Характеристика иммунного гомеостазадетей, больных хроническим вирусным гепатитом в Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

© Д.А. Джаррахова УДК 616.523 Д.А. Джаррахова

ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУННОГО ГОМЕОСТАЗА ДЕТЕЙ, БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ В

Институт педиатрии им. К.Фараджевой, Клинический Медицинский Центр (Баку)

Данная работа является фрагменом НИР «Особенности клинико-иммунологического поражения гепато-билиарной системы новорожденных детей при внутриутробных вирусных инфекциях», № гос. регистрации 0107А200014.

Вступление. Реализация внутриутробной инфекции у новорожденного во многом зависит от состояния его иммунитета. Персистенция инфекционных агентов в ранних периодах онтогенеза является провоцирующим фактором для формирования им-мунодефицитных состояний [1, 4, 7, 8].

В последние годы широко признана вирусно-иммунная концепция развития хронических вирусных гепатитов. В основе этих заболеваний лежат нарушения противовирусного иммунитета, во многом зависящие от доминирующего участия клонов Т-лимфоцитов-хелперов (ТИ) 1-го и 2-го типов, различающихся по спектру продуцируемых цитокинов. Первый из них активирует клеточное звено, которое играет решающую роль в защите от гепатотропных вирусов, тогда как ТИ2 стимулирует преимущественно гуморальный иммунитет [2, 3]. Именно нарушение их баланса имеет важное значение в иммунопатогенезе хронизации и прогрессирования вирусных гепатитов [6].

Целью исследования явилось изучение показателей иммунного гомеостаза детей, больных хроническим вирусным гепатитом В.

Объект и методы исследования. Под наблюдением находились 27 детей в возрасте 18 месяцев, больных хроническим вирусным гепатитом В. Больные были разделены на две группы в зависимости от степени активности заболевания. Первая группа включала больных с умеренной, вторая группа - с минимальной активностью патологического процесса. Активность патологического процесса у 11 детей (40,7%) была умеренной, у 16 (59,3%) -минимальной. На момент первого обследования ни один ребенок не получал этиотропную противовирусную терапию.

Клеточный иммунитет оценивался по количеству поверхностных антигенов 003, 004, 008, 0016, 0019 на лимфоцитах периферической крови имму-ноцитохимическим методом; состояние гуморального иммунитета изучалось по уровню сывороточных 1д класса А, М, О, выявляемых методом простой иммунодиффузии в геле. Содержание цитокинов в сыворотке крови (ТЫР-а, !РЫ-а, 11_-4, 11_-8) исследовали методом иммуноферментного анализа.

В качестве контрольных значений были использованы показатели иммунного статуса 15 практически здоровых детей того же возраста.

Статистическая обработка результатов исследования осуществлялась с применением пакета прикладных программ «Microsoft Excel 2000» [5].

Результаты исследования и их обсуждение.

Иммунологическое обследование детей было проведено в возрасте 18 месяцев, когда с полным основанием можно судить о наличии хронического течения заболевания. Анализ полученных результатов показал, что в группе больных детей, как с умеренной, так и с минимальной активностью процесса, отмечался Т-клеточный дефицит (табл.).

Индивидуальный анализ показателей иммунного статуса у обследованных больных установил его отклонения от показателей контрольной группы. При этом отмечалось значительное снижение общего числа Т-лимфоцитов (43,61 ±2,54% в 1-й группе, 51,38±2,96% во 2-й группе против 63,58±1,73% в контрольной группе, р<0,001-0,05), Т-хелперов (26,81±2,13% в 1-й группе, 29,55±2,87% во 2-й группе против 44,57±1,91% в контрольной группе, р<0,05) и Т-супрессоров (12,84±2,38% в 1-й группе, 14,62±1,49% во 2-й группе против 22,34±1,70% в контрольной группе, р<0,05).

Причем уже при минимальной активности процесса наблюдалось снижение субпопуляции CD4+ лимфоцитов периферической крови, участвующих в развитии клеточного иммунного ответа и являющихся продуцентом IL-2 - непецифического сигнала для формирования специфического клона цито-токсических лимфоцитов (CD8+).

Указанные изменения в соотношениях Т-клеток приводили к значительному повышению иммуно-регуляторного индекса CD4/CD8, который был на 22-29% выше, чем в контрольной группе. Такое повышение иммунорегуляторного индекса связано с выраженным дефицитом Т-супрессоров у обследованных больных.

Также обращает на себя внимание факт значительного снижения общего пула Т-лимфоцитов у больных с умеренной активностью патологического процесса (в 1,4 раза по отношению к контролю, р<0,001) по сравнению с группой больных с минимальной активностью процесса (в 1,2 раза по отношению к контролю, р<0,05), что свидетельствует о четкой взаимосвязи со степенью выраженности воспалительного процесса в печени. Анализ содержания Т-хелперов и Т-супрессоров не выявил каких-либо значительных различий в зависимости от фазы активности патологического процесса. Так, независимо от активности процесса, проходящего в печени, в периферической крови преобладали Т-лимфоциты/хелперы, что очевидно связано с

Таблица

Характеристика иммунограммы детей с хронической ИБУ-инфекцией

Показатели Больные с умеренной активностью процесса (П=11) Больные с минимальной активностью процесса (п=16) Контрольная группа (п=15) Достоверность, Р

1 2 3

Т-лимфоциты, 003+ % 43,61 ±2,54 51,38+2,96 63,58+1,73 Р1-2 <0,05 Р1-3 <0,001 Р2-3 <0,05

Т-хелперы, 004+ % 26,81+2,13 29,55+2,87 44,57+1,91 Р1-2 >0,05 Р1-3 <0,05 Р2-3<0,05

Т-супрессоры, 008+ % 12,84±2,38 14,62+1,49 22,34+1,70 Р1-2 >0,05 Р1-3 <0,05 Р2-3 <0,05

Т-киллеры, 0016+ % 9,07+1,42 15,38+1,19 16,51+1,83 Р1-2 <0,05 Р1-3 <0,05 Р2-3 >0,05

В-лимфоциты,Сй19+ % 24,55+2,28 15,61+1,20 23,68+2,75 Р1-2 <0,05 Р1-3 >0,05 Р2-3 <0,05

Иммунорегуляторный индекс, 004+/008+ ед. 2,56+0,17 2,43+0,25 1,99+0,13 Р1-2 >0,05 Р1-3 <0,05 Р2-3 <0,05

1дА, г/л 0,33+0,07 0,61+0,06 0,70+0,08 Р1-2 <0,05 Р1-3 <0,05 Р2-3 >0,05

1дМ, г/л 1,42+0,27 1,23+0,34 0,53+0,07 Р1-2 >0,05 Р1-3 <0,001 Р2-3<0,001

!дй, г/л 8,97+0,68 9,16+0,71 5,81+0,64 Р1-2 >0,05 Р1-3 <0,05 Р2-3 <0,05

миграцией цитотоксических Т-лимфоцитов/супрес-соров в очаг репликации вируса-возбудителя.

Следовательно, у обследованных больных были выявлены изменения содержания субпопуляций лимфоцитов периферической крови, отвечающих за развитие клеточного иммунного ответа, что, возможно, имеет решающее значение в развитии длительной персистенции вируса и хронизации вирусного гепатита. Снижение относительного количества общих Т-лимфоцитов и Т-хелперов свидетельствует о напряженных реакциях клеточного иммунитета при хронической HBV-инфекции. Изменения в содержании Т-супрессоров могут предполагать как дефект цитотоксической функции лимфоцитов, ведущий к нарушению в клеточно-обусловленном иммунитете, так и повышенную миграцию этих клеток в печень, где они выполняют функцию защиты от НВУ Нарушение гомеостаза в клеточном звене иммунитета у детей с HBV-инфекцией характеризуется трансформацией процессов дифференцировки Т-клеточного звена, приводящих к подавлению обычного иммунного ответа и развитию вторичного иммунодефи-цитного состояния.

Возникновение, развитие, течение и исходы хронических вирусных гепатитов в значительной мере определяются совершенством механизмов

специфического иммунитета - клеточного и гуморального. Однако, в становлении клинической картины болезни, особенностей течения патологического процесса важную роль играют и неспецифические факторы иммунологической зашиты, среди которых внимание привлекают натуральные киллеры (0016+). Натуральные киллеры вовлечены во многие процессы, включая иммунорегуляцию, контроль инфекционных заболеваний, они являются первой линией защиты, лизируя вирусинфици-рованные клетки. Натуральные киллеры являются основными эффекторами врожденного иммунитета и наряду с нейтрофилами представляют первую линию обороны от чужеродных агентов, обеспечивая реализацию иммунных реакций еще до развития приобретенного иммунитета.

Согласно полученным результатам, у больных при умеренной цитолитической активности процесса установлено существенное снижение числа Т-лимфоцитов/киллеров фенотипа 0016+ (до 9,07±1,42% против 15,38±1,19% в группе сравнения и 16,51±1,83% в контрольной группе, р<0,05). Напротив, минимальная цитолитическая активность сочеталась с нормальным количеством 00 16+ (15,38±1,19% против 16,51 ± 1,83% в контроле, р>0,05). Таким образом, снижение у всех больных с

ПГ/МЛ

300-1

250

200

254,5

ІРІЧ-а

ІІ.-8

ТРМ-а

ІІ.-4

■ Больные с умеренной активностью процесса ■ Больные с минимальной активностью процесса ■ Контрольная группа

Рис. Содержание цитокинов в сыворотке крови детей с хронической ИВУ-инфекцией.

умеренной активностью процесса содержания лимфоцитов, экспрессирующих маркеры 004+ и 0016+, свидетельствует о недостаточности клеточного звена иммунитета.

В отношении содержания В-лимфоцитов в периферической крови было установлено, что в группе больных с умеренной активностью патологического процесса уровень В-лимфоцитов (0019+) оставался в пределах нормы (24,55±2,28% против 23,68±2,75% в контроле, р>0,05) и снижался в группе больных с минимальной активностью процесса (15,61±1,20% против 23,68±2,75% в контроле, р<0,05).

У обследованных детей, нами также были выявлены особенности продукции иммуноглобулинов в сыворотке крови. При этом уровни иммуноглобулинов классов А, М и О у больных как с минимальной, так и с умеренной активностью процесса были достоверно различны по сравнению с контрольными значениями. Так, умеренная активность цито-литического процесса в печени сопровождалась значительным снижением уровня 1дА (0,33±0,07 г/л против 0,70±0,08 г/л в контрольной группе, р<0,05) и повышением 1дМ (1,42±0,27 г/л против 0,53±0,07 г/л в контрольной группе, р<0,001) и 1дО (8,97±0,68 г/л против 5,81±0,64 г/л в контрольной группе, р<0,05) в сыворотке крови. При минимальной активности процесса уровень 1дА оставался в пределах нормы (0,61±0,06 г/л, р>0,05) при повышенном синтезе 1дМ (1,23±0,34 г/л, р<0,001) и 1дО (5,81±0,64, р<0,05).

Клеточно-опосредованный иммунный ответ, также как и гуморальный ответ, управляются и регулируются цитокинами. Учитывая важную роль цитокинов в регуляции иммунного ответа, нам представилось интересным изучить изменения ци-токинового статуса у больных.

Изучение параметров цитокинового статуса показало, что у обследованных детей наблюдалась выраженная тенденция к снижению !РЫ-а и существенное снижение уровня провоспалительного цитокина 11_-8 в сравнении с данными контрольной группы, не зависимо от фазы активности процесса.

Данное изменение сочеталось с активацией синтеза ТЫРа, а также !_-4 (рис.).

При этом значительно более высокие показатели регистрировались при умеренной активности процесса. Так концентрация ИЛ-4 в сыворотке крови детей с умеренной активностью патологического процесса была повышена в 3 раза, а ТЫРа - более чем в 12 раз по сравнению с контролем (р<0,001), что указывает на нарушение баланса регуляторных процессов, ответственных за поддержание нормального уровня клеточной активности.

Одним из условий, способствующих формированию хронического вирусного гепатита, признается изменение в системе а-интерферона, а именно - уменьшение его синтеза в лимфоцитах и макрофагах.

!РЫ-а играет важнейшую роль в осуществлении противовирусной защиты организма, обладает широким спектром иммунологической активности: стимулирует фагоцитоз, цитотоксическую активность ЫК-клеток, выработку цитокинов, эффектор-ных клеток иммунной системы, является мощным ингибитором активной репликации вирусов.

Выработка !РЫ-а относится к ранним событиям иммунного ответа, осуществляется активированными макрофагами под действием чужеродного антигена. У обследованных детей уровень !РЫ-а был достоверно низким и составил в фазу умеренной активности 1,84±0,67 пг/мл, а фазу минимальной активности - 1 31±0,17 пг/мл (в контроле - 9,6±7,3 пг/мл, р<0,05).

Повышение значений цитокина ИЛ-4 в сыворотке крови больных является косвенным признаком активного участия гуморального иммунного ответа в патогенезе заболевания и способствует активации В-лимфоцитов. Анализ полученных результатов показал, что средняя концентрация в крови !_-4 была в 5 раз выше у больных с умеренной активностью процесса, чем с минимальной.

Об активности воспалительной реакции в ткани печени свидетельствует повышение продукции ТЫРа. У всех наблюдавшихся больных с умеренной

активностью цитолитического процесса было повышено содержание ТЫРа в крови в 3 раза по сравнению с больными с минимальной активностью, что является показателем активации макрофагального звена иммунитета и неспецифическим признаком воспаления.

Выводы. Таким образом, у детей, больных хроническим вирусным гепатитом В, отмечены изменения со стороны клеточного, гуморального иммунитета и цитокиновой регуляции, свидетельствующие о выраженности и глубине композиционных нарушений в различных звеньях защиты в единой

биологической системе организма. Полученные результаты позволяют сделать предположение о том, что важен не сам факт повышения или снижения уровня цитокинов, а их динамика и соотношение оппозиционных пулов. Дисбаланс цитокинового статуса поддерживает хроническое иммунозависимое воспаление, а также развитие интерлейкин-зависи-мого вторичного иммунодефицитного состояния.

Перспективы дальнейших исследований. Проводимые исследования позволят усовершенствовать методы диагностики и лечения детей, больных хроническим вирусным гепатитом В.

Список литературы

1. Баранов А.А. Диагностика и лечение хронических вирусных гепатитов В, С и Д у детей : Пособие для врачей. / А.А. Баранов, Б.С. Каганов, В.Ф. Учайкин [и др.]. - Москва, 2003. - 84 с.

2. Каплина Н.А. Цитокиновый профиль сыворотки крови при хроническом вирусном гепатите В и С у детей / Н.А.Каплина // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2007. - Т. XVII, № 5. - С. 112.

3. Каплина Н.А. Особенности биохимических и иммунологических нарушений при хронических вирусных гепатитах В и С у детей / Н.А. Каплина, Е.И. Шабунина, Е.А. Жукова // Сибирский медицинский журнал. - 2008. - Т. 23, № 1 (Вып. 2). - С.83-88.

4. Нисевич Л.Л. Внутриутробная инфекция: мать - плацента - плод / Л.Л. Нисевич // Детские инфекции. - 2008. - № 2. -С. 9 -13.

5. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ Statistica. М., 2000.

6. Шабунина Е.И. Алгоритм диагностики хронических гепатитов у детей: медицинская технология. / Е.И. Шабунина, Е.А. Жукова, С.В. Переслегина. - Н.Новгород, 2007. - 24 с.

7. Chang M.H. Natural, history of hepatitis В virus infection in children / M.H. Chang // J. Gastroenterol. Hepatol. - 2009. - Vol.15. -P.16-19.

8. Lok A.S. Chronic hepatitis В / A.S. Lok // New Engl. J. Med. 2002. - Vol. 346 - Р1682-83.

УДК 616.523

ХАРАКТЕРИСТИКА ІМУННОГО ГОМЕОСТАЗУ ДІТЕЙ, ХВОРИХ НА ХРОНІЧНИЙ ВІРУСНИЙ ГЕПАТИТ В

Джаррахова Д.А.

Резюме. Були вивчені деякі пapaмeтpи імунного гoмeoстaзy 27 дітей, xвopиx Ha xpoнiчний вipyсний rena-тит В. Встaнoвлeнo, що y дітей, xвopиx Ha xpoнiчний вipyсний гегатит В, відмічені зміни з 6оку клітинного, гу-мopaльнoгo імунітету і цитокиновоЇ peгyляцiЇ, що свідчить npo виpaжeнiсть і глибину пopyшeнь в piзниx лaн-Kax імунного зaxистy opгaнiзмy. Різні зміни пapaмeтpiв імунноЇ системи xвopиx дітей aсoцiювaлися з piзнoю aктивнiстю пaтoлoгiчнoгo гфоцесу.

Ключові слова: вipyсний гегатит В, діти, імунітет.

УДК 616.523

ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУННОГО ГОМЕОСТАЗАДЕТЕЙ, БОЛЬНЫ1Х ХРОНИЧЕСКИМ ВИРУСНЫМ ГЕПАТИТОМ В

Джаррахова Д.А.

Резюме. Были изучены HeraTOpbie пapaмeтpы иммунного гoмeoстaзa 27 детей, больные xpoничeским виpyсным ге^титом В. Устaнoвлeнo, что у детей, больные xpoничeским виpyсным гегатитом В, отмечены изменения со стopoны клеточного, гyмopaльнoгo иммyнитeтa и цитокиновой peгyляции, свидетельствующие о вы^женнос™ и глубине нapyшeний в paзличныx звeньяx иммунной зaщиты opгaнизмa. Paзличныe изменения пapaмeтpoв иммунной системы больные детей aссoцииpoвaлись с paзличнoй aктивнoстью na-тологического пpoцeссa.

Ключевые слова: виpyсный гегютит В, дети, иммунитет.

UDC 616.523

The Characteristic Of The Immune Homeostasis Of Children Sick Of The Chronic Virus Hepatitis Of Century

Dzharrahova D.A.

Summary. Some parametres of an immune homeostasis of 27 children sick of a chronic virus hepatitis В. specify, that in children with chronic virus hepatitis В have been studied changes from cellular, humoral immunity and cytokine regulation, testifying to expressiveness and depth of infringements in various links of immune protection of an organism are noted. Various changes of parametres of immune system of sick children associated with various activity of pathological process.

Key words: virus hepatitis В, children, immunity.

Стаття надійшла 31.05.2012 р.

Рецензент - проф. Крючко Т.О.