CC BY
26
перегруппировка основных популяций NK- и T-клеток. На 20 день культивирования среднее содержание NK-клеток увеличилось в 5 раз до 69,7% (p<0,05), а Т-клеток снизилось в 2,6 раз до 26,8%. При этом более 75% NK-клеток имели фенотип CD56+CD16+, также наблюдалось увеличение экспрессии маркеров активации CD38+ и HLA-DR+ до 92,3% и 96,9% соответственно, что подтверждает процесс активации in vitro.
Таким образом, длительное культивирование монону-клеарных клеток в присутствии цитокина и фидерных клеток позволяет многократно увеличить количество и долю активированных NK-клеток. Данную технологию можно использовать для производства клеточного продукта.
Литература:
1. Laskowski, T.J., Biederstädt, A. & Rezvani, K. Nat. Rev. Cancer. 2022. P. 1-19
2. Abakushina E.V., Popova L., Zamyatin A., et al. Vaccines. 2021. V. 9. № 11. P. 1363.
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПЕРИНАТАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК В КОМПЛЕКСНОМ ЛЕЧЕНИИ ВРОЖДЕННОГО БУЛЛЕЗНОГО ЭПИДЕРМОЛИЗА
И.И. Рюмина1, Д.Н. Силачев1, Н.М. Марычева1 3, Д.Ю. Трофимов1, Ю.Ю. Коталевская2 3, В.В. Зубков1, Г.Т. Сухих1
1 ФГБУ НМИЦ акушерства, гинекологии
и перинатологии им. В.И. Кулакова МЗ РФ, Москва, Россия
2 ГБУЗ МО МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского, Москва, Россия
3 Благотворительный фонд помощи детям, страдающим заболеванием буллезный эпидермолиз «БЭЛА. Дети-бабочки», Москва, Россия
e-mail: ¡_ryumina@oparina4.ru
Ключевые слова: новорожденные, врожденный буллезный эпидермолиз, мультипотентные мезенхимальные стволовые клетки.
Буллезный эпидермолиз (БЭ) — клинически и генетически гетерогенное наследственное нарушение структуры кожи, которое связано с разрушением дермо-эпидермаль-ного соединения или базального слоя эпидермиса, что приводит к повышенной уязвимости кожи к механическому воздействию [1]. Клинически БЭ проявляется появлением пузырей (булл), которые вскрываются, оставляя болезненные, длительно незаживающие эрозии и рубцы. В настоящее время ведутся исследования по лечению БЭ по нескольким направлениям: генная, протеиновая (белковая) и клеточная терапия мезенхимальными стволовыми клетками (ММСК), полученными из костного мозга. ММСК способны дифференцироваться в эпителиальные клетки, и могут способствовать заживлению повреждений кожного покрова [2]. 19 новорожденным с дистрофической рецессивной формой БЭ проводили лечение ММСК, которые получали из ткани плаценты. Образцы ткани инкубировали с 0,5% раствором коллагеназы I типа, в течение 3-4 ч при 37°С. Полученную суспензию осаждали центрифугированием (3000 об/мин) в течение 3 мин, а образовавшийся осадок, содержащий клетки, ресуспендировали в полной питательной среде, высаживали на полистирольные матрасы и инкубировали в течение 2-3 суток. По достижении 70-80% конфлюэнтности клетки подвергали трипсино-лизу с целью пересадки на новые культуральные матрасы
(Corning T-15G, США) для дальнейшего наращивания клеточной массы. Для трансплантации пациенту использовались клетки, культивируемые до третьего пассажа. Перед трансплантацией проводили процедуру фенотипирования на стандартные маркеры CD9G, CD73, CD1G5, CD45, CD14, CD2G, а также оценивали жизнеспособность клеток, проводя окраску аликвоты клеток (1G мкл) трипано-вым синим и проводя анализ с помощью счетчика клеток. Трансплантацию ММСК проводили системным способом (внутривенно) в 1G мл физиологического раствора в течение 1G минут, доза клеток составляла 3 ■ 1G6 клеток/ кг веса пациента. Предварительные данные свидетельствуют о терапевтической активности трансплантированных ММСК. У всех пациентов улучшилось общее состояние, сократилась длительность эпителизации эрозий, уменьшалось количество вновь появившихся пузырей, уменьшились беспокойство и болезненность при проведении регулярных перевязок. Необходимы дальнейшие исследования, для изучения потенциальных эффектов трансплантации ММСК на регенеративные процессы в коже при БЭ.
Литература:
1. Lucky A.W., Whalen J., Rowe S., Marathe K.S., Gorell E. Neoreviews (2G21) 22 (7): e438-e451.
2. El-Darouti M, Fawzy M, Amin I, Abdel Hay R, Hegazy R, Gabr H, El Maadawi Z. Dermatol Ther. 2G16 Mar-Apr;29(2):96-1GG. doi: 1G.1111/dth.123G5.
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СТРОМАЛЬНО-ВАСКУЛЯРНОЙ ФРАКЦИИ ЖИРОВОЙ ТКАНИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПАЦИЕНТОВ С ТЕРМИЧЕСКИМИ ОЖОГАМИ
М.Г. Рябков, М.Н. Егорихина, И.Ю. Арефьев, И.Н. Чарыкова, Н.А. Колошеин, А.Е. Богданова, А.О. Московченко, Н.Г. Засецкая
ФГБОУ ВО Приволжский исследовательский медицинский университет Минздрава РФ, Нижний Новгород, Россия
e-mail: maxim-ryabkov@yandex.ru
Ключевые слова: жировая ткань, стромально-васкулярная фракция, мезенхимальные стволовые клетки, биомедицинская технология, ожоги, донорские раны, аутодеомопластика.
Целесообразность применения продуктов из жировой ткани, содержащих мезенхимальные стволовые клетки, для лечения ран патогенетически обоснована [1, 2]. Важный фактор, сдерживающий широкое использование продуктов из аутологичной жировой ткани в практике комбустиологии — дефицит безопасных биомедицинских технологий, адаптированных к специфике пациентов с глубокими ожогами [3, 4]. Цель работы — оценить безопасность и эффективность биомедицинской технологии трансплантации стромально-васкулярной фракции жировой ткани для заживления ран донорской зоны у пациентов с ожогами III степени.
Материал и методы. В проспективное плацебо-кон-тролируемое клиническое исследование включены 38 пациентов с термическими ожогами кожи III степени на площади 35 [30; 55]% поверхности тела. Проведены липосакция, ферментное выделение стромально-васку-лярной фракции с мезенхимальными стволовыми клетками, внутридермальное введение препарата в исследуемый участок и плацебо в контрольный участок раны донорской зоны, через 10 суток — неинвазивный (тева-метрия, кутометрия) и инвазивный (биопсия) контроль.
Гены & Клетки XVII, №3, 2G22
Результаты. В послеоперационном периоде зафиксированы 5 «нежелательных явлений», связанных с проведенными в рамках исследования манипуляциями: местные реакции I-II классов по Clavien-Dindo в области липосакции [3], в области введения препарата [2]. Эпителизация ран донорской зоны на 10 сутки зафиксирована у всех пациентов. Функциональные характеристики кожи на исследуемом и контрольном участках ран различались по параметрам трансдермальной потери жидкости и не различались по параметрам эластичности. Гистоморфометрия показала, что суммарная толщина эпидермиса и дермы в исследуемых участках ран была на 22% больше, в контрольных участках ран (p=0,046).
Заключение. Трансплантация стромально-васкуляр-ной фракции аутологичной жировой ткани в раны донорской зоны у пациентов с ожогами не вызвала реакций и осложнений у 87% пациентов, сопровождалась незначительными местными реакциями I-II классов по Clavien-Dindo в области липосакции — у 8% пациентов, в области инъекции — у 5% пациентов. Эффект трансплантации проявился достоверным снижением трансдермальной потери воды и увеличением толщины новообразованной кожи в ранах донорской зоны.
Работа выполнена в рамках реализации «Приоритет-2030».
Литература:
1. Арцимович И.В., Зиновьев Е.В., Гостимский А.В. и др. Ортопедия, травматология и восстановительная хирургия детского возраста. — 2021. — Т. 9. — № 2. — C. 175-181.
2. Гатиатулина Е.Р., Мантурова Н.Е., Димов Г.П. и др. Пластическая хирургия и эстетическая медицина. 2019; 2: 43-48.
3. Rangatchew F. Vester-Glowinski P., Rasmussen B.S., et al. Burns. 2021;47(2): 270-294.
4. Momeni M., Fallah N., Bajouri A., et al. Burns. 2019;45(4): 914-922.
КЛЕТКИ РАННИХ СТРОМАЛЬНЫХ ПАССАЖЕЙ ИЗ ОПУХОЛЕВОЙ ТКАНИ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И ПРОИЗВОДНЫЕ ОРГАНОИДНЫЕ КУЛЬТУРЫ ЭКСПРЕССИРУЮТ ТКАНЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ЭПИТЕЛИАЛЬНЫЕ И ОПУХОЛЕВЫЕ МАРКЕРЫ
В.М. Рябов1, М.М. Барышев2, М.А. Воскресенский3, Б.В. Попов1
1 Институт Цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия
2 Институт Микробиологии и Вирусологии, Рижский Университет им. Страдиньша, Рига, Латвия
3 Городская многопрофильная больница № 2, Санкт-Петербург, Россия
e-mail: borisvp478@gmail.com
Ключевые слова: органоидные, первичные стромальные и эпителиальные культуры предстательной железы человека, эпителиально-мезенхимный переход, рак предстательной железы.
Рак предстательной железы (РПЖ) диагностируется в течение жизни у каждого восьмого лица мужского пола. Во многих случаях РПЖ протекает в дремлющей форме, не требующей активной терапии. Однако в некоторых случаях болезнь трансформируется в агрессивную метастатическую форму, устойчивую к лекарственной терапии и неизбежно приводящую к быстрой смерти пациента. Различные формы РПЖ могут происходить из разных
типов эпителиальных клеток ПЖ, которые представлены популяциями базальных, люминальных, промежуточных, и нейроэндокринных клеток. Молекулярные профили разных типов эпителиальных клеток, их способность к дифференцировке, трансдифференцировке и репро-граммированию в опухолевые клетки являются объектом изучения во многих биомедицинских лабораториях в настоящее время. Одним из неотложных вопросов для диагностики, лечения, прогноза и исследования патогенеза РПЖ является поиск ранних маркеров перехода дремлющей форма РПЖ в его агрессивную форму.
Для изучения этого вопроса мы использовали модель стромальных культур (СКПЖ) человека и соответствующих органоидных культур (ОК), полученных из опухолевой и нормальной тканей ПЖ, пациентов, оперированных по поводу РПЖ. Технология ОК основана на получении 3D культуры клеток, которые появляются из стволовых клеток и сохраняют все свойства исходной материнской ткани [1]. Мы обнаружили, что ОК могут быть приготовлены из СКПЖ, подразделенных нами на ранние (пассажи 1-3), и поздние (пассажи 4-6). Используя по-лимеразную цепную реакцию с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР), мы нашли, что клетки ранних и поздних СКПЖ, и соответствующие ОК, экспрессируют люминальные (андрогенный рецептор, AR), цитокератин 1 8 (ЦК1 8) и базальные (ЦК5, р63) эпителиальные маркеры, продукция которых снижается или исчезает в поздних СКПЖ и производных ОК. СКПЖ ранних пассажей и соответствующие ОК, полученные из опухолевой ткани, продуцируют также маркер РПЖ AMACR, а в половине из них выявляется рекомбинантный маркер РПЖ TMPRSS2-ERG. Такой рекомбинантный мутантный ген идентифицирован нами путем клонирования и секвенирования продуктов ОТ-ПЦР, полученных из опухолевой ткани ПЖ, производных ранних СКПЖ и соответствующих ОК. В опухолевой ткани, соответствующих ранних СКПЖ и ОК нами также выявлена путем ОТ-ПЦР, электрофореза белков и имму-ноблотинга со специфическими антителами повышенная продукция белка Ezh2.
Полученные результаты предполагают, что ранние пассажи СКПЖ и соответствующие ОК представляют эффективную преклиническую модель для поиска ранних маркеров агрессивной форма РПЖ. Работа выполнена в рамках бюджетной темы Института цитологии РАН № 0124-2019-0004 и поддержана внутренним грантом Института цитологии РАН.
Литература: 1. Sato et al., Gastroenterology, 2011, V. 141, P. 1762.
ВЛИЯНИЕ ДВИГАТЕЛЬНОЙ РЕАБИЛИТАЦИИ
НА ЭКСПРЕССИЮ NG2 ПРОТЕОГЛИКАНА ПРИ
ТРАВМЕ СПИННОГО МОЗГА КРЫСЫ
Д.Х. Сабиров, Э.Ф. Давлетшин, А.В. Тимофеева,
Т.В. Повышева, Я.О. Мухамедшина
Казанский (Приволжский) Федеральный
Университет, Казань, Россия
e-mail: davraniwe@gmail.com
Ключевые слова: NG2, травма спинного мозга, двигательная реабилитация.
Двигательная реабилитация в современной концепции продолжает рассматриваться как достаточно эффективный, легко воспроизводимый и дозируемый способ стимулирования восстановления двигательной функции.
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
