CC BY
42
ГЕНОТЕРАПИЯ БОЛЬНЫХ ДИССЕМИНИРОВАННОЙ МЕЛАНОМОЙ КОЖИ И МЕТАСТАТИЧЕСКИМ РАКОМ ПОЧКИ С ПОМОЩЬЮ АУТОЛОГИЧНЫХ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК, МОДИФИЦИРОВАННЫХ ГЕНОМ TAG7
В.М. Моисеенко, И.А. Балдуева, А.Б. Данилова, А.О. Данилов, Н.В. Тюкавина, С.С. Ларин1, С.Л. Киселев1, Р.В. Орлова, В.В. Анисимов, А.И. Семёнова, Л.А. Щёкина, Г.И. Гафтон, В.А. Кочнев, А.С. Барчук, С.В. Канаев, К.П. Хансон, Г.П. Георгиев1
НИИ. онкологии им. проф. Н.Н.Петрова, г. Санкт-Петербург Институт биологии гена РАН, г. Москва1
Одним из эффективных способов генерации специфического противоопухолевого иммунитета является создание вакцин на основе аутоло-гачных модифицированных опухолевых клеток [2,21, 26]. Модификация опухолевых клеток используется для усиления их иммуногенности, что позволяет индуцировать клоногеннуго пролиферацию эффекторных клеток и/или усиливать уже существующий противоопухолевый иммунный ответ. В качестве одного из наиболее перспективных молекулярно- биологических подходов к созданию противоопухолевых вакцин рассматривается введение в опухолевую клетку генов некоторых цитокинов (интерлейкины (ИЛ)-2,7,12; гранулоцитарно-макрофагалъный коло-ниестимулирующий фактор (ГМ-КСФ) и др.). После блокады пролиферативяых способностей облучением такие модифицированные клетки могут в течение месяца существовать в организме, продуцируя цитокины, стимулирующие противоопухолевый иммунитет [13]. Одним из подобных агентов для вакцинотерапии опухолей считается продукт недавно выделенного и клонированного гена tag 7 [14].
В экспериментах было показано, что белок Tag 7, первоначально полученный из клеток адено-карциномы молочной железы мыши, обладает свойством подавлять рост опухоли, причем степень подавления роста опухоли коррелирует со степенью экспрессии этого гена [13, 15]. Этот протеин обладает выраженной гомологией с ка-
талитическим доменом лизоцима, слабой гомологией с членами семейства фактора некроза опухолей и представляет собой секретируемый белок, который выявляется в мембранной фракции клеток и в культуральной среде. Он обладает цитотоксичностью по отношению к целому ряду линий опухолевых клеток, причем гибель клеток осуществляется путем апоптоза [3, 13]. Экспериментальные данные дают также основания предполагать, что, помимо прямого токсического действия, этот белок активирует посредством АПК лимфоциты, которые атакуют и разрушают как модифицированные, так и неизмененные опухолевые клетки [12]. Кроме того, в противоопухолевое действие вовлечены В-лимфоциты [13]. Таким образом, есть основания считать, что трансфекция аутологичных опухолевых клеток геном tag? может быть использована для терапии злокачественных новообразований человека.
В ряде клинических исследований установлено, что наиболее эффективно применение методов вакцинотерапии у больных диссеминиро-ванной меланомой кожи и раком почки. При этом результаты лечения сопоставимы с современной химио- и иммунотерапией [6, 25]. По этой причине нами проведена оценка токсичности и эффективности вакцин на основе модифицированных геном tag? аутологичных опухолевых клеток у больных меланомой кожи и раком почки.
СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2004. №2-3 (10-11)
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Б исследование было включено 39 пациентов с гистологически верифицированным диагнозом диссеминированной меланомы кожи (34 больных) и рака почки (5 больных), получавших лечение в НИИ онкологии им. проф. Н.Н. Петрова за период с 2001 по 2003 г. Клиническую и иммунологическую оценку эффективности генотерапии провели у 28 пациентов (24 больных меланомой кожи и 4 больных раком почки), из них 22 пациента получали паллиативную вакцинотерапию и б больных меланомой кожи — адъювантную вакцинотерапию после полных циторедуктивных операций. Семь пациентов отказались принимать участие в исследовании на начальных этапах, у 4 больных выявлено быстрое прогрессирование заболевания до начала лечения.
Б табл. 1 представлена клиническая характеристика пациентов, получавших вакцинотерапию. Средний возраст больных составил 44,3 ± 12,3 года (от 21 до 71 года). Перед началом вакцинотерапии все пациенты подверглись хирургическому лечению. Полные циторедуктивные операции выполнены 6 больным (21%), частичные — 22 больным (79%) в объеме лимфаденэк-томии или иссечения транспортных метастазов.
Пять пациентов (18%) получили химиотерапию дакарбазином, 3 (14%) - иммунотерапию интер-фероном-а, 2 пациента (7%) получили химио- и иммунотерапию и 1 больному (4%) ранее проводилась специфическая иммунотерапия аутологич-ной немодифицированной вакциной с БЦЖ.
На момент начала вакцинотерапии у 14 больных (64%) диагностированы висцеральные метастазы, невисцеральные поражения выявлены у 8 пациентов (36%). Все пациенты прошли комплексное обследование, включающее стандартные клинические, лабораторные, рентгенологические и ультразвуковые методы исследования. Общее состояние больного оценивалось по 5-балльной шкале ВОЗ (табл. 1).
В процессе вакцинотерапии осуществлялся мониторинг состояния клеточного иммунитета с оценкой относительного и абсолютного содержания основных субпопуляций Т-лимфоци-тов (CD3, CD4, CDS), В-лимфоцитов (CD20),
Т я б л и Ц а Клиническая характеристика пациентов, получавших вакцинотерапию аутодогичными опухолевыми клетками, модифицированными геном tag?
Характеристика Количество пациентов (п=28)
Средний возраст,, годы 44,3±12,3 (от 21 до 7
Пол; * мужчины • женщины 15 (54%) 13 (4Й%)
Характеристика опухоли: * мелаяома кожи • рак почки 24 (86%) 4 (14%)
Общее состояние больного на момент начала иммупотератгм (по критериям ВОЗ), баллы: • 0 * 1 • 2 12 (43%) 6 (21%) 10 (36%)
Предшествующее лечение: 1. Циторедуктивные операции: * частичные • полные 2. Системное лечение: • химиотерапии • иммунотерапии • химио + иммунотерапия 22 (79%) 6 (21%) 5 (18%) 4 (14%) 2 (7%)
Локализация метастгпов (п-22): • лёгкие • печень • лимфатические узлы, мягкие ткани • другие локализации (надпочечники, поджелудочная железа, плевра) 12 (54%) 3 (14%) 15 (68%) У (14%)
НК-клеток (CD16), активированных Т- и В-лим-фоцитов ^25, CD30, CD38, CD71, CD95). Для этого исследовали лимфоциты периферической крови с помощью соответствующих мо-ноклональных антител ("Сорбент", Россия; "DAKO", Дания) методом непрямой иммуно-флюоресценции, уровень иммуноглобулинов классов G, А, М в сыворотке крови больных -методом радиальной иммунодиффузии, циркулирующие иммунные комплексы ~ методом осаждения полиэтиленгликолем, фагоцитарную активность нейтрофилов и моноцитов с частицами латекса с расчетом фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа, метаболическую активность нейтрофилов и моноцитов в НСТ-те-
СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2004. №2-3 (10-11)
сте, функциональную активность Т-лимфоци-тов по их ответу на митоген конковалин Л. Тесты проводили на базе городской больницы № 31 г, Санкт-Петербурга.
Технология приготовления вакцины на основе аутологичных генетически модифицированных опухолевых клеток предполагает дезагрегацию образцов опухоли, культивирование клеток, их трансфекцию, анализ экспрессии введенных генов с помощью иммуноблотинга и облучения клеток с целью девитализации.
Дезагрегация образцов опухоли. Использовался механический способ дезагрегации опухолевой ткани. Для этого опухолевые образцы разделяли на фрагменты 2—3 мм, помещали на стерильные ножи и подвертели диссоциации в течение 0,5-1 мин. Затем клеточную суспензию профильтровывали и осаждали центрифугированием при 1000 об/мин в течение 10 мин. Далее суспензировали в среде для культивирования и переносили в культуральную посуду.
Культивирование опухолевых клеток. Полученные опухолевые клетки культивировали при 37°С, 5% СО2 и 98% влажности в пластиковых флаконах (Sarstedt, ФРГ). Для культивирования использовали питательную среду DMEM/F12 (Биолог, РФ), содержащую 20% сыворотки эмбрионов крупного рогатого скота (СЭКРС) (Биолог, РФ), 20% кондиционированной среды культуры фибробластов легких эмбриона человека, трансферрин, инсулин, селен в стандартной дозе (Invitrogen, США).
Трансфекция опухолевых клеток. Для проведения модификации геном tag? опухолевых клеток in vitro использовали метод транс-фекции с помощью двух модификаций липо-сом. Рекомендации по проведению липофекции и препараты липосом предоставлены разработчиками [24]. Для анализа экспрессии введенных генов применяли генетические конструкции, содержащие ген (3-галактоз ид азы и зеленого флюоресцентного белка GFP, синтез продуктов которых выявляли через 24-72 ч после транс-фекдии. Эффективность трансфекции оценивали по соотношению окрашенных (трансфе-цированных) клеток общего количества клеток. После определения оптимальных условий осуществляли трансфекцию клеток меланомы и рака почки геном tag 7, максимальное значение
которой составило 30%, минимальное - 4%, среднее значение - 12,0 ± 6,5%. Далее тестировали клеточные образцы больных на присутствие белка Tag 7 с помощью электрофореза в ДНС-ПААГ [15] и иммуноблот-анализа [4].
Приготовление вакцины на основе аутологичных опухолевых клеток, модифицированных геном tag 7. Трансфецированные опухолевые клетки каждого пациента, экспрес-сирующие белок Tag 7, подсчитывали Б камере Горяева и замораживали в криосреде, содержащей 10% диметилсульфоксида, 40% СКРС, 50% DMEM. В день вакцинации клетки в количестве 107 [10] размораживали, огмывали центрифугированием в трех порциях физиологического раствора, облучали на терапевтическом аппарате "Рокус-у" Сово 1,25 MeV при 2000 сГр (мощность дозы 0,99 сГр/с) [7] с целью блокады пролиферации опухолевых клеток.
Приготовленную вакцину вводили строго внутрикожно паравертсбрально в 3 точки на расстоянии 3 см друг от друга. В 4-ю точку вводили нетрансфецированные опухолевые клетки. Полный курс лечения состоял из 6 введений вакцины с интервалом 21 день.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
В зависимости от клинического состояния больных, переносимости вакцинации, количества материала для вакцинации больные распределились следующим образом: шесть вакцинаций получили 13 больных (46%), 5 введений вакцины - 1 больной (4%), 4 введения - 4 больных (14%), 3 введения — 4 больных (11%), 2 введения - 3 больных (11%) и 1 введение аутологичной вакцины - 3 пациента (11%). Преждевременное завершение лечения было обусловлено прогрес-сированием заболевания у 14 больных (50%) (табл. 2). Ни у одного из пациентов не отмечено ухудшение самочувствия и побочных явлений (лихорадки, регионарной лимфаденопатии, изъязвлений в месте инъекций, аллергических и аутоиммунных реакций, желудочно-кишечных расстройств), связанных с введением вакцины.
Полный и частичный регресс (уменьшение метастатических очагов менее чем на 50% (критерии ВОЗ, 1998) зарегистрирован не был, в
СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2004. №2-3 (10-11)
n
E
tn
П §
да
0 x
1 О
я о
S
5S
> а
£
fj
I,
Т а б л и и а 2
И Или виду ильная характеристика больных, получавших нл«иу потеря пи ю ayTOAOi ичной вакциной, модифицированной геном tag 7,
эффективность трансфекции опухолевых клеток и результаты лечения
с Till г опухоли 11 рслшествуго! цес лечение Локализация метастазов Эффектив-ность трансфекшш опухолевых клеток Коли чес: но вдгядананпй Ответ на вакцинацию
№ Возраст, пол ГЭГ Клинический эффект Время до nporpecciipi вания
1 2 3 з 6 7 8 9 10 11
1 21, м Меланомя Хирургическое лечение 15 6 fie о Пр. - 8 мае
2 48. ж Меланома Хи рур гическое лечение 30 6 + - 21 мсс+
3 53, м Меланома Хирургическое лечение, иляьгунсУгерйпяж 18 6 + Стабил из ация 7 мес
4 34, ж Меланома Хи рур1 пческое лечение Мягкие ткани 4 6 "7 Стабилизация 5 мес
5 35, м Me лап ома Хирургическое лечение 12 в + - 4,5 мес
6 33, м Меланома Мягкие ткани 20 6 + Стабилизация 5 мее
7 36, м Рак почки Лимфатичее кие узлы, плевра, легкие ¡0 6 + Прей рессироюянн е
S 57, ж Рак почки Легкие 22 6 «и (,табил изация (минимальный регресс <50%) 12 мес
9 5Й, м Мел ал ом я невыясненной первичной локализации Мягкие ткани 15 4 Прогресси рование
10 4&, ы МеланОада Хирургическое лечение Ншиючечшга, лёгкие 8 4 + Стабилизация 5 мес
11 31,ж Меланома Хирургическое лелгепяйхично- тераиия, и ммунотерш и ш Мягкие 'гкаця, лимф атн чески с узлы 7 4 Протрсссираваии е
12 62, м Меланома Хирур пичес кос лечение Мягкие ткани, л и мфати чесше узлы, легкие 12 3 Прог рессированме
13 46, ж Меланома Хи рурги нее кое лечение, химиотерапия Лимфатические узлы брыжейки 5 3 Прея реешреванйе
СП
00
со §
§
1 g
£ СП
I I
ь
0 £
1
Я*
Й
а
|
£ I
Ч
60 В.М. МОИСЕЕНКО, ИЛ. БАЛДУЕВА, А.Б.ДАНИЛОВА, А.О.ДАНИЛОВ, Н.В. ТЮКАВИНА И ДР.
том числе и у больных, получивших максимальное (6) количество вакцинаций. Стабилизация процесса наблюдалась у 7 (32%) пациентов (6 больных меланомой кожи и 1 больная раком почки) (табл. 2). Средняя продолжительность эффекта составила 6,8 мес. У 1 больного меланомой кожи с метастазами в мягких тканях эффект продолжается в течение 13 мес. У 1 больной раком почки зарегистрирован минимальный регресс метастазов в легких (регресс
<50%) продолжительностью 12 мес. У б больных с высоким риском развития рецидива после полных циторедуктивных операций средняя продолжительность безрецидивного периода составила 9,6 мес (от 4 до 21 мес) от начала вакцинотерапии. При анализе показателей выживаемости выявлено, что медиана выживаемости пациентов, получавших вакцинотерапию, составила 6,5 мес от начала лечения, средняя продолжительность жизни 8,1 мес (95% а 5,9-10,2 мес) (рис. 1).
В процессе лечения у 16 (57%) из 24 больных (из них - 3 больных раком почки и 13 больных меланомой кожи) через 48—72 ч после введения вакцины в местах инъекции модифицированных геном tag? аутологичных опухолевых клеток выявлена местная реакция в виде участков гиперемии, которая могла быть расценена как реакция гиперчувствительносги замедленного типа (ГЗТ),
однако при этом специальных иммунодиагнос-тических анализов не проводилось. Следует отметить, что у больных раком почки остаточные явления ГЗТ сохранялись более 20 дней. У ; 4 пациентов (19%) ГЗТ не определяли.
В некоторых исследованиях эффективности противоопухолевой вакцинотерапии отмечено наличие корреляции между интенсивностью ре-
акции ГЗТ и продолжительностью жизни больного. Б частности, при изучении клинических эффектов при вакцинации аутологичными опухолевыми клетками, применявшейся как адъю-вантное лечение для 43 пациентов с меланомой кожи III ст., при размере участка гиперемии более 10 мм медиана выживаемости составила 17 мес, в то время как для пациентов с отрицательной или слабой реакцией — 9 мес [16].
При анализе результатов иммунологического обследования было установлено, что вакцинотерапия вызывает иммунный ответ на введение опухолевых клеток у 91,6% (22 из 24) первично иммунизированных пациентов. У больных меланомой кожи со стабилизацией процесса (п=12) и прогрессированием заболевания (п—12) выявили иммунологически различный ответ на проводимую вакцинотерапию (табл. 3).
Таблица 3
Иммунологические показатели больных меланомой кожи 8 процессе вакцинотерапии аутологичными опухолевыми клетками, модифицированными геном tag 7
До вакцинации После 1-й вакцинации После 2-и вакцинации
SD (п-11) (я 10» кл/л) PD (а-10) (х кл/л) SD (а~9) (х 10' кл/л) РП (п-7) (х 10" кл/л) SD (п=9) (■х 10' кл/л) PD (о=5) (х 1 CP кл/л)
СШ 1,03+0,12 1,21 ±0,08 1,16±0,11 1,01 ±0,02 l,09±ü,ll 0,83+0,03*
CD 4 0,5 S±U,U8 0,6У±0,08 0,71 ±0,05 0,56±0Д5* 0,65 ±0,21 0,43±0,02*
CD8 0,43 ±0,09 0,53±0,08 0,52+0,05 0,5010,12 0,4310,06 0,3910,04
CD) 6 0,22±0,05 0,22±0,02 0,21±0,03 0,13±0,01* 0,2510,05 0,13±0,04*
CD20 0,19+0,06 0,15±0,03 0,17±0,03 0,13±0,03 0,1710,03 0,10±0,02
CD25 0,15±0,03 0,1011),01 0,20+0,04 0,12+0,05' 0,15±0,04 0,04±0,01*
с:пзя 0,39+0,07 0,23+0,07 0,39±0,09 0,25±0,06 0,31+0,04 0,29±0,11
CD7] ОД5±0,Об 0,11 ±0,03 0,07±0,02 0,03±0,01 0,12±0,03 0,09±0,04
CD95 0,17±0,04 0,16+0,04 0,24±0,07 0,05 ±0,01 0,26±0,04 0,15+0,07*
Примечание; * - р<0,05;
SD - стабилизация процесса;
PD- прогрессировать заболевания.
До вакцинации у этих групп больных абсолютное содержание основных популяций и субпопуляций лимфоцитов в периферической крови находилось практически на одном уровне. Через месяц после 1 -и вакцинации у всех обследованных больных наблюдали увеличение общего количества Т-лимфоцитов, преимущественно за счет увеличения числа Т-хелперов (CD4) и цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8) (табл. 3). Б то же время имела место тенденция к снижению абсолютного содержания В-лимфоцитов (CD204) и РЖ-клеток (CD16+). После 2-й вакцинации у больных с прогрессированием заболевания содержание CD3+ и СВ4-клеток достоверно уменьшилось по сравнению с исходными значениями (1,01 ± 0,02 и 0,56 + 0,15, соответственно, р<0,05), а у больных со стабилизацией процесса оставалось ш более высоком уровне, чем данные параметры до начала лечения (1,16 ± 0,11 и 0,71 + 0,05, со-
ответственно, р<0,05) (табл, 3). Абсолютное содержание цитотоксических Т-лимфоцитов достоверно не изменилось (CDS'), в то время как содержание CD16y больных с прогрессирова-сгием заболевания было ниже, чем у больных со стабилизацией (р<0,05). Количество лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности рецепторы активации и антиген CD95, имело тенденцию к увеличению в процессе вакцинотерапии у больных со стабилизацией процесса, в то же время у больных с прогрессированием заболевания оставалось на одном уровне или снижалось (табл. 3). Функциональная активность лимфоцитов, определяемая по их ответу на ми-тогены конконовалин А (Кон А) и фитогемаг-глютинин (ФГА), после 2-й вакцинации была достоверно ниже у больных с прогрессированием заболевания по сравнению с больными со стабилизацией процесса (41,8 ± 0,9 и 53,8 ± 4,5; 57,8 ± 4,2 и 67,1 ± 0,4, соответственно) (рис. 2).
СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2004. №2-3 (10-И)
При выявлении прогрессировали"" заболевания пациентам прекращали вакцинотерапию и переводили их на другой вид лечения. Пациенты, у которых развился клинический ответ на проводимую вакцинотерапию, получили полный курс лечения, что дало возможность более полно проанализировать иммунологические параметры, которые через 1 мес после окончания вакцинотерапии возвращались к исходному уровню. Это указывает на необходимость
проведения повторных курсов вакцинации. Б целом можно сказать, что у всех обследованных пациентов с меланомой кожи развивался иммунологический ответ на проводимую вакцинотерапию, однако именно у тех больных, у которых после курса вакцинотерапии наблюдали стабилизацию процесса, имела место более выраженная активация клеточного звена иммунной системы. В том случае, когда проводимая вакцинотерапия не оказала существенного влияния на опухолевый процесс, кратковременный подъем
рассматриваемых параметров перед 2-й вакцинацией сменился падением показателей.
На данном этапе исследований из 4 больных раком почки, получивших курс вакцинотерапии генетически модифицированными опухолевыми клетками, только у одной пациентки, 57 л., по данным компьютерной томографии наблюдалась стабилизация (регресс <50%) размеров метастазов в легких после лечения, при этом диаметр наибольшего очага уменьшился с 13 до 7 мм. Сравнение содержания СБ3+, СБ4"1", СБ8+, СБ16 и СБ20 "лимфоцитов в периферической крови этой больной и трех больных с прогрессией заболевания говорит о наличии аналогичных вышеописанным изменений иммунной системы в процессе вакцинотерапии (рис. 3 А, Б).
Тесты на определение функциональной активности лимфоцитов показали снижение относительного содержания лимфоцитов, реагирующих на Кон А у больных с прогрессирова-
нием заболевания, а у больной с клинически выраженной стабилизацией опухолевого процесса относительное содержание СБ3+ лимфоцитов, реагирующих на Кон А и ФГА, имело тенденцию к увеличению (рис. 4). У ряда пациентов мы не обнаружили корреляции между ответом иммунной системы и наличием клинических эффектов от проводимой вакцинотерапии. В частности, у больного Г., 36 л., с диагнозом рак почки с метастазами в левые надключичные, правые бронхопульмональные, забрюшинные лимфоузлы, плевру, печень наблюдали ярко выраженную реакцию ГЗТ после каждого введения вакцины, увеличение содержания цитотоксических Т-лимфоцитов (СВ8"'")), активированных Т- и В-клеток (СБ25 , СБ30 ), рост функциональной активности лимфоцитов по их ответу на митоген Кон А. Однако клинически имело место бурное прогрессирование заболевания независимо от проводимого лечения.
Отсутствие объективных клинических эффектов от проводимой терапии (полный и частичный регресс) может быть связано с рядом причин: распространённостью опухолевого процесса, наличием метастатического поражения жизненно важных органов (61,9%), ослабленным общим статусом больных (на момент начала лечения 42,9% пациентов имели статус 2 в соответствии с критериями ВОЗ), предшествующим лечением (химио- или лучевой терапией). Кроме того, известно, что эффективность использования модифи-
цированных цитокином опухолевых клеток для индукции противоопухолевого иммунитета зависит от количества продуцируемого цитокина [9]. Поэтому одной из причин отсутствия выраженных клинических эффектов от проводимой терапии может быть недостаточная эффективность применявшегося липосомного метода трансфек-ции опухолевых клеток геном tag 7.
Очевидно, что иммунотерапия аутологичной вакциной будет более эффективна у больных с небольшой опухолевой массой, а также у боль-
В.М. МОИСЕЕНКО, И.А. БАЛДУЕВА, А.Б. ДАНИЛОВА, А. О. ДАНИЛОВ, Н.В. ТЮКАВИНА И ДР.
ных с высоким риском развития рецидива после хирургического лечения. Учитывая наличие соответствующего иммунологического эффекта, именно эта группа больных должна быть объектом для вакцинотерапии с помощью опухолевых клеток, модифицированных геном tag/,
В настоящее время известны результаты клинических и иммунологических исследований I— I! фазы вакцин, приготовленных на основе опухолевых клеток, модифицированных генами ци-токинов, таких как ГМ—К.СФ, ИЛ-2, 7, 12, применяющихся для лечения больных меланомой кожи и раком почки [19, 22, 23, 25]. Все виды
вакцин формировали у ряда больных реакцию ГЗТ и вызывали активацию противоопухолевого клеточного и гуморального иммунитета, однако их клиническая эффективность не была значительной. В частности, применение вакцины, модифицированной геном ГМ-КСФ для лечения больных меланомой кожи, характеризовалось стабилизацией процесса продолжительностью от 20 до 36 мес у 3 из 33 пациентов [20], в случае лечения рака почки у 1 из 16 больных зафиксирован частичный регресс множественных метастазов в легких [22] (табл. 4).
Т а б л и д а +
Эффективность активной специфической иммунотерапии с помощью аутологкчиых генетически модифицированных опухолевых клеток у больных солидными опухолями (1/П фаза клинических испытаний)
Авторы Ао^шзация первичной orrvxoj\H Схема вакцинации Кол-во больных Лечебный эффект
Moller Р. ct al., 1997 [17] ген IL-7 Меланома ктога Внутрикожное введение облученных клеток 10 2SD
Simons J.M. et al., 1997 [21J ген GM-CSF Рак почки Внутрикожное введение облученных клеток 16 1 PR
Soiffer R. et al., 199В Щ ген GM-CSF Меланома кожи Внутрикожное введение облученных клеток 33 3 SD
Syn Y. et al., 1998 [23j reit IL-12 Меланома кожи Внутрикожное введение облученных клеток 6 1 SD
Palmer К. et al., 1999 [18] ген IL-2 Меланома кожи Внутрикожное введение облученных клеток 12 4 SD
Chang A.E. et al., 2000 [8] ген GM-CSF Меланома кожи Введение в лимфатические узлы облучашых клеток 5 1 CR
Примечание: SD - стабилизация процесса; PR - частичный регресс; CR - полный регресс.
Таким образом, у больных диссеминирован-ной меланомой кожи и метастатическим раком почки вакцинотерапия аутологичными опухолевыми клетками, модифицированными геном tag 7, безопасна и не сопровождается клинически значимыми побочными эффектами. При этом направленность изменений иммунологических и клинических параметров неоднозначна, но позволяет в целом говорить о тенденции к усилению антиген-специфического иммунного ответа. Предварительные результаты исследовании в этом направлении создают предпосылки для дальнейшего усовершенствования этого метода активной специфической иммунотерапии.
Трудоемкость приготовления таких вакцин и их высокая стоимость приводят к тому, что до настоящего времени этот перспективный метод лечения не имеет широкого применения в клинической практике. Однако нет сомнения, что поиски новых подходов к созданию противоопухолевых вакцин дадут возможность более широкого их использования для лечения больных злокачественными новообразованиями.
Выводы
1. Иммунотерапия больных диссеминирован-ными солидными опухолями вакциной на основе
модифицированных геном tag/ опухолевых клеток нетоксична и хорошо переносится больными.
2. Введение генетически модифицированной вашины сопровождается развитием реакции ги перчувствительности замедленного типа у 47,6% больных, иммунологическим ответом у 91,6% и объективным регрессом метастазов и легких (минимальный регресс <50%) у 1 из 28 пациен тов с диссеминированньш опухолевым процес сом.
3. Перспективным представляется проведения югмунотерапии генетически модифицирован ной вакциной у больных после радикального лечения или циторедуктивных операций с минимальным объемом опухолевой массы.
Литература
1. Ъуркпви Л.Л., Забшина Т.Н., Кадашдзе З.Г. Иммуноте рапия: моннториш субпопуляций лимфоцитов // Мед. иммунология. 2002. Т. 4, №2. С. 291.
2 Киселев О.И., Бендзко П.Г., ШхольниковаА~А. и др. Ви русные и опухолевые антигены, их использование в кон-сфуировани» противораковых вакцин // Мед. акад. журнал. 2002. Т. 2, № 1. С. 19-32.
3. Кишев С.А.,Ларин С.С.,] "мучевН.В., ГеоргиевГ.П. Ген tag? и гемотерапия рака // Генетика. 2000. Т. 36, № 11. С 1431-1435.
4. Михашов Л. Т., Симирский В.Н. Методы иымунохи-мнческого анализа 1з биологии развития (практическое ру ководство). М.: "Наука", 1991. 288 с.
5. Моисее ико В.М. Биотерапия солидных опухолей // Вонр. онкол. 1998- Т. 44, № 1. С. 120-125.
6. Ыбшеенко В.М. Возможности вакцинотерапии мела-номы кожи // Практ, онкол. 2001. № 4(8). С. 58-64.
?. berd D., Maguire Н.С., ЬАсСие P., Mastrangeto M.J. Treatment of mecastatic melanoma with an autologous tumor-cell vaccine: clinical and immunologic results in 64 patients // J. Gin. Oncol. 1990. Vol. 8. P. 1858-1867.
& ChaHgA-E., Uf}., BishopD.K- eta/. Immunogenetic therapy ofhuman melanoma utilising autologous tumor cells transduced to secrete granulocyte-macrophage colony-stimulating factor / / Hum. Gene Ther. 2000. Vol. 11, № 6. P. 839-850.
9. Dillmaa R.O., Xayak S.K., Barfh N.M. el a/. Clinical experience with aurologous tumor cell lines for patient-specific vaccine therapy in metastatic melanoma // Cancer Biother. Radiopharm. 1998. Vol. 13, N° 3. P. 165-176.
10. Dillman R.O., Baile/L.D.. Berth N.M. et al. Irradiated cells from aurologous tumor cell lines as patient-specific vaccine therapy in 125 patients with metastatic cancer: induction of ddayed-typc hypcrsensitivhy to autologous tumor is associated with improved survival // Cancer Biother. Radiopharm. 2002. Vol. 17. >» 1. P. 51-66.
11. Cancer: Principles & Practice of Oncology, 4l!l edit. / Ed. V. DeVita et al. Philadelphia; J.B.Lippincott Сотр. 1993.
12. Georgiev G.P., KisekvS.L., LttkamdhiE.M. Genes involved in the control of tumor progression and their possible use for gene therapy // Gene Ther. Mol -ВЫ. 1998. Vol. 1. P. 381-389.
13. GrefenT.F.JafaE.M. Cancer vaccine// J. Qin. Oncol.
1999. Vol/17, № 3.' P. 1047-1060.
14. Kise/evS.L., Kiistikova O.S., Korobko B.V. et al. Molecular Cloning and Characterization of the mouse tag7 gene encoding a novel cytokine // J. Biol. Chem. 1998. Vol. 273, №• 29. P. 18633-18639.
15. LaefftH U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of ba.cteriophagc T4 // Nature. 1970. Vol. 227. P. 680-685.
16. Lotem M., Peret% Т., DriAe O. et al. Autologous cell vaccine as a post operative adjuvant treatment for high-risk melanoma patients (AJCC stages III and IV). The new American Joint Committee on Cancer /./ Br. J. Cancer. 2002. Vol. 86, № 'lO. P. 1534-1539.
17. Mo/ierP., Sun Y., Dorbu T. et al. Vaccination with IL-7 gene-modified autologous melanoma cells can enhance the anti-melanoma lytic activity in peripheral blood of patients with a good clinical performance status: a clinical phase I study. Br. J. Oncol. 1998. Vol. 77, № 1. P. 1907-1916.
18. Palmer K., Moore J., ALmradM. et aL Gene therapy with autologous, interleukin-2—secreting tumor cells in patients with malignant melanoma // Hum. Gene Ther. 1999. Vol. 10, № 8. P. 1261-1268.
19. Rosenberg S.A. Cancer vaccines based on the identification of genes encoding cancer regression antigens. ImmunoL Today. 1997. Vol. 18. P. 175-182.
20. Rosenberg S.A. Progress in human tumor immunology and immunotherapy. Nature. 2001. Vol. 86. P. 81-84.
21. Simons]Ж,]ф EM., Weber C.K., cl aL Bioactivity of autologous irradiated renal cell carcinoma vaccines generated by ex vivo granulocyte-macrophagc colony-stimulating factor gene transfer. Салсег Res. 1997. Vol. 57. P. 1537-1546.
22. SoifJerK., Lynch Т., Mihm M. el al. Vaccination with irradiated autologous melanoma cells engineered to secrete human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor generates potent antituraor immunity in patients with metastatic melanoma // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. Vol. 95. P. 13141-13146.
23. Sun Y.tfargovskyK, Мд/lerP. eta!. Vaccination with !L-12 gene-modified autologous melanoma cells: preclinical results and first clinical phase I study // Gene Ther. 1998. Vol. 5, № 4- P. 481-490.
24. SuTovoy A., FkchslsrL, Geumfy l~. et al. Simple and fast microscale procedure for transfection and quantification of reporter gene expression in eukaryodc cells // Adv. Exp. Med. Biol. 1998. Vol. 451. P. 457л460.
25. Vile R-, SouberbielkВ., Dalgkish A.G. Tumor vaccines // Iramunotherapy in Cancer / Eds. Gore M., Riches P. London, 1996. P. 157-191.
26. Xu M., Qui G., Jiang Z., Humphreys R.E. Genetic modulation of tumor antigen presentation. Trends Biotechnol.
2000. Vol. 18, jVe 4. P. 167-172.
Поступила 30.04.04
