CC BY
17
УДК 636.598.15
Назар Б. I., к. вет. н. ([email protected]) ©
Державный науково-дослгдный контрольный тстытут ветеринарных npenapamie та кормовых добавок
ОБМЕЖЕННЯ ТА КОНТРОЛЬ ЗА ВИКОРИСТАННЯМ Б1ЛК1В ЖУЙНИХ ТВАРИН В УКРА1Н1
Ycmammi высвтлено пытання контролю за выкорыстанням быюв жуйных тварын у кормах, кормовых добавках та премтсах. Проведено вызначення наявност1 чы eidcymnocmi быюв жуйных тварын у препаратах, кормах та кормовых добавках прыреестрацИ'гх в Украш та выб1рковому контролг.
Ключое1 слова: быкы жуйных тварын, ПЛР, кормы, кормовг добавкы.
Вступ. Етзоотична ситуащя щодо губчастопод1бно! енцефалопатп велико! рогато! худоби (BSE) у крашах Свропи залишаеться складною. Хворобу зареестровано у 16 крашах св1ту, з якими Укра!на пщтримуе TicHi торговельш вщносини. Зважаючи на те, Мгжнародне ешзоотичне бюро (МЕБ) вщнесло BSE до Списку "Б", як особливо небезпечне захворювання для тварин та людей.
Укра!ною до 2010 року тимчасово був заборонений ¿миорт тварин, сировини та продукт1в тваринного походження ¿з кра!н, де це захворювання зареестровано. Це дало позитивний результат, бо на територ1! Украши дане захворювання виявлено не було, але недопущения цього захворювання в подальшому на територ1ю держави потребуе щоденного дотримання певних вимог. Одна з суттевих вимог - це заборона ввозити в Укра!ну з пост1йно неблагополучних кра!н: сировину, продукта та готов! харчов1 продукти, а також корми, кормов! добавки, м'ясне, м'ясо-к1сткове та к1сткове борошно, до складу яких входить б1лок жуйних тварин. KpiM цього, необх1дно дотримуватись заборони згодовувати жуйним тваринам м'ясне, м'ясо-ккткове та к1сткове борошно, до складу якого входить б1лок жуйних тварин.
Допускаеться використання кормового борошна тваринного походження, м' ясного, м'яео-KicTKOBoro, KicTKOBoro борошна та ¿ншо! продукци тваринного походження, що м1стить бшки жуйних, лише для год1вл1 птищ та риби.
1з р1зким пщвищенням ц1н на кормову сировину виробники корм1в прагнуть максимально здешевити виробництво корм1в, за рахунок використання дешевшо! кормово! сировини. Власне тому, за таких обставин, виникають ризики попадания на ринок неяк1сних, фальсиф1кованих та непридатних корм1в. Наприклад, найб1льш поширеним способом фальсиф1кац1! рибного борошна е внесения дешевших компонент1в, таких як корми тваринного походження - борошно м'ясне, юсткове, м'ясо-юсткове, печ1нкове, кров'яне, а також жир ВРХ. Тому ¿снуе потреба пост1йного контролю за наявшстю 61лк1в жуйних тварин у кормах та кормових добавка при реестрацп, ¿мпорт! та застосуванн1 !х в Укра!н1.
©НазарБ. I., 2012
209
За кордоном та в Укра!ш ¿снуе ряд метод1в для контролю наявност1 чи вщсутност1 у кормах тканин жуйних тварин - 1ФА, мжроскотя та ПЛР - анал1з.
Найбшьш точним та об'ективним методом оцшки корм1в та кормових добавок е метод ПЛР.
Матер1али та методи. Починаючи з 2002 року в ДНДК1 ветпрепарат1в та кормових добавок налагоджено контроль якост1 БВД, корм1в та кормових добавок для визначення наявност1 в них бшюв жуйних тварин, котр!, в pa3i шфжування, можуть стати джерелом губчастопод1бно! енцефалопати.
Визначення проводяться за допомогою молекулярно-бюлопчного методу, в основ! якого лежить багаторазове повторения in vitro процесу реплжаци ДНК, що иризводить до ексиериментального нагромадження ДНК у реакцшнш cyMimi.
Головш переваги цього методу - простота, швидккть i висока чутливють, що дозволяе в коротк! термши (до 8 годин) одночасно дослщити велику кшьккть проб.
Визначення наявност1 тканин жуйних тварин проводили у кормах, як1 пщлягали терм1чнш обробщ (рибна мука тощо), бшково-в1тамшних добавках, премжсах, кормах для непродуктивних тварин (kotIb i собак).
Дослщження на наявшсть бшюв жуйних проводили за допомогою тест-системи "БИГ" (РоЫя) методом ПЛР. В основ! методу лежить ампл1ф1кащя специф1чно! дшянки ДНК м1тохондр1ального геному за рахунок багаторазового повторения цикл1в денатураци ДНК у дослщнш npo6i, вщпалу специф1чних ол1гонуклеотидних затравок (праймер1в) i синтезу комплементарного ланцюга ДНК за допомогою Tag пол1мерази. Кшьккть копш фрагмент1в ДНК подвоюеться в геометричнш nporpecii з кожним новим циклом.
Цей метод можна проводити двома способами, а саме при завершенш використовувати електрофоретичний анал1з або ПЛР в реальному 4aci.
Результата дослщжень. Дослщження на наявшсть чи вщсутшсть бшюв жуйних тварин проводились при реестраци та виб1рковому контрол1 ветеринарних препарата, корм1в та кормових добавок.
Було дослщжено 260 зразюв р1зного походження, яю умовно можна роздшити на три групи: перша група — корми для непродуктивних тварин, друга — премшси, бшково-в1тамшш та бшково-мшеральш добавки, комбшорми, третя — борошно рибне та тваринного походження тощо. Продукщя, що пщлягала дослщженню, призначалась для год1вл1 р1зних сшьськогосподарських тварин та птищ.
Анал1з продукта ПЛР проводили методом електрофорезу в 2 %-му агарозному гелг ДНК виявляли в ультрафюлетовому промшш теля забарвлення бромистим етид1ем (фрагмент ДНК для яловичини вщзначали — 680 нуклеотидних послщовностей, а для баранини — 350 н.п..). Анал1з методом ПЛР в реальному 4aci був точшшим i давав змогу виявити кшькюний вмкт ДНК жуйних тварин у дослщжуваному продукт!. В ход1 реакци спостер1гали в реальному 4aci сигнали флюоресценци. Збшьшення сигнал1в викликане використанням специф1чного для дано! ДНК зонду, який под1бно до праймера в
210
ход1 реакцп зв'язуеться з одним i3 ланцюпв ДНК. У процес1 синтезу комплементарного ланцюга, завдячуючи 5' - 3' нуклеазно! активносп Tag ДНК-пол1мерази, зонд розщеплюеться. BiH мштить на 5' юнщ флюоресцентний барвник, а на 3' юнщ — загашувач флюорисценцп. Шсля розщеплення проходить роз'еднання барвника i загашувача, що призводить по Mipi накопичення продукпв реакцп до збшьшення сигналу флюорисценцп. Процес завершения ПЛР обумовлений витратою реагенив при накопиченш специф1чних продукта ампл1ф1кац11. При цьому збшьшення сигналу флюорисценцп припиняеться.
У результат! проведених дослщжень виявлено наявшсть бшюв жуйних тварин у першш rpyni - з 34 проб 4 позитивних (11,7 %), у другш rpyni з 46 проб - 2 позитивних (4,3 %), в третш rpyni з 180 проб - 16 позитивних (8,9 %).
Корми, K0pM0Bi добавки й rnmi продукти, в яких було виявлено бшки жуйних тварин, не були 3apeecTpoBaHi та i'x ввезення в Украшу було заборонено.
За результатами дослщжень було заборонено використання KopMiB, кормових добавок та npeMiKciB в yKpai'Hi, у яких було виявлено бшки жуйних для гoдiвлi сшьськогосподарських тварин i дозволено лише для птищ та риби.
Висновки. При гoдiвлi тварин в yKpai'Hi можна використовувати кормове борошно тваринного походження, м'ясне, м'ясо-KicTKOBe, KicTKOBe борошно та шшу npoflyKuiro тваринного походження, що мштить бiлки жуйних, лише для гoдiвлi nTHui та риби.
Л1тература
1. Диагностика инфекционных звболеваний животных с помощью молекулярно-биологисческих методов / Б. Стегний, В. Бусол, А. Коваленко, Л. Коваленко // Вет.медицина Украши — 2003. — № 5. — С. 20-23.
2. ПЛЛ^агностики в CHCTeMi зaпoбiгaння поширення губчасто! eнцeфaлoпaтii /М. В. Косенко, Т. Р. Левицький, Б. I. Назар // Аграрш BicTi. — 2004. — №3. — С. 10-11.
Summary
Nazar BI, cand. sci (vet) ([email protected]) State Scientific-Research Control Institute of Veterinary Medicinal Products and
Feed Additives
IMITATIONS AND CONTROL OF RUMINANTS PROTEINS USAGE IN
UKRAINE
The article highlights the issue of control over the use of ruminant protein in feed, feed additives and premixes. A determination of the presence-absence of proteins in ruminant products, feed and feed additives at their registration in Ukraine and sampling was conducted.
Key words: ruminants protein, PCR, feed, feed additives.
Рецензент - д.вет.н., професор Гуфрш Д.Ф.
211
