CC BY
15
Науковий вкник Л^вського нацюнального ушверситету ветеринарно! медицини та бютехнологш iMeHi С.З. Гжицького.
CepiH: Ветеринарнi науки
Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies.
Series: Veterinary sciences
ISSN 2518-7554 print ISSN 2518-1327 online
doi: 10.32718/nvlvet9604 http://nvlvet.com.ua
UDC 619:616.98:579
Innovative domestic product of "EMKapBaK" - vaccine against blacleg at the market of veterinary immunobiological facilities
P. Boyko1, B. Busol2, L. Akymenko3, O. Boyko4, B. Kurtiak5, O. Assory6 1Institute of Veterinary Medicine of NAAS, Kyiv, Ukraine
2National Scientific Center "Institute of Experimental and Clinical Veterinary Medicine", Kharkov, Ukraine 3State Scientific Control Institute of Biotechnology and Microorganism, Kyiv, Ukraine
4Experimental Station of Epizootology of the Institute of Veterinary Medicine of the National Academy of Sciences of Ukraine, Rivne, Ukraine
5Stepan Gzhytskyi National University of Veterinary Medicine and Biotechnology Lviv, Ukraine 6Sumy biological state factory, Sumy, Ukraine
Article info
Received 01.10.2019 Received in revised form
01.11.2019 Accepted 02.11.2019
Institute of Veterinary Medicine, National Academy of Sciences of
Ukraine, Donetska Str., 30, Kyiv, 03151, Ukraine.
National Scientific Center "Institute of Experimental and Clinical Veterinary Medicine", Pushkinska Str., 82, Kharkov, 61023, Ukraine.
State Scientific Control Institute of Biotechnology and Microorganism, Donetska, Str., 30, Kyiv, 03151, Ukraine.
Experimental Station of Epizootology of the Institute of Veterinary Medicine of the National Academy of Sciences of Ukraine, Knyaz Volodymyr Str., 18, Rivne, 33028, Ukraine.
Stepan Gzhytskyi National
University of Veterinary Medicine
and Biotechnologies Lviv,
Pekarska Str., 50, Lviv,
79010, Ukraine.
Tel.: +38-097-698-93-71
E-mail: kurtakbohdan@gmail.com
Sumy biological state factory, Hamalia Str., 25, Sumy, 40021, Ukraine.
Boyko, P., Busol, B., Akymenko, L., Boyko, O., Kurtiak, B., & Assory, O. (2019). Innovative domestic product of "EMKapeaK" - vaccine against blacleg at the market of veterinary immunobiological facilities. Scientific Messenger of Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies. Series: Veterinary sciences, 21(96), 19-27. doi: 10.32718/nvlvet9604
The results over the test of new domestic vaccine against to the blackleg - "EMKAPBAK" was brought. The local productive strain C. chauvoei of fl— 7 has high immunogenicity, protective capacity and create immunity duration over 9 months. The corresponding changes in regulation technological process was enable to use of the newest data in relation to immunogenicity capacity of C. chauvoei. In particular, duration of accumulation of microbial mass of C. chauvoei in a reactor diminished from 36-42 hours to 16— 18 hour, as an adsorbent is used aerosils of brand of A-300 (a production is Germany) from the calculation of 3 ± 0.1mg/sm3 culture; the supernatants was recovered by concentration of liquid after inactivation. The microbial mass of vaccine is 3.5 ± 0.3*1093. The tests of vaccine of "EMKAPBAK" showed that preparation was sterile, inactivated, harmless (a bioassay is on guinea-pigs), owns high antigen (the level of antibodies for the instilled animals presented 1:828 ± 257 on a 21th day after inoculation) and immunogenicity activity. The field tests of vaccine of "EMKAPBAK" showed that a vaccine owns high antigenicity, providing even in 12 months after her inoculation high level of specific antibodies (the level for the instilled animals presented 1:32 ± 6.0 against 1:11 ± 3.6 for control animals). The productive tests of the productive-experienced series of vaccine of "EMKAPBAK' conducted in the conditions of 22 unhappy economies of the Volyn' area on young cattle. Rejections of general (oppression, increase of temperature, loss of appetite and others like that) or changes of local character (slight swelling in place inoculation, increase of regional lymphatic knots) it was not educed. Thus, the vaccine of "EMKAPBAK" in the conditions of the field test appeared harmless and immunogenicity, able to support tense immunity at the receptive contingent of cattle during 9 months (term of supervision).
Key words: Clostridium chauvoe, blacleg, local strain, constructing of vaccine, immunogenicity, protective capacity, virulence.
¡нновацшнмй в1тчизняний продукт "Емкарвак" - вакцина проти емф1зематозного карбункулу на ринку ветеринарних 1мунобюлог1чних засоб1в
П К. Бойко1, В О. Бусол2, Л.1. Акименко3, О.П. Бойко4, Б.М. Куртяк5, О.Ю. Accopi6
Институт ветеринарно'1 медицини НААН, м. Кшв, Украша 2Нацюнальний науковий центр "1ЕКВМ", м. Харюв, Украта
3Державний науково-контрольний iнститут бiотехнологii i штамiв мiкроорганiзмiв, м. Кшв, Украша 4Дослана станщя етзоотологп 1нституту ветеринарноi медицини НААН, м. Piem, Украша 5Львiвський нацюнальний утверситет ветеринарно'1' медицини та бютехнологт iменi С.З. Гжицького, м. Львiв, Украта
6Державне тдприемство "Сумська бiологiчна фабрика", м. Суми,Украша
У статт1 наведено результаты випробувань новоi втчизняноi вакцини проти емф1зематозного карбункулу "ЕМКАРВАК" ¡з вШчизняного виробничого штаму C. chauvoei Л-7, яка створюе ¡мун1тет тривал1стю понад 9 масящв. Використання новШжх даних щодо гмуногенних детермтант C. chauvoei дало можлив1сть внести в1дпов1дт змти у регламент технолог1чного процесу. Зокрема, тривалкть накопичення мжробно! маси C. chauvoei в реакторi зменшена з 36-42 год до 16-18 год; як адсорбент викори-стано аеросил марки А-300 (виробництво Нмеччина) з розрахунку 3 ± 0,1 мг/см3 культури; концентрування мкробноi маси проводили декантуванням надосадовогр1дини тсля тактивацИ та адсорбування культури; ктцева концентращя мжробних тт - 3,5 ± 0,3*109 в 1 см3 вакцини. Лабораторт випробування вакцини "ЕМКАРВАК» показали, що препарат е стерильним, тактивованим, нештдливим (бюпроба на морських свинках), волод1е високою антигенною (р1вень антитт у щеплених тварин становив 1:828 ± 257 на 21-й день тсля уведення вакцини) та ¡муногенною активтстю. Польовими випробуваннями вакцини "ЕМКАРВАК" встано-влено, що вакцина володiе високою антигентстю, забезпечуючи навШь через 12 мкящв тсля iiуведення високий рiвень специфiч-них антитт (рiвень аглютижтву щеплених тварин становив 1:32 ± 6,0 проти 1:11 ± 3,6у контрольних тварин). Виробничi випро-бовування виробничо-до^дно1 сери вакцини "ЕМКАРВАК" провели в умовах 22 неблагополучних господарств Волинсько1 областi на молодняку великоХ рогатоХхудоби. Вiдхилень загального стану (пригтчення, тдвищення температури, втрата апетиту тощо) або змт м^цевого характеру (припухлкть на мкщ уведення, збтьшення регюнальних лiмфатичних вузлiв) не було виявлено. Таким чином, вакцина "ЕМКАРВАК" в умовах польового випробування виявилася нештдливою та iмуногенною, здатною тдтримувати напружений iмунiтет у сприйнятливого контингенту велико1 рогато1 худоби протягом 9 мкящв (термт спостереження).
Ключовi слова: емфiзематозний карбункул, токсигенш i вiрулентнi властивостi Clostridium chauvoei, конструювання вакцини.
Вступ
Актуальтсть теми. Незважаючи на те, що в кра!-hí дониш не розроблена цшсна система розвитку агропромислового комплексу, проте у кожнш обласп ми бачимо виникнення та устшний розвиток ферм велико! рогато! худоби молочного i м'ясного напрям-ыв i тдтримку держави (Postanova vid 30 sichnya 2019). З'являються впчизняш породи м'ясного i ком-бшованого напрямшв, яш пристосоваш до нагулу на природшх пасовищах (Logosha, 2012). Природно, що цей контингент худоби потрiбно захистити ввд збуд-нишв грунтових шфекцш, зокрема сибiрки та емфiзе-матозного карбункулу.
Аналгз остантх дослгджень i публгкацт. Ввдомо, що на територп вах регюшв Укра!ни прояв етзооти-чного процесу емфiзематозного карбункулу велико! рогато! худоби та овець мае постшний характер (Bojko, 1998). При цьому повторш спалахи шфекцп у неблагополучних пунктах спостер^алися через десятки рошв (Mandygra et al., 2003). Тому питання контролю етзоотичного процесу ще! шфекци е дуже ак-туальним. Найб№ш ефективним е комплексний контроль вах трьох ланок ешзоотичного процесу (Bojko, 2008), а в неблагополучних пунктах - вакцинащя сприйнятливих тварин (Kagan & Kyryllov, 1976; Kyryllov, 2001; Bojko, 2009). З щею метою в УкраМ використовують концентровану пдрооксидалюмше-
ву формолвакцину проти емф1зематозного карбункулу велико! рогато! худоби i овець, яку виготовляють на Сумсьшй державнш бюфабрищ. Ця вакцина була розроблена у 60-х роках минулого столггтя. Вона забезпечуе iмунiтет тривалютю до 6 мюящв.
Для середшх i швшчних широт Росп така трива-лiсть iмунiтету е цiлком задовiльною, бо пасовищний перiод там тривае не б№ше нiж пiв року. В Укра!ш тривалiсть пасовищного перiоду е довшою. Зважаючи на суттеве глобальне потеплшня, тривалiсть пасовищного перiоду в Укра!ш зросла до 8-9 мкящв. Тому для надiйного захисту тварин, яш випасаються, три-валiсть iмунiтету повинна бути не меншою нж 9 мь сяцiв.
Мета роботи - дати порiвняльну характеристику основних властивостей впчизняного виробничого штаму C. chauvoei Л-7 та ввдзначити особливосп тех-нологй' виготовлення вакцини "ЕМКАРВАК".
Завдання дослвдження полягало насамперед у ви-дiленнi перспективного i впчизняного штаму C. chauvoei, який за iмуногенними властивостями не посту-пався б зарубiжним виробничим штамам (Bojko et al., 2008). По-друге, технологiя виготовлення вакцини повинна забезпечувати повну експресiю та збережен-ня iмуногенних детермiнант виробничого штаму i таким чином створювати тривалший iмунiтет у щеп-лених тварин.
MaTepiai i MeTogu gociig^eHb
B po6oTi BHKopHCTaHO 6aKTepioioriHHi, 6ioioriHHi, 6ioxiMiHHi Ta iMyHoiorinrn MeTogu gociig^eHb. Rocii-
g^yBaiu Mop^oiorinrn o3HaKH, THHKTopiaibHi, KyibTy-paibHi Ta 6ioxiMinHi BiacTHBocTi Bupo6HHnoro mTaMy C. chauvoei .H-7 3rigHo 3 DSTU ISO 7218 (DSTU ISO 7218:2014), DSTU 8492:2015 (DSTU 8492:2015), DSTU 7937 (DSTU 7937:2006). Ria BHBneHHa 6ioxiMi-hhhx B^acTHBocTen mTaMy BHKopucraHo Mo3KoBe cepe-goBH^e, moioko, cepegoBH^e ricca i3 мoнoцyкpaмн i cepegoBH^e TOKcHHoHaKonuHeHHa (Bojko, 2003; Busol et al., 2005).
naToreHHicTb Bupo6HHnoro mTaMy C. chauvoei fl-7 BHBHajiH Ha MopcbKHx cBHHKax Macoio 400 ± 50 r 3 bh-KopHcraHHHM go6oBoi' KyibTypu C. chauvoei fl-7 b go3i 0,5 cm3 3a rCTy 46.024-2002 (Galuzevyj standart Ukrayiny, 2002).
OcBmeHHa naToreHHux BiacTHBocTeH mTaMy npo-BogHjiH nepe3 opraHi3M TeiaTH BiKoM 3 Mic., He ^enie-Horo npoTH 6ygb-aKoro 3axBopoBaHHa. Ria цboro cy-Mim 5 cm3 24-rogHHHoi' KyibTypu C. chauvoei fl-7 i 1 cm3 cTepuibHoro 5% po3HHHy кaIbцio xiopugy BBoguiu nigmKipHo b giiaH^ iiBoro naxy. BnpogoB® nepmoi' roguHH nicia cMepTi TBapuHH Big6upaiu naToioriHHHH MaTepiai (cepцe, ceie3iHKa, neniHKa, hhpkh, ypa^eHa M'a3oBa TKaHHHa) gia 6aKTepioioriHHoro gociig^eHHa 3 MeToo BHBneHHH TunoBocTi BHgiieHoi KyibTypu C. chauvoei fl-7 3a Mop^oioriHHHMH o3HaKaMH i Kyib-TypaibHo-6ioxiMinHHMH BiacTHBocTaMH, BHgiieHHa
f„ I >
\|
1
MaTpoBoi' KyibTypu (master-seed) i Big6opy naToiorin-Horo MaTepiaiy gia TpuBaioro 36epiraHHa.
EaKTepioiorinHe gociig^eHHa naroioriHHoro MaTepiaiy 3Boguioca go BHBneHHa Mop^oiorinHux o3HaK i THHKTopiaibHux BiacTHBocTeH C. chauvoei fl-7 y Ma3-Kax-Big6uTKax i3 naTOiorinHoro MaTepiaiy i npenapa-Tax, no$ap6oBaHux 3a TpaMoM, i "po3gymeHa Kpania" i3 12-14-roguHHux KyibTyp, oTpuMaHux miaxoM BuciBy Bcix opraHiB i TKaHHH b cepegoBH^e Кiттa-Тapoццi (CKT), M'aco-nenToHHHH 6yibHoH (MnE) i Ha M'aco-nenToHHHH arap (MnA) (KoHTpoib Ha npucyTHicTb aepo6Hoi' MiKpo^iopu) i TBepgi ^HBHibHi cepegoBH^a -KpoB'aHHH raoKo3HHH M'aco-nenToHHHH arap (KTM-nA). nociBH iHKy6yBaiu 3a TeMnepaiypu 37 ± 0,5 °C npoTaroM 24-48 rog. MeTogoioria npoBegeHHx gocii-g^eHb 6a3yeTbca Ha BHMorax DSTU 7198:2010 (DSTU 7198:2010), DSTU 7199:2010 (DSTU 7199:2010), DSTU 8164:2015 (DSTU 8164:2015).
Pe3yibTaTH Ta ix oSroBopeHHH
13 KoieKqii bhpo6hhhhx, My3enHHx i noiboBHx mTa-MiB 36ygHHKa eM$i3eMaTO3Horo Kap6yHKyiy, ^o 3i6paHa HaMH BnpogoB® KiibKox gecaTKiB poKiB i HapaxoBye 31 i3oiaT, HaMH Bigi6paHo aK nepcneKTHBHHH BiTHH3HaHHH mTaM C. chauvoei fl-7 (Bojko et al., 2008).
^ noiboBHH i3oiaT 36ygHHKa eM$i3eMaTO3Horo Ka-p6yHKyiy, BHgiieHHH HaMH y 1980 po^ Big Tpyna 6y-ranHHKa BiKoM 12 Mic. CrporHH aHaepo6. rpaMia6iibHa (Moiogi KyibTypu rpaMno3HTHBHi, cTapi - rpaMHeraTHB-Hi) naiHHKa 3 g^ryTHKaMH, aKa yTBopoe cnopu (puc. 1).
\
A —
s
Phc. 1. BereTaTHBHi $opMH mTaMy Cl. chauvoei fl-7 (12-rogHHHa KyibTypa Ha cepegoBH^i Kiтт-Тapoццi;
$ap6yBaHHa 3a rpaMoM)
Cnopu po3TamoByoTbca b цeнтpi naiuHKH a6o nigKiH- MiKpo6y $opMH iHMoHa, rpymi, TonuibHoro KaMeHa цeвo i, 6ygyHH mupmuMH 3a giaMeTp naiuHKH, HagaoTb (puc. 2).
Рис. 2. 24-годинна культура на середовищ1 Кггт-Тароцщ C. chauvoei Л-7 (А. Фазово-контрастна мшроскотя. Препарат "роздушена крапля"; Б. Фарбування за Грамом)
Газоутворення на рщких живильних середовищах незначне. Ферментуе з утворенням кислоти та газу сахарозу, лактозу, машт, глюкозу, дульцит, не розще-плюе глщерин, 1зодульцит i салщин, повшьно розрь джуе желатину, не викликае почорнiння мозкового середовища, повiльно звурджуе молоко.
У товщi сироваткового МПА утворюе дрiбнi щшь-нi круглi випуклi колони, як розташовуються пооди-нцi або парно у виглядi зернiвки сочевищ.
На кров'яному глюкозному МПА утворюе гладк колонii двох типiв. Одш за формою мають вигляд виноградного листка (якщо чашки Петрi iз середови-щем були недостатньо тдсушеш) зi значною зоною гемолiзу (рис. 3), а друп мають вигляд перламутрового Гудзика з помггною зоною прозорого гемолiзу на-вколо колонш (рис. 4).
Зона B-гемолiзу
Краi колонii
Рис. 3. Колотя 40-годинно1 культури C.chauvoei Л-7 на кров'яному arapi
т 1
(форма виноградного листа) Колонп C. chauvoei
Зона 3-гемолiзу
Рис. 4. Колошя 40-годинно'' культури C. chauvoei Л-7 на кров'яному агарi (форма перламутрового Гудзика)
Колони молодих культур мають голубуватий ко-л1р, а стар1 набувають срого забарвлення; поверхня колонш обох титв гладка, центр i кра! круглих колонш дещо припiднятi й у ввдбитих прямих променях створюють враження перламутрових гудзик1в. Кра! колонiй оточеш зоною прозорого гемолiзу.
Щдшшрне введення 0,5 см3 24-годинно! культури спричиняе загибель морських свинок вагою 350 ± 50 г
через 18-28 год. з типовою для C. chauvoei патолого-анатомiчною картиною (рис. 5) - морсьш свинки за-звичай лежать на животi (шби сплять), добре поми'-ний набряк пвдшшрно! клiтковини живота, що простя-гаеться аж до подгрудка; на розрiзi драглистий кров'янистий ексудат, м'язова тканина шнщвки вiд темно-вишневого до чорного кольору.
А т^Ш
-.W fci, - Кров'янистий ексудат у
пiдшкiрнiй клiтковинi i
некротизованi тканини
шрыШЖ Пухирцi газу у пiдшкiрнiй
клiтковинi
Рис. 5. Змши у пiдшкiрнiй клiтковинi на тсщ уведення культури С. chauvoei Л-7.
Вивченням антигенностi та iмуногенностi екзоток-сину та антигешв вегетативних клiтин С. chauvoei Л-7 встановлено, що визначальним фактором iмуногенно-стi е концентрацiя та стан вегетативних клггин, тим-часом як для екзотоксину властива висока антиген-
нiсть i незначна iмуногеннiсть (Bojko et al., 2008). Бiльшiсть авторiв iмуногенну силу емкарних вакцин пов'язують iз джгутиковим антигеном вегетативних клiтин С. chauvoei (рис. 6.) (Chandler & Gulasekharam, 1974; Tanaka et al., 1987).
Рис. 6. Вегетативш форми штаму Cl. chauvoei Л-7 iз джгутиками (16-годинна культура на середовищi
Кит-Тароццц непрямий варiант МФА)
Технiчним регламентом з виготовлення шактиво-вано! вакцини проти емфiзематозного карбункулу передбачено пасажування виробничого штаму через органiзм сприйнятливо! тварини (велика рогата худоба чи вiвцi) з метою освiження його вiрулентних влас-тивостей.
Для цього ми провели гострий дослiд з поновлення патогенних та вiрулентних властивостей вакцинного штаму C. chauvoei Л-7 на бугайчику сро! мастi добро! вгодованосл, вiком 3 мiс., живою масою 80 кг. 1нфь кування теляти проводили сумiшшю 5 см3 24-
годинно' культури штаму 1з 1 см3 5% розчину кальцш хлориду, яку вводили пвдшшрно в д1лянщ паху.
Експериментальний емкар у теляти, спричинений C. chauvoei Л-7, характеризувався гострим переб1гом (смерть тварини наступила через 43 год тсля заражения), реактивним набряком у мющ розвитку пато-лопчного процесу 1з порушенням функци уражено' кшщвки - кульгавють, важке пересування i вставан-ня; температурна реакщя оргашзму у процес розвит-
ку хвороби вщсутня або ж не вловлюеться, а в термь нальнш стадн спостертаеться ii зниження; набряк уражених тканин супроводжуеться накопиченням у них газ1в 1з характерним трюком при натисканш, що нагадуе шелест - це було тдставою для украшсько! назви емкару - шелесниця; накопичення газ1в в ура-жених тканинах проявляеться креттащею i тимпашч-ним звуком в дшянщ набряку; розвитком типових для цiеi шфекцп патолого-анатом1чних змш (рис. 7).
Пухирщ газу на поверхш уражено! шнщвки
ВВё»
Некротизована м'язова тканина
Рис. 7. Експериментальний емкар у теляти, спричинений C. chauvoei Л-7
З рис. 7 видно, що вся задня шнщвка повшстю нах д1стала назви: blackleg - чорна нога або black уражена, через що й ця хвороба в англомовних краь quarter - чорна чверть).
Кров'янистий ексудат, яким просочена шдшшрна клгтко-вина
Значш крововиливи в нек-ротизоваш м'язову тканину уражено! шнщвки
Рис. 8. Експериментальний емкар у теляти, спричинений C. chauvoei Л-7 (уражеш м'язи темно-вишневого i
чорного кольору, сух1 з крововиливами)
Таким чином, осв1ження штаму Л-7 з вщтворен-ням експериментального емкару на цшьовому вид1 тварин показало, що вш волод1е типовими для С. chauvoei тинктор1ально-морфолопчними, культу-рально-бюх1м1чними, патогенними та високими в1ру-лентними властивостями i може бути використаний як еталонний у пор1вняльних дослщах при депону-
ванш шших 1золят1в збудника емфiзематозного карбункулу.
Отримаш чист1 культури з тканин i оргашв трупа теляти на середовищах Кпт-Тароцщ i КГМПА були законсервоваш й розфасоваш у 1-мшлиров1 епен-дорфш ампули на тривале збертання.
На довготермтове збертання було закладено зра-зки патолопчного матер1алу в глщерит та люфшзо-вану культуру C. chauvoei Л-7 з подальшим перюди-чним визначенням паспортних характеристик штаму.
Перюдичтсть проведения штаму через оргатзм морських свинок один раз на тв року, а через оргатзм телят - раз на 5 рошв.
Вщповвдно до вимог FAO процедура створення партп вихщного матер1алу для виготовлення вакцини (seed-lot) поетапно мае таку послвдовтсть:
- пасаж виробничого штаму через оргатзм сприй-нятливих тварин, в якому мжрооргатзм вщтворюе повний наб1р патогенних екзотоксишв та антигених й 1муногенних детермшант;
- р1вень протективних антигешв треба пвдтриму-вати в культур^ яка використовуеться для виробницт-ва вакцини;
- повторне пасажування м1кроорган1зм1в в штуч-них живильних середовищах призводить до втрати в1рулентно1, антигенно! та 1муногенно1 активностц
Тому культури виробничого штаму C. chauvoei можна використовувати в межах не б1льше тж трьох пасаж1в на штучних живильних середовищах тсля видшення 1х 1з патолопчного матер1алу, отриманого ввд заражено! велико! рогато! худоби, в1вщ або морсь-ко! свинки;
- велика парпя замороженого матер1алу повинна збертатися за температури - 20 °C або нижче (seed-lots);
- seed-lots повинш надаватися для повного д1аиа-зону контрольних випробувань препарату, тобто його щентичносп, безпечносп та 1муногенност1 вакцини.
Два типи seed-lots повинш бути в наявносп для за-безпечення виробництва вакцина, а саме - головна або матрова (master-seed) та (work-seed) робоча культура. Ця система гарантуе, що впродовж перюду збе-рiгаиия ф1з1олог1чна актившсть штаму не змшиться так, як це може статися за його постшного культиву-вання на штучних середовищах.
Зважаючи на результати дослвджень з вивчення протективних властивостей антигенних детермiнаит C. chauvoei, яш отриманi рiзними дослiдниками, в т. ч. й нами, нами внесено певш змши у технологiчний регламент промислового виготовлення шактивовано! вакцини проти емфiзематозного карбункулу. Зокрема, тривалють накопичення мiкробноï маси C. chauvoei в реакторi зменшена з 36-42 год до 1618 год, як адсорбент використано аеросил марки А-300 (виробництво Нiмеччина) з розрахунку 3 ± 0,1 мг/см3 культури; концентрування мiкробноï маси проводили декантуванням надосадовоï рвдини пiсля шактиваци та адсорбування культури; к1нцева конце-нтрацiя мiкробних тiл - 3,5 ± 0,3*109 в 1 см3 вакцини. Визначення концентрацiï мiкробних тш проводили в термiнальнiй стадiï шкубаци за допомогою ФЕК на жовтому свiтлофiльтрi (X = 575-590 нм), використо-вуючи як стандарт бруцельозний антиген для постановки РА з врахуванням вiдповiдних коефiцiентiв, розроблених для ОСТ (оптичний стандарт каламутно-
стi). При цьому ми не мiняли шших технолопчних параметрiв виробництва вакцини.
Лабораторн випробування вакцини "ЕМКАРВАК" показали, що препарат е стерильним, шактиво-ваним, нешк1дливим (бiопроба на морських свинках), володiе високою антигенною ^вень антитiл у щеплених тварин становив 1:828 ± 257 на 21-й день тсля уведення вакцини) та iмуногенною (вижили всi iмунi-зованi 10 морських свинок, 4 телят i 4 ягнят 6-мюячного вiку пiсля контрольного зараження су-спензiею iз рiвних частин 48-годинно! культуру С. chauvoei Л-7 та 5% стерильного розчину кальцио хлориду) актившстю.
Польовими випробуваннями вакцини "ЕМКАРВАК" встановлено, що вакцина володiе високою ан-тигеннiстю, забезпечуючи навиъ через 12 мiсяцiв пiсля !! уведення високий рiвень специфiчних антитш (рiвень аглютинiнiв у щеплених тварин становив 1:32 ± 6,0 проти 1:11 ± 3,6 у контрольних тварин). Вакцина мае виражений iмуностимулюючий вплив на органiзм вакцинованих тварин, про що свщчать пока-зники динамiки основних показник1в кровi телят про-тягом року пiсля щеплення вакциною "ЕМКАРВАК", лейкоцитiв, загального бшка, бiлкового профiлю си-роваткових бшшв, пвдвищенням активностi фагоцитiв та лiзоциму кровi.
Виробничi випробовування виробничо-дослiдно! сери вакцини "ЕМКАРВАК" провели в умовах 22 неблагополучних господарств Волинсько! обласп на молодняку велико! рогато! худоби. Вакцину вводили внутршньом'язово у дозi 2 см3. Всього було щеплено 6975 голiв. Вiдхилень загального стану (пригтчення, пiдвищення температури, втрата апетиту тощо) або змiн мiсцевого характеру (припухлють на мiсцi уведення, збшьшення регiональних лiмфатичних вузлiв) не було виявлено.
Всi щепленi тварини протягом лiтньо-табiрного утримання випасалися на природних лучних пасови-щах. У зв'язку з тим, що кшець осенi та початок зими видалися теплими, то у вах господарствах областi, у тому чи^ й у неблагополучних пунктах, де було проведено щеплення тварин виробничо-дослщною серiею вакцини "ЕМКАРВАК", випасання тварин тривало включно по грудень (першi заморозки iз ви-паданням осадiв у виглядi сшгу спостерiгалися аж у 2-iй половит счня наступного року). Повторне щеплення сприйнятливих тварин, як1 залишалися на пасо-вищi, не проводили. Випадшв захворювання на емфi-зематозний карбункул серед тварин, щеплених виро-бничо-дослвдною серiею вакцини, не було.
Таким чином, вакцина "ЕМКАРВАК" в умовах польового випробування виявилася нешшдливою та iмуногенною, здатною шдтримувати напружений iму-нiтет у сприйнятливого контингенту велико! рогато! худоби протягом 9 мюятв (термт спостереження).
Висновки
1. Вичизняний вакцинний штам С. chauvoei Л-7, який за сво!ми паспортними характеристиками
вiдпoвiдae вимогам мiжнapoдниx нopмaтивниx доку-мeнтiв, e актуальним за антигенною cтpyктypoю та iмyнoгeнними влacтивocтями штамом для в^х' тepи-тopiï Укpaïни.
2. Texнoлoгiя виготовлення вiтчизнянoï такти-вoвaнoï вакцини ^оти eмфiзeмaтoзнoгo кapбyнкyлy вeликoï poraTOï xyдoби i овець "EMKAPBAK" iз вгт-чизняного виpoбничoгo штаму C. chauvoei Л-? вщпо-вiдae peкoмeндaцiям CFR та £С з ypaxyвaнням пeвниx змiн: тpивaлicть накопичення мiкpoбнoï мacи C. chauvoei в peaктopi зменшена з 36-42 год до 1618 год; як aдcopбeнт викopиcтaнo aepocил мapки A-300 ^^обнищ^о Hiмeччинa) з poзpaxyнкy 3 ± 0,1 мг/cм3 кyльтypи.
3. Bиpoбничi випpoбoвyвaння дocлiднoï cepiï вакцини "EMKAPBAK" в yмoвax 22 нeблaгoпoлyчниx гocпoдapcтв Boлинcькoï oблacтi на молодняку вели^ poгaтoï xyдoби пiдтвepдили ïï нeшкiдливicть та здат-нicть пiдтpимyвaти нaпpyжeний iмyнiтeт у cпpийнят-ливого контингенту вeликoï poгaтoï xyдoби ^отягом 9 мicяцiв.
4. Дoвгoтepмiнoвe дубльоване збepiгaння вакцинного штаму C. chauvoei Л-? та конфолювання m^opm^ i тexнoлoгiчниx xapaктepиcтик ^ово-дитьcя в дeпoзитapiï ДHKIБШM (лioфiльнe виушу-вання, зaмopoжyвaння за тeмпepaтypи - 80 °С).
Перте-итши тдальшт дocлiджeнь включають poзpoбкy мeтoдiв кошролювання eфeктивнocтi вакцини вiдпoвiднo до вимог Дepжaвнoï фapмaкoпeй Укpaïни та ^оведення пocтpeecтpaцiйнoгo мoнiтopи-нгу.
References
"Pro zatverdzhennya Poryadku vykory stannya koshtiv, peredbachenykh u derzhavnomu byudzheti dlya pid-trymky galuzi tvarynnycztva" Kabinet ministriv Ukrayiny. Postanova vid 30 sichnya 2019, 110 (in Ukrainian).
Bojko P.K. (1998). Do vyvchennya epizootychnogo pro-cesu emfizematoznogo karbunkulu v Ukrayini. Naukova spadshhyna Luyi Pastera i veterynarna medycyna Ukrayiny. (Do 175-richchya vid dnya narodzhennya Luyi Pastera). Zbir. naukovykh statej. Rivne: IE UAAN, 6-12 (in Ukrainian). Bojko, P.K. (2003). Deklaracijnyi patent na vynakhid "Seredovyshhe toksynonakopychennya dlya CLOSTRIDIUM CHAUVOEI" No 60761 A. 2003021398, 10. 15.10.2003, Byul. No 10. http://uapatents.com/2-60761-seredovishhe-toksinonakopichennya-dlya-clostridium-chauvoei.html (in Ukrainian). Bojko, P.K. (2008). Epizootologichnyj monitoryng. Klostrydiozy tvaryn. Emfizematoznyj karbunkul. Vet-erynarna medycyna Ukrayiny, 4, 8-10 (in Ukrainian). Bojko, P.K. (2009). Epizootychnyi proces ta specyfichna profilaktyka emfizematoznogo karbunkulu velykoyi rogatoyi xudoby. Avtoref. dysertaciyi ... doktora vet-erynarnyx nauk. K.: NUBiP (in Ukrainian). Bojko, P.K., Akymenko, L.I., Kovalenko, L.V., & Bojko, O.P. (2008). Vidbir perspektyvnykh shtamiv Slostrid-
ium chauvoei dlya deponuvannya u depozytariyi DNKIBShM. Veterynarna biotexnologiya. Materialy konferenciyi, prysvyachenoyi 10-richchyu stvorennya DNKIBShM. K.: DNKIBShM, Byuleten, 13(1), 223230 (in Ukrainian).
Busol, V.O., Ryzhenko, V.P., Mandygra, M.S., & Bojko, P.K. (2005). Diagnostyka emfizema-toznogo kar-bunkulu: Metodychni rekomendaciyi dlya specialistiv vet. medycyny, naukovciv ta studentiv. K.: DDVM (in Ukrainian).
Chandler, H.M., & Gulasekharam, J. (1974). The protective antigen of a highly immunogenic strain of Clostridium chauvoei including an evaluation of its flagella as a protective antigen. J. Gen. Microbial., 84(1), 128-134. doi: 10.1099/00221287-84-1-128.
Derzhavnyj standart Ukrayiny 7198:2010. Preparaty vet-erynarni. Nalezhna laboratorna praktyka. Data vvedennya v diyu: 01.07.2011. Nadannya chynosti, nakaz: 2010-12-28, 604. Diye z 01.07.2011. [Elektronnyi resurs] Rezhym dostupu: http://document.ua/preparati-veterinarni_-nalezhna-laboratorna-praktika-std3688.html (in Ukrainian).
Derzhavnyj standart Ukrayiny 7199:2010. Preparaty vet-erynarni imunobiologichni. Nalezhna doklinichna praktyka. Data vvedennya v diyu: 01.07.2011. Komentar shhodo nadannya chynosti, nakaz: 2010-1228, 604. [Elektronnyi resurs] Rezhym dostupu: http://document.ua/preparati-veterinarni-imunobiologichni_-nalezhna-doklinichna-std3689.html (in Ukrainian).
Derzhavnyj standart Ukrayiny 8164:2015. Preparatyvet-erynarni. Nalezhna vyrobnycha praktyka. Diye z 01.01.2017. Informaciya pro DSTU 8164:2015: Nadano chynnosti: nakaz DP "UkrNDNCz" vid 22 chervnya 2015, 61. [Elektronnyi resurs] Rezhym dostupu: http://document.ua/preparati-veterinarni_-nalezhna-virobnicha-praktika-nor29321.html (in Ukrainian).
Derzhavnyj standart Ukrayiny 8492:2015. Veterynarna medycyna. Metody laboratornogo diagnostuvannya klostrydioziv. Data vvedennya v diyu: 01.07.2017. Komentar shhodo nadannya chynosti, nakaz: 2015-1021, 133. [Elektronnyi resurs] Rezhym dostupu: http://document.ua/veterinarna-medicina_-metodi-laboratornogo-diagnostuvannja-k-std31238.html (in Ukrainian).
Derzhavnyj standart Ukrayiny ISO 7218:2014. Mikrobi-ologiya xarchovyx produktiv i kormiv dlya tvaryn. Zagalni nastanovy shhodo mikrobiologichnyx doslidzhen.Data vvedennya v diyu: 01.01.2016. Komentar shhodo nadannya chynosti, nakaz: 2014-1230, 1494. [Elektronnyj resurs] Rezhym dostupu: http://document.ua/mikrobiologija-harchovih-produktiv-i-kormiv-dlj a-tvarin_-zag-std30622.html (in Ukrainian).
Derzhavnyj standart Ukrayiny ISO 7937:2006. Mikrobi-ologiya kharchovyx produktiv i kormiv dlya tvaryn. Goryzontalnyj metod vyznachennya kilkosti Clostrid-ium Perfringens. Tekhnika pidrakhuvannya kolonij. Data vvedennya v diyu: 01.10.2007. Komentar shhodo
nadannya chynosti, nakaz: 2006-06-09, 161. [El-ektronnyi resurs] Rezhym dostupu: http://document.ua/mikrobiologija-harchovih-produktiv-i-kormiv-dlja-tvarin_-gor-std10402.html (in Ukrainian).
Galuzevyj standart Ukrayiny (2002). Preparaty veterynar-ni. Metody vyznachennya neshkidlyvosti [Tekst]: GSTU 46.024-2002. Vyd. oficz. Vpershe; vved. 200301-01. K.: [Elektronnyi resurs] Rezhym dostupu: https://zakon.rada.gov.ua/rada/show/v0371555-02?lang=ru (in Ukrainian).
Kagan, F.Y., & Kyryllov, V.L. (1976). Specyficheskaya profilaktika klostrydiozov zhyvotnykh. M.: Kolos (in Russian).
Kyryllov, L.V. (2001). Preduprezhdenie o infekcionnykh boleznej anaerobnoj etiologii. Veterinariya, 1, 16-19 (in Russian).
Logosha, R.V. (2012). Myasne skotarstvo Ukrayiny: stan, tendenciyi ta napryamky jogo intensyfikaciyi. Zbirnyk naukovyx pracz VNAU. Seriya: Ekonomichni nauky, 2, 1(56), 90-96 (in Ukrainian).
Mandygra, M.S. Bojko, P.K., & Bojko, O.P. (2003). Osoblyvosti epizootychnogo procesu pry emfizema-
toznomu karbunkuli velykoyi rogatoyi khudoby v Ivano-Frankivs'kij oblasti. Veterynarna medycyna (mizhvidomchyj tematychnyj naukovyj zbirnyk), 82, 376-380 (in Ukrainian).
Mandygra, M.S., Bojko, P.K., & Bojko, O.P. (2015). Metodychni pidkhody do konstruyuvannya bakterial-nykh vakcyn na prykladi inaktyvovanykh vakcyn proty emfizematoznogo karbunkulu. Vet. medycyna: Mizhvid. temat. nauk. zb., Kh., 101, 211-214 (in Ukrainian).
Misra, R.P. (1991). Manual for the production of anthrax and blackleg vaccines. Fao animal production and health paper, 87. http://www.fao.org/3/T0278E/T0278E00.htm.
Tamura, Y., Minamoto, N., & Tanaka, S. (1984). Demonstration of protective antigen carried by flagella of Clos-tridium chauvoei. Microbial. Immunol., 28(2), 13251332. doi: 10.1111/j.1348-0421.1984.tb00790.x.
Tanaka, M., Hirayama, N., & Tamura, Y. (1987). Production, characterization and protective effect of monoclonal antibodies to Clostridium chauvoei flagella. Infect. Immun., 55, 1779-1783.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/3301677.
