные ДККМ имплантировали под капсулу почки сингенным реципиентам. В очагах эктопического кроветворения (ОЭК), полученных спустя 42 дня, исследовали содержание колониеобразующих единиц фибро-бластных (КОЕф), эффективность маркирования ДкКм и КОЕф. СИ в ОЭК изучали с помощью NGS на Illumina MiSeq. Биоинформатической анализ проводили алгоритмом, разработанным авторами на языке Python. Картирование СИ выполняли NCBI BLAST.
Несмотря на высокую эффективность заражения ДККМ, ни одна из 309 КОЕф, полученных из 10 ОЭК, не была маркирована, по данным цифровой капельной ПЦР. ЫЭВ-анализ показал, что крупных маркированных клонов (40-100 клеток), было всего 10 из 2165 среди всех образцов. Следовательно, клетки с высоким про-лиферативным потенциалом не были эффективно заражены. Значит, регистрируемые маркированные клетки — это не стволовые стромальные клетки, которые переживают процедуру первичной имплантации. Их доля от всех стромальных клеток ОЭК оценивается в 30% (диапазон значений 5-72%). Картирование СИ показало, что они распределены по всему геному мыши, с небольшими преференциями к генам. Отмечено, что индекс-хоппинг — серьезное препятствие для анализа амплифи-цированных библиотек.
В подслое ДККМ эффективность заражения МСК заметно ниже, чем КОЕф и более дифференцированных стромальных клеток. Это может быть обусловлено совокупностью молекулярных процессов, которые определяют стволовый статус клетки. Это подразумевает, что эффективность генной терапии, основанной на подобных лентивирусных векторах, может быть ограничена и определяется, в основном, временем жизни зараженных не стволовых клеток. С другой стороны, это означает сниженную вероятность нарушения функций стволовых клеток.
РАЗРАБОТКА МОДЕЛИ БОЛЕЗНИ АЛЬЦГЕЙМЕРА И ЕЕ ВАЛИДАЗАЦИЯ С ПОМОЩЬЮ ПОВЕДЕНЧЕСКИХ ТЕСТОВ НА КРЫСАХ
Е.К. Карсунцева, А.Д. Воронова, С.С. Андрецова, А.В. Чадин, Г.А. Фурса, О.В. Степанова, В.П. Чехонин
ФГБУ НМИЦ ПН им. В.П. Сербского Минздрава России, Москва, Россия
e-mail: katya.karsunceva@gmail.com
Ключевые слова: моделирование болезни Альцгеймера, бета-амилоид, тесты открытого поля, тест на пассивное избегание, водный лабиринт Морриса.
Болезнь Альцгеймера (БА) на сегодняшний день является тяжелейшим нейродегенеративным заболеванием, характеризующимся прогрессирующей потерей памяти и дезориентацией в пространстве [1]. БА затрагивает население старше 65 лет, и после диагностирования заболевания средняя продолжительность жизни пациентов составляет всего 7 лет. Существующие подходы к лечению способствуют лишь замедлению нейродегенерации, однако не приводят к выздоровлению пациентов. Таким образом, поиск эффективной терапии БА остается важнейшей задачей нейробиологии. Для оценки различных стратегий лечения необходимы экспериментальные и доклинические исследования, в которых большая роль отводится изучению поведенческих реакций у лабораторных животных. На данный момент существует множество протоколов для моделирования болезни Альцгеймера, однако все они имеют свои недостатки [2]. Таким образом, целью данного исследования было разработать оптимальную модель болезнни Альцгеймера на крысах и провести ее валидиза-цию с помощью поведенческих тестов.
В исследовании были использованы самцы (n=16) и самки (n=16) линии Вистар в возрасте 6 месяцев. Синтетический бета-амилоид (2,5 нмоль) вводили по 5 мкл в оба полушария в область гиппокампа. Для
Гены & Клетки XVII, №3, 2022