Иммуногистохимическая верификация системы Kiss 1/kiss 1R в органах плода человека Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Международная конференция «Репродуктивная медицина: взгляд молодых — 2016» International conference "Reproductive medicine: young scientists' overlook — 2016"

холинэстеразы, глутаматдегидрогеназы (ГлДГ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), концентрацию общего белка, мочевины, триглицеридов, холестерина, активность щелочной фосфатазы (ЩФ). На протяжении эксперимента животных обеих групп ежедневно осматривали, определяли массу тела для расчета дозы вводимого препарата и сравнительной оценки относительной массы печени. Эвтаназию всех животных осуществляли на 19-й день беременности. Далее готовили гистологические срезы толщиной 8-10 мкм. Препараты исследовали при помощи микроскопа (ув. ><400).

Результаты исследования

За время эксперимента случаев гибели животных зафиксировано не было. Однако на фоне препарата в подопытной группе отмечались вялость и апатия животных. При биохимических исследованиях сыворотки крови определяли 12 основных показателей. Наиболее значительные изменения были отмечены для показателей липидного обмена — триглицеридов и холестерина, уровень которых вырос в 80 и 15 раз соответственно (р < 0,002 и 0,02; здесь и далее, если не указано иначе, критерий Манна-Уитни с поправками на множественные сравнения и на непрерывность). Также значительно увеличилась активность ЛДГ — в 5,4 раза (р < 0,002), концентрация желчных кислот и активность ГлДГ — в 3 раза (р < 0,001 и 0,05), АСТ — в 2 раза (р < 0,001), АЛТ — в 1,3 раза (р < 0,01). При этом наблюдалось снижение в сыворотке крови экспериментальных животных концентрации холинэстеразы и уровня общего белка (в 1,5 раза) (р < 0,001 и 0,002). Вместе с тем активность ЩФ, уровни билирубина и мочевины оставались без значимых изменений (р > 0,05).

При макроскопическом исследовании печень подопытных крыс была бледная, рыхлая, с оливковым оттенком и наличием вкраплений. При этом масса органа соответствовала результатам в контрольной группе (медианы в контрольной и подопытной группах составили 4,32 и 4,30 г на 100 г массы животного соответственно р = 1,00).

Гистологическое исследование образцов печени экспериментальной группы показало, что балочное строение сохранено лишь в половине исследуемых случаев — 50 % Дистрофические изменения гепатоцитов выявлены во всех исследуемых образцах. Паренхиматозная жировая дистрофия печени присутствовала в 44 % случаев. Выявлялись ожирение с некробиозом гепатоцитов и ожирение с мезенхимально-клеточной реакцией без перестройки дольковых структур печени. В 100 % случаев (у всех 16 животных) присутствовала жировая дистрофия (вероятность формирования жировой дистрофии выше 0,75 с р = 0,01, посчитано точным биномиальным критерием). При этом превалировала мелкокапельная и крупнокапельная жировая дистрофия, определяющаяся в 75 и 25 % случаев соответственно.

Выводы

По совокупности результатов биохимических и гистологических исследований можно сделать вывод о том, что 4-дневное внутрибрюшинное введение беременным крысам (15-18-й день беременности) препарата тритон WR-1339 в дозе 300 мг/кг приводит к токсическому поражению печени по типу ОЖГ. Данная модель печеночной патологии может быть использована для проведения скрининга как вновь синтезированных, так и применяющихся в клинике фармакологических средств, обладающих гепатотропной активностью.

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКАЯ ВЕРИФИКАЦИЯ СИСТЕМЫ KISS 1/KISS 1R В ОРГАНАХ ПЛОДА ЧЕЛОВЕКА © В.Р. Родичкина 1, студ., А.О. Дробинцева 2, с. н. с.

1 Санкт-Петербургский государственный университет, г. Санкт-Петербург, Россия;

2 ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», г Санкт-Петербург, Россия

Актуальность проблемы

По результатам многочисленных исследований последнего десятилетия известно, что кис-спептины (КП) и их рецепторы (KISS1R) играют ключевую роль во многих физиологических процессах организма, таких как половое созревание, нормальное функционирование репродуктивной системы, секреция инсулина и пищевой статус, вазоконстрикция. Экспрессия кисспептинов и их рецепторов была выявлена в различных тканях организма, причем не только в центральных орга-

нах (гипофиз, гипоталамус), в которых изначально была определена их функция, но и в органах репродуктивной системы, поджелудочной железе, пищеводе, почках и др. До сих пор идет определение роли и значимости кисспептинов в периферических тканях и органах. Функциональная значимость и локализация системы KISS1/KISS1R при внутриутробном развитии до сих пор не изучена.

Цель исследования: выявление системы KISS1/KISS1R в органах плода человека на разных сроках развития (23-42 недели).

■ ЖУРИАЛЪ АКПИЕРСШ " ЖЕНСШХЪ БОЛМНЕЙ

ТОМ LXVСПЕЦВЫПУСК 2016

ISSN 1684-0461

ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

85

материалы и методы исследования

Объектом для исследования послужили образцы тканей и органов плодов (гипофиз, тимус, надпочечники, поджелудочная железа, аорта), полученные из архива отделения патоморфологии ФГБНУ «НИИ АГиР им. Д О. Отта». Материал (n=9) был разделен на группы по срокам гестации: 23-27 недель (конец второго триместра), 28- 42 недели (третий триместр). Для иммуногистохими-ческого исследования использовали первичные моноклональные антитела к KISS1 (1 : 140, Abcam, Великобритания) и к KISS1R (1 : 350, Abcam). В качестве вторичных антител брали универсальный набор, содержащий биотинилированные кроличьи антимышиные иммуноглобулины, конъюгирован-ные с биотинилированной пероксидазой хрена (EnVision Detection System, Peroxidase/DAB, Rabbit, Mouse, Dako, Дания). В качестве негативного контроля производилась ИГХ реакция без использования первичных антител. Визуализация реакции осуществлялась проявлением пероксидазы хрена диаминобензидином (Novocastra, Leica Biosistem, Германия). Проводилось морфометрическое исследование с использованием системы компьютерного анализа микроскопических изображений, состоящей из микроскопа Olympus BX46 (Olympus, Япония) и программного обеспечения Vidеotest Morphology 5.2 (Россия). Исследования проведены с использованием оборудования ресурсного центра Научного парка СПБГУ «Развитие молекулярных и клеточных технологий».

Результаты исследования

Показано, что наибольший уровень экспрессии KISS1/KISS1R наблюдается в клетках аде-ногипофиза и материале коры надпочечников во всех группах. Также наблюдается значительный уровень экспрессии в ацинарных клетках поджелудочной железы, корковом веществе тимуса и эндотелиальной выстилке аорты, однако, статистически достоверных различий между группами не выявлено. Корреляция между геста-ционным возрастом и уровнем экспрессии кис-спептинов характерна лишь для материала тимуса (г=0,54, р < 0,05) и надпочечников г=0,48, р < 0,05).

выводы

Полученные данные свидетельствуют о том, что закладка системы KISS1/KISS1R, возможно, происходит во время первого триместра внутриутробного развития, когда наблюдается формирование основных органов и систем. Также отмечено усиление экспрессии кисспептинов в тимусе и коре надпочечников по мере увеличения геста-ционного возраста. Это может быть следствием того, что на 7-м месяце внутриутробного развития на надпочечники оказывается специфическое действие адренокортикотропного гормона, и начинают функционировать все звенья гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы, в регуляции которой, как известно, принимают участие и кисспептины.

оценка параметров развития и реактивных свойств тканевых элементов плаценты при введении в организм наночастиц меди

© A.A. Слободсков, асп., д.А. Боков, н. с.

Оренбургский государственный университет, г. Оренбург, Россия; Оренбургский государственный медицинский университет, г Оренбург, Россия

Актуальность проблемы

Реализация инвазивно-трофического и регуля-торного потенциала трофобласта в связи с диффе-ренцировкой хориональных структур развивающейся плаценты обусловлена высокими уровнями ферментативной и цитокиновой активности сим-пластотрофобласта. Становление всего комплекса свойств селективного трансбарьерного обмена, а также взаимоотношений тканевых элементов, принадлежащих разным организмам (матери и плода), контролируется рядом цито- и гистогенетиче-ских факторов (развитие щеточной каймы, состав и целостность гликокаликса, экспрессия рецептор-ного аппарата, тканевая детерминация трофобласта и др.), а также достижением необходимых метаболических условий и синтезом группы регуляторов (ПЩФ, Р-ХГЧ, простациклины и др.). Медь, как эс-

сенциальный элемент, в организме проявляет сродство к некоторым неметаллам (например, к сере) — компонентам органических молекул. Кроме того, медь входит в состав координационных соединений, в которых является комплексообразователем, а лигандами являются аминокислоты. Возможная биохимическая активность меди при увеличении ее концентрации в организме, очевидно, будет иметь патогномоничное значение. Получение нанострук-турированного порошка меди, как вещества с новыми физическими и химическими свойствами, актуализирует изучение его биотехнологических свойств. Влияние наночастиц меди (НМ) на плаценту на сегодняшний день не исследовано, в том числе в аспекте обозначенных выше проблем регуляции морфогенеза плаценты, ее метаболической и барьерной активности.

ЖУРНАЛ! АКУШЕРСТВА - ЖЕНСКИХЪ БОЛМНЕЙ

ТОМ LXVСПЕЦВЫПУСК 2016

ISSN 1684-0461 ■