CC BY
20
Международная конференция «Репродуктивная медицина: взгляд молодых — 2016» International conference "Reproductive medicine: young scientists' overlook — 2016"
фенотипические и функциональные характеристики лейкоцитов периферической крови и их микрочастиц при гестозе
© в.А. Михайлова, н. с.
ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», отдел иммунологии, лаборатория межклеточных взаимодействий, г Санкт-Петербург, Россия
Актуальность проблемы
Развитие патофизиологического процесса при гестозе сопровождается изменением состава основных популяций лейкоцитов в периферической крови и децидуальной оболочке. В литературе представлены разрозненные данные о феноти-пических характеристиках лейкоцитов периферической крови матери при гестозе, тогда как их функциональные свойства остаются практически не исследованными. Изменение функционального состояния лейкоцитов при гестозе может быть связано с различием в характеристиках микрочастиц клеток, присутствующих в периферической крови.
Целью работы явилось изучение характеристик лейкоцитов и их микрочастиц, выделенных из периферической крови женщин с беременностью, осложненной гестозом.
материалы и методы исследования
Обследовано 422 женщины во время и вне беременности: здоровые небеременные женщины, соматически здоровые женщины с физиологически протекающей беременностью (38-39 недель) и беременные женщины с гестозом (38-39 недель). В работе была проведена оценка особенности адгезии и трансэндотелиальной миграции мононуклеа-ров периферической крови, которую выполняли in vitro с применением совместной инкубации моно-нуклеаров периферической крови и эндотелиаль-ных клеток линии Ea.Hy926. С использованием метода проточной цитофлюориметрии с помощью FACSCantoII (BD, США) проведена оценка экспрессии лейкоцитами периферической крови адгезионных молекул, рецепторов к хемокинам и ростовым факторам. Для проведения оценки функциональной активности NK-клеток мононуклеары периферической крови инкубировали в присутствии антител к CD 107a, 8 мкг/мл монензина, стандартного реагента для активации лейкоцитов и TRAIL в различных модификациях, с последующей оценкой экспрессии NK-клетками маркеров активации. Для анализа микрочастиц периферическую кровь последовательно центрифугировали при 2600g, 9900g, 19800g. Микрочастицы разводили в растворе Хенкса с 0,35 % бычьим сывороточным альбумином, обрабатывали антителами. Атомно-силовая микроскопия препаратов микрочастиц выполнена на сканирующем зондовом микроскопе Интегра Аура (NT-MDT,
Россия). Оценка влияния микрочастиц плазмы крови на функциональные свойства клеток проведена путем инкубации клеток линии THP-1 в присутствии микрочастиц в течение суток с последующей оценкой фенотипа клеток.
Результаты исследования
Установлено, что гестоз по сравнению с физиологической беременностью сопровождается повышенной экспрессией CD18CD8+ Т-лимфоцитами (p < 0,05), CD1k NK-клетками (p < 0,05) и CD119 моноцитами (p < 0,05) периферической крови и повышенной функцией адгезии лимфоцитов и моноцитов in vitro как к интактным (p < 0,05), так и к активированным (p < 0,05) эндотелиальным клеткам линии Ea.Hy926. Установлено, что при гестозе по сравнению с физиологической беременностью снижена экспрессия CD107a NK-клетками после активации (p< 0,05). Установлено, что гестоз по сравнению с физиологической беременностью характеризуется присутствием в периферической крови повышенного количества TRAIL+ NK- клеток (p < 0,05). Выявленные фенотипические и функциональные характеристики лимфоцитов и моноцитов при гестозе могут определять их миграцию в деци-дуальную оболочку и их участие в развитии воспаления. Выявленные изменения экспрессии CD107a и TRAIL NK-клетками отражают происходящую при гестозе смену стратегии реализации цитоток-сических эффектов NK- клеток, а именно снижение способности реализовывать цитотоксический ответ с образованием гранзимов и перфорина и предрасположенностью NK-клеток индуцировать TRAIL-опосредованный апоптоз клеток-мишеней. Установлено повышенное количество микрочастиц с фенотипом CD45+CD16+CD56+ (p < 0,001) у женщин с физиологической беременностью по сравнению с небеременными женщинами, что может отражать гибель цитотоксических NK-клеток. При гестозе по сравнению с физиологической беременностью выявлено повышенное количество микрочастиц, образованных нейтрофилами и моноцитами (CD45+CD16+CD56) (p< 0,001). Показано, что гестоз сопровождается присутствием сниженного количества микрочастиц, образованных NK-клетками (CD45+CD16+CD56+) (p < 0,001). Вероятно, повышенное количество микрочастиц нейтрофилов и моноцитов является следствием развивающейся при гестозе воспалительной реакции,
ЖУРИАЛЪ АКУШЕРСТВА " ЖЕНСКЖЪ БОЛЬЗНЕЙ
ТОМ LXVСПЕЦВЫПУСК 2016
ISSN 1684-0461
ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
83
а повышенное содержание микрочастиц NK-клеток связано с нарушением механизмов развития иммунологической толерантности, а именно дефектом в индукции гибели активированных NK-клеток. Установлено, что микрочастицы женщин с физиологической беременностью снижают экспрессию рецептора для ^-8 (р < 0,05) и повышают экспрессию адгезионных молекул CD18 (р < 0,05) и CD54 (р< 0,05) клетками линии ТНР-1. Микрочастицы женщин с гестозом по сравнению с микрочастицами женщин с физиологической беременностью повышают экспрессию CD181 (р < 0,05) клетками линии ТНР-1.
выводы
Гестоз по сравнению с физиологической беременностью характеризуется повышенной экс-
прессией отдельных адгезионных рецепторов и повышенной способностью лимфоцитов и моноцитов периферической крови к адгезии к активированным эндотелиальным клеткам линии Ea.Hy926, что определяет предрасположенность лимфоцитов и моноцитов к интенсификации миграции в децидуальную оболочку при гестозе. Развитие гестоза сопровождается увеличением количества микрочастиц плазмы крови, образованных нейтрофилами и моноцитами, что отражает развитие воспалительной реакции при данной патологии. Микрочастицы плазмы периферической крови женщин с физиологической беременностью и с гестозом обладают разнонаправленными эффектами на клетки в условиях in vitro, что указывает на возможность существования регуляторной функции микрочастиц.
экспериментальная модель острого жирового гепатоза на беременных крысах
© л.С. полянских, н. с., н.н. Балашова, м. н. с.
ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», г. Санкт-Петербург, Россия
Актуальность проблемы
Острый жировой гепатоз (ОЖГ) является одним из самых тяжелых осложнений беременности (1 на 13 000 родов), приводящих к высокой материнской и перинатальной смертности. Успех лечения определяется прежде всего своевременным распознаванием этого заболевания и ранним родоразрешением, а также совершенствованием методов интенсивной фармакотерапии.
В настоящее время существует около 20 моделей печеночной патологии. У животных наиболее близкие к человеку морфологические изменения паренхимы печени возникают в экспериментальных условиях при введении гепатотоксинов. Это наиболее эффективный способ индуцирования патологии печени у лабораторных животных.
К наиболее распространенным гепатотоксинам для создания моделей повреждения печени относятся: четыреххлористый углерод, ацетаминофен, ацетон, D-галактозамин гидрохлорид, этанол, а-нафтилизотиоцианат и др. Оральное, внутри-брюшинное, подкожное или ингаляционное введение этих гепатотоксинов приводит к острому, обратимому повреждению печени, дистрофическим изменениям печени, почек и других органов, поражению ЦНС.
В литературе также имеются данные о моделировании липемии, вызываемой введением препаратов тритон WR-1339 (тилоксапол) и поликса-мер-407 у мышей. Преимуществами этих моделей являются простота воспроизведения, низкая токсичность полимеров, дозозависимый эффект со-
единений при воспроизведении липемии разной степени выраженности.
Цель исследования: создать экспериментальную модель ОЖГ на беременных самках крыс.
Материалы и методы исследования
Моделирование ОЖГ проводили на крысах линии Вистар на 15-18-й день беременности. Всего в эксперименте было использовано 24 самки крыс, из которых были сформированы две группы животных:
• контрольная группа (п = 8) получала с 15-го по 18-й день беременности инъекции растворителя (стерильная вода для приготовления лекарственных форм для инъекций);
• подопытная группа (п = 16) получала в те же сроки беременности инъекции препарата тритон WR-1339 ^та-АЫйЛ, США).
Ранее проведенные пилотные исследования показали, что стабильный гепатотоксический эффект наблюдается только в случае ежедневного назначения препарата в дозе не менее 300 мг/кг более 3 дней. Основываясь на этих данных, с целью моделирования ОЖГ животным подопытной группы внутрибрюшинно вводили препарат тритон WR-1339 в дозе 300 мг/кг ежедневно в течение 4 дней. О развитии токсического поражения печени судили по изменениям биохимических показателей крови. При биохимических исследованиях определяли 12 основных показателей: активность трансаминаз (АСТ, АЛТ), содержание желчных кислот, билирубина, активность
ЖУРНАЛЪ АКУШЕРСТВА и ЖЕНСКИХЪ БОЛМНЕЙ
ТОМ LXVСПЕЦВЫПУСК 2016
ISSN 1684-0461
