CC BY
28
DOI: 10.24411/0235-2990-2019-10049
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Фенотипические изменения субпопуляций NK-и NKT-клеток человека сульфатированными полисахаридами
*Т. П. СМОЛИНА1, Т. А. КУЗНЕЦОВА1, Л. А. ИВАНУШКО1, А. К. ГАЖА1, А. С. СИЛЬЧЕНКО2, Н. Н. БЕСЕДНОВА1
1 НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г. П. Сомова, Владивосток
2 Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г. Б. Елякова ДВО РАН, Владивосток
Phenotypic Changes in Subpopulations of Human NK and NKT Cells Induced by Sulfated Polysaccharides
*T. P. SMOLINA1, T. A. KUZNETSOVA1, L. A. IVANUSHKO1, A. K. GAZHA1, A. S. SILCHENKO2, N. N. BESEDNOVA1
1 Somov Institute of Epidemiology and Microbiology, Vladivostok
2 G. B. Elyakov Pacific Institute of Bioorganic Chemistry, Vladivostok
Изучено влияние сульфатированного полисахарида из бурой водоросли Fucus evanescens (фукоидана) и продукта его ферментативной трансформации на NK- и NKT-клетки человека. В результате инкубации цельной крови с полисахаридами зарегистрированы значимые фенотипические изменения NK и NKT-клеток. Это проявлялось в увеличении экспрессии ак-тивационных молекул CD69, CD25, HLA-DR и маркера дегрануляции CD107a на NK- и NKT-клетках, а также молекул CD8 на NK-клетках. Эффект продукта ферментативной трансформации был значимо более выражен по сравнению с на-тивным полисахаридом только в отношении экспрессии CD69.
Ключевые слова: сульфатированные полисахариды, фукоидан, ферментативная трансформация фукоидана, врождённый иммунитет, маркеры активации, NK- клетки, NKT-клетки.
The article studies the effect of sulfated polysaccharide extracted from brown algae Fucus evanescens (fucoidan) and the product of Its enzymatic transformation on human NK and NKT cells. Significant phenotypic changes in NK and NKT cells were recorded as a result of incubation of whole blood with polysaccharides. This was manifested in an increase in the expression of the activation molecules CD69, CD25, HLA-DR and the degranulation marker CD107a on NK and NKT cells, as well as CD8 molecules on NK cells. The effect of the enzymatic transformation product was significantly more pronounced compared to the native polysaccha-ride only in relation to the expression of CD69.
Keywords: sulfated polysaccharides, fucoidan, enzymatic transformation of fucoidan, innate immunity, activation markers, NK cells, NKT cells.
Введение
Врождённый иммунитет является первой линией защиты организма от патогенов. КК- и ККТ-клетки — одни из главных эффекторных клеток врождённого иммунитета, способных осуществлять элиминацию заражённых и повреждённых клеток организма. Стимуляция КК- и ККТ-кле-ток различными растворимыми веществами и/или контактными взаимодействиями приводит к изменению их фенотипа и возможности более эффективно осуществлять свои функции [1].
Для поиска препаратов, активирующих клетки врождённого иммунитета, перспективно применение фукоиданов — биологически активных сульфатированных полисахаридов, синтезируемых бурыми водорослями. Низкая токсичность и биологическая активность фукоиданов обуслов-
© Коллектив авторов, 2019
*Адрес для корреспонденции: 690087, Владивосток, Сельская, 1. НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г. П.Сомова
ливает интерес к ним учёных во всем мире. Структура этих биополимеров может быть различной в зависимости от вида водоросли, сезона сбора, мест её произрастания, и других факторов. Суль-фатированные полисахариды являются перспективными для создания фармацевтических препаратов [2—5], однако лекарства на их основе не созданы, т. к. пока нет простых и воспроизводимых методов стандартизации препаратов и недостаточно информации о связи структуры и биологической активности фукоиданов. Биологическая активность фукоиданов зависит от степени суль-фатирования, моносахаридного состава, степени разветвлённости, типа связи [6, 7], но структурные параметры, отвечающие за проявление той или иной биологической активности, не установлены. Применение ферментативной трансформации фукоиданов может быть перспективным для стандартизации природных полисахаридов, определения их структуры, увеличения биологической активности и снижения побочных эффектов [8].
Ранее нами было проведено сравнительное исследование действия сульфатированного полисахарида из бурой водоросли Fucus evanescens и продукта ферментативной трансформации этого полисахарида на функциональную активность нейт-рофилов периферической крови человека. Показано повышение уровня экспрессии молекул CD69, CD14, CD11b на клеточных мембранах ней-трофилов с одновременным снижением CD62L, а также увеличение показателей фагоцитарной и бактерицидной активности этих клеток. Полисахарид, полученный из фукоидана с применением фукоиданаз путём ферментативной трансформации оказывал более выраженный эффект на уровень экспрессии молекул CD14, CD11b и CD62L по сравнению с более высокомолекулярным [9]. Эти результаты дали нам основание для проведения исследования действия этих же полисахаридов на клетки врождённого иммунитета NK и NKT, обладающие цитолитической активностью и осуществляющие регуляторные функции.
Целью работы явилось сравнительное изучение влияния сульфатированного полисахарида из бурой водоросли Fucus evanescens и продукта его ферментативной трансформации на функциональную активность и изменение фенотипа NK-и NKT-лимфоцитов периферической крови человека. Для этого исследовали изменение экспрессии молекул CD25, CD69, HLA-DR, CD107a на мембранах NK- и NKT -клеток, а также CD8 на NK-клетках.
Материал и методы
Сульфатированные полисахариды выделены из бурой водоросли Fucus evanescens (табл. 1). Первый полисахарид — фу-коидан в комплексе с полифенолами (Ф1) с молекулярной массой 130—430 кДа [10]; второй — продукт ферментативного гидролиза фукоидана (Ф2) с молекулярной массой 50,8 кДа [11] (см. табл. 1), главным структурным элементом молекул которого является повторяющаяся последовательность:
[^3)-a-L-Fucp(2,4-SO-)-(1?4)-a-L-Fucp(2-O5)-(1^]n
Материалом для исследования и контрольных проб служила полученная от условно здоровых доноров периферическая кровь с гепарином (25 ЕД/мл), которую разводили в соотношении 1:2 полной питательной средой (среда RPMI-1640, содержащая 10% эмбриональную телячью сыворотку, 0,01 М HEPES, 200 мМ L-глутамина, 100 мг/мл гентамицина). Использование для экспериментов цельной крови не требует выделения и подготовки клеток к культивированию, устраняет неспецифическую активацию клеток на этапах сепарации, при этом сохраняется существующий in vivo баланс различных типов клеток крови.
Для контрольных проб Ф1 и Ф2 растворяли в полной питательной среде и вносили в кровь в конечной концентрации 100 мкг/мл (оптимальную дозу определили в предваритель-
ных экспериментах). Инкубировали опытные и контрольные пробы в течение 24 ч при 37°C в атмосфере 5% СО2.
Уровень экспрессии молекул определяли методом цито-метрического анализа в программе «Cell Quest» на проточном цитометре «FACSCalibur» («Becton Dickinson») c использованием моноклональных антител к молекулам CD56-FITC, CD3-APC, CD8-PE, CD25-PE, HLA-DR-PE, CD69-PE («Beckman Coulter»), CDH^-PE («eBiosciense») и соответствующих изотипических контролей. NK-клетки идентифицировали как субпопуляцию лимфоцитов CD3-CD56+, NKT как лимфоциты CD3+CD56+. В каждой пробе анализировали не менее 104 клеток.
Результаты представлены как процент NK- и NKT-клеток, экспрессирующих соответствующие маркеры. Плотность (количество) молекул на поверхности клеток отражены в виде условных единиц средних интенсивностей флуоресценции (MFI).
Статистическую обработку полученных результатов проводили методами непараметрической статистики, которые включали расчёт медианы и квартального размаха (разность значений 75-го и 25-го процентиля), а также оценку различий с использованием критерия Вилкоксона для связанных групп.
Результаты и обсуждение
Активность NK-клеток регулируется сложным набором рецепторов, экспрессия которых может изменяться под действием различных веществ. В результате исследования установлено, что после 24-часовой инкубации клеток крови как с Ф1, так и с Ф2 изменялся субпопуляцион-ный состав NK-клеток: наблюдалось увеличение относительного количества NK-клеток, экспрес-сирующих маркеры ранней (CD69) и поздней (CD25 и HLA-DR) активации, а также молекулы CD8 (рисунок). Отмечено также возрастание MFI этих маркеров, отражающих плотность их молекул на мембранах клеток. Эффект Ф2 был значимо более выражен по сравнению с Ф1 только в отношение экспрессии CD69.
Известно, что трансмембранный гликопроте-ин CD69 является одним из самых ранних инду-цибельных поверхностных маркеров активированных Т- и В-лимфоцитов, NK-клеток, нейтро-филов, эозинофилов, который участвует в пролиферации клеток и функционирует в качестве сигнального рецептора лимфоцитов. Молекулы CD69 не экспрессируются на интактных лимфоцитах, в том числе и на NK-клетках, а появляются на их поверхности после активации клеток различными стимулами. Экспрессию CD69 на NK-клетках связывают с их цитотоксической функцией [12].
Так как молекулы CD69 имеют прямое отношение к активации генов, ответственных за синтез интерлейкина-2, то сигналы, поступающие с CD69, могут вызывать как увеличение продукции
Таблица 1. Характеристики фукоиданов из бурой водоросли Fucus evanescens
Полисахарид SO3Na*, % Нейтральные сахара, мольные %
Fuc Gal Xyl Man Glc
Ф1 27,0 94,1 3,8 2,1 0 0
Ф2 29,7 97,8 2,2 0 0 0
Примечание. * — процент от массы.
этого цитокина, так и количества рецепторов к нему (CD25) на клетках [13], экспрессию которых принято считать одной из ключевых стадий процесса активации.
Экспрессируясь на NK-клетках, CD25 позитивно коррелирует с их цитотоксической функцией, увеличивая деграну-ляцию и процент гибели клеток-мишеней, а также продукцию ИФН-у [14].
В отличие от белков МНС I класса, которые находятся на большинстве клеток человека, белки МНС II класса обычно экспрессируются профессиональными антиген-представля-ющими клетками. Однако экспрессия молекул HLA-DR была обнаружена и на NK-клетках, где они вначале считались маркерами активации, т. к. экс-прессировались после стимуляции NK-клеток IL-2 [15, 16]. Позже было показано, что HLA-DR-положительные NK-клетки могут представлять антигены T-клеткам с рестрикцией по HLA-DR [17]. Кроме того, выявлена корреляция между процентом NK-клеток, экс-прессирующих HLA-DR, и уровнем транскрипции генов IFN-y NK-клетками [18]. Таким образом, NK клетки обладают способностью представлять антиген, по крайней мере, в определённых обстоятельствах. HLA-DR-экспрессирую-щие NK-клетки проявляют большую литическую способность и экспрессируют хемоки-новый рецептор, связанный как с привлечением клеток к участкам воспаления, так и с возвращением их в лимфатический узел. Показано что, HLA-DR-экс-прессирующие NK-клетки могут играть существенную роль во время инициации и усиления воспалительных реакций, обеспечивая регуляцию иммунного ответа [19].
Достаточно часто NK-клетки экспрессируют на своей поверхности а-цепь CD8, но в более низкой плотности, чем цитотоксические Т-клет-ки. Субпопуляции NK-клеток человека, экспрес-сирующие аа гомодимер CD8, обладают большей цитотоксичностью, т.к. соединение CD8a цепей
Влияние фукоидана (Ф1) и продукта его ферментной трансформации (Ф2) на экспрессию мембранных молекул NK-клетками человека
в гомодимер индуцирует быстрое повышение внутриклеточного Са2+ и инициированное этим увеличение экспрессии СБ69. Хотя секреция ци-толитических ферментов инициирует апоптоз КК-клеток, приток экзогенного кальция защищает СБ8а+ КК-клетки от данного процесса. Этот механизм позволяет СБ8а+ КК-клеткам сохранять жизнеспособность и принимать участие в многократном лизисе клеток-мишеней [20].
При активации КК-клеток на их мембране регистрируется экспрессия маркера СБ 107а, который характеризуется как трансмембранный белок
Таблица 2. Уровень экспрессии рецепторов на поверхности ЖТ-клеток после инкубации (24 ч) с фукоида-нами
Маркеры Единица измерения Контроль Ф1 Ф2
Me (Min-max) Me (Min-max) Me (Min-max)
CD69+ % клеток 5,3 (3,5-6,4) 6,5* (4,0-7,8) 10,0* (8,1-11,3)
MFI 11,0 (7,3-13,5) 14,1* (13,7-16,4) 22,2* (18,4-25,0)
CD25 + % клеток 4,3 (2,5-5,1) 5,5* (5,0-7,7) 4,8* (4,6-7,2)
MFI 5,8 (3,2-6,4) 6,3* (5,9-8,7) 6,4* (5,9-8,9)
HLA—DR+ % клеток 6,8 (4,5-7,4) 7,6* (6,9-8,9) 9,7* (7,5-10,8)
MFI 3,4 (1,7-4,5) 4,6* (3,8-6,1) 4,9* (3,9-6,3)
CD107a+ % клеток 1,2 (0,5-2,1) 3,1* (2,5-4,9) 3,3* (2,6-5,1)
Примечание. Ме - медиана; (М1п-тах) - минимальное и максимальное значение; * - различия статистически значимы (р<0,05) по отношению к контролю.
LAMP-1 (lysosomal associated membrane proteinl) и является маркером дегрануляци NK- и цитотокси-ческих Т-клеток. [21]. Инкубация клеток крови с Ф1 приводила к увеличению относительного количества NK-клеток, экспрессирующих на поверхности CD107a, до 1,3±0,7% (контроль — 0,7±0,9%). Ф2 увеличивал относительное количество CD107a-позитивных NK-клеток до 2,6±0,9%.
Таким образом, возрастание экспрессии молекул CD69, CD25, HLA-DRи CD8 может приводить к активации NK-клеток, увеличению их ци-тотоксического потенциала, продукции ИФН-у, инициации и регуляции иммунного ответа.
Поскольку NKT-клетки представляют собой уникальную и гетерогенную популяцию Т-кле-ток, которые имеют некоторые функциональные и фенотипические характеристики, сходные с NK-клетками, то следующим этапом исследования была оценка действия Ф1 и Ф2 на изменение уровня экспрессии CD69, CD25, HLA-DR и CD 107a NKT-клетками [22]. NKT-лимфоциты экспрессируют как маркеры NK-клеток, так и Т-клеточные дифференцировочные антигены и играют ключевую роль в регуляции иммунного ответа, связывая механизмы врождённого и адаптивного иммунитета. Подобно NK-клеткам, NKT идентифицируются как регуляторы врождённого иммунного ответа и распознают гликолипидные антигены, представленные молекулой CD1d [23]. NKT-клетки, в отличие от других Т-клеток, могут осуществлять немедленный тип ответа на патогены без стадии антигензависимой дифференци-ровки, которая необходима для образования эф-фекторных Т-клеток. При активации NKT-клет-ки осуществляют быструю дегрануляцию и секрецию цитокинов, с помощью которых регулируют функции клеток врождённого иммунитета и участвуют в индукции адаптивного иммунного ответа [24]. NKT-клетки, продуцирующие цитокины, участвуют в регуляции иммунного ответа, который осуществляется путём активации как ТЫ-, так и ТИ2-клеток, и необходим для защиты организма от инфекций и развития опухолей. Изучение возможности воздействия на активность NKT-клеток может иметь решающее значение в
клинике при инфекционных заболеваниях, аутоиммунных процессах и в лечении злокачественных новообразований [25].
После 24-часовой инкубации крови с полисахаридами (Ф1 и Ф2) увеличивались как относительное количество NKT-лимфоцитов, экспрес-сирующих CD69, CD25 и HLA-DR, так и плотность экспрессии этих маркеров. Как и на NK-клетках, более выраженное действие Ф2 по сравнению с Ф1 оказывал только на уровень экспрессии CD69 (табл. 2). Кроме того, Ф1 и Ф2 увеличивали относительное количество N^-^^™^ экспрессирующих на поверхности CD107a.
Эти данные свидетельствуют о том, что Ф1 и Ф2 активируют NKT-клетки, хоть и малочисленную субпопуляцию, но тем не менее играющую важнейшую роль в регуляции направленности действия иммунного ответа, что очень важно для разработки фармакологических препаратов.
Результатом активации NK- и NKX-клеток является секреция ими цитокинов. Полученные ранее нами результаты показали, что Ф1 и Ф2 в системе in vitro усиливают продукцию провоспа-лительных (TNFa, IFN-y, IL-8) цитокинов и ре-гуляторного медиатора IL-10 [26].
NK- и NKT-клетки участвуют практически во всех реакциях иммунной системы и, увеличивая синтез IFNy, вносят вклад в развитие Th1-иммунного ответа.
Полисахариды являются природными биополимерами и широко используются в качестве продуктов питания, косметических средств и фармацевтических препаратов. Химическая или ферментативная модификация структуры природных полисахаридов может использоваться для возможности их стандартизации и снижения побочных эффектов. При этом важно сохранить биологическую активность природных полисахаридов. Ферментативные биопроцессы, применяющиеся для трансформации полисахаридов, являются более специфичными и избирательными по сравнению с химическими методами. Наши исследования показали, что продукт ферментативного гидролиза (Ф2), характеризующийся более низкой молекулярной массой (50,8 кДа), чем Ф1
(130-430 кДа), выделенный из бурой водоросли Fucus evanescens, не потерял биологической активности. Оба полисахарида увеличивают экспрессию молекул активации (CD69, CD25, HLA-DR) и маркера дегрануляции (CD107a) на NK- и NKT-клетках, а также субпопуляцию CD8-пози-тивных NK-клеток. Фенотипические изменения NK- и NKT-клеток приводят к возрастанию их цитотоксического потенциала и возможности регуляции иммунного ответа.
ЛИТЕРАТУРА
1. Farag S.S., Caligiuri M.A. Human natural killer cell development and biology. Blood Rev 2006; 20: 123-137.
2. Jiao G, Yu G, Zhang J., Ewart H.S. Chemical structures and bioactivities of sulfated polysaccharides from marine algae. Mar Drugs 2011; 9: 196-223.
3. Pomin V.H. Marine non-glycosaminoglycan sulfated glycans as potential pharmaceuticals. Pharmaceuticals 2015; 8: 848-864.
4. Jesus Raposo M.F., Morais A.M., Morais R.M. Marine polysaccharides from algae with potential biomedical applications. Mar Drugs 2015; 13 (5): 2967-3028.
5. Cumashi A., Ushakova N.A., Preobrazhenskaya M.E., DIncecco A., Piccoli A., Totani L. et al. A comparative study of anti-inflammatory, anticoagulant, antiangiogenic, and antiadhesive activities of nine different fucoidans from brown seaweeds. Glycobiology 2007; 17 (5): 541-552.
6. Koyanagi S, Tanigawa N, Nakagawa H, Soeda S, Shimeno H. Oversulfation of fucoidan enhances its anti-angiogenic and antitumor activities. Biochem Pharmacol 2003; 65 (2): 173-179.
7. Berteau O, Mulloy B. Sulfated fucans, fresh perspectives: structures, functions, and biological properties of sulfated fucans and an overview of enzymes active toward this class of polysaccharide. Glycobiology 2003; 13 (6): 29-40.
8. Kusaykin M.I., Chizhov A.O., Grachev A.A., Alekseeva S.A., Bakunina I.Yu, Nedashkovskaya O.I. et al. A comparative study of specificity of fucoidanases from marine microorganisms and invertebrates. Journal of Applied Phycology 2006; 18: 369-373.
9. Кузнецова T.A., Смолина Т.П., Беседнова Н.Н, Силъченко А.С., Имбс Т.И., Ермакова С.П. Влияние сульфатированных полисахаридов из бурой водоросли Fucus evanescens и продукта их ферментативной трансформации на функциональную активность клеток врождённого иммунитета. Антибиотики и химиотер. — 2016. — Т. 61. — №7-8. — С. 10-14. / Kuznetsova T.A., Smolina T.P., Besednova N.N., Sil'chenko A.S., Imbs T.I., Ermakova S.P. Vliyanie sul'fatirovannykh polisakharidov iz buroj vodorosli Fucus evanescens i produkta ikh fermentativnoj transfor-matsii na funktsional'nujyu aktivnost' kletok vrozhdennogo immuniteta. Antibiotiki i khimioter 2016; 61 (7-8): 10-14. [in Russian]
10. Anastyuk S.D., Shevchenko N.M., Dmitrenok P.S., Zvyagintseva T.N. Structural similarities of fucoidans from brown algae Silvetia babingtonii and Fucus evanescens, determined by tandem MALDI-TOF mass spec-trometry. Carbohydr Res 2012; 358: 78-81.
11. Силъченко A.C. Фукоиданазы и альгинат-лиазы морской бактерии Formosa algae KMM 3553T и морского моллюска Lambis sp.: автореф. дис. канд. хим. наук: Владивосток. 2014. — 24 с. / Sil'chenko A.C. Fukoidanazy i al'ginat-liazy morskoj bakterii Formosa algae KMM 3553T i morskogo molljyuska Lambis sp.: avtoref. dis. kand. khim. nauk: Vladivostok. 2014; 24. [in Russian]
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ:
Смолина Татъяна Павловна — к. б. н., ведущий научный сотрудник лаборатории иммунологии «НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г. П. Сомова», Владивосток Кузнецова Татьяна Алексеевна — д. м. н., главный научный сотрудник лаборатории иммунологии «НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г. П. Сомова», Владивосток Иванушко Людмила Александровна — к. м. н., старший научный сотрудник лаб. иммунологии «НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г. П. Сомова», Владивосток
В связи с тем, что NK- и NKT-клеткам принадлежит важнейшая роль в иммунологическом надзоре, представляется перспективным дальнейшее исследование природныгх и ферментатив-но трансформированных сульфатированных полисахаридов из Fucus evanescens с целью создания на их основе фармакологических противовирусных и противоопухолевых препаратов.
12. Borrego F., Robertson M.J., Ritz J., Pena J., Solana R. CD69 is stimulatory receptor for natural killer cell and its cytotoxic effect. Immunology 1999; 97 (1): 159-165.
13. Marzio R, Mauel J., Betz-Corradin S. CD69 and regulation ofthe immune function. Immunopharmacol Immunotoxicol 1999; 21 (3): 565-582.
14. Rudnicka K., Matusiak A., Chmiela M. CD25 (IL-2R) expression correlates with the target cell induced cytotoxic activity and cytokine secretion in human natural killer cells. Acta Biochim Pol 2015; 62 (4): 885-894.
15. Skak K, Frederiksen K.S, Lundsgaard D. Interleukin-21 activates human natural killer cells and modulates their surface receptor expression. Immunology 2008; 123 (4): 575-583.
16. Li W, Janowicz D.M., Fortney K.R., Katz. B.P., Spinola S.M. Mechanism of human natural killer cell activation by Haemophilus ducreyi. J Infect Dis 2009; 200 (4): 590-598.
17. Roncarolo M.G., Bigler M, Haanen J.B., Yssel H, Bacchetta R, de Vries J.E. et al. Natural killer cell clones can efficiently process and present protein antigens. J Immunol 1991; 147 (3): 781-787.
18. Yano N, Endoh M, Nomoto Y, Sakai H, Rifai A. Increase of HLA-DR-positive natural killer cells in peripheral blood from patients with IgA nephropathy. Hum Immunol 1996; 49 (1): 64-70.
19. Evans J.H, Horowitz A, Mehrabi M, Wise E.L., Pease J.E, Riley E.M., et al. A distinct subset of human NK cells expressing HLA-DR expand in response to IL-2 and can aid immune responses to BCG. Eur J Immunol 2011; 41 (7): 1924-1933.
20. Addison E.G., North J., Bakhsh I, Marden C, Haq S, Al-Sarraj S. et al. Ligation of CD8a on human natural killer cells prevents activation-induced apoptosis and enhances cytolytic activity. Immunology 2005; 116 (3): 354-361.
21. Betts M.R., Koup R.A. Detection of T-cell degranulation: CD107a and b. Methods Cell Biol 2004; 75: 497-512.
22. Emoto M., Kaufmann S.H. Liver NKT cells: an account of heterogeneity. Trends Immunol 2003; 24 (7): 364-369.
23. Loza M.J., Metelitsa L.S., Perussia B. NKT and T cells: coordinate regulation of NK-like phenotype and cytokine production. Eur J Immunol 2002; 32 (12): 3453-3462.
24. Colucci F.I., Caligiuri M.A., Di Santo J.P. What does it take to make a natural killer? Nat Rev Immunol 2003; 3 (5): 413-425.
25. Godfrey D.I, MacDonald H.R, Kronenberg M.M., Smyth M.J., Van Kaer L. NKT cells: what's in a name? Nat Rev Immunol 2004; 4 (3): 231-237.
26. ИванушкаЛ.А., Имбс Т.И. Сравнительное изучение цитокинидуцирую-щих свойств фукоидана из бурой водоросли Fucus evanescens и его производных. Здоровье. Медицинская экология. Наука. — 2017. — № 70. — С. 60-62. / Ivanushko LA.., Imbs T.I. Sravnitel'noe izuchenie tsitokinidut-sirujyushchikh svojstv fukoidana iz buroj vodorosli Fucus evanescens i ego proizvodnykh. Zdorov'e. Meditsinskaya ekologiya. Nauka 2017; 70: 60-62. [in Russian]
Гажа Анна Константиновна — к. м. н., старший научный сотрудник лаб. иммунологии «НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г. П. Сомова», Владивосток Сильченко Артем Сергеевич — к. х. н., старший научный сотрудник лаб. химии ферментов Тихоокеанского института биоорганической химии им. Г. Б. Елякова ДВО РАН, Владивосток
Беседнова Наталия Николаевна — академик РАН, д. м. н., проф., главный научный сотрудник лаб. иммунологии «НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г. П. Сомова», Владивосток
