Химический метод определения витамина С Текст научной статьи по специальности «Промышленные биотехнологии»

Для сравнения этих двух методов на производстве было проделано около 100 анализов. В каждой пробе свинец определялся обоими методами. Отбор проб производился в аллонжи, смоченные 7,5%> азотной кислотой; протягивалось 200—300 л испытуемого воздуха со скоростью 10 л в минуту. Часть анализов помещена в табл. 2 (результаты даны в мг/м3).

Как видно из табл. 2, хроматным методом в 200—300 л воздуха определяются концентрации свинца от 0,03 мг/м3 и выше. Без применения растворителя (СН3СООН +!СН3СО(Жа) по хроматному методу в этих условиях определяются концентрации, начиная с 0,05—0,08 мг/м3.

Молибденовый метод более чувствителен и позволяет определять в воздухе рабочих помещений при протягивании тех же 200—300 л воздуха количества свинца в пределах допустимой концентрации в 0,01 мг/м3.

М. А. ХОМУТОВА

Химический метод определения витамина С

Из кафедры общей я пищевой гигиены Ленинградского государственного института для усовершенствования врачей (ГИДУВ)

Наиболее распространенные титрометрические методы определения витамина С (метод Тильманса и метод с KJ03), основанные на окислительно-восстановительных свойствах аскорбиновой кислоты, имеют существенные недостатки. Сопровождающие аскорбиновую кислоту редуцирующие вещества, переходящие в растительные вытяжки, также восстанавливают 2,6-дихлорфенолиндофенол и иодноватокислый калий. С помощью этих методов без удаления редуцирующих веществ полу-.чаются результаты, превышающие действительное содержание аскорбиновой кислоты в продуктах. Кроме того, окраска растительных вытяжек, особенно в ягодах, мешает определению.

Метод обработки растительных экстрактов, предложенный В. А. Де-вятниным и В. М. Дорошенко, не дает полного обесцвечивания их, в чем легко убедиться. Способ обесцвечивания растительных вытяжек по Emmerie и van Eckelen, основанный на обработке их ацетатом ртути с последующим пропусканием через жидкость тока сероводорода и вытеснением последнего током углекислоты, кроме трудности его применения, оказался недостаточно надежным. Работами Н. С. Ярусовой, Н. С. Крамаровой и М. А. Бутом установлено, что вытеснить сероводород из растительных экстрактов током углекислоты полностью не удается. За счет остающегося в экстракте сероводорода, который является сильным восстановителем, получаются завышенные результаты.

Учитывая недостатки указанных способов, мы попытались использовать предложенный нами ранее метод осаждения некоторых редуцирующих веществ и обесцвечивания растительных вытяжек комбинированной обработкой ZnS04 и Ва(ОН)2х для разработки титрометриче-ского способа определения витамина С, основанного на окислении аскорбиновой кислоты солями трехвалентного железа. Подобным способом в разведенных растительных вытяжках (без обесцвечивания) мы пользовались для определения витамина С во время Отечественной1 войны. Применив этот способ к определению витамина С в обесцвечен-

1 Хомутов а М. 'А., Оценка абсолютных колориметров (фотометров) и при-

менение их к исследованию пищевых продуктов (диссертация).

ных экстрактах из ягод (черной смородины, брусники, клюквы), мы внесли в него некоторые изменения.

Принцип способа основан на следующем: железоаммиачные квасцы реагируют с аскорбиновой кислотой, окисляя ее в дегндро-аскорбиновую кислоту, при этом окисное железо восстанавливается в закисное.

1. Ре2 (50^^Н4)г504-24Н20 + С6Н8Ос—>

—► 2Ре504 4- (МН4).,504 + СвНвОв + Н2804 + 24Н.О

2. Ре2(504)3-(^Н4)г504.24Н20 +2КЛ —

— 2Ре504 4- (\'Н4>2504 4- К2504 + +■ 24H.fi

Если к смеси аскорбиновой кислоты и КЛ приливать постепенно раствор железоаммиачных квасцов, то йодистый калий до тех пор не вступает в реакцию с ними, пока не будет окислена вся аскорбиновая кислота. Как только витамин С будет окислен, трехвалентное железо вступает в реакцию с иодистым калием, выделяя из него свободный иод, который с помощью крахмального клейстера может быть обнаружен в ничтожных количествах. Из приведенных реакций видно, что 1 грамм-молекула железоаммиачных квасцов реагирует с 1 грамм-молекулой аскорбиновой кислоты.

Если растворить в дестиллированной воде 5,48 г свежепере-кристаллизованных кристаллов железоаммиачных квасцов1 в литровой мерной колбе, обесцветив желтую окраску раствора добавлением 2,5 мл крепкой азотной кислоты (для исключения закисного железа мы добавляем 2—3 капли 0,01 N раствора КМп4 до слаборозового окрашивания), и затем довести объем-жидкости до метки, то 1 л раствора должен окислять 1 г аскорбиновой кислоты, а 1 мл — 1 мг аскорбиновой кислоты. Титрование точно приготовленных растворов аскорбиновой кислоты в 1,5°/о растворе уксусной кислоты подтверждает теоретические расчеты: на 1 мг аскорбиновой кислоты идет 1,05 мл раствора железоаммиачных квасцов (0,05 мл идет на образование окраски). |

Так как этот исходный раствор довольно крепок, то для титрования его следует развести дестиллированной водой в 4 и 5 раз. 1 мл раствора, разведенного в 4 раза, окисляет 0,25 мг аскорбиновой кислоты. Перед титрованием к исследуемому раствору добавляется 1 мл свежеприготовленного 10% раствора йодистого калия и 0,5 мл 1°/о1 крахмального клейстера. Титрование, особенно к концу, должно производиться медленно и на белом' фоне, чтобы уловить момент появления голубоватой окраски, которая усиливается при стоянии жидкости-Приготовление бесцветных вытяжек. Вытяжки из брусники, клюквы, черной смородины, свеклы, моркови и картофеля мы готовили следующим образом: навеска 10 г измельчается в фарфоровой ступке с небольшим количеством 1,5% раствора уксусной кислоты. Затем содержимое ступки смывается тем же раствором уксусной кислоты в мерный цилиндр и доводится до 100 мл. После перемешивания и 10-минутного экстрагирования Еытяжка фильтруется через бумажный фильтр. 5 мл фильтрата переносится в пробирку большого размера. К этому количеству вытяжки добавляется 2 мл 20% раствора сернокислого цинка и 10—15 мл 5% раствора едкого барита. Плавными движениями жидкость перемешивается и образующийся осадок осаждается на дно пробирки 3—4-минутным центрифугированием (центрифугирование должно производиться немедленно после перемешивания жидкости). рН получающейся смеси равен 6,6—6,8. Добавлением 2п504 и Ва(ОН)2 осаждаются белки, пигменты и редуцирующие веще-

964,48 — мол. вес железоаммиачных квасцов 176 —мол. вес аскорбиновом кислоты

ства: таннины, цистин, цистеин, гидрохинон, пирогаллол и пр. После центрифугирования жидкость с осадка сливается в чистую пробирку и для удаления остатка бария к ней добавляется 2 мл раствора серной кислоты (6 мл НгЭО.! уд. веса 1,84 + 94 мл дестиллированной воды). Образующийся белый осадок тотчас удаляется центрифугированием в течение 5 минут. Бесцветная жидкость переливается в колбу Эрленмейера и после добавления реактивов (1 мл 10% раствора КЛ и 0,5 мл 1 »/о крахмального клейстера) титруется раствором железо-аммиачных квасцов до появления слабоголубого окрашивания.

Примерные расчеты: на 5 мл экстракта из брусники пошло 0,5 мл раствора железоаммиачных квасцов (разведенных в 4 раза). На образование окраски пошло 0,2 мл; 0,5 — 0,2 = 0,3 мл пошло на окисление аскорбиновой кислоты в 5 мл экстракта, что соответствует 0,5 г брусники. На 100 г брусники пойдет 0,3-20- 10 = 60 мл.

Так как 1 мл железоаммиачных квасцов окисляет 0,25 мг аскорбиновой кислоты, то 60 мл окислят 0,25-60=15 мг. Следовательно, в 100 г брусники содержится 15 мг аскорбиновой кислоты.

Для проверки точности метода мы добавляли к экстрактам из брусники, клюквы, свеклы и другим заведомо не содержащим витамина С вытяжкам определенное количество аскорбиновой кислоты и затем под-

Наименование исследованных продуктов Количество аскорбиновой кислоты в мг на 100 г продукта Добавлено аско- би-новой кислоты (в мг) к растите тьному экстракту до обесцвечивании Открыт биновой пссле о в мг э аскор-кислоты бработки в %

Брусника 15.0 _ _

10,0 — — —

Экстракты, не содер- 1,0 0,97 97

жащие витамина С 0 5 0,45 90

1,0 0,86 86

Клюква 6.0 — — —

Чернан смородина 110 0 — — —

То же 115.0 — — —

Свекла 8,0 — — —

Экстракты, не содер- 1,0 0,86 86

жащие витамина С 1.0 0,94 94

Картофель 6,0 — — —

Морковь 4,0 —~

вергали их обесцвечиванию с помощью сернокислого цинка и едкого барита. После обработки можно было открыть титрованием железо-аммиачными квасцами от 86 до 97% добавленной аскорбиновой кислоты. Некоторые данные из проведенных 103 опытов определения витамина С в ягодах и овощах приведены в таблице.

Выводы

Предлагаемый метод определения витамина С в обесцвеченных растительных вытяжках дает возможность определить от 86 до 97% добавленной аскорбиновой кислоты. Благодаря своей простоте метод может быть применен в любой лаборатории.