CC BY
11
такое снижение уровня 5-НТ7 рецепторов, вероятно, связано с возрастом, а не с тау-патологией. Кроме того, было выявлено возраст-зависимое повышение уровней Tau и pTau во фронтальной коре и гиппокампе крыс OXYS, по-видимому, связанное с тау-патологией у исследованных животных.
Содержание животных было поддержано фундаментальным исследовательским проектом #FWNR-2022-0023. Исследование было поддержано Российским научным фондом, грант № 22-15-00011.
Литература:
1. 2020 Alzheimer's desease facts and figures. Alzheimer's & dementia: the journal of the Alzheimer's Association 2020.
2. Labus J, Rohrs K, Ackmann J et al. Progress in neurobiology 2020, 101900.
анализ состава гидрогеля
из внеклеточного матрикса пуповины
человека
М.В. Руснак1, Л.И. Калюжная1' 2, А.А. Кондратенко2, Д.В. Товпеко2
1 Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И.П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия
2 Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург, Россия
e-mail: maksimrusnak055@gmail.com
Ключевые слова: гидрогель, внеклеточный матрикс, пуповина человека, регенеративная медицина, тканевая инженерия.
Гидрогели на основе внеклеточного матрикса показали высокую эффективность в клинических испытаниях in vivo, способствуя восстановлению функциональных тканей [1]. Пуповина человека является одним из наиболее перспективных биоматериалов, имея ряд преимуществ, таких как большое количество факторов роста, преобладание противовоспалительных цитокинов, высокое содержание гликозаминогликанов [2].
Исследуемый гидрогель был изготовлен и запатентован в научно-исследовательском центре Военно-медицинской академии [3]. Из нативной пуповины человека удаляли сосуды, далее полученный образец гомогенизировали и децеллюляризировали с помощью 0,2 Н раствора NaOH. Бесклеточный матрикс солюбили-зировали в растворе солянокислого пепсина (1 мг/мл), нейтрализовали, добавляли раствор 10xPBS и лиофили-зировали для длительного сохранения.
Анализ состава готового продукта проводили методами гистологического окрашивания, электронной микроскопии и инфракрасной спектроскопии с преобразованием Фурье (ИКФС).
Гидрогель заливали в парафин, изготавливали срезы и окрашивали препарат альциановым синим, pH 2,5 (Биовитрум, Россия) по инструкции производителя, оценивали результаты в проходящем свете. Согласно данным световой микроскопии, готовый продукт сохраняет гликозаминогликаны, высокое содержание которых является специфической особенностью пуповины человека.
Наличие фрагментов коллагена, возникающих врезультате обработки пепсином при изготовлении гидрогеля, показала трансмиссионная электронная микроскопия.
Сравнение спектров поглощения инфракрасного излучения нативной пуповины и гидрогеля показало схожесть их профилей (коэффициент корреляции Пирсона = 0,99).
Изготовленный тканеинженерный продукт сохраняет компонентное преимущество фетальной ткани пуповины человека (коллагены и гликозаминогликаны) что подтверждается проведенными в этой работе исследованиями. Гидрогель из внеклеточного матрикса пуповины человека является многообещающим продуктом, способным решить многие вопросы регенеративной медицины, включая заживление глубоких повреждений кожи и суставного хряща.
Литература:
1. Dubus M. et al. Front. Bioeng. Biotechnol. 2022. V. 10. 828424.
2. Dan P. et al. Acta Biomaterialia J. 2017. V. 48. P. 227-237.
3. Патент на изобретение № 2745995. Приоритет изобретения 16 сентября 2020 г.
иммунофенотип nk-клеток при длительном культивировании мононуклеарных клеток
В.А. Рыбачук1' 2, Н.В. Михайловский1,
Л.И. Попова1, А.П. Петрикина1, Е.В. Абакушина1
1 ООО «Текон Медицинские приборы», Москва, Россия
2 МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия e-mail: rybachuk2016@list.ru
Ключевые слова: адоптивная иммунотерапия, экспансия NK-клеток.
Современные подходы лечения онкологических больных, включают в себя метод адоптивной иммунотерапии, основанный на трансплантации больному аутологичных или аллогенных активированных клеточных препаратов на основе T- или NK-клеток [1]. Для эффективной активации и экспансии NK-клеток необходимо подобрать условия для их культивирования, которые могут включать в себя ко-стимулирующие факторы (цитокины, антитела) и/или фидерные клетки, а также длительность культивирования [1, 2].
Целью данного исследования явилась оценка проли-феративной активности и иммунофенотипа NK-клеток здоровых доноров в процессе длительной экспансии.
Мононуклеарные клетки выделяли из периферической крови 4 условно здоровых доноров по стандартной методике и кокультивировали с фидерными клетками линии K-562 в течение 20 дней в полной питательной среде RPMI-1640 с добавлением ИЛ-2 (рон-колейкин, «БИОТЕХ», Россия) во флаконах, в условиях СО2-инкубатора при температуре 37оС. Подсчет клеток и жизнеспособность осуществляли на автоматическом анализаторе TC10 (BioRad, Сингапур) каждые 10 дней. Индекс пролиферации (ИП) определяли как отношение общего числа клеток на 20 день к количеству клеток до начала культивирования. Цитофлуориметрический анализ проводили на 0, 10 и 20 дни экспансии на проточном цитометре с визуализацией Image Stream MkII («Luminex», США). Применяли 6-цветную панель меченых антител к СD45/3/56/16 и маркерам активации CD38/HLA-DR («BD Biosciences», США). Статистический анализ осуществляли с помощью «MS Excel 2016».
Средний ИП NK-клеток на 20 день культивирования составил — 107. В процессе экспансии происходила
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
перегруппировка основных популяций NK- и T-клеток. На 20 день культивирования среднее содержание NK-клеток увеличилось в 5 раз до 69,7% (p<0,05), а Т-клеток снизилось в 2,6 раз до 26,8%. При этом более 75% NK-клеток имели фенотип CD56+CD16+, также наблюдалось увеличение экспрессии маркеров активации CD38+ и HLA-DR+ до 92,3% и 96,9% соответственно, что подтверждает процесс активации in vitro.
Таким образом, длительное культивирование монону-клеарных клеток в присутствии цитокина и фидерных клеток позволяет многократно увеличить количество и долю активированных NK-клеток. Данную технологию можно использовать для производства клеточного продукта.
Литература:
1. Laskowski, T.J., Biederstädt, A. & Rezvani, K. Nat. Rev. Cancer. 2022. P. 1-19
2. Abakushina E.V., Popova L., Zamyatin A., et al. Vaccines. 2021. V. 9. № 11. P. 1363.
использование перинатальных стволовых клеток в комплексном лечении врожденного буллезного эпидермолиза
И.И. Рюмина1, Д.Н. Силачев1, Н.М. Марычева1 3, Д.Ю. Трофимов1, Ю.Ю. Коталевская2 3, В.В. Зубков1, Г.Т. Сухих1
1 ФГБУ НМИЦ акушерства, гинекологии
и перинатологии им. В.И. Кулакова МЗ РФ, Москва, Россия
2 ГБУЗ МО МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского, Москва, Россия
3 Благотворительный фонд помощи детям, страдающим заболеванием буллезный эпидермолиз «БЭЛА. Дети-бабочки», Москва, Россия
e-mail: ¡_ryumina@oparina4.ru
Ключевые слова: новорожденные, врожденный буллезный эпидермолиз, мультипотентные мезенхимальные стволовые клетки.
Буллезный эпидермолиз (БЭ) — клинически и генетически гетерогенное наследственное нарушение структуры кожи, которое связано с разрушением дермо-эпидермаль-ного соединения или базального слоя эпидермиса, что приводит к повышенной уязвимости кожи к механическому воздействию [1]. Клинически БЭ проявляется появлением пузырей (булл), которые вскрываются, оставляя болезненные, длительно незаживающие эрозии и рубцы. В настоящее время ведутся исследования по лечению БЭ по нескольким направлениям: генная, протеиновая (белковая) и клеточная терапия мезенхимальными стволовыми клетками (ММСК), полученными из костного мозга. ММСК способны дифференцироваться в эпителиальные клетки, и могут способствовать заживлению повреждений кожного покрова [2]. 19 новорожденным с дистрофической рецессивной формой БЭ проводили лечение ММСК, которые получали из ткани плаценты. Образцы ткани инкубировали с 0,5% раствором коллагеназы I типа, в течение 3-4 ч при 37°С. Полученную суспензию осаждали центрифугированием (3000 об/мин) в течение 3 мин, а образовавшийся осадок, содержащий клетки, ресуспендировали в полной питательной среде, высаживали на полистирольные матрасы и инкубировали в течение 2-3 суток. По достижении 70-80% конфлюэнтности клетки подвергали трипсино-лизу с целью пересадки на новые культуральные матрасы
(Corning T-15G, США) для дальнейшего наращивания клеточной массы. Для трансплантации пациенту использовались клетки, культивируемые до третьего пассажа. Перед трансплантацией проводили процедуру фенотипирования на стандартные маркеры CD9G, CD73, CD1G5, CD45, CD14, CD2G, а также оценивали жизнеспособность клеток, проводя окраску аликвоты клеток (1G мкл) трипано-вым синим и проводя анализ с помощью счетчика клеток. Трансплантацию ММСК проводили системным способом (внутривенно) в 1G мл физиологического раствора в течение 1G минут, доза клеток составляла 3 ■ 1G6 клеток/ кг веса пациента. Предварительные данные свидетельствуют о терапевтической активности трансплантированных ММСК. У всех пациентов улучшилось общее состояние, сократилась длительность эпителизации эрозий, уменьшалось количество вновь появившихся пузырей, уменьшились беспокойство и болезненность при проведении регулярных перевязок. Необходимы дальнейшие исследования, для изучения потенциальных эффектов трансплантации ММСК на регенеративные процессы в коже при БЭ.
Литература:
1. Lucky A.W., Whalen J., Rowe S., Marathe K.S., Gorell E. Neoreviews (2G21) 22 (7): e438-e451.
2. El-Darouti M, Fawzy M, Amin I, Abdel Hay R, Hegazy R, Gabr H, El Maadawi Z. Dermatol Ther. 2G16 Mar-Apr;29(2):96-1GG. doi: 1G.1111/dth.123G5.
использование стромально-васкулярной фракции жировой ткани для лечения пациентов с термическими ожогами
М.Г. Рябков, М.Н. Егорихина, И.Ю. Арефьев, И.Н. Чарыкова, Н.А. Колошеин, А.Е. Богданова, А.О. Московченко, Н.Г. Засецкая
ФГБОУ ВО Приволжский исследовательский медицинский университет Минздрава РФ, Нижний Новгород, Россия
e-mail: maxim-ryabkov@yandex.ru
Ключевые слова: жировая ткань, стромально-васкулярная фракция, мезенхимальные стволовые клетки, биомедицинская технология, ожоги, донорские раны, аутодеомопластика.
Целесообразность применения продуктов из жировой ткани, содержащих мезенхимальные стволовые клетки, для лечения ран патогенетически обоснована [1, 2]. Важный фактор, сдерживающий широкое использование продуктов из аутологичной жировой ткани в практике комбустиологии — дефицит безопасных биомедицинских технологий, адаптированных к специфике пациентов с глубокими ожогами [3, 4]. Цель работы — оценить безопасность и эффективность биомедицинской технологии трансплантации стромально-васкулярной фракции жировой ткани для заживления ран донорской зоны у пациентов с ожогами III степени.
Материал и методы. В проспективное плацебо-кон-тролируемое клиническое исследование включены 38 пациентов с термическими ожогами кожи III степени на площади 35 [30; 55]% поверхности тела. Проведены липосакция, ферментное выделение стромально-васку-лярной фракции с мезенхимальными стволовыми клетками, внутридермальное введение препарата в исследуемый участок и плацебо в контрольный участок раны донорской зоны, через 10 суток — неинвазивный (тева-метрия, кутометрия) и инвазивный (биопсия) контроль.
Гены & Клетки XVII, №3, 2G22
