CC BY
103
Литература:
1. Балаболкин М.И. Сахарный диабет. — М., 1994.
2. Балаболкин М.И. // Клин. лаб. диагностика. — 1997. — № 5. — С. 26-26.
3. Дедов И.И., Мельниченко Г.А. // Клин. Лаб. Диагностика. 1995. — № 6. — С.46-55.
4. КачинаН.Н. // Суд.-мед. эксперт. — 1991. — №4. — С.7-10.
5. КачинаН.Н. //Суд.-мед. эксперт. — 1994. — № 3. — С. 5-7.
6. Лабораторные методы исследования в клинике / Под ред. В.В. Меньшикова. — М., 1987.
7. Николайчик В.В., Моин В.М., Кирковский В.В. и др. // Лаб. дело. —1991. — № 10. — С. 13-18.
8. Пат. 2131700 RU. Способ диагностики гипергликемической комы в постмортальном периоде / Акимов П.А., ТерёхинаН.А. // Изобретения. — 1999. —№ 17. — С. 294-294.
9. Петрович Ю.А., ТерёхинаН.А. // Вопр. мед. химии. — 1990. — №3. — Т. 36. — С. 13-18.
10. ТерёхинаН.А., Хоробрых О.Ю. // Пермский медицинский журнал. 1998. — № 1. — С. 28-31.
11. AdhikariP.M., Mohammed N., Pereira P. // J. Indian. Med. Assoc. — 1997. — № 10. —Vol. 95 — P. 540-542.
12. Berger W. // Schweis. Rundsch. Med. Prax. — 1997. — №8 — Bd. 86. — S. 308-313.
13. CathelmeauG.,de Champ’vallms М. // Metabolism. — 1997. — № 12. — Vol. 46. — P. 31-34.
14. Terekhina N.,PetrovichI. // Proceedings ofXVI International Congress ofclinical Chemistry. — London,1996. — P. 65-65.
У A.M. Хромова, Д.М. Валиуллина, 2001 УДК 616 - 091.8 - 073.537
A.M. Хромова, Д.М. Валиуллина
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ЛЮМИНЕСЦЕНТНОГО МЕТОДА В СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЙ (ГИСТОЛОГИЧЕСКОЙ) ПРАКТИКЕ
Республиканское бюро судебно-медицинской экспертизы (нач. — к.м.н. Ю.П. Калинин) Министерства здравоохранения Республики Татарстан, Казань
В сообщении излагаются результаты люминесцентного гистологического и гистохимического исследования миокарда. По мнению авторов данный метод является доступным, доказательным и объективным, расширяющим круг экспертных доказательств при диагностике различных патологических состояний.
LUMINESCENT METHOD APPLICATION IN HYSTOLOGICAL FORENSIC MEDICINE PRACTICE
A.M. Khromova, D.M. Valiullina The results of luminescent hystological and hystochemical investigation of myocardium are presented. It is the auther’s opinion that this method is simple, demonstrative, objective and allow to inlarge the expert’s evidence of different pathological conditions diagnostic.
Внезапная сердечная смерть (ВСС) — одна из важнейших проблем здравоохранения нашего времени. ВСС остается главной причиной внезапной смерти.
Инициативной группой сотрудников судебно-гистологического отделения РБ СМЭ М3 РТ и кафедры МБЭ (медико-биологической электроники) КГЭУ, в составе заведующей судебно-гистологическим отделением, кандидатом медицинских наук А.М.Хромо-вой, совместно с заведующим кафедрой МБЭ, профессором, доктором физико-математических наук В.К. Козловым и аспирантом КГМЭУ Д.М. Валиуллиной был использован метод фотолюминесценции для целей судебно-медицинской практики, а именно для выявления ранних стадий ишемических повреждений сердца.
В случаях внезапной сердечной смерти при исследовании сердечной мышцы на вскрытии макроскопических изменений обычно не обнаруживается, и эксперт берет кусочки миокарда из левого желудочка произвольно. Тем не менее, при исследовании сумма патологий характерная для внезапной сердечной (коронарной) смерти (ВКС) обычно обнаруживается. Это объясняется тем, что поражение миокарда при
ВКС первоначально множественные. Как показано Л.В. Кактурским [1], процесс начинается во многих мелких ветвях артерий среза, причем невозможно определить, что именно первично — спазм артерий или катехоламиновые повреждения миокардиоцитов.
В данном сообщении излагаются результаты люминесцентного гистологического и гистохимического исследования миокарда в тех случаях, когда от момента смерти до аутопсии прошло менее 1 суток. Это были трупы мужчин в возрасте от 20 до 35 лет. В основной группе допускалось содержание алкоголя в крови не менее 1,5%. В контрольной группе исследовался биоматериал от трупов лиц без содержания алкоголя в крови.
Исследования проводились на люминесцентном микроскопе серии «Люмам»: исследовательская модель «Люмам-И2» с фотометрической люминесцентной насадкой ФМЭЛ, снабженной фотоэлектронным умножителем ФЭУ-39А.
Исследования выполнялись в 26 случаях, которые включали в себя 4 группы:
1. ишемическая болезнь сердца (ИБС);
2. кардиомиопатия (КМП);
3. острые отравления алкоголем;
4. отравление наркотиками (морфиносодержащими).
Контролем явились случаи смерти лиц:
1) от грубой механической травмы (смерть на месте), преимущественно от травмы головы, без повреждений органов грудной клетки;
2) механическая асфиксия, вследствии сдавления органов шеи петлей.
Исследования показали, что в случаях с механической асфиксией, наблюдается значительное нарушение собственной люминесценции: появляются фокусы свечения, т.е. идет фоновое изменение метаболизма в миокарде, в результате чего данные случаи были исключены из группы контроля.
Целью исследования было решение следующих задач:
1. определение условий оптимального возбуждения люминесценции;
2. определение допустимых технологий изготовления гистосрезов;
3. изучение опытных и контрольных образцов при оптимальных условиях возбуждения люминесценции;
Выявленные участки изменений характеризовались по следующим критериям:
— локализация зон изменений;
— их размеры;
— цвет люминесцентного свечения;
— определение относительной интенсивности люминесцентного свечения по 2 вариантам:
а) определение отношений интенсивности измененных участков к неизмененным участкам одного и того же образца;
б) определение отношений интенсивности измененных участков опытного образца к неизмененным участкам контрольного образца.
Нами определялись оптимальные условия возбуждения люминесценции с помощью фотометрической насадки. При этом нами было установлено, что оптимальными условиями для люминесцентного анализа можно считать следующие:
1) источник возбуждения люминесценции ------
ртутная лампа;
2) светофильтр СЗС — 24-4+светофильтр возбуждения ФС-1-2 (светофильтр СЗС — 24-4 устанавливается в ближайшее к основанию гнездо для предохранения светофильтров возбуждения от нагревания);
3) запирающий светофильтр ЖС-18 + ЖЭС-19 (зеленая светоделительная пластина);
4) время экспозиция (не более 30 минут);
5) перед проведением исследования образцы необходимо держать в темном месте (не менее 2-3 часов).
Для решения 11-ой задачи нами использовались срезы как нативные (неокрашенные), так и после их заключения в глицерин и окраски Рего. Для люминесцентной микроскопии гистосрезы, заключенные в
глицерин и окрашенные по Рего, не пригодны, т.к. при их облучении коротковолновым ультрафиолетовым излучением люминесцентное свечение не обнаруживается.
Интенсивность свечения нативных срезов выше, чем например, у гистопрепаратов окрашенных гематоксилин-эозином и заключенных в полистирол. В неокрашенных срезах на зеленом фоне появляются светло-зеленые, желто-зеленые, изумрудные, темно-зеленые области, а так же люминесцирую-щие ярко-оранжевым светом гранулы (возможно, это липофусцин). Однако за счет наличия в поле зрения такого многообразия цветных гамм, сложно получить информацию о структуре миокарда, местоположения некроза и ишемии. Причем при использовании фотометрической люминесцентной насадки наличие ярких цветов увеличивается паразитный сигнал, т.е. необходимо исключить мешающее люминесцентное свечение (разноцветное поле) для получения достоверных данных. К тому те такие срезы (неокрашенные) не применяются в традиционной световой микроскопии. Поэтому, базируясь на собственные экспериментальные данные, можно сделать следующий вывод, что для пользователей (судмедэкспертов) наиболее оптимальным является использование срезов, окрашенных в гематоксилин-эозин и заключенных в полистирол, используемых в традиционной световой микроскопии. В этом случае образуется не только оптимальное люминесцентное свечение гистосреза, без мешающего яркого фона, но и появляется возможность проанализировать состояние ядра, прокрашенного гематоксиолином и цитоплазмы, прокрашенной эозином.
Для каждой группы наблюдений были выявлены особенности характеризующие фокусы изменений, например при ИБС зоны изменений, располагались вокруг сосудов (периваскулярно), были более одного поля зрения малого увеличения (х10); цвет люминесцентного свечения колебался от ярко-желтого до янтарного. При КМП изменения носили мозаично-диффузный характер, по типу звездного неба; общая площадь изменений также превышала одно поле зрения; цвет люминесценции, как правило, изменялся от светло-зеленого до ярко-желтого. Во всех группах наблюдений отмечалось изменение средней интенсивности свечения с 1,5 до 3 отн. ед.
На наш взгляд, данный метод является доступным, доказательным и объективным, расширяющий круг экспертных доказательств при диагностике различных патологических состояний. Поэтому в дальнейшем для повышения информативности данной методики имеет смысл определять не только интегральную интенсивность люминесценции и её спектральный состав, но и исследовать спектры люминесценции и спектры возбуждения люминесценции.
Литература:
1. Кактурский Л.В. // Итоги науки и техники. Патологическая анатомия. — М., 1985. — Т. 5. — С. 50-59.
