Инфекция GBV-B как суррогатная модель HCV-инфекции Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

течением инфекции. При гепатите С в условиях отсутствия вакцинации роль этих мер является особенно значимой.

Г.Е. Ефимов, Т.Е. Кайданек, К.Ф. Кондратьева, А.С. Воробьев, З.А. Шагиева, С.С.Сивоконь, Башкирский государственный медицинский университет, Республиканский центр ГСЭН, г. Уфа.

ИНФЕКЦИЯ GBV-B КАК СУРРОГАТНАЯ МОДЕЛЬ HCV-ИНФЕКЦИИ.

История открытия вируса GBV-B началась в 70-е годы 20 века, когда F. Deinhardt с коллегами провели серийные пассажи среди обезьян тамаринов, используя сыворотку крови, полученную от хирурга, заболевшего гепатитом неясной этиологии. Инициалы имени этого хирурга были G.B., они и дали название группе агентов, выявленных впоследствии в результате серийных пассажей среди тамаринов. Идентифицировать два вирусных агента, GBV-A и GBV-B, удалось в 90-е годы группе ученых, возглавляемых J.Simmons. Они установили, что филогенетически оба вируса относятся к флавивирусам, причем вирус GBV-B наиболее близок к вирусу гепатита С (HCV). Немного позднее, в 1996 г. J.Linnen с коллегами был описан третий представитель группы GB вирусов - GBV-С (HGV) - вирус человека с невыраженными патогенными свойствами. Ни GBV-A, ни GBV-B никогда не были выявлены у человека; по-видимому, тамарины, участвовавшие в пассажных исследованиях с сывороткой G.B., уже были эндогенно ифицированы этими агентами. Позднее работы P.Leary с соавт. (1996), J.Erker с соавт, (1998), R.Charel с соавт. (1999) показали, что GBV-A является вирусом обезьян Нового Света, вызывает у них хроническую инфекцию без кого-либо выраженного патогенеза, и различные варианты GBV-A специфичны для разных видов обезьян. Естественный хозяин GBV-B не установлен, поскольку этот вирус был выявлен только у приматов Нового Света (тамарины, мармозеты, совиные обезьяны), инфицированных in vivo материалами, полученными в результате серийных пассажей сыворотки G.B., и не был выявлен у диких животных. J.Bukh с соавт. (2001) пытались обнаружить РНК GBV-B в оригинальной сыворотке G.B., но неудачно. Эта же группа исследователей проводила попытки инфицировать GBV-B шимпанзе, но эти животные оказались невосприимчивыми к GBV-В. По-видимому, этот агент все-таки является вирусом мелких обезьян Нового Света, а неудачи в выявлении этой инфекции в диких популяциях объясняются тем, что GBV-B вызывает острую инфекцию, а это значительно сужает временные рамки выявления инфекции, и вероятность обнаружения инфекции GBV-B у пойманной в естественной среде обитания обезьяны довольно мала. У тамаринов и мармозет, инфицированных in vivo, GBV-B вызывает острый гепатит, сопровождающийся в большинстве случаев не сильным повышением показателей активности аланинаминотрансферазы (АЛТ) и изоцитрат дегидрогеназы (ИЦД) на протяжении 10-12 недель, однако по данным R.Landford с соавт. (2003) и J.Bukh с соавт. (1999) инфекция не всегда сопровождается подъемом уровней активности ферментов. Виремия при инфекции GBV-B отмечается в среднем в течение 12-16 недель, после чего спонтанно исчезает. J.Bukh с соавт. в 1999г. удалось вызвать инфекцию GBV-B при внутрипеченочном введении тамарипам синтетической РНК, полученной в результате транскрипции in vitro с инфекционного клона кДНК GBV-B, это является доказательством того, что именно GBV-B, а не какой-то еще не выявленный вирус, присутствующий в сывороточном инокуляте, вызывает гепатит у инфицированных обезьян.

GBV-B вызывает особый интерес благодаря двум факторам: во-первых, этот вирус наиболее филогенетически близок к HCV и, во-вторых, способен инфицировать мармозет и тамаринов, животных, удобных для использования в медико-биологических экспериментах. Единственной животной моделью инфекции HCV являются шимпанзе, животные редкие и трудные в содержании, поэтому инфекция GBV-B у тамаринов и мармозет очень удобна как суррогатная модель HCV-иифекции. Общий план строения генома GBV-B сходен с HCV. Уровень гомологии полипротеинов GBV-B и HCV на аминокислотном уровне составляет 25-30% (по данным A.Muerhoff с соавт,, 1995), Протеаза NS3 GBV-B в правильных сайтах производит процессинг полипротеина HCV (E.

Scarcelli с соавт., 1997), а химерные белки NS3 HCV/GBV-B обладают энзиматической активностью (N.Butkiewicz с соавт,, 2000). Эти данные позволяют предполагать, что антивирусные препараты, разработанные против HCV, будут обладать активностью и против GBV-B.

B.Beames с соавт. (2000) и R.Landford с соавт. (2001) удалось получить на основе первичной культуры гепатоцитов тамаринов клеточные культуры, поддерживающие репликацию GBV-B. Авторы сообщают о способности такой клеточной культуры поддерживать высокие уровни вирусной РНК в клетке и секретировать вириоыы в течение 42 дней. Эта же группа ученых с помощью данной клеточной культуры гепатоцитов тамаринов, инфицированной GBV-B, тестировала влияние антивирусных препаратов на репликацию GBV-B. Было установлено, что человеческий интерферон обладал слабым антивирусным действием, тогда как поли (I-C) вызывал снижение виремии GBV-B на 3-4 порядка. Обработка инфицированных GBV-B гепатоцитов рибавирином приводила к снижению уровня вирусной РНК на 4 порядка. Полученные данные продемонстрировали удобство культуры гепатоцитов тамаринов, поддерживающей репликацию GBV-B, в качестве системы для испытания препаратов для терапии HCV. Помимо исследований in vitro, та же исследовательская группа изучала действие антивирусных препаратов in vivo, проводя курс терапии рибавирином для тамаринов с острой инфекцией GBV-B. Были получены результаты, аналогичные наблюдениям при монотерапии рибавирином при HCV-инфекции, - подавление заболевания печени без значительного снижения виремии.

Основным недостатком инфекции GBV-B у тамаринов и мармозет как суррогатной модели HCV-инфекции является отсутствие ее хронизации - в отличие от HCV вирус GBV-B вызывает у восприимчивых организмов только острый гепатит. Поэтому помимо тестирования антивирусных препаратов с помощью модели инфекции GBV-B приоритетным направлением исследований в этой области является получение хронической инфекции GBV-B. Так, R.Landford с соавт. (2003), применяя иммуносупрессию у тамаринов с прмощью препарата FK 506, добились персистирования инфекции GBV-B на протяжении 46 недель (против 12-16 недель в отсутствие иммуносупрессии), однако виремия прекратилась через 18 недель после терапии FK506. A.Martin с коллегами (2003), проведя впутрипеченочиое введение синтетической РНК GBV-B двум здоровым тамарипам (Saguinus oedipus), получили в одном случае персистирующую виремию GBV-B (10(3) - 10(7) эквивалентов генома/мл), на протяжении более 2-х лет, сопровождавшуюся кратковремеиым подъемом АЛТ после инфицирования и незадолго перед спонтанной элиминацией вируса. Биопсия печени, проведенная на позднем этапе инфекции, продемонстрировала гепатит с характерными гистологическими чертами хронического гепатита С -гепатоклеточными микровезикулярными изменениями, пери портальным моноядерным инфильтратом, цитоплазматическими жировыми включениями и изменениями ультраструктуры митохондрий. Инфицированные GBV-B гепатоциты содержали многочисленные везикулярные структуры, сходные со структурами, наблюдаемыми при экспрессии неструктурных белков HCV в клетке. Таким образом, описанный A.Martin с соавт. случай хронического гепатита GBV-B у тамарина гистологически напоминал хронический гепатиит С человека. Инфицирование других тамарипов вариантом вируса, вызвавшим хроническую инфекцию в описанном случае, привело к развитию классической острой самопрекращающейся инфекции GBV-B, что указывает на то, что развитие хронической инфекции GBV-B было скорее обусловлено факторами организма хозяина, а не особенностяим варианта вируса. Тем не менее описанный случай позволяет предполагать, что в ряде случаев GBV-B способен вызывать хронический гепатит у инфицированных обезьян, что значительно повышает ценность инфекции GBV-B как суррогатной модели HCV-инфекции.

К.ККюрегян, В.Ф. Полещук, НЛ.Замятина, О.В.Исаева, М.И. Михайлов, Институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН, Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им М.П. Чумакова РАМН, г. Москва.