CC BY
11
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ
А.Н. Петрова, ЕЮ. Челышева, О.А. Шухов, И.С. Немченко, М.А. Гурьянова, А.В. Быкова, Н.Н. Цыба, А.Г. Туркина
ДИНАМИКА МОЛЕКУЛЯРНОГО ОТВЕТА И ЗНАЧЕНИЕ ПОТЕРИ МО4 ДЛЯ ВЫЖИВАЕМОСТИ БЕЗ МОЛЕКУЛЯРНОГО РЕЦИДИВА У БОЛЬНЫХ ХМЛ ПОСЛЕ ОТМЕНЫ ТЕРАПИИ ИТК В ИССЛЕДОВАНИИ RU-SKI
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
Введение. В различных исследованиях по прекращению терапии ингибиторами тирозинкиназ (ИТК) у больных хроническим миелоидным лейкозом (ХМЛ) с глубоким молекулярным ответом (МО) критерии молекулярного рецидива различались. В ранних исследованиях молекулярный рецидив констатировали при потере глубокого МО (включая потерю M04, уровень BCR-ABL>0,01% по международной шкале IS). В новых рекомендациях ELN (Hochhaus и соавт., 2020) в качестве критерия молекулярного рецидива после отмены ИТК предложено рассматривать потерю большого молекулярного ответа (БМО) - превышение уровня BCR-ABL более 0,1% IS. Варианты кинетики лейкозного клона после отмены ИТК и значение потери глубокого МО для сохранения возможности наблюдения в РБЛ требуют изучения.
Цель. Оценить взаимосвязь потери МО4 с дальнейшей потерей БМО у больных ХМЛ на ранних и поздних сроках после прекращения терапии ИТК и описать варианты динамики опухолевого клона в период наблюдения без терапии.
Материалы и методы. В проспективное исследование RU-SKI включено 98 больных в хронической фазе ХМЛ, получавших терапию любыми ИТК > 3 лет, с глубоким МО (BCR-ABL<0,01% IS) длительностью > 2 лет. Мониторинг минимальной остаточной болезни (МОБ) проводили с помощью количественного определения экспрессии гена BCR-ABL методом ОТ-ПЦР РВ ежемесячно в первые полгода после отмены ИТК, каждые 2 месяца (мес.) с 6 по 12 мес. и 1 раз в 3 мес. после года наблюдения без терапии. Потеря МО4 определялась как уровень BCR-ABL >0,01% и <0,1%. Прием ИТК возобновляли в случае развития молекулярного рецидива, который определялся как потеря БМО (BCR-ABL>0,1%). Выживаемость без потери БМО рассчитывалась методом Каплана-Майера, для сравнения использовался Лог-ранк критерий.
Результаты. Медиана (Ме) наблюдения после отмены ИТК составила 40 мес. (от 28 до 57 мес.) на момент анализа (июнь 2020). Потеря БМО и МО4 наблюдалась у 48(49%) и 38(39%) больных соответственно. У 42(87%) больных потеря БМО произошла в течение первых 6 мес. после отмены ИТК. Выживаемость без потери БМО во всей группе больных составила 51% (95% ДИ 41 - 61%) через 36 мес. после пре-
кращения терапии ИТК. У 10 (26%) из 38 больных с потерей МО4 сохранялся БМО, в то время как у 28(74%) пациентов с потерей МО4 при последующем наблюдении произошла потеря БМО. Выживаемость без потери БМО от момента первой задокументированной потери МО4 составила 29% (95% ДИ 15 - 44%) и 24% (95% ДИ 10,5 - 38%) через 12 и 36 мес. после отмены терапии соответственно. При сравнительном анализе выживаемости без потери БМО у больных с ранней потерей МО4 на сроках < 3 мес. после отмены ИТК (п=25) и с поздней потерей МО4 на сроках > 3 мес. после отмены иТк (п=13) отмечено, что выживаемость без потери БМО через 36 мес. была значимо выше в группе больных с поздней потерей МО4 по сравнению с больными с ранней потерей МО4: 53% и 8% соответственно (р=0,0004). У 50 больных с сохранением БМО после отмены ИТК мы выявили 3 основных варианта поведения опухолевого клона: 1) стабильно неопределяемый уровень BCR-ABL в течение всего периода наблюдения без терапии у 17(34%) пациентов; 2) кратковременные или длительные колебания BCR-ABL в пределах МО4 у 23(46%) больных; 3) колебания с временной потерей глубокого МО4, но с сохранением БМО, у 10(20%) больных. Интересно отметить, что у 8 из 10 пациентов с временной потерей МО4 в последующем был достигнут неопределяемый уровень BCR-ABL при продолжении наблюдения без терапии ИТК.
Выводы. Установлено, что потеря МО4 после прекращения терапии ИТК в большинстве случаев (74%) предшествует молекулярному рецидиву - потере БМО. Однако, выживаемость без потери БМО у больных с потерей МО4 на сроках более 3 мес. после отмены ИТК была значимо выше, чем у больных с ранней потерей МО4 (менее 3 мес.), и была сопоставима с выживаемостью без потери БМО во всей группе больных. Мы обнаружили, что у 66% больных наблюдаются колебания уровня BCR-ABL в период наблюдения в РБЛ. При этом около четверти больных (26%) с потерей МО4 могут оставаться в РБЛ и даже достичь неопределяемого уровня МОБ. Таким образом, потеря МО4, особенно на поздних этапах наблюдения после отмены ИТК, не является показанием для возврата к лечению и позволяет продолжить наблюдение без терапии при условии регулярного молекулярного мониторинга МОБ.
И.А. Петрова, М.В. Латыпова, М.Е. Власова, Т.Ю. Грачева, Д.С. Ильясова, Е.С. Рябикова, М.В. Барабанщикова,
Е.В. Морозова, Т.Л. Гиндина
ВЛИЯНИЕ НОВОГО МЕТОДИЧЕСКОГО ПОДХОДА НА РЕЗУЛЬТАТЫ ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКОГО АНАЛИЗА У ПАЦИЕНТОВ С МИЕЛОФИБРОЗОМ
«Научно-исследовательский институт детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой» Федерального Государственного Бюджетного Образовательного Учреждения Высшего Профессионального Образования «Первый Санкт-Петербургский Государственный Медицинский Университет имени академика И.П. Павлова», г. Санкт-Петербург
Введение. Миелофиброз - хроническое Р^негативное мие-лопролиферативное заболевание, характеризующееся неэффективным гемопоэзом, ассоциированным с мегакариоцитарной гиперплазией и дисплазией, а также ретикулиновым фиброзом костного мозга. Наряду с клиническими данными и мутациями генов JAK2, САЬ^ МРЬ, цитогенетические аберрации имеют
важное прогностическое значение и учитываются в системах оценок DIPSS plus, GPSS, MIPSS70. Поскольку при разрастании соединительной ткани не всегда удается получить качественный аспират костного мозга для цитогенетического анализа, новый метод 48-часового культивирования клеток крови, предложенный N.R. Singh с соавторами в l. Cytogenetics, 2013], помогает
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVII, № 2, 2021
улучшить результаты кариотипирования.
Цель. Оценить эффективность методики культивирования клеток периферической крови и сопоставить её результаты со стандартными культуральными протоколами костного мозга у пациентов с миелофиброзом.
Материалы и методы. Цитогенетический анализ был проведен 95 пациентам, обследованным в лаборатории цитогенетики и диагностики генетических заболеваний НИИ ДОГиТ им. РМ. Горбачевой с 2009 по 2021 год. Среди пациентов были 55 (58 %) женщин и 40 (42 %) мужчин в возрасте от 28 до 83 лет (медиана 51 год). Для исследования применялась стандартная методика краткосрочного 24-часового культивирования клеток костного мозга у 37 (38,9 %) пациентов, 48-часовое культивирование клеток периферической крови без стимуляторов роста у 34 (35,8 %) и их комбинация - у 24 (25,3%). Окрашивание полученных препаратов проводилось методом СТС-бэндирования. Хромосомные аберрации описывались согласно критериям ISCN 2016.
Результаты. Из 95 обследованных пациентов у 39 (41 %) были обнаружены численные и структурные перестройки. Из встретившихся аномалий можно выделить: полную или частичную моносомию хромосом 7, 11, 13 (п=9); полную или частичную
трисомию хромосом 1, 8, 9 и 21 (n=13); одиночные аномалии, такие как inv(3), t(5;7), der(9), i(17) (n=5); комплексные перестройки c >3 аберрациями (n=l2). Трисомия хромосомы 8 наблюдалась чаще других перестроек хромосом (n=11, 27,5 %). Пациенты с очень высоким, высоким, промежуточным и низким цитогенетическим риском по системе оценок DIPSS plus составили 6,3 %, 42,1 %, 6,3 % и 45,3 % соответственно. При кариотипи-ровании клеток крови у 18 (31 %) из 58 пациентов были обнаружены метафазы с тетра- и октаплоидным набором хромосом без структурных перестроек. У 24 (41,4 %) пациентов численные перестройки комбинировались со структурными, причем в 10 наблюдениях хромосомные аберрации определялись как в диплоидных, так и полиплоидных кариотипах. При сравнении эффективности культуральных протоколов возможность обнаружить аномальный кариотип была выше при культивировании клеток крови, дополняя результаты, полученные при кариоти-пировании клеток костного мозга.
Выводы. Исследование показало, что комбинация культу-ральных протоколов клеток крови и костного мозга является наиболее эффективным приёмом в цитогенетической диагностике миелофиброза.
М.А. Поспелова1, К.В. Данилов1, А.В. Горбунова2, И.В. Евсюков1
ПОИСК НОВЫХ ХИМЕРНЫХ ГЕНОВ В ОБРАЗЦАХ ФОЛИКУЛЯРНОИ ЛИМФОМЫ
МЕТОДОМ РНК-СЕКВЕНИРОВАНИЯ
1Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Национальный
исследовательский университет ИТМО», г. Санкт-Петербург 2Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Северо-Западный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова» министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Санкт-Петербург
Введение. По частоте встречаемости фолликулярная лимфома (ФЛ) занимает второе место среди неходжкинских лимфом. В большинстве случаев опухолевые клетки содержат транслокацию t(14;18)(q32;q21), которая активирует BCL2, ключевой ген апоптоза. Однако, существует целый ряд минорных транслокаций. Выявление таких событий у конкретного пациента может повлиять на диагностику, прогноз и лечение рака. Поэтому поиск новых химерных генов очень важен для персонифицированного подхода в медицине. В настоящее время поиск новых химерных генов можно осуществлять в данных РНК секвенирования. Найденные таким образом и провалидированные химерные гены могут использоваться в диагностических целях.
Цель. Осуществить поиск новых химерных генов в транс-криптомах образцов фолликулярной лимфомы с использованием специализированных биоинформатических программ. Составить список потенциальных новых химерных генов для их дальнейшего подтверждения секвенированием по Сэнгеру.
Материалы и методы. Сбор материала проводился в Северо-Западном государственном медицинском университете им. И.И. Мечникова. У всех пациентов было получено информированное согласие на хранение образцов и их использование для молекулярно-биологических исследований. Стандартное секвенирование РНК было проведено в Ресурсном центре "Биобанк" Санкт-Петербургского Государственного Университета. В анализ было включено 53 образца: 19 образцов ФЛ 1-2 стадии, 16 образцов ФЛ 3 стадии и 18 контрольных образцов, представленных фрагментами лимфоузлов без признаков опухолевого роста. Для контроля качества секвенирования была использована программа FastQC. Индексирование генома и выравнивание прочтений было осуществлено в программе STAR. Для поиска химерных генов были использованы программы STAR-Fusion, Arriba и Fusion Catcher.
Результаты. Чтобы уменьшить количество ложнополо-жительных результатов в итоговом списке химерных генов,
для дальнейшей работы были отобраны только такие события, которые были обнаружены как минимум двумя используемыми в анализе программами и у одного и того же образца. После применения этих критериев были отобраны 19 химерных генов из всех опухолевых образцов, а также 2 химерных гена, найденные в контрольных образцах. Чтобы определить, были ли обнаруженные химерные гены описаны ранее, полученный список проверяли по Атласу Генетики и Цитогенетики в Онкологии и Гематологии, а также по специализированным базам данных (FusionGDB, TCGA Fusion Gene Database и ChimerDB). Было обнаружено, что 5 химерных генов присутствовали хотя бы в одной из баз данных. Среди них IGH/BCL2, результат характерной для ФЛ транслокации t(14;18)(q32;q21) и IGH/BCL6, также часто встречающийся при ФЛ химерный ген. Остальные 16 химерных генов ранее не были описаны в раковых или нормальных тканях. При этом подавляющее большинство генов, входящих в состав новых химерных генов, имеют прямое отношение к канцерогенезу. Так ген MYC является известным протоонкогеном и кодирует ядерный фосфопротеин, играет роль в прогрессии клеточного цикла, апоптозе и клеточной трансформации, а HNRNPA2B1 путем активации циклоок-сигеназы-2 способствует росту опухоли при раке легкого. Можно предположить, что и образуемый ими химерный ген HNRNPA2B1_MYC может способствовать опухолевому росту. Мутации в гене OSBPL10 служат прогностическими маркерами при диффузной В-крупноклеточной лимфоме. Ген NOP53 является онкогеном при семейном немедуллярном раке щитовидной железы, а ANKRD22 способствует прогрессиро-ванию немелкоклеточного рака легкого за счет активации транскрипции E2F1.
Выводы. Найденные химерные гены, вероятно, можно будет использовать для персонализации диагностики и терапии фолликулярной лимфомы. Однако, полученные данные являются предварительными и требуют валидации методами молекулярной биологии.
