CC BY
1
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
по количеству агглютинированных эритроцитов (АЭ) соответствующими ЦК. Генотипирование проводили ПЦР с праймерами для выявления генов систем ABO, Резус, Kell, MNS по методике производителя.
Результаты и обсуждение. В 2018—2020 гг. в НМИЦ гематологии проведено 270 трансплантаций ГСК. У 129 пар донор — реципиент (47,78%) была одинаковая группа крови ABO, у 141 пары (52,22%) — несовместимость. Проблемы оценки серологических результатов былиу 98 больных (36,3%): 79 больных с ПТХ и 19 больных с ОЭА. Генотипирование провели 49 больным с ПТХ, уточнение генотипа при ОЭА — 14 больным. Типирование по ABO провели 32 больным: 25 с ПТХ с АЭ ЦК 5-98% и 7 с ОЭА А (6 человек) и В (1 человек). У больных с АЭ 50-80% с ЦК а-А1 был генотип АВ0*01А2 (группа А2). У больной с 50% АЭ с а-А1 - АВОЮ1А1 (группа Al). У пациента с 50% АЭ с а-А и а-В — АВО*В1В1 (табл.). По Резус — 21 больному. Найдены гены RHCE'Cy лиц с АЭ ЦК а-С 20-95%, RHCE°c -сАЭ а-с 40-90%, RHD°D - с АЭ a-D 20-90%, RHCE°E - с АЭ а-Е 3090%, RHCE°e - с АЭ а-е 95%. По MNS - 20 больным. У больных с АЭ ЦК а-М в 50-90% и a-N 50-80% был генотип NN. У больных
с 90-100% АЭ а-М и 50-80% АЭ a-N - ММ. Со 100% АЭ а-М и 5080% АЭ a-N - MN. Со 100% АЭ а-М и 70-80% АЭ a-N - ММ. По Kell — 4 больным. Пациент с 50% АЭ ЦКа-К и а-к оказался гомозиготным по гену KEL*01.01. У 3 больных с 80—97% АЭ а-К найдены гены KEL*01.01 и KEL*02. Уточнение генотипа провели 15 донорам. Причины: отсутствовали сведения о группе крови при поступлении криоконсервированных ГСК из-за лизиса эритроцитов (4); уточнение генотипа для выявления информативных маркеров мониторинга приживления ГСК (1); ОЭА (у 10 доноров и 14 больных подтверждены гены 01А2, В1В1, RHD weak type 1, RHD weaktype 2, RHD weak type 3, RHCE*Cw).
Заключение. Отмечено преобладание трансплантаций ГСК, несовместимых по ABO. Проблемы с определением группы крови возникали у больных перед трансплантацией ГСК из-за ПТХ и ОЭА (36,3%). Уточнение генотипа доноров ГСК связано с ОЭА и поступлением криоконсервированных клеток. Процент АЭ не может быть надежным критериемустановления истинного фенотипа пациента. Обнаружение смешанного химеризма при определении группы крови серологическими методами является показанием к генотипированию.
Гончарова М. И., Зеркаленкова Е. А., Солдаткина О. И., Дёмина И. А., Казакова А. Н., Попов А. М.
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ ПРОФИЛЬ ВП-ОЛЛ У ДЕТЕЙ С ПОВЕРХНОСТНОЙ ЭКСПРЕССИЕЙ Т8ЬРЯ
ФГБУ «НМИЦ детской гематологии, онкологии и иммунологии имени Дмитрия Рогачева» Минздрава России
Введение. Ген CRLF2 расположен в псевдоаутосомном регионе в локусах Xp22.3/Ypll.3 и кодирует подобный цитокиновым рецепторам фактор 2. Совместно с рецептором интерлейкина-7 (IL7R) CRLF2 формирует гетеродимерный рецептор тимического стромального лимфопоэтина (TSLPR). В результате хромосомных перестроек ген CRLF2 переносится либо в локус генов тяжелых цепей иммуноглобулинов с формированием химерного гена IGH::CRLF2, либо под промотор P2RY8 с формированием химерного гена P2RY8::CRLF2 в результате фокальной делеции. Считается, что оба вида хромосомных перестроек приводят к гиперэкспрессии белка CRLF2 на поверхности лимфобластов.
Цель работы. Охарактеризовать молекулярно-генетический профиль ВП-ОЛЛу детей с поверхностной экспрессией TSLPR.
Материалы и методы. Поверхностную экспрессию определяли методом проточной цитометрии с помощью антител Anti-Hu TSLP Receptor (Thermo Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, US) на проточном цитометре FACSCanto II (BD Biosciences, San Jose, CA, US). Была выделена когорта 36 детей с первично выявленным ВП-ОЛЛ с поверхностной экспрессией белка TSLPR. В нее включили детей в возрасте от 1 года до 17 лет (медиана 5,5 года), 14 мальчиков и 22 девочки. У всех пациентов был диагностирован В2-ОЛЛ. Всем пациентам было проведено стандартное кариотипирование методом G-banding и исследование методом FISH для определения значимых хромосомных перестроек. Перестройку гена CRLF2 определяли методом FISH с пробами CRFL2 Breakapart (Cytocell, Cambridge, UK) и XL CRLF2 Breakapart (Metasystems, Altlussheim, Germany). Природу гена-партнера CRLF2yтoчняли методом FISH с пробами IGH breakapart (Leica,
Amsterdam, Netherlands) и P2RY8 Deletion (Cytocell, Cambridge, UK). Пациентам без перестройки гена CRLF2 было выполнено секвени-рование полного транскриптома с подготовкой бибилиотек NEBNext Ultra II Directional (NEB, Ipswich, MA, USA) на платформе NextSeq (Illumina, CA, USA).
Результаты и обсуждение. Из 36 проанализированных пациентов с поверхностной экспрессией белка TSLPR у 34 пациентов была выявлена перестройка гена CRLF2. Среди этой группы пациентов были выявлены следующие варианты хромосомных аберраций: у 25 пациентов был обнаружен химерный ген P2RY8::CRLF2, у 7 пациентов — IGH::CRLF2, у 2 пациентов — перестройки CRLF2 с неизвестным геном. У 2 пациентов перестройка CRLF2 сочеталась с внутрихромосомной амплификацией гена RUNX1 и прилежащих регионов хромосомы 21 (iamp21),y одного — с парциальной делецией IGH, у одного — с дицентриком dic(9;20), у одного — с субклональ-ной перестройкой гена ETV6. У 2 пациентов из когорты ген CRLF2 не был перестроен по данным FISH. У этих пациентов были выявлены гиперплоидные клоны с трисомией X. По данным исследования полного транскриптома, эти пациенты не экспрессировали никаких CRLF2-xHMepHbix транскриптов. Также они не имели патогенных мутаций в генах CRLF2, JAK1, JAK2 и IL7R, для которых в литературе ранее была показана высокая частота при ОЛЛ с дерегуляцией
CRLF2.
Заключение. Таким образом, поверхностная экспрессия белка TSLPR не является абсолютным предиктором перестроек гена CRLF2. Механизм аберрантной экспрессии TSLPR при отсутствии перестроек гена CRLF2 является предметом дальнейшего изучения.
Грицаев С. В.1, Жук А. С.2, Кострома И. И.1, Аксенова А. Ю.3, Лада А. Г.4, Зотова И. В.3, Качкин Д. В.3, Гарифуллин А. Д.5,
Волошин С. В.6, Степченкова Е. И.3, Павлов Ю. И.7
ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ПЛАСТИЧНОСТЬ КЛЕТОК МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЫ
Республиканский центр трансплантации костного мозга, ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии ФМБА России», г. Санкт-Петербург, Национальный исследовательский университет ИТМО, 3Санкт-Петербургский государственный университет, 4Университет Калифорнии в Дэвисе (University of California, Davis), 5Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии ФМБА России, 6ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии ФМБА России» и ФГБВОУ ВО «Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова» Минобороны России,
7Медицинский центр университета штата Небраска
Введение. Множественная миелома (ММ) — второе по уровню заболеваемости онкогематологическое заболевание, характеризующееся гиперпролиферацией плазматических клеток в костном мозге (КМ). Встречается преимущественно у лиц старшего возраста. Причины развития ММ не ясны. Предполагается генетическая предрасположенность, возможны эндогенные или внешние
генотоксические воздействия. Окончательно не изучены и молекулярные механизмы лекарственной резистентности и прогрессирова-ния болезни.
Цель работы. С применением N08 изучить динамику генетических изменений, ассоциированных с развитием и прогрессированием
мм.
3S
| ГЕМАТОЛОГИЯ И ТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2022; ТОМ 67; №2 |
Материалы и методы. Для секвенирования расширенного экзо-ма опухолевых клеток на разных стадиях болезни использовали ДНК плазматических CD138+ клеток КМ, полученных в дебюте заболевания, через 100 дней после трансплантации аутологичных гемопоэти-ческих стволовых клеток (АутоТГСК) и еще через 6 месяцев после АутоТГСК. В качестве контроля использовали ДНК лимфоцитов периферической крови. Длина коротких парных прочтений составляла 2*110 п.о. со средним покрытием 100. Для коротких прочтений проводили оценку качества. Выравнивания и генотипирование для наследуемых и соматических мутаций производили с использованием подхода, рекомендованного GATK Best Practices Workflows. Анализ мутационных подписей осуществляли с использованием SigProfiler.
Результаты и обсуждение. Были выявлены наследуемые мутации и варианты, связанные с чувствительностью к противоопухолевым препаратам. При анализе соматических мутаций были выявлены мутации в генах, ассоциированных с развитием ММ. Анализ
мутационных подписей показал наличие подписей, которые характерны для ММ, а также изменение соотношения подписей по мере развития болезни. Дебют заболевания характеризуется большим числом генетических изменений, чем последующие фазы болезни.
Заключение. Исследование генома клеток опухоли в разных временных точках позволило провести анализ генетических изменений, возникающих у пациентов с ММ при лечении различными препаратами. Выявление наследственных и соматических генетических вариаций, характерных для ММ, необходимо для совершенствования методов ранней диагностики, прогнозирования течения и разработки схем лечения заболевания, учитывающих генетические особенности развития болезни.
Работа поддержана грантом РНФ№ 20-15-00081. Работа Жук A.C. выполнена при государственной финансовой поддержке ведущих университетов Российской Федерации в рамках программы ITMO Fellowship and Professorship Program.
Гурьянова М. А.', Шухов О. А.', Челышева Е. Ю.', Петрова А. Н.', Быкова А. В.', Немченко И. С.', Гаврилова Л. В.2, Абдуллаев А. О.', Степанова Е. А.', Судариков А. Б.', Цыба Н. Н.', Куликов С. М.', Кохно А. В.', Туркина А. Г.'
ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ПРОСПЕКТИВНОГО НАБЛЮДЕНИЯ ЗА БОЛЬНЫМИ ХРОНИЧЕСКИМ МИЕЛОИДНЫМ ЛЕЙКОЗОМ С ГЛУБОКИМ МОЛЕКУЛЯРНЫМ ОТВЕТОМ НА ТЕРАПИИ СНИЖЕННЫМИ ДОЗАМИ ИНГИБИТОРОВ ТИРОЗИНКИНАЗ
С ПОСЛЕДУЮЩЕЙ ОТМЕНОЙ ЛЕЧЕНИЯ
'ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России, 2ГБУЗ «Республиканская клиническая больница № 4», г. Саранск
Введение. По данным некоторых зарубежных исследований, наблюдение больных хроническим миелоидным лейкозом (ХМЛ) на терапии сниженными дозами ингибиторов тирозинкиназ (НТК) перед отменой терапии позволяет улучшить показатель выживаемости без потери большого молекулярного ответа (БМО) (ВСК-АВЬ>0,1%) при наблюдении в ремиссии без лечения (РБЛ).
Цель работы. Оценить предварительные результаты выживаемости без потери БМО у больных ХМЛ в РБЛ с предшествующим наблюдением на терапии сниженными дозами НТК (Clmicaltrials.gov
КСТ 04578847).
Материалы и методы. Исследование состоит из двух последовательных фаз: 1) наблюдение на сниженных дозах ИТК>12 месяцев (мес.); 2) наблюдение в РБЛ. Снижение дозы ИТК выполнялось в 2 этапа (табл. 1). Пациентов включали в исследование на любом этапе редукции доз ИТК приусловии соответствия критериям включения. Критерии включения для 1-го этапа исследования: взрослые больные
Фаза редукции доз Фаза РБЛ
1 этап 2 этап
Препарат Изначальная доза ИТК (мг) п=75 Сниженная доза 1 этапа редукции доз ИТК (мг) Изначальная доза ИТК (мг) п=16 Сниженная доза 2 этапа редукции доз ИТК (мг) Изначальная доза ИТК (мг) п=9 к s с CS о. 1) н со я <L> s
Иматиниб (п=67) 600-400 (71=60) 300 300 (п=3) 200 200 (п=4)
Нилотиниб (п=22) 800-600 (п=10) 400 400 (п=9) 200 200 (п=3)
Дазатиниб (п=6) 100-70 (п=4) 50 50 (п=2) 25 25 (>1=0) р о
Бозутиниб (п=5) 500 (п=1) 300 300 (п=2) 200 200 (п=2)
Табл.1 Дозы ингибиторов тирозинкиназ у больных хроническим миелолейкозом в фазе редукции доз
60°/о
к________
1___,
к..... 66% (п=31)
46% (п=15)
е прекращения терапии ИТК. м
е прекращения терапнн ИТК,
_1 -ая попытка отмены терапии _ повторная попытка отмены терапии
Рис. 1. Выживаемость без потери БМО после прекращения терапии Рис. 2. Выживаемость без потери БМО у пациентов с первой и ИТК повторной попыткой отмены ИТК
ХМЛ в хронической фазе, срок терапии ИТК>3 лет, длительность БМО>2 лет и глубокого МО>1 года (ВСТАВЬ <0,01%). В фазу РБЛ включали пациентов с длительностью глубокого МО>2 лет. В случае потери БМО доза ИТК повышалась на +1уровень от той, на которой развился молекулярный рецидив.
Результаты и обсуждение. С декабря 2019 г. по ноябрь 2021 г. в исследование включено 100 больных: женщины 60%; медиана (Ме) возраста на момент установления диагноза и Ме возраста при включении в исследование составили 46 лет (11—71 год) и 51 год (23—74 года) соответственно; группа риска ЕБТв 63%:16%:1% для низкого, промежуточного и высокого риска, соответственно. У 20% пациентов данных по группе риска нет. У 29 пациентов в анамнезеуже была попытка отмены терапии ИТК. Ме срока терапии ИТК, длительности БМО и глубокого МО на момент включения в исследование составила 7 лет (3—19,7 года), 3,3 года (2—12,6 года) и 2,5 года (1,2—10,5 года) соответственно. Терапия ИТК, дозы препаратов и количество больных на терапии каждой из доз препарата на момент включения в исследование представлены в таблице 1. Причинами перевода на ИТК 2-го поколения были: неудача терапии (п=9), лекарственная токсичность (п=21), другие причины (п=1). Первый этап редукции доз ИТК завершили 59 пациентов: потеря глубокого МО была отмечена у 4 больных; потери БМО не было. Второй этап редукции доз ИТК завершили 53 пациента: потеря БМО была у 2 пациентов, потеря глубокого МО — у9 больных. В фазу РБЛ включено 46 пациентов, из них у 15 (32,6%) в анамнезе уже была как минимум одна попытка отмены лечения. Ме наблюдения после отмены лечения составила 8 мес. (1—21 мес.). Выживаемость без потери БМО через 12 мес. во всей группе составила 60% (рис. 1). Выживаемость без потери БМО для пациентов с первой попыткой отмены терапии и для пациентов с повторной отменой лечения составила 66% и 46% соответственно (рис. 2).
Заключение. Терапия сниженными дозами ИТКу больных ХМЛ с глубоким МО>1 года является безопасной опцией лечения при условии регулярного молекулярного мониторинга. Обнадеживающим является показатель выживаемости без потери БМО в РБЛ у больных с первой попыткой отмены терапии — 66%. Наблюдение пациентов в исследовании продолжается.
