ІДЕНТИФіКАЦіЯ ДНК ТВАРИННОГО ПОХОДЖЕННЯ В М’ЯСНИХ ПРОДУКТАХ ТА КОРМАХ ДЛЯ ТВАРИН МЕТОДОМ ПОЛіМЕРАЗНОї ЛАНЦЮГОВОї РЕАКЦії В РЕАЛЬНОМУ ЧАСі Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

УДК 619:613.281:577.212.3:608.2 DOI: 10.15587/2313-8416.2016.83196

1ДЕНТИФ1КАЦ1Я ДНК ТВАРИННОГО ПОХОДЖЕННЯ В М'ЯСНИХ ПРОДУКТАХ ТА КОРМАХ ДЛЯ ТВАРИН МЕТОДОМ ПОЛIМЕРАЗНОÏ ЛАНЦЮГОВОÏ РЕАКЦП В РЕАЛЬНОМУ ЧАС1

© Л. М. 1щенко, Л. М. Шинкаренко, I. В. Андреев, Л. I. Калакайло, В. Д. 1щенко, В. Г. Спиридонов

Проведено апробацгю д1агностичних mecmie для видовог 1дентиф1каци яловичини, свинини та курятини методом полiмeразноï ланцюгово'1 реакци в реальному 4aci. Для доcлiджeння використовували продукти м'ясно'1 промиcловоcmi з mоргiвeльних мереж, в тому чиcm тих, що зазнали meрмiчноï обробки, та корми. Встановлено факт нeвiдповiдноcmi щодо зазначеного виробником складу окремих мясних продукmiв Клю^о^^ слова: полiмeразна ланцюгова рeакцiя, видова iдeнmифiкацiя ДНК, яловичина, свинина, курятина

Approbation of diagnostic tests for species identification of beef, pork and chicken by real time polymerase chain reaction method was done. Meat food, including heat treated and animal feed, was used for research. The fact of inconsistencies was revealed for product composition of some meat products that is marked by manufacturer Keywords: polymerase chain reaction, DNA species identification, beef, pork, chicken

ВЕТЕ РИНАРН1 НАУКИ

1. Вступ

Шдвищения темтв виробництва i обсяпв випуску продукцп м'ясно! промисловосп нерозривно пов'язане з вдосконаленням i створенням нових ре-сурсозберпаючих технологш, комплексним викори-станням тваринницько! сировини, розробкою нових видiв продукцп з високими споживчими властиво-стями. Проте виршення цих завдань обов'язково повинно супроводжуватися впровадженням комплексу показнишв об'ективно! i надшно! оцшки якосп сировини i готово! продукцп за рахунок використання нових аналтгичних методiв, яш вiдповiдають останнiм досягненням в галузi аналiтичних дослiджень.

2. Аналiз лiтературних даних i постановка проблеми

Фальсифжащя видового складу м'ясних про-дуктiв, окрiм економiчного шахрайства, мie цiлий ряд iнших проблем, серед яких можна видiлити медичш, ветеринарно-санiтарнi та соцiальнi. З медичних i ве-теринарних аспектiв небезпеку становить можливiсть попадання в м'ясну сировину, готовi м'яснi вироби, корми для тварин та дieтичнi добавки кюткового чи м'ясо-к1сткового борошна тварин, хворих губчастою енцефалопатieю велико! рогато! худоби (ГЕ ВРХ) [1, 2]. Захворювання виникае пiсля згодовування ве-лик1й рогатiй худобi кормiв, до складу яких входить тваринне борошно (м'ясо-шсткове, к1сткове), ура-жене патолопчним прiоном [3]. Через 10 рошв вiд

початку виникнення ешзоотп ГЕ ВРХ у Великобри-танп було доведено можливють заражения людей ввд велико! рогато! худоби (нетипова форма хвороби Крейцфельда-Якоба) [4]. Ураження людей частше рееструють у регiонах, де у худоби дiагностували губчасту енцефалопатш. Також слад вiдмiтити виникнення шдиввдуальних алергiчних реакцiй, на вживання певного виду м'яса [5, 6]. Особливо! уваги науковцiв сьогоднi привертае алергiя у дiтей на вжи-вання яловичини [7, 8].

Серед сощальних питань варто зазначити ре-лiгiйнi табу на деяк1 види м'яса, моральне несприйнят-тя споживання м'яса кремих видiв тварин.

Окрiм того, багато споживачiв для зменшен-ня надходження жирiв, вважають за краще включа-ти у рацюн бiльше курятини, нiж яловичини або свинини.

У кормах для дрiбних тварин також важливо контролювати видовий склад мясних компоненпв, особливо в дiетичних кормах, призначених для попе-редження кормово! алергi! [9-11].

Таким чином, потреба видово! iдентифiкацi! м'ясних компоненпв в продуктах харчуваннях та кормах для тварин не викликае сумнiвiв. Так1 методи дослвдження, як iмунодифузiя в гелi, iмунофермент-ний аналiз (1ФА) та iншi, що широко використову-ються для видово! щентифжаци сирого м'яса, е ма-лоiнформативними щодо продуктiв, виробництво яких вимагае термiчно! обробки, оск1льки, вона приз-

водить до денатурацп бiлкiв i втрати ними видово1 специфiчностi [12]. На ввдмшу вiд бiлкiв, ДНК е бiльш стiйкою до термiчноl обробки, тому нинi пер-спективними для щентифшаци видового складу мяс-них компонентiв у продуктах харчування та кормах для тварин е молекулярно-генетичш методи, зокрема, полiмеразна ланцюгова реакцiя (ПЛР) в рiзних и мо-дифiкацiях [13-15]. У попереднiх дослiдженнях нами було розроблено дiагностичнi тести для вдентифшацп яловичини, свинини i курятини, визначено !х специ-фiчнiсть та ефективнiсть використання для про-дуктiв, що зазнали термiчноl обробки [16]. Водночас актуальним питаниям залишаеться апробацiя запро-понованих теспв.

3. Мета та задачi дослщження

Метою дослвдження було провести апробацш дiагностичних тестiв на основi полiмеразноl ланцюгова! реакцп в реальному чай для вдентифшацп яло-вичини, свинини та курятини.

Для досягнення мети необх1дно було виршити наступнi задачi:

а) дослiдити окремi валiдацiйнi показники за-пропонованих дiагностичних тестiв;

б) здiйснити практичну апробацш розробле-них дiагностичних тестiв.

У запропонованих дiагностичних тестах для реестрацп флуоресцентного сигналу при проведеннi ПЛР у реальному чай використано технологш «ан-типраймеру» [18]. Суть ще1 модифжацп полягае у тому, що до одного iз праймерiв «пришиваеться» унiверсальна нуклеотидна послiдовнiсть мiчена флу-оресцентним барвником (15-20 нуклеотидiв) на 5'-шнщ. Вiдповiдно, в реакцiйне середовище вносять комплементарну 1й нуклеотидну послщовнють «ан-типраймер», мiчену гасником флюуоресценци на 3'-кiнцi. Таким чином, до початку реакцп флуорес-центний сигнал вщсутнш, оск1льки флуорофор i гас-ник флуоресценци просторово зближенi. При наяв-ностi специфiчноl матрицi в реакцп ПЛР олиюнук-леотид, який мiстить гасник, витiсияеться Tag-ДНК-полiмеразою, в результатi чого пiдвищуеться рiвень флуоресценци. Такий пiдхiд до проведення ПЛР в реальному часi е максимально економним, оскшьки, немае потреби у дизайш флуоресцентних зондiв до кожно! матрицi. Окрiм того, дизайн прамейрiв проводили таким чином, щоб один iз праймерiв був спшьним для тварин трьох видiв (до нього i приеднували ушверсальну нуклеотидну послщов-

4. Матерiали i методи досл1дження

Дослщжуваш матер1али, що використовува-лись в експерименп:

1. Свгже м'ясо тварии (яловичииа, свинина, курятина).

2. Самостшио приготовлеш 1 %-т фарш1 свинини, яловичини та курятини.

3. М'ясш вироби з торг1вельно! мереж1.

4. Сух1 корми для собак р1зного класу якосп.

Екстракцш ДНК i3 зразшв проводили методом

сорбцп на оксидi кремиiю [17], з передньою шкуба-цieю i3 протешазою К упродовж 2 год.

4. 1. Методика полiмеразноТ ланцюговоТ реакцп у реальному час для видовоТ щентифжацп ДНК запропонованими дiагностичними тестами

Амплiфiкацiю проводили в реакцiйиiй сумiшi об'емом 25 мкл, що мiстила: 50,0 мМ Трис-НС1 (рН 8,3), 3,0 мМ MgCl2, 0,2 мМ кожного з дНТФ, по 2 пМ пари олiгоиуклеотидиих праймерiв, 10 пМ «аи-типраймеру» та 1 од. Taq ДНК-полiмерази. Зразки екстраговаио! ДНК вносили у об'eмi 5 мкл. До-слвджеиия проводили на прилащ ABI PRISM SDS 7000 (Applied Biosystems, Великобритатя) та CFX96 Real-Time System (BioRad) iз иаступиим температур-иим профшем (табл. 1).

нють i3 флуоресцентним барвником FAM), а шший -видоспецифiчний, що також суттево знизило BapTicTb дослвдження, оскшьки, найб№ш вагому частку собiвартостi ПЛР у реальному чай становлять флуо-ресцентш зонди.

5. Результати дослщжень м'ясних продукт1в харчування i сухих корм1в для собак на видову належшсть м'ясноТ сировини

Оск1льки валвдащя запропонованих дiагно-стичних тестiв проводилася на приладi ABI PRISM SDS 7000 (Applied Biosystems, Великобритангя), а апробащя на приладi CFX96 Real-Time System (BioRad), було проведено дослщження внутршньо-лабо-раторно! вщтворюваносп такого показника як чут-ливють. Для дослiджения використовували м'ясо та приготовлений 1,0 % фарш з м'яса тварин кожного дослвджуваного виду. Переметри кривих амплiфi-кацп, отриманих на рiзних приладах, наведено в табл. 2. На рис. 1 зображено ^rai амплiфiкацü, отримаиi при амплiфiкацп яловичини та 1,0 % яловичого фаршу, на рiзних приладах для проведення ПЛР у реальному чай.

Таблиця 1

Температурний режим амплiфiкацií_

Ста^я Режим амплiфiкацil Процес Кiлькiсть

температура, °С час цик. lilt

1 95 5 хв Активащя полiмерази 1

95 15 с Деиатуращя ДНК

2 64 (66)* 30 с Ввдпалюваиня праймерiв 25

72 30 с Елоигащя ДНК

50 45 с Приедиання антипраймера**

Примтка: * - для свинини i яловичини температура вгдпалювання праймергв 64 С, для курятини - 66 °С; **стадгя на який вгдбуваеться реестращя даних флуоресценци

Таблиця 2

Характеристики кривих ампл1ф1кацп за барвником FAM на р1зних приладах для проведення ПЛР _у реальному чаС_

Сировина ABI PRISM SDS 7000 CFX96 Real-Time System

м'ясо 1,0 % фарш м'ясо 1,0 % фарш

Ct FAM ÄRn* Ct FAM ÄRn Ct FAM ÄRn CtFAM ÄRn

Яловичина 13,5 1600 19,8 1200 17,5 900 23,0 700

Свинина 15,8 1400 21,5 1000 16,0 1200 24,5 1000

Курятина 15,4 1450 20,4 1000 17,8 1300 23,8 1100

Примтка: * - eidHOCHi одиниц флуоресценци

а

б

Рис. 1. Kpmi амплiфiкацiï 100 % яловичини i 1 % яловичого фаршу, отримаш на приладах:

а - CFX96 Real-Time System; б - ABI PRISM SDS 7000

З отриманих результапв дослвдження видно, що запропоноваш д1агностичш тести можна викори-стовувати як на прилад1 CFX96 Real-Time System, так i на ABI PRISM SDS 7000.

Для апробаци теспв видово! щентифшацп ДНК дослiджували рiзнi м'яснi продукти харчування, придбанi в торпвельнш мереж!, в тому числ так1, як1 у процесi виробництва пiддавали термiчнiй обробщ, та готов! корми для собак.

Результата дослщження продукпв харчування щодо видового складу 1х м'ясних компонента наведено в табл. 3.

Як видно iз представлених результапв до-слвдження в окремих харчових продуктах встановлено факт невщповвдносп видового складу сировини заявлено! виробником. Так, у паштет! «Нжний» (№ 3) не ви-явлено курятини, а у сардельках «Селянсью» (№ 7) та сосисках «ДитячЬ> (№ 8) - не виявлено свинини.

Слiд ввдмгтити можливiсть встановлення видового складу м'ясно! сировини у консервах домаш-нього ириготування (№ 10) та у булочних виробах (№ 6), яш зазнають термiчноi обробки, адже такi продукти часто можна зустргти на стих1йних ринках та у закладах «вуличного» харчування.

Таблиця 3

Видова вдентифжащя м яса в р1зних продуктах_

№ Назва продукту Склад виробу (зпдно з даними виробника) Результати ПЛР (значення порогового циклу за каналом FAM, Ct)

яловичина свинина курятина

1 Сосиски «Тигрик», вищий сорт свинина, курятина, яловичина, яечний порошок 20,44 23,5 21,25

2 Сардельш «Шшльш», вищий сорт свинина, яловичина, яечний порошок 26,74 21,68 21,86

3 Паштет «Шжний», перший сорт м'ясо куряче, печшка свиняча, шкурка свиняча варена - 17,94 -

4 Ковбаса сирокопчена «Махан по татарськи», першого сорту конина, яловичина 21,38 - -

5 Салямi «Вiденська» свинина, яловичина 20,45 21,80 -

6 Булочний вирiб з потрошками без етикетки - 21,84 -

7 Сардельки «Селянсьш» яловичина, свинина, яйця ку-ряч^ курятина 24,0 - 19,5

8 Сосиски «ДитячЬ> яловичина, свинина, яйця ку-рячi 24,0 - 19,0

9 Вареники iз печiнкою яловичина 19,0 - -

10 Паштет iз суб-продуктiв свинi домашнього приготування свинина - 23 -

Для ощнки можливостi використання запропонованих дiагностичних тестiв для визначення видового складу м'ясно! сировини у кормах для тварин дослщжували готовi сухi корми для собак рiз-них виробник1в та рiзного класу якостi, придбанi в торпвельнш мереж1. Вiдбираючи зразки для до-слiдження було встановлено, що у кормах для тва-

рин виробником не завжди вказуеться видовий склад м'ясно! сировини. Наприклад, у кормах еко-ном-класу часто можна зустргги вказ1вки: «м'ясо птищ», «м'ясо свшсько1 птищ» або «м'ясо тварин i м'ясш похвдт» - без конкретизацп його видово1 на-лежностi. Результати дослщжень кормiв для собак наведеш в табл. 4.

Таблиця 4

Видова вдентифжащя м'ясних компонентiв в кормах для собак

№ Краша-виробник та клас корму Склад продукту (згщно з даними виробника) Результати ПЛР (значення порогового циклу за каналом FAM, Ct)

яловичина свинина курятина

1 Шмеччина, супер-премiум свiже м'ясо свiйськоï птищ, яечний порошок - - 24

2 Шмеччина, премiум м'ясо тварин i м'ясш похщш - - -

3 Шмеччина, премiум м'ясо тварин i м'ясш похщш 26 26 -

4 1таля супер-премiум сублiмоване м'ясо курки та iндички, свiже м'ясо курки та iндички - - 24

5 Iспанiя, супер-премiум м'ясо ягняти, бiлки м'яса свiйсь-коï птицi - - 23

6 Iспанiя, премiум м'ясо та м'ясш продукта (не менше 6% курки) - - 25

7 Франщя, супер-премiум дегщратоване м'ясо птищ - - 25

8 Франщя, супер-премiум зневоднене м'ясо птищ - - 23

9 Франщя, супер-премiум зневоднене м'ясо птищ - - 21

10 Франщя, премiум дегщратоване м'ясо птищ - - -

11 В елико -бриташя, супер-премiум борошно з курячого м'яса, свiже куряче м'ясо (5 %), яечний порошок - - 20

12 Iспанiя, супер-премiум курка (16%), яечний порошок - - 20

Аналiзуючи даш наведенi в табл. 4 щодо щен-тифiкацiï видового складу м'ясних компоненпв у сухих кормах для собак можна зробити висновок, що

факту фальсифжаци видового складу не виявлено, осшльки, в багатьох кормах, як уже дослщжувалося дослщжувалося вище, не зазначаеться видовий склад

корму. Курятину було виявлено у 75,0 % корм1в, 40,0 % з яких склали корми, у яких не зазначено видового складу сировини. У 16,6 % дослвджуваних зразшв корм1в видовий склад не встановлено.

6. Висновки

1. Результати дослщження внутршньолабора-торно! ввдтворюваносп для запропонованих д1агно-стичних теспв сввдчать, що !х можна застосовувати як на прилад1 CFX96 Real-Time System так i на ABI PRISM SDS 7000.

2. Отримат дат щодо апробацй' дiагностичних теспв для вдентифшаци яловичини, свинини та куря-тини методом ПЛР в реальному чай дозволяють зро-бити висновик, що вони е високочутливим та специ-фiчним засобом для видово! вдентифжацй м'ясних компонентiв в продуктах харчування, в тому числ тих що зазнали термiчноl обробки, та в кормах для тварин.

Л^ература

1. Вербицьций, П. I. Статус Укра!ни щодо губ-частоподiбноl енцефалопатй велико! рогато! худоби зпдно з рекомендацшми кодексу МЕБ [Текст] / П. I. Вербицьций,

B. В. Влiзло, А. В. Абрамов, О. В. Ложкша // Ветеринарна медицина Укра!ни. - 2010. - № 1. - С. 7-10.

2. Назар, Б. I. Обмеження та контроль за викори-станням бшюв жуйних тварин в Укра!ш [Текст] / Б. I. Назар // Науковий вiсник Львiвського национального ун1верситету ветеринарно! медицини та бютехнологш iменi

C. З. Гжицького. - 2012. - Т. 14, № 3. - С. 209-211.

3. Про затвердження йструкцп щодо дiагностики, профшактики та боротьби з губчастоподiбною енцефало-патiею велико! рогато! худоби [Текст]. - Держкомветмеди-цини, 2008. - № 180. - Режим доступу: http://zakon3.rada. gov.ua/laws/show/z0994-08

4. Henry, С. Clinical features of variant CreutzfeldtJakob disease [Text] / C. Henry, R. Knight // Reviews in Medical Virology. - 2002. - Vol. 12, Issue 3. - P. 143-150. doi: 10.1002/rmv.345

5. Theler, B. Clinical presentation and diagnosis of meat allergy in Switzerland and Southern Germany [Text] /

B. Theler, K. Brockow, B. Ballmer-Weber // Swiss Med Wkly. - 2009. - Vol. 139, Issue 17-18. - P. 264-270.

6. Restani, P. Meat allergy [Text] / P. Restani, C. Bal-labio, S. Tripodi, A. Fiocchi // Current Opinion in Allergy and Clinical Immunology. - 2009. - Vol. 9, Issue 3. - P. 265-269. doi: 10.1097/aci.0b013e32832aef3d

7. Fiocchi, A. Beef allergy in children [Text] / A. Fioc-chi, P. Restani, E. Riva // Nutrition. - 2000. - Vol. 16, Issue 6. - P. 454-457. doi: 10.1016/s0899-9007(00)00285-9

8. Werfel, S. Clinical reactivity to beef in children allergic to cow's milk [Text] / S. Werfel, S. Cooke, H. Sampson // Journal of Allergy and Clinical Immunology. - 1997. - Vol. 99, Issue 3. - P. 293-300. doi: 10.1016/s0091-6749(97)70045-9

9. Шарифулина, Е. М. Вопрос выбора лучшего корма для мелких домашних животных [Текст] / Е. М. Шарифулина, К. В. Закирова // Science Time. - 2015. - № 12. -

C. 862-867.

10. Хохрин, С. Н. Кормление собак [Текст] / С. Н. Хохрин. - СПб.: Лань, 2001. - 192 с.

11. Raditic, D. M. ELISA testing for common food antigens in four dry dog foods used in dietary elimination trials [Text] / D. M. Raditic, R. L. Remillard, K. C. Tater // Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition. - 2011. - Vol. 95, Issue 1. - P. 90-97. doi: 10.1111/j.1439-0396.2010.01016.x

12. Wintero, A. K. A comparison of DNA-hybridiza-tion, immunodiffusion, countercurrent immunoelec trophoresis

and isoelectric focusing for detecting the admixture of pork to beef [Text] / A. K. Wintero, P. D. Thomsen, W. Davies // Meat Science. - 1990. - Vol. 27, Issue 1. - P. 75-85. doi: 10.1016/ 0309-1740(90)90030-a

13. Lopez-Andreo, M. Identification and quantitation of species in complex DNA mixtures by real-time polymerase chain reaction [Text] / M. Lopez-Andreo, L. Lugo, A. Garrido-Pertierra, M. Isabel Prieto, A. Puyet // Analytical Biochemistry. - 2005. -Vol. 339, Issue 1. - P. 73-82. doi: 10.1016/j.ab.2004.11.045

14. Kesmena, Z. PCR assay for the identification of animal species in cooked sausages [Text] / Z. Kesmen, F. Sahin,

H. Yetim // Meat Science. - 2007. - Vol. 77, Issue 4. - Р. 649653. doi: 10.1016/j.meatsci.2007.05.018

15. Laube, I. Methods for the detection of beef and pork in foods using real-time polymerase chain reaction [Text] /

I. Laube, A. Spiegelberg, A. Butschke, J. Zagon, M. Schauzu, L. Kroh, H. Broll // International Journal of Food Science and Technology. - 2003. - Vol. 38, Issue 2. - P. 111-118. doi: 10.1046/ j.1365-2621.2003.00651.x

16. Спиридонов, В. Г. 1дентифжащя ДНК тваринно-го походження в м'ясних продуктах та кормах, що зазнали тертчно! обробки [Текст] / В. Г. Спиридонов, Л. М. 1щенко, С. Д. Мельничук // Продовольча щдуст^ АПК. - 2010. -№ 3-4. - С. 39-43.

17. Boom, R. Rapid and simple method for purification of nucleic acids [Text] / R. Boom, C. J. Sol, M. M. Salimans et. al. // Journal of clinical microbiology. - 1990. - Vol. 28, Issue 3. - P. 495-503.

18. Jin Li G. Anti-primer quenching-based real-time PCR for simplex or multiplex DNA quantification and single-nucleotide polymorphism genotyping [Text] / J. Li, G. M. Ma-krigiorgos // Nature Protocols. - 2007. - Vol. 2, Issue 1. -P. 50-58. doi: 10.1038/nprot.2007.11

References

1. Verbyts'tsyy, P. I., Vlizlo, V. V., Abramov, A. V., Lozhkina, O. V. (2010). Ctatus Ukrayiny shchodo hubchasto-podibnoyi entsefalopatiyi velykoyi rohatoyi khudoby zhidno z rekomendatsiyamy kodeksu MEB. Veterynarna medytsyna Ukrayiny, 1, 7-10.

2. Nazar, B. I. (2012). Obmezhennya ta kontrol' za vy-korystannyam bilkiv zhuynykh tvaryn v Ukrayini. Naukovyy visnyk L' vivs' koho natsional' noho universytetu veterynarnoyi medytsyny ta biotekhnolohiy imeni S. Z. Gzhyts'koho, 14 (3), 209-211.

3. Pro zatverdzhennja Instrukcii' shhodo diagnostyky, profilaktyky ta borot'by z gubchastopodibnoju encefalopatijeju velykoi' rogatoi' hudoby (2008). Derzhkomvetmedycyny, 180. Available at: http://zakon3.rada.gov.ua/laws/show/z0994-08

4. Henry, C., Knight, R. (2002). Clinical features of variant Creutzfeldt-Jakob disease. Reviews in Medical Virology, 12 (3), 143-150. doi: 10.1002/rmv.345

5. Theler, B., Brockow, K., Ballmer-Weber, B. (2009). Clinical presentation and diagnosis of meat allergy in Switzerland and Southern Germany. Swiss Med Wkly., 139 (17-18), 264-270.

6. Restani, P., Ballabio, C., Tripodi, S., Fiocchi, A. (2009). Meat allergy. Current Opinion in Allergy and Clinical Immunology, 9 (3), 265-269. doi: 10.1097/aci.0b013e32832aef3d

7. Fiocchi, A., Restani, P., Riva, E. (2000). Beef allergy in children. Nutrition, 16 (6), 454-457. doi: 10.1016/s0899-9007(00)00285-9

8. Werfel, S., Cooke, S., Sampson, H. (1997). Clinical reactivity to beef in children allergic to cow's milk. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 99 (3), 293-300. doi: 10.1016/s0091 -6749(97)70045-9

9. Sharyfulyna, E. M, Zakyrova, K. V. (2015). Vopros vy-bora luchsheho korma dlya melkykh domashnykh zhyvotnykh. Science Time, 12, 862-867.

10. Hohrin, S. N. (2001). Kormlenie sobak. Sankt-Peterburg: Lan', 192.

11. Raditic, D. M., Remillard, R. L., Tater, K. C. (2010). ELISA testing for common food antigens in four dry dog foods used in dietary elimination trials. Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition, 95 (1), 90-97. doi: 10.1111/ j.1439-0396.2010.01016.x

12. Wintero, A. K., Thomsen, P. D., Davies, W. (1990). A comparison of DNA-hybridization, immunodiffusion, coun-tercurrent Immunoelectrophoresis and isoelectric focusing for detecting the admixture of pork to beef. Meat Science, 27 (1), 75-85. doi: 10.1016/0309-1740(90)90030-a

13. Lopez-Andreo, M., Lugo, L., Garrido-Pertierra, A., Prieto, M. I., Puyet, A. (2005). Identification and quantitation of species in complex DNA mixtures by real-time polymerrase chain reaction. Analytical Biochemistry, 339 (1), 73-82. doi: 10.1016/j.ab.2004.11.045

14. Kesmen, Z., Sahin, F., Yetim, H. (2007). PCR assay for the identification of animal species in cooked sausa-

ges. Meat Science, 77 (4), 649-653. doi: 10.1016/j.meatsci. 2007.05.018

15. Laube, I., Spiegelberg, A., Butschke, A., Zagon, J., Schauzu, M., Kroh, L., Broll, H. (2003). Methods for the detection of beef and pork in foods using real-time polymerase chain reaction. International Journal of Food Science and Technology, 38 (2), 111-118. doi: 10.1046/j.1365-2621.2003. 00651.x

16. Spyrydonov, V. H., Ishchenko, L. M., Mel'nychuk, S. D. (2010). Identyfikatsiya DNK tvarynnoho pokhodzhennya v m"yasnykh produktakh ta kormakh, shcho zaznaly termich-noyi obrobky. Prodovol'cha industriya APK, 3-4, 39-43.

17. Boom, R., Sol, C. J., Salimans, M. M. et. al. (1990). Rapid and simple method for purification of nucleic acids. Journal of clinical microbiology, 28 (3), 495-503.

18. Li, J., Makrigiorgos, G. M. (2007). Anti-primer quenching-based real-time PCR for simplex or multiplex DNA quantification and single-nucleotide polymorphism genotyping. Nature Protocols, 2 (1), 50-58. doi: 10.1038/nprot.2007.11

Дата надходження рукопису 04.10.2016

1щенко Людмила Мар'яшвна, кандидат ветеринарних наук, старший научковий сшвробпник, Укра1н-ская лаборатор1я якосп i безпеки продукци АПК, Нацюнальний университет бюресурав i природоко-рустування Украини, вул. Геро1в Оборони, 15, м. Ки1в, Укра1на, 03041 E-mail: ischenko_lm@ukr.net

Шинкаренко Лариса МиколаТвна, провiдний iнженер, Украшська лабораторiя якостi i безпеки продукци АПК, Нацюнальний ушверситет бiоресурсiв i природокористування Укра1ни, вул. Геро1в Оборони, 15, м. Кшв, Украша, 03041 E-mail: IBK_line@mail.ru

Андреев 1лля Володимирович, науковий спiвробiтник, Украшська лабораторiя якостi i безпеки продукци АПК, Нацюнальний ушверситет бюресурав i природокористування Украши, вул. Геро1в Оборони, 15, м. Ки1в, Украша, 03041 E-mail: vmdd1@ukr.net

Калакайло Любов 1вашвна, провiдний iнженер, Украшська лабораторiя якостi i безпеки продукци АПК, Нацюнальний ушверситет бюресурав i природокористування Украши, вул. Герош Оборони, 15, м. Ки-1в, Украша, 03041 E-mail: kalakajlo92@mail.ru

1щенко Вадим Дмитрович, кандидат ветеринарних наук, доцент, кафедра фармакологи та токсикологи, Нацюнальний ушверситет бюресурав i природокористування Украши, вул. Геро1в Оборони, 15, м. Кшв, Украша, 03041

E-mail: ischenko_vd@nubip.edu.ua

Спиридонов Владислав Геннадшович, доктор сшьськогосподарських наук, заыдувач в^вдлу, Украшська лабораторiя якосп i безпеки продукци АПК, Нацюнальний ушверситет бюресурав i природокористування Украши, вул. Геро1в Оборони, 15, м. Кшв, Украша, 03041 E-mail: spyrydonov@ukr.net