CC BY
10образцах сывороток из низкотитражных панелей и панелей сывороток со смешанными титрами INNO-LIA HCV Ab III Update показал лучший уровень реактивности по сравнению с RIBA HCV 3.0 и подтверждающим тестом Recomblot. Специфичность подтверждающего теста оценена экспериментально при тестировании 588 сывороток от серонегативных доноров и составила 100% (или 96,4%. Включая неопределенные результаты).
Выводы. Применение в конструкции сочетания смеси синтетических пептидов и рекомбинантных белков из основных иммунодоминантных эпигонов HCV позволило создать подтверждающий тест INNO-LIA HCV Ab III Update на антитела к HCV с превосходной специфичностью и чувствительностью для определения статуса инфицирования вирусом гепатита С, что является основополагающим условием для раннего выявления антител к РСМ в процессе сероконверсии.
ИММУНОФЕРМЕНТНОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКА НУКЛЕОКАПСИДА (CORE)
ВГС в СЫВОРОТКАХ БОЛЬНЫХ ХГС О.В.Масалова, Т.В.Вишневская, Т.В.Шкурко, Е.И.Келли, А.А.Кущ
НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН, Инфекционная клиническая больница
№1, г. Москва
Цель работы состояла в сопоставлении результатов определения core-белка в сыворотках больных ХГС с клиническими, биохимическими, гистологическими и вирусологическими данными пациентов.
Материалы и методы. Соге-белок ВГС в сыворотках 98 пациентов с ХГС определяли с помощью оригинального разработанного нами количественного сэндвич-варианта ИФА с применением моноклональных антител (МКА). Метод позволяет дифференцировать циркулирующие в крови вирионы и иммунные комплексы (ИК). Наличие РНК ВГС в сыворотках и ткани печени определяли методом RT-PCR. Белки ВГС (core, NS3, NS4, NS5) в печени выявляли на криостатных срезах биопсий методом иммунопероксидазного окрашивания с помощью МКА. Антитела к различным белкам ВГС в сыворотках определяли в подтверждающей тест-системе «ИФА-анти-НСУ-спектр» (НПО «Диагностические системы», Н. Новгород).
Результаты. Соге-белок ВГС был обнаружен в сыворотках 80 пациентов (82%), из них у 36% больных core циркулировал преимущественно в виде свободных вирионов, у 48% - исключительно в составе ИК, у 16% больных обнаружена социркуляция вирионов и ИК. Минимальная концентрация core в сыворотках составляла 20 пг/мл, максимальная -более 2 нг/мл (в среднем 391±95 пг/мл). Определение core коррелировало с результатами выявления РНК ВГС в сыворотках (г=0,5, р<0,0001). Core-позитивные пациенты (соге»+») отличались от core-негативных (core»-») большей тяжестью хронического гепатита: 1) повышенный уровень фермента АЛТ имели 85% пациентов соге»+» и только 61% - соге»-» (р=0,03); 2) воспалительно-некротические процессы в ткани печени были более выражены в группе соге»+» (р<0,05); 3) пациенты с тяжелым фиброзом и циррозом печени встречались только среди больных соге»+» (р<0,05), при этом 12 из 15 таких пациентов обнаружены в группе с циркулирующими ИК; 4) большинство пациентов соге»+» (63%) имели антитела к белку NS5 ВГС, тогда как аналогичный показатель у больных core»-» составлял 39% (р<0,05). Ранее мы показали, что антитела к NS5 ассоциируются с более тяжелым течением ХГС; 5) соге»+» пациенты чаще содержали ВГС (вирусные белки или РНК) в ткани печени - 86% и 56% пациентов соответственно (р=0,007).
Полученные данные показали, что разработанный ИФА-метод количественной детекции core-белка является эффективным инструментом для оценки вирусной нагрузки
в сыворотках больных ХГС. Установлено, что наличие шге-белка в сыворотках прямо коррелирует с активностью и стадией заболевания.
МЕЖДУНАРОДНЫЕ СТАНДАРТЫ для ВНЕШНЕГО КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА и ОЦЕНКИ РАБОТЫ НАБОРОВ по ДИАГНОСТИКЕ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ
Нико Лили VQC International Sanquin Diagnostic Services
В начале 1990х центральная референс-лаборатория Нидерландов (CLB) совместно с европейской группой по гепатитам разработала стандарты для генодиагностики вирусных гепатитов. В 1992 г, CLB и диагностическая лаборатория в г.Дельфт (Нидерланды) инициировали первые квалификационные испытания по генодиагностике вирусных инфекций совместно с европейской группой по гепатитам и европейским обществом клинической вирусологии. Начиная с 1997 г., эта работа продолжается в рамках квалификационной программы контроля качества препаратов по диагностике вирусных инфекций (VQC).
CLB, известная также как Sanquin, является международной лабораторией биологических стандартов и оказывает поддержку ВОЗ в разработке международных стандартов по серологической диагностике (HBsAg, anti-HBs PI др.) и генодиагностике (HBV-ДНК, HCV-PHK, HIV-PHK и др.) вирусных инфекций. При содействии ВОЗ стандарты VQC для ряда инфекций были откалиброваны в международных единицах. Продолжающиеся квалификационные испытания включают в себя панели разведенных стандартов, представляющих собой инструменты контроля качества диагностических наборов. Лаборатории многих стран используют стандарты PeliSpy для внешнего контроля аналитической чувствительности тестов. Производители диагностических наборов используют референс-папели PeliCheck для контроля качества индивидуальных серий наборов. Благодаря сотрудничеству с национальной серологической референс-лабораторией в Австралии (NRL) и медицинским центром Авиценна в России реагенты VQC и квалификационные программы испытаний диагностических препаратов распространяются в различные регионы мира.
VQC сотрудничает с сертификационным агентством TNO, организацией, присваивающей диагностическим наборам марку европейского стандарта качества. С этой целью набор ИФА для определения антител к вирусу гепатита С производства медицинского центра Авиценна был проверен на его соответствие требованиям, предъявляемым европейским сообществом к диагностическим препаратам. Характеристики оценки работы различных диагностических тестов на вирусные гепатиты5 полученные как в результате клинических испытаний, так и в квалификационных лабораторных испытаниях, публикуются в виде отчетов на сайте VQC (www.vqc.nl).
Мы надеемся, что лаборатории России и стран СНГ примут участие в международных квалификационных программах по серологической и генетической диагностике вирусных инфекций, и что производители диагностических тестов будут стремиться привести их качество в соответствие с европейскими стандартами.
