CC BY
76
HayKOBMM BiCHMK ^tBiBCtKoro Ha^OHa^tHoro yHiBepcMTeTy
BeTepMHapHoi Megw^HM Ta öioTexHO^oriw iMem C.3. I^M^Koro
Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies
ISSN 2518-7554 print doi: 10.32718/nvlvet9212
ISSN 2518-1327 online http://nvlvet.com.ua
UDC 619.615.637
Investigation of the parameters of acute and acute toxicity of the "VetMicoDerm" liniment under the skin application
V. Martynyshyn
Stepan Gzhytskyi National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies Lviv, Ukraine
Martynyshyn, V. (2018). Investigation of the parameters of acute and acute toxicity of the "VetMicoDerm" liniment under the skin application. Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies, 20(92), 59-63. doi: 10.32718/nvlvet9212
The toxicity parameters of "VetMikoDerm" for one-time and long-term skin treatment were investigated. The studied liniment as an off-white substance has a thio derivative of 1,2,4-triasole. Spotted thistle oil is used as a solvent. The research of the determination of acute and low acute skin toxicity has been performed on young, healthy, healthy skin of the laboratory rats. The drug was applied in different doses to the stripped areas of the skin (area is not less than 10% of the total area of the skin). It was established that after a single application of the drug (24 hours) in a dose of less than 2000 mg/kg of body weight, the death of experimental animals or any signs of general intoxication of the body is not observed. Local reaction (redness, itching, allergy, combing) is absent. According to GHS under the assessment in this dose studying the "VetMicoDerm" drug belongs to the 5th safety category (Grade 5, not classified). During a long-lasting application of the drug (28 days), the death of the rats was not adversed, the animals had a preserved appetite, responded adequately to external stimuli, reflex excitability was completely preserved. Under hematological and biochemical studies of blood of the experimental animals, it was found that against the backdrop of insignificant increase in the number of white blood cells in their blood, the number of neutrophils increases and the percentage of lymphocytes decreases significantly. However, under the usage of the drug in the therapeutic dose (50 mg/kg body weight) the liver function has a tendency to increase. Increasing in dose (500 mg/kg) of the VetMikoDerm a 10-fold continued its application which led to an increase in serum concentrations of urea and creatinine,increasing the mass index can serve as a marker of renal decline functional condition of the body.
Key words: acute and subacute toxicity, rats, "VetMikoDerm", hematological and biochemical parameters of blood.
- Я • • •••• •• •••
Досл1дження параметрш гостро1 i шдгостро1 токсичносл лшшенту "ВетМжоДерм" за нашк1рного застосування
В.П. Мартинишин
Львiвський нацюнальний утверситет ветеринарног медицини та бютехнологт iMem С.З. Гжицького, м. Львiв, Укра'та
До^джено параметри токсичностi препарату "ВетМжоДерм " за одноразового i довготривалого наштрного його застосування. До^джуваний лттент як дЮчаречовина мае тiопохiдну 1,2,4-трiазолу, а зарозчинник в ньому використано олт розто-ропшi плямистог. До^дження з визначення гострог i тдгострог нашшрног токсичностi проведено на молодих, здорових гз непо-шкодженою шмрою лабораторних щурах. Препарат наносився в рiзних дозах на вистрижеш дтянки штри (площа не менше 10% вiд загальног площi штри). Встановлено, що за одноразовог аплтацп препарату (24 год) в дозi меншш за 2000 мг/кг маси тта загибeлi тддо^дних тварин чи появи в них ознак загальног ттоксикацп оргатзму не спостеркалося. Мкцевареакщя (почервонт-ня, свeрбiж, алeргiя, розчухування) вiдсутня. Зурахуванням вимог УГС (GHS) до^джуваний препарат "ВетМжоДерм", за прове-деною оцткою в такт дозi належить до 5-г категоргг (5 клас, не класиф^еться) бeзпeчностi. За довготривалого наштрного застосування препарату (28 дiб) загибель щурiв не наступала, тварини мали збережений апетит, адекватно реагували на зовшш-rn подразники, рефлекторна збудлив^ть була повтстю збережена. За гематолог1чних та бiохiмiчних до^джень кровi в тддослi-дних тварин встановлено, що на тлi незначного зростання в гх кровi числа лeйкоцитiв тдвищуеться юльтсть нейтрофШв та
Article info
Received 16.10.2018 Received in revisedform 16.11.2018 Accepted 19.11.2018
Stepan Gzhytskyi National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies Lviv, Pekarska Str., 50, Lviv, 79010, Ukraine. Tel.: +38-097-519-13-88 E-mail: [email protected]
вiрогiдно знижуеться вiдсоток лiмфоцитiв. Протешсинтезувальна функщя печтки за використання препарату в терапевтичнш дозi (50 мг/кг маси тварини) мала тенденщю до зростання. За 10-ти кратного збшьшення дози (500 мг/кг) ВетМтоДерму тривала його аплтащя призводила до тдвищення в сироватщ кровi концентрацп сечовини i креатитну, що на тлi зростання тдексу маси нирок може слугувати маркером зниження функцюнального стану цього органа.
Ключовг слова: гостра i тдгостра токсичтсть, щур^ "ВетМжоДерм ", гематологiчнi i бюхмчш показники кровi.
Вступ
Серед синтетичних бюлопчно активных сполук, яш за х1м1чною структурою е гетероцикл1чними речо-винами з атомом нпрогену, юнуе значна кшьшсть препарапв, яш знайшли свое застосування як в медицин^ так 1 у ветеринарнш практищ. Особливу увагу серед под1бних речовин привертають похвдш 1,2,4-тр1азолу (Obushak et а1., 2003; Panasenko, 2005; Savchenkova, 2008).
Серед р1зномаштних патологш, що трапляються в домашшх 1 свшських тварин особливого поширення набувають захворювання шк1ри. Бшьшють з них ма-ють хрошчний переби- та погано пщдаються л1куван-ню. Щдвищити ефектившсть лшування тварин з дерматитами чи шшою нашшрною патолопею вдаеться за умови використання багатокомпонентних мазей чи лштентш. Наявш науков1 повщомлення, що використання м'яких л1карських форм з морфолшш 2-[5-(шридин-4-ш)-1,2,4-тр1азол-3-1лтю] ацетатом, трери-динш 2-[5-(фуран-2-ш)-4-метил-1,2,4-тр1азол-3-штю] ацетатом призводить до пришвидшення лшування дерматилв у собак (Knysh et а1., 2010).
Щнними, на нашу думку, е лшменти, що виготов-ляються за типом розчишв на нелетких розчинниках, зокрема рослинних отях. При створенш нового препарату з потенцшно вираженою протим1кробною 1 протигрибковою д1ею нами дослщжуеться субстанщя на основ1 тюпохвдних тр1азолу, синтезована в лабора-торп кафедри фармакологи Запор1зького державного медичного ушверситету. Як розчинник або основа для лшменту було використано ол1ю розторопш1 плямис-то!, яка за даними лггератури е не лише доброю дисперсною системою для дшчих речовин, а й самостш-
но проявляе виражеш мембраностабшзувальш, про-тизапальш та ранозагоююч1 властивосп (Martynyshyn et а1., 2017).
Фармаколопчна актившсть похщних 1,2,4-тр1азолу е загальновщомою. Однак здатшсть синтетичних сполук до прояву поб1чних 1 токсичних ефекпв вимагае детальних дослщжень щодо з'ясування пара-метр1в гостро!' 1 хрошчно! токсичносп дослщжуваних компоненпв препарату (Kosenko et а1., 1997; Kotsiumbas et а1., 2006; Todoriuk et а1., 2018).
Тому метою нашо! роботи були встановлення без-печносл препарату "ВетМжоДерм" за умови однократного 1 довготривалого його нашк1рного примшен-ня.
Матерiал i методи дослiджень
Дослвдження з визначення гостро! нашшрно! ток-сичносп лшменту ВетМжоДерм проводили ввдпо-в1дно до вимог ОЕСД № 402 (OECD, 2017). Для дос-лвду використовували здорових, молодих щур1в з непошкодженою шкурою, масою тша 200-220 г.
За день до нанесення досл1джуваного засобу проводили видалення шерсп з дорзально!/боково! повер-хш шк1ри (10% ввд загально! площ1 поверхш тша). Лшмент "ВетМжоДерм" наносили якомога р1вшше 1 тримали в контакт з1 шкурою за допомогою пористо! марлево! пов'язки та неподразливо! стр1чки впродовж 24 годин. Згвдно з методикою (OECD, 1981), у зв'язку з вшсутностю шформац! щодо досл1джувано! речови-ни, ВетМ1коДерм наносили у початковш доз1 200 мг/кг маси тша тварини. Уа подальш1 дослщжен-ня проводили ввдповшно до блок-схеми (рис. 1).
Початок
Рис. 1. Дослвдження д1апазону дози препарату "ВетМжоДерм"
Шсля нанесення препарату "ВетМжоДерм" спо-стереження за лабораторными тваринами вели протя-гом 14 д1б. При цьому враховували зовшшнш вигляд i поведшку тварин, стан !х шерсл, видимих слизових оболонок, вiдношення до корму, ритм i частоту ди-хання, час виникнення та характер штоксикацп, !! важк1сть, перебiг, час загибел1 тварин або !х одужан-ня.
Вивчення нашшрно! токсичностi ВетМiкоДерму за тривалого застосування здiйснювали вiдповiдно до ОЕСД № 410 (Repeated Dose Dermal Toxicity: 21/28-day Study). Для дослшу використовували молодих здорових тварин з непошкодженою шшрою, масою тша 200-220 г. За день до нанесення дослщжуваного засобу, як i в попередньому дослiдi, проводили вида-лення шерстi з повторенням через тиждень.
Дослiджуваний засiб тримали в контактi зi шкурою щоденно впродовж 6 годин. Дослщжуваний лшмент наносили на шк1ру кожного дня впродовж 28 дiб. Пiсля закшчення перiоду експозицп дослiджуваний засiб видаляли, де це можливо, використовуючи при цьому воду чи шший вшповшний розчинник.
Для дослщу, за принципом аналопв, було сформовано 3 групи тварин - по 6 щурiв у кожнiй. Тваринам контрольно! групи на попередньо тдготовлену дмн-ку шк1ри наносили розчин олп розторопшi плямисто!, дослщно! групи - препарат в дозi 50 мг/кг, а II дослщно! групи - 500 мг/кг маси тша.
На наступну добу шсля зашнчення дослщу щодо вивчення пщгостро! токсичносп препарату "Вет-МжоДерм" лабораторних тварин за легкого ефiрного наркозу пщдавали декапiтацi!, вщбирали проби кровi та проводили вщповщш гематологiчнi й бiохiмiчнi !! дослщження за загальновизнаними методиками. Крiм того, тварин розтинали, зважували масу внутрiшнiх органiв, визначали коефщенти !хньо! маси, порiвняно з тваринами контрольно! групи.
Результата та Тх обговорення
За проведення експерименпв на бiлих щурах вста-новлено, що нашк1рне нанесення "ВетМгкоДерму" у дозi 2000мг/кг маси тiла не викликало загибел1 досль дних тварин чи появи в них якихось ознак загально! iнтоксикацi! органiзму. При цьому в шсщ контакту препарату зi шкурою ознак почервонiння, сверб1жу, розчухування не виявлено. З урахуванням вимог УГС (GHS) - узгоджено! на глобальному рiвнi системи класифжацп небезпеки та маркування хiмiчно! проду-кцi!, дослщжуваний лiнiмент "ВетМгкоДерм" нале-жить до 5-! категорi! (клас 5, не класифiкуeться).
За проведення довготривалого дослщу з вивчення пщгостро! токсичностi встановлено, що впродовж усього перюду спостереження дослiднi тварини були активними, мали задовiльний апетит, адекватно реа-гували на звуковi та свiтловi подразники, у них зберь галась виражена рефлекторна збудливiсть. Загибелi пiддослiдних щурiв чи ознак токсикозу, викликаного тривалим контактом новоствореного лшарського засобу iз шкурою, виявлено не було.
За оцшкою морфологiчних показнишв кровi встановлено, що за довготривалого нанесення ВетМжо-Дерму на шкру лабораторних тварин в терапевтичнш та 10-ти кратнiй терапевтичнiй дозах суттевих змiн в кiлькостi еритроципв, концентрацi! гемоглобiну та вiдносних показниках, що характеризують насиче-нiсть еритроципв гемоглобiном (МСНС, МСН, МСV), не вщзначено (табл. 1). При цьому число лейкоципв у кровi щурiв I i II досл1дних груп мало виражену тен-денцiю до зниження. Аналiз лейкограми показав, що в них на rai лейкоцитозу вшзначено вiрогiдне зниження кiлькостi лiмфоцитiв на 10,5 i 8,8% (Р < 0,05) та зрос-тання вiдсотка нейтрофiлiв на 27,2 i 25,1% вiдповiдно. Число моноцитiв та еозинофшв суттево не змiнюва-лось i було на рiвнi показника щурiв контрольно! групи.
Таблиця 1
Гематолопчш показники кровi бiлих щурiв на 29- ту добу дослвду за нашшрного застосування лiнiменту ВетМiкоДерм (M ± m, n = 6)
Показники Групи тварин
Контрольна до^дт I-а II-а
Гемоглобш, г/л 147,75 ± 4,78 145,17 ± 1,54 150,0 ± 1,14
Еритроцити, Т/л 6,35 ± 0,25 6,25 ± 0,11 6,52 ± 0,11
Лейкоцити, Г/л 10,47 ± 1,99 8,63 ± 2,34 7,88 ± 0,60
Гематокрит, % 40,5 ± 0,89 40,17 ± 0,28 41,4 ± 0,39
Нейтроф1ли 19,5 ± 1,54 24,8 ± 1,85* 24,4 ± 1,94
Лейкограма, Л1мфоцити 71,5 ± 0,5 64,0 ± 2,28* 65,2 ± 2,06*
% Моноцити 9 ± 0,58 9,6 ± 0,75 9,2 ± 0,49
Еозинофши 0 ± 0 1 ± 0,7 1,2 ± 0,49
МСН, пг 23,18 ± 0,19 23,1 ± 0,42 22,88 ± 0,29
МСНС, г/дл 36,48 ± 0,44 36,15 ± 0,18 36,24 ± 0,27
МСV, мкм3 63,63 ± 1,23 63,93 ± 1,18 63,12 ± 0,45
Тромбоцити, Г/л 707,75 ± 66,14 805,5 ± 42,33 * 737,2 ± 92,82
Примтка: в цш та шших таблицях * - Р < 0,05; ** - Р < 0,01; *** - Р < 0,001
Анал1з окремих бiохiмiчних показнишв сироватки Нами встановлено, що ВетМжоДерм в дозi 50 i кровi пiддослiдних тварин наведено в таблищ 2. 500 мг/кг маси тша (дослщш групи I i II) за тривалого
зовнiшнього застосування сприяе полiпшенню проте-
!нсинтезувальних процеав у лабораторних щур1в. Р1вень загального проте!ну в сироватщ кров1 щур1в дослвдних груп був на 9,9 i 4,6% вищим за показник тварин контрольно! групи.
У щурiв 2-! дослщно! групи вщзначено вiрогiдне зростання концентрацп сечовини в сироватщ кровi на 32,1% (Р < 0,01) та рiвня креатинiну на 10,0% (Р < 0,05). Вiрогiдне збiльшення в кровi щурiв ще! групи креатинiну, на rai зростання вагового коефiцieнту
маси нирок е, ймовiрно, ознакою зниження функщо-нального стану цього органа.
Ваговi коефiцiенти внутрiшнiх органiв щурiв до-слiдних груп, що являють собою спiввiдношення !хньо! маси до маси тша не зазнавали суттевих ввдхи-лень, порiвняно з аналопчним показником тварин контрольно! групи, хоч у щурiв I групи, за аплшаци !м дослiджуваного лiнiменту в дозi 50мг/кг ввдзначено тенденцiю до зростання шдексу маси печiнки, селезь нки, серця, нирок i тимуса (табл. 3).
Таблиця 2
Бiохiмiчнi показники кровi бiлих щурiв на 29-ту добу дослвду за нашшрного застосування ВетМiкоДерм (M ± m, n = 6)
Показники Контрольна (К) -;-—-——
I-а II-а
Проте!н загальний, г/л 73,87 ± 1,90 81,2 ± 2,67 77,3 ± 1,87
Сечовина, ммоль/л 7,55 ± 0,48 8,23 ± 0,61 9,97 ± 0,32**
Креатишн, мкмоль/л 73,7 ± 3,04 77,4 ± 4,0 81,1 ± 3,22*
АсАТ, Од/л 93,0 ± 14,0 70,95 ± 5,09 77,18 ± 4,76
АлАТ, Од/л 243,2 ± 18,99 240,75 ± 21,88 240,4 ± 28,09
ЛФ, Од/л 179,85 ± 10,51 211,63 ± 8,898 197,03 ± 16,05
Таблиця 3
Ваговi коефiцiенти маси внутршшх органiв бiлих щурiв на 29-ту добу дослщу (M ± m, n = 6)
Внутрiшнi органи Групи тварин
До^дт
контрольна Iгрупа II група
Печiнка 33,5 ± 2,22 37,7 ± 1,31 31,35 ± 0,81
Селезiнка 2,25 ± 0,17 2,59 ± 0,08 2,67 ± 0,17
Серце 3,61 ± 0,19 3,87 ± 0,11 3,74 ± 0,18
Легенi 8,36 ± 0,63 8,02 ± 0,74 9,99 ± 1,83
Права нирка 3,21 ± 0,14 3,35 ± 0,04 3,48 ± 0,11
Шва нирка 3,11 ± 0,24 3,41 ± 0,09 3,49 ± 0,13
Тимус 1,29 ± 0,10 1,49 ± 0,24 1,46 ± 0,19
Маса тша тварин, г 224,5 ± 5,5 229,6 ± 4,69 217,0 ± 6,44
Отже, аналiзуючи отриманi данi щодо ди препарату "ВетМжоДерм", варто зазначити, що довготривале нашк1рне його застосування викликало у тварин не-значне пвдвищення вiдсотка нейтрофiлiв на тл зниження лiмфоцитiв, що, ймовiрно, може свiдчити про регенеративну реакцш шк1ри на дш препарату. Зростання вмюту сечовини в сироватщ кровi та рiвня кре-атишну, за збiльшення маси нирок характеризуе фун-кцiональний стан нирок, i найiмовiрнiше, адаптацш-но-пристосувальний характер.
Висновки
1. Одноразове застосування лшменту "ВетМжо-Дерм" не викликае загибелi тварин, появи токсичних явищ, почервонiння на мющ нанесення препарату, тому зпдно з УГС (GHS) дослвджуваний зааб нале-жить до 5 категори (клас 5, не класифiкуеться).
2. Довготривале нашшрне застосування лiнiменту "ВетМжоДерм" викликае зростання кiлькостi нейт-рофшв та особливо в 10-ти кратнш терапевтичнiй дозi зниження вiдсотка лiмфоцитiв, сприяе пвдвищен-ню проте!носинтезувально! функци печiнки та приг-нiчуе функцюнальний стан нирок.
nepcnexmuea nodanbrnux docnidweHb. Eyge BHBHe-
ho giro npenapaTy "BeTMiKO,n,epM" 3a gepMarmiB rpu6-
KOBoro noxog^eHHa.
References
Obushak, N.D., Matijchuk V.S., & Martjak R.L. (2003). Sintez geterociklov na osnove produktov anionariliro-vanija nepredel'nyh soedinenij. Produkty galogenarilirovanija akrilovoj kisloty i ee jefirov v sinteze proizvodnyh benzo[v] tiofena. Himija geterocik-licheskih soedinenij, 7, 1019-1026 (in Russian).
Panasenko, O.I. (2005). Syntez, peretvorennia, fizyko-khimichni ta biolohichni vlastyvosti pokhidnykh 1,2,4-triazolu: dys. d-ra farm. nauk. K., 396 (in Ukrainian).
Savchenkova, L.V. (2008). Klinichna farmakolohiia tiotriazolinu: (ohliad lit-ry). Ukr. med. almanakh, 11(3), 212-217 (in Ukrainian).
Knysh, Ye.H., Parchenko, V.V., & Panasenko, O.I. (2010). Maz dlia korektsii perebihu zapalnykh protsesiv. Patent Ukrainy na korysnu model 90983.Zaiav. 12.10.2009; opubl. 10.06.2010, Biul. №
HayKOBHH BicHHK ^HyBME iMeHi C.3. IW^KOTO, 2018, T 20, № 92
11. http://uapatents.com/4-90983-maz-dlya-korekci-perebigu-zapalnikh-procesiv.html (in Ukrainian).
Knysh, Ye.H., Parchenko, V.V., & Panasenko, O.I. (2010). Hidrofilna maz dlia likuvannia zapalen shkiry. Patent Ukrainy na korysnu model 47942. Zaiav. 12.10.09; opubl. 25.02.2010, Biul. № 4. http://uapatents.com/3-47942-gidrofilna-maz-dlya-likuvannya-zapalen-shkiri.html (in Ukrainian).
Martynyshyn, V.P., Hunchak, V.M., Hutyi, B.V., & Hlukh, O.S. (2017). Do metodyky pryhotuvannia linimentu na osnovi tiopokhidnoi triazolu ta yoho otsinka za fizychnymy vlastyvostiamy i diieiu na okremi mikroorhanizmy ta hrybky. Naukovyi visnyk LNUVM i BT imeni S.Z. Hzhytskoho, 19(82), 36-40. doi: 10.15421/nvlvet8208 (in Ukrainian).
OECD (2017). Test No. 402: Acute Dermal Toxicity, OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Sec-
tion 4, OECD Publishing, Paris. doi: 10.1787/9789264070585-en.
OECD (1981). Test No. 410 "Repeated Dose Dermal Toxicity: 21/28-day Study". doi: 10.1787/20745788.
Kosenko, M.V., Malyk, O.H., Kotsiumbas, I.Ia., Patereha, I.P., Chura, D.O. (1997). Toksykolohichnyi kontrol novykh zasobiv zakhystu tvaryn: Metodychni rek-omendatsii. K. (in Ukrainian).
Kotsiumbas, I.Ia., Malyk, O.E., & Patereha, I.P. (2006). Doklinichni doslidzhennia veterynarnykh likarskykh zasobiv. Lviv: Triada plius (in Ukrainian).
Todoriuk, V.B., Hunchak, V.M., Gutyj, B.V., Gufriy, D.F., Hariv, I.I., Khomyk, R.I. , & Vasiv, R.O. (2018). Pre-clinical research of the experimental preparation "Ferosel T". Ukrainian Journal of Veterinary and Agricultural Sciences, 1(1), 3-9. doi: 10.32718/ujvas1-1.01.
