Імуногістохімічні маркери р63 та а-БМД в діагностиці неінвазивного протокового рака молочної залози Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

ПАТ0М0РФ0Л0Г1Я

© Нколенко Д. 6.

УДК 618. 193-006. 6-07-091. 8

Н1коленко Д. €.

1МУН0Г1СТ0Х1М1ЧН1 МАРКЕРИ Р63 ТА a-SMA В Д1АГН0СТИЦ1 НЕ1НВАЗИВН0Г0 ПР0Т0К0В0Г0 РАКА М0Л0ЧН0Т ЗАЛ03И

Вищш державний навчальний заклад УкраТни «УкраГнська медична стоматолопчна академ1я» (м. Полтава)

Дана робота виконана в рамках Угоди про науко-во-практичне ствробггництво Mix Днтропетров-ською державною медичною академieю i Вищим державним навчальним закладом Укра1ни «Укра!н-ська медична стоматолопчна академiя», № державно! реестраци 0101U4001002.

Вступ. Рак молочно! залози (РМЗ) продовжуе залишатись у свiтi однieю з найбтьш частих пухлин у жiнок. В Укра!ы вiн складае за рк до 60 випадкiв на 100 тис. жЫочого населення, при цьому летальнють 2/3 хворих виникае на фон прогресування хвороби, незважаючи на л^вання [3,4,6]. Останне обумовле-но тим, що дiагностика РМЗ вщбуваеться частiше на 2- 3 стадiях розвитку, ускладнених наслiдками шва-зивного росту пухлини, появою вiдцалених метаста-зiв. Досконала патоморфологiчна дiагностика РМЗ суттево знизить ступiнь iнвалiдiзацií пащен^в при своечасному лiкуваннi.

Визначення морфолопчних змiн базально! мемб-рани канцеризовано! протоки молочно! залози, як передумови до радикального л^вання пацieнта iз злоякiсною неоплазieю, складае певнi труднощг Останне виникае через надто малу товщину базально! мембрани проток дано! залози, що складае близько 1 мкм [2, 10, 12] та обумовлюе нечтеють !! обриЫв при спостереженн у свiтловому мiкроскопi.

Сучасна медична наука при патоморфолопчних дослiдженнях пропонуе орieнтуватися на клггинний склад вистелки протоки МЗ. Для клггинного типува-ня останнього е iнформативним карiометричне до-слiдження [5]. Разом з цим виявлен iмуногiстохiмiч-нi маркери стiйко! верифiкацi! клггинних елементiв, якi не зникають в них навггь за умов неопластично! трансформаци [7, 11].

Мета досл1дження. За допомогою комплексного морфолопчного дослiдження з'ясувати кттин-ний склад вистелки протоки МЗ в нормi i порiвняти останнiй з елементами вистелки стшки канцеризовано! протоки залози з патоморфолопчно встанов-леною нешвазивною формою росту протокового раку молочно! залози.

0б'ект i методи дослщження. Вивчали серiйнi зрiзи гiстологiчних препаратiв товщиною 5-6 мкм, забарвлен гематоксилiном та еозином за загаль-ноприйнятою методикою, архiвного матерiалу Пол-тавського обласного патологоанатомiчного бюро -14 випадкiв захворювань на РМЗ iз верифiкованою псевдопаптярною формою дано! неоплазi! (жiнки вщ 30 до 70 рокiв), 8 випадюв аутопсiйного матерi-алу тканини нелактуючо! молочно! залози (жiнки вщ 20 до 40 рокiв).

До^дження проведено з дотриманням осно-вних бюетичних положень Kонвенцi! Ради 6в-ропи про права людини та бюмедицину (вiд 04.04.1997 р.), ГельсЫсько! декJlарацi! Всесвiтньо! медично! асоцiацi! про етичы принципи проведен-ня наукових медичних дослщжень за участю людини (1964-2008 рр.), а також наказу МОЗ Укра!ни № 690 вщ 23. 09. 2009 р.

lмуногiстохiмiчнi реакцi! виконанi на парафiнових зрiзах товщиною 4-5 мкм з використанням антитт згiдно протоколiв рекомендованих фiрмою - вироб-ником моноклональних антитт та додатковим фар-буванням гематоксилшом Майера в сертифiкованiй лабораторi! патологоанатомiчного бюро (м. Днiпро-петровськ). Використаы первиннi моноклональнi мишачi антитiла до маркеру базальних клггин протоку - р63 (клон 4А4, 1:100, Dako, Данiя) i до маркеру мiкрофiламентiв мiоепiтелiальних клiтин проток - a-sma (клон 1A4, 1:50, Dako, Даыя). Система вiзу-алiзацi! - EnVision (Dako, Данiя).

Маркер р63 - iндикатор малодиференцiйованих кгмтин, !х стовбурових варiантiв в ходi ембрiогенезу, та камбiальних клiтин ектодермального походжен-ня. Переважне мiсце його експреси- ядра клiтин. Маркер а-sma виявляе гладком'язовий актин в ци-топлазмi гладком'язових клiтин, в тому чист мiоепi-телi! молочно! залози [7, 11].

Вивчення забарвлених мiкропрепаратiв проведено за допомогою св^лового мiкроскопу фiрми «Olympus BX 41» з об'ективами х10, х20, х40, х100. Фотозйомка здiйснена цифровою фотокамерою

Вюник проблем бiологiV i медицини - 2014 - Вип. 4, Том 2 (114)

275

Pиc. 1. Eкcпpeciя a-sma eпiтeлieм мiжчacтoчкoвoï пpoтoки мoлoчнoï зaлoзи. 1ГХ peaкцiя, дoфapбyвaння гeмaтoкcилiнoм Maéepa. Зб. x 200:

1- бaзaльнopoзтaшoвaнi ^тини з виpaжeнoю цитoплaзмaтичнoю eкcпpecieю мapкepa.

Pиc. 2. Eкcпpeciя a-sma в cocoчкoвиx вeгeтaцiяx кaнцepiзoвaнoï пpoтoки мoлoчнoï зaлoзи. 1ГХ peaкцiя, дoфapбyвaння гeмaтoкcилiнoм Maéepa. Зб. Х1000:

1- клiтинa, щс eкcпpecye мapкep дс глaдкoм'язoвoгo aктинy;

2- вiдcyтня eкcпpeciя мapкepa в нeсплacтичниx вeгeтaцiяx;

3- пoзитивнa peaкцiя eндстeлiю cyдин дс мapкepa.

фipми «Olympus С З040-А DAP» дo мiкpocкoпy з ви-кopиcтaнням пpoгpaми « Oлимпyc ДП ^фт».

Kapioмeтpичнe дocлiджeння пpoвeдeнo згiднo peкoмeндaцiй Aвтaндилoвa Г. Г., (1990); Jacobi W., (19З5).

Peзyльтaти дocлiджeнь тa ïx oбгoвopeння.

Koмплeкcним пaтoмopфoлoгiчним мeтoдoм дocлi-джeний eпiтeлiaльний cклaд виcтeлки мiжчacтoчкo-вoгo вщдшу пpoтoки мoлoчнoï зaлoзи i пopiвняний з виявлeним paнiшe [9] ïï мaлiгнiзoвaним гicтoгe-нeтичним eквiвaлeнтoм - пceвдoпaпiляpним типoм пpoтoкoвoгo PMЗ. Bcтaнoвлeний гicтoгeнeтичний зв'язoк дaнoï фopми пужлини з вcтaвними клiтинa-ми пpoтoки, щo eкcпpecyють мapкepи pб3 i a-sma eпiтeлiaльнoю виcтeлкoю кaнцepизoвaнoï пpoтoки в пужлиш. Ocтaння тaкoж виявляе oзнaки чacткoвoгo дифepeнцiювaння клiтин нaявнicтю мiкpoвopcинoк нa aпiкaльнiй пoвepxнi.

Mopфoлoгiчнa цiлicнicть виcтeлки мiжчacтoчкo-вoï пpoтoки в нopмi дeтaлiзoвaнa кapioмeтpичним,

гicтoxiмiчним тa iммyнoгicтoxiмiчним мeтoдaми. Mo-дaльний ядepний «^ac клiтин мiжчacтoчкoвoï пpo-тoки з IgV 0,9 нaлeжaв eпiтeлiю з мiкpoвopcинкaми нa aпiкaльнiй пoвepxнi, щo мaв нeгaтивнy eкcпpeciю pб3. Ептелм пpoтoки з LgV ядpa 0,15 мae кyтacтy фopмy, poзтaшoвaний бeзпepepвним шapoм вздoвж бaзaльнoï мeмбpaни пpoтoки, eкcпpecye pб3, тa виявляе вмют глaдкoм'язoвoгo aктинy з a-sma фио. 1 ). Ocтaннiй, нa нaшy думку, вiднocитьcя дo мioeпiтeлiю, кoтpий зa дaними вiтчизнянoï лiтepaтypи [2] oпиca-ний лишe в aльвeoляpнiй чacтинi мoлoчнoï зaлoзи. Hacaмкiнeць, eпiтeлiй пpoтoки MЗ з LgV ядpa 0,55 мae пapaбaзaльнe poзтaшyвaння, eкcпpecye мapкep p63,виднeceний дo peзepвнoгo.

Пpи кoмплeкcнoмy дocлiджeннi пceвдoпaпiляp-нoï фopми pocтy внyтpiшньoпpoтoкoвoгo PMЗ ви-явлeнe пopyшeння pитмiчнoгo pocтy кл^ин y вигля-дi LgV ядep 0,55; 0,9; 1,05 тa 1,45, cпocтepiгaютьcя чиceльнi фiгypи пaтoлoгiчниx мiтoзiв. Heзнaчнa чacтинa клiтин eпiтeлiaльнoï виcтeлки aтипoвиx co-coчкiв кaнцepизoвaнoï пpoтoки збepiгae oзнaки ди-фepeнцiйoвaнoï фopми пoxiднoгo eпiтeлiю y виглядi мiкpoвopcинчacтиx cтpyктyp нa aпiкaльнiй пoвepxнi. 1<л^ини кyтacтoï фopми, щo eкcпpecyють мapкepи p63 тa a-sma мaють пepepивчacтe poзтaшyвaння нa вiдмiнy вiд aнaлoгa y нopмi (pиc. 2), щo, нa нaш пo-гляд, cтвopюe пepeдyмoви для пoдaльшoï iнвaзiйнoï фopми pocтy дaнoï нeoплaзiï. Paзoм з цим ^o^epi-гaютьcя aтипoвi пaпiляpнi вeгeтaцiï в cтiнцi кaнцepи-зoвaнoï пpoтoки, cпpямoвaнi дo ïï пpocвiтy.

Ha пopyшeння цiлicнocтi eпiтeлiaльнoгo rnapy виcтeлки пpoтoкiв пepeдмixypoвoï зaлoзи, як пe-peдyмoви iнвaзивнoгo pocтy ïï пужлини, вкaзye i Е. O. Лeвицький (2001).

Пpoпoнyeтьcя для визнaчeння цiлicнocтi бaзaль-нoï мeмбpaни кaнцepизoвaнoï пpoтoки MЗ, вдоут-нocтi iнвaзивнoгo pocтy внyтpiшньoпpoтoкoвoгo PMЗ кopиcтyвaтиcя cиpoвaткoю дo глaдкoм'язoвoгo a^ тину a-sma тa p63, кoнтypyючиx map глядкoм'язoвиx клiтин.

Taким чинoм, нa пiдcтaвi пpoвeдeнoгo cyчacнoгo кoмплeкcнoгo мopфoлoгiчнoгo дocлiджeння eпiтeлi-aльнoï виcтeлки cтiнки пpoтoки MЗ тa iï гicтoгeнeтич-нoгo нeoплacтичнoгo eквiвaлeнтy - пceвдoпaпiляpнiï фopми пpoтoкoвoгo PMЗ мoжнa зpoбити нacтyпнi виcнoвки:

1. Eпiтeлiaльнa виcтeлкa мiжчacтoчкoвиx пpo-тoкiв мoлoчнoï зaлoзи в нopмi cклaдaeтьcя з тpьox видiв eпiтeлiю: бaзaльнopoзтaшoвaнoгo мioeпiтeлiю, пapaбaзaльнopoзтaшoвaнoгo - peзepвнoгo eпiтe-лiю, тa кoнтaктyючoгo з пpocвiтoм пpoтoки - мiкpo-вopcинчacтoгo eпiтeлiю.

2. Iмyнoгicтoxiмiчнi мapкepи p63 тa a-sma дoзвo-ляють виключити нaявнicть iнвaзивнoгo po^y пpo-тoкoвoгo paкy MЗ y paзi yтвopeння бeзпepepвнoгo rnapy мapкoвaними клiтинaми.

Пepcпeктиви пoдaльшиx дocлiджeнь. Вивчи-ти oзнaки вiдcyтнocтi iнвaзивнoгo po^y пужлини пpи iншиx мopфoлoгiчниx вapiaнтax пpoтoкoвoгo paкa мoлoчнoï зaлoзи.

21б

Вюник пpoблeм бioлoгiï i мeдицини - 2014 - Вип. 4, Тэм 2 (114)

Л1тература

1. Автандилов Г. Г. Медицинская морфометрия: Руководство / Автандилов Г. Г. - М. : Медицина, 1990. - С. 240-260.

2. Афанасьев Ю. И. Гистология, цитология и эмбриология: Учебник / Афанасьев Ю. И., Юрина Н. А., Котовский Е. Ф. -М. : Медицина, 1999. - С. 138 - 155.

3. Билынский Б. Т. Рак молочной железы как общемедицинская проблема / Б. Т. Билынский // Международный медицинский журнал. - 2002. - № 4. - С. 11-117.

4. Волченко Н. Н. Внутрипротоковий рак молочноУ залози / Н. Н. Волченко // Архив патологии. - 2000. - № 2. - Т. 62. -С.22 - 26.

5. Голубев О. А. Морфометрические и иммуногистохимические маркери прогрессии рака молочной железы / О. А. Голубев, С. Ю. Абросимов, О. А. Шистерова // Архив патологии. - 2001. - № 4. - Т. 63. - С. 57 - 60.

6. Захарцева Л. М., Чешук В. Е., Майструк Г. П. Рак молочной железы: как обеспечить в Украине надлежащее качество диагностики и лечения? / Л. М. Захарцева, В. Е. Чешук, Г. П. Майструк // Здоров'я УкраУни. - 2007. - № 6 (163). -С. 56-57.

7. Заридзе Д. Г. Канцерогенез / Подред. Д. Г. Заридзе. - М. : Медицина, 2004 - 576с.

8. Левицьюй Е. О. Сучасш алгоритми д1агностики пухлин передм1хуровоУ залози. Монограф1я. - Житом1р: «Полюся», 2007. - С. 50 - 64.

9. Нколенко Д. 6. Особливост сосочкового типу внутршньопротокового раку молочноУ залози в аспект! онтогенезу / Д. 6. Нколенко // Актуальш проблеми сучасноУ медицини. Полтава, 2009. - Т. 9. - вип. 2 (26). - С. 168-172.

10. Barbara Young, James S. Lowe, Alan Stevens, John W. Heath. Wheather's Functional Histology. A Text and Color Atlas. Fifth adition. Churchill Livingstone. Elsevier. 2006. - P. 70.

11. Jacobi W. Uber das rythmisches Waschtum der Cellen durch Verduppelung ihres volumens / W. Jacobi // Arch. Entwicklunsmech. - 1935. - Bd. 10. - S. 124 -126.

12. Luiz Carlos Junqueira, Jose Carneiro. Basic histology. Tenth Edition. The McGrow-Hill Companies. 2003. - P. 69-70.

YflK 618. 193-006. 6-07-091. 8

IMyHOriCTOXIMIHHI MAPKEPM p63 TAa-SMA BflIArHOCTMUI HEIHBA3MBHOI nPOTOKOBOl' KAPUI-HOMM MO^OHHOf 3A^O3M

HiKo.eHKo fl. S.

Pe3№Me. MeTa flaHoro flocjiiflxeHHA - nowyK Mop^o/ioriHHMX KpMTepii'B BMKnioHeHHfl iHBa3MBHoro pocTy npo-tokoboto paKy mojiohho'i 3a/o3M. BcTaHoB/eHo, i^o MapKepoM urnicHocTi cTiHKM KaHuepM3oBaHo'l npoToKM mojiohho'i 3ajo3M Moxe c/yryBaTM 6a3ajibHopo3Tai±ioBaHMM eniTe/iM, eKcnpecyiHMM MapKepM a-sma Ta p63 y pa3i Moro 6e3nepepBHoro po3Tai±iyBaHHH. 0ap KjiTMH, ^o BMcTej^iTb MixHacToHKoBy npoToKy 3ajo3M cKjaflaeTbca 3 MiKpoBopcMHHacToro, pe3epBHoro Ta MioeniTejiro.

K^№H0Bi c.noBa: MojoHHa 3ajo3a, HeiHBa3MBHMM npoToKoBMM paK, iMyHHi MapKepM.

yflK 618. 193-006. 6-07-091. 8

MMMyHOrMCTOXMMMHECKME MAPKEPH p63 M a-SMA B flMArHOCTMKE HEMHBA3MBHOM OOPMH nPOTOKOBOrO PAKA MO^OHHOM XE^E3H

HMKo.eHKo fl. E.

Pe3№Me. Ue/ib flaHHoro MccjefloBaHM^ - noMcK Mop^o/iorMHecKMX KpMTepMeB McKJiHeHM^ MHBa3MBHoro pocTa BHyTpMnpoToKoBoro paKa mojohhom xe/e3H. YcTaHoB/eHo, hto MapKepoM ue/ocTHocTM cTeHKM KaHuepM-3MpoBaHoro npoToKa mojohhom xe/e3H MoxeT c/yxMTb 6a3a/bHopacno/oxeHHM enMTe/MM, KoTopuM eKcnpec-cMpyeT MMMyHorMcToxMMMHecKMe MapKepu a-sma m p63 npM yc/oBMM ero 6ecnpepuBHoro pacnozoxeHMR C/oM K/eToK, BucTe/aro^MM Mexflo/bKoBMM npoToK mojohhom xe/e3u, coctomt M3 MMKpoBopcMHHaToro, pe3epBHoro m MMoanMTe/M^.

K.nneBue c.oBa: Mo/oHHaa xe/e3a, HeMHBa3MBHuM npoToKoBuM paK, MMMyHHue MapKepu.

UDC 618. 193-006. 6-07-091. 8

Immunohistochemical Markers p63 and a-sma in Diagnostics of Non-Invasive Ductal Carcinoma of Mammary Gland

Nikolenko D.

Abstract. Objective. To search and compare peculiarities of duct lining cellular composition of both healthy mammary gland duct and pathomorphologycal diagnosed non-invasive ductal carcinoma.

Results. There is high level of morbidity associated with mammary gland cancer among women in the world. In addition, in Ukraine there is a tendency to the elevation of death rate among women (up to 60 the occurrence of cancer per 100 thousandths of female population) caused by the neaplasia which, in its turn, is connected with late diagnostics and compications of the tumor invasive grow.

Investigation of mammary duct cell composition in case of both norma and tumor of mammary gland is realized on the histologic specimen from the Poltava regional pathology anatomy department archives. All the material was examined by means of histochemical (hematoxylin-eosin-stained sections) and immunohistochemical (immunohistochemical staining with p63 and a-sma) methods, histological samples were prepared from certain

BicHMK проблем бюлопУ i медицини - 2014 - Вип. 4, Том 2 (114)

277

preparations. Photographies of histological slides were taken with digital camera and microscope «Olympus» company.

The following variants of the normal mammary gland duct epithelium were found in the women of 20 - 40 yeas old: myoepithelium, reserve and microvillous epithelium. Mathematical investigation has showed rhythmical cells growth in form of cell nucleus LgV 0,55; 0,75; 0,9. Myoepithelium is characterized with continuous basal disposition as well as p63 and a-sma expression. Reserve epithelium is located in parabasal region of the mammary gland duct and expresses p63. Microvillous epithelium doesn't express p63 and a-sma, it characterizes with microvillous structures on it apical surface.

Integrated study of pseudopapillary intraductal carcinoma has revealed disturbance in intermittent cells growth in form of cell nucleus LgV 0,55; 0,9; 1,05; 1,45. For the tumor version among the variants of malignant duct epithelium cells expresses features of derivative epithelium are found. Thouse are microvillous cells and myoepithelium shows p63 and a-sma expression. Last ones noncontinuous located in contrast to their normal analog. On our opinion, these factors play important role in following tumor invasive growth.

Conclusions. Thus, moderm complex morphological investigation of both epithelial lining of mammary gland duct and its hystogenetic neoplastic equivalent - pseudopapillary form of ductal mammary gland carcinoma permits us to do following conclusions:

Epithelial layer of interlobular mammary gland ductules consists of three kinds of cells. Those are microvillous cells, reserve epithelium and basal situated myoepithelium.

It is possible to use immunohistochemical markers p63 and a-sma in presses of mammary gland cancer invasive growth exclusion provided that marked cells compose uninterrupted epithelial layer.

Prospects for further research. To explore absence invasive tumor growing characters in other morphological alternate version of ductal mammary gland carcinoma.

Keywords: mammary gland, non-invasive ductal carcinoma, immune markers.

Рецензент - проф. Гасюк А. П.

Стаття надшшла 19. 08. 2014 р.

278

В1сник проблем бюлош i медицини - 2014 - Вип. 4, Том 2 (114)