CC BY
76
ИММУНОЛОГИЯ № 5, 2012
8. Hayashi H., Sakai T. Biological significance of local TGF-P activation in liver diseases. Front. Physiol. 2012; 3: 12.
9. Im M., Chae H., Kim T. et al. Comparative quantitative analysis of cluster of differentiation 45 antigen expression on lymphocyte subsets. Korean J. Lab. Med. 2011; 3(13): 148-153.
10. Kotenko S. V IFN-Xs. Curr. Opin. Immunol. 2011; 23(5): 583-590.
11. Li M. L., Tian W. W., Gao Y. D. et al. Genome-wide prediction of interferon family members of tree shrew and their molecular characteristics analysis. Dongwuxue Yanjiu 2012; 33(1): 67-74.
12. LuH. G., PengH., Chen D. H. et al. Relationship between allergic symptoms and RORC2, and IL-17 in patients with allergic rhinitis. Zhonghua Er Bi Yan Hou Tou Jing Wai Ke Za Zhi 2011; 46(2): 144-148.
13. Pandya A. D., Al-Jaderi Z., HoglundR. A. et al. Identification of human NK17/NK1 cells. PLoS One 2011; 6(10): e26780.
14. Qu S. H., Li M., Liang J. P. et al. Change of Th17 and expression of RORyt in a murine model of allergic rhinitis after a stimulation
of allergen and corticosteroid. Zhonghua Yi Xue Za Zhi 2011; 91(6): 401-404.
15. Quaglino P., Bergallo M., Ponti R. et al. Th1, Th2, Th17 and regulatory T cell pattern in psoriatic patients: Modulation of cytokines and gene targets induced by etanercept treatment and correlation with clinical response. Dermatology 2011;
16. Solinhac R., Mompart F., Martin P. et al. Transcriptomic and nuclear architecture of immune cells after LPS activation. Front Physiol. 2011; 2: 41.
17. Walsh N. P., Gleeson M., ShephardR. J. et al. Position statement. Part one: Immune function and exercise. Exerc. Immunol. Rev. 2011; 17: 6-63.
18. Zimmermann H. W., Seidler S., Gassler N. et al. Interleukin-8 is activated in patients with chronic liver diseases and associated with hepatic macrophage accumulation in human liver fibrosis. PLoS One 2011; 6(6): e21381.
Поступила 02.04.12
КЛЕТОЧНАЯ ИММУНОЛОГИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2012 УДК 618.3-008.6-092:612.017.1.014
В. А. Михайлова, О. М. Овчинникова, С. А. Сельков, Д. И. Соколов
особенности трансэндотелиальной миграции мононуклеаров периферической крови при физиологической беременности и гестозе
Лаборатория иммунологии ФГБУ Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта СЗО РАМН (199034, г Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3)
гестоз по сравнению с физиологической беременностью сопровождается повышенной функцией адгезии лимфоцитов и моноцитов периферической крови к эндотелию. Целью настоящей работы стала оценка функции трансэндотелиальной миграции лимфоцитов и моноцитов при физиологическом течении беременности и гестозе. Выявлено, что при гестозе количество T-лимфоцитов, CD4+-T-лимфоцитов, CD8+-T-лимфоцитов, NK-клеток и NKT-клеток, мигрировавших через монослой эндотелиальных клеток, снижено по сравнению с таковым при физиологической беременности, что отражает функциональные нарушения лимфоидных клеток иммунной системы при данной патологии. Работа выполнена при финансовой поддержке грантов НШ № 131.2012.7, ТК № 02.740.11.0711, МД-150.2011.7.
Ключевые слова: беременность, гестоз, трансэндотелиальная миграция, мононуклеары, лимфоциты, моноциты
V.A. Mikhaylova, O.M. Ovchinnikova, S.A. Selkov, D.I. Sokolov
CHARATERISTICS OF TRANSENDOTHELIAL MIGRATION OF PERIPHERAL BLOOD MONONULAER CELLS IN CASE OF HEALTHY PREGNANCY AND PREECLAMPSIA
Preeclampsia is associated with intensified adhesion function of peripheral blood lymphocytes and monocytes to endothelium. The aim of the present study was the assessment of transendothelial migration of lymphocytes and monocytes in case of healthy pregnancy and preeclampsia. We showed that in case of preeclampsia the amount of T-lymphocytes, CD4+ T-lymphocytes, CD8+ T-lymphocytes, NK-cells and NKT-cells which migrated through endothelial monolayer decreased when comparing with healthy pregnancy. This decrease is a possible result of malfunction of lymphoid cells in case of preeclampsia. This work was supported by grants НШ-131.2012.7, ГК №02.740.11.0711, МД-150.2011.7.
Keywords: pregnancy, preeclampsia, transendothelial migration, mononuclear cells, lymphocytes, monocytes
Введение. Частота возникновения гестоза при беременности достигает 6-8% в развитых странах и превышает 20% в развивающихся [1]. Несмотря на то что в литературе представлено большое количество исследований, посвященных
Михайлова Валентина Анатольевна - науч. сотр., асп., тел. 8(981)741-51-60, e-mail: [email protected]
гестозу, механизмы возникновения и развития этой патологии в настоящее время четко не установлены. Поэтому актуальным является определение механизмов, нарушающих физиологическое течение беременности и характерных для развития гестоза, на тканевом и особенно на клеточном уровне. При физиологическом течении беременности в ткани плаценты и децидуальной ткани присутствуют различные популяции лейкоцитов, основными из которых являются NK-клетки и макро-
- 236 -
КЛЕТОЧНАЯ ИММУНОЛОГИЯ
фаги [17]. За счет экспрессии клетками трофобласта молекул локуса HLA-G, а также ряда других механизмов индуцируется состояние иммунологической толерантности клеток иммунной системы матери по отношению к плоду, который, по сути, является полуаллогенным трансплантатом в организме матери [18]. При гестозе по сравнению с физиологической беременностью в децидуальной ткани повышено количество NK-клеток и цитотоксических T-лимфоцитов [23]. Гестоз сопровождается нарушением экспрессии молекул локуса HLA-G на клетках трофобласта [16], в результате которой цитотоксическая активность NK-клеток и CD8+-T-лимфоцитов не подавляется. Также при гестозе в ткани плаценты наблюдаются мононуклеарные инфильтраты [10], что в целом указывает на наличие воспалительной реакции в ткани плаценты при гестозе. Несмотря на присутствие в децидуальной ткани и ткани плаценты клеток иммунной системы, механизм образования и пополнения пула этих клеток требует уточнения. Одним из возможных путей, определяющих увеличение количества клеток иммунной системы в децидуальной ткани и ткани плаценты, является их миграция из периферической крови. Ранее нами установлено, что при гестозе по сравнению с физиологической беременностью в периферической крови повышено количество активированных T-лимфоцитов, цитотоксических T-лимфоцитов, NK-клеток и NKT-клеток [7]. При гестозе по сравнению с физиологической беременностью повышена адгезия лимфоцитов и моноцитов периферической крови к эндотелиальным клеткам [8]. Целью настоящего исследования стала оценка функции трансэндотелиальной миграции лимфоцитов и моноцитов при физиологическом течении беременности и гестозе.
Материалы и методы. Анализ трансэндотелиальной миграции мононуклеаров периферической крови провели у 85 женщин (27 небеременных женщин без признаков воспалительных процессов и иных признаков патологий на момент исследования, 27 беременных женщин с физиологическим течением беременности (38-39 нед), 31 беременная женщина с гестозом (38-39 нед)). Критериями исключения являлись сахарный диабет 1-го типа, многоводие, маловодие, урогенитальная инфекция, острая инфекция или обострение хронической инфекции, гипертоническая болезнь и заболевания системы кровообращения. Получено информированное согласие пациенток на обследование.
Накануне опыта производили пересев линии клеток EA.hy926. Часть полученной клеточной суспензии тщательно ресуспензировали в культуральной среде и вносили во вставки для 24-луночных планшетов с поликарбонатным фильтром (размер пор 8 мкм; «BD Falkon», США) в количестве 45 000 клеток на вставку в среде DMEM/F12 с добавлением
Рис. 1. Модель, используемая для оценки трансэндотелиальной миграции мононуклеаров периферической крови.
10% ЭТС. Клетки линии Ea.hy926, помещенные во вставки, установленные в 24-луночный планшет, инкубировали до образования конфлюэнтного монослоя при 37C во влажной атмосфере с 5% содержанием CO2. Однородность монослоя эндотелиальных клеток контролировали при помощи инвертированного микроскопа Axio Observer Z-1 («Zeiss», Германия).
Мононуклеары периферической крови выделяли стерильно при помощи стандартного метода с использованием центрифугирования в градиенте плотности фиколла-верографина (Histopaque®-1077 Hybri-Max, «Sigma», США).
В верхнюю камеру (вставка с эндотелиальными клетками на фильтре; рис. 1) вносили мононуклеары в количестве 1 ■ 106 клеток в 200 мкл среды DMEM/F12 с добавлением 10% ЭТС. В работе оценивали как спонтанную трансэндотелиальную миграцию мононуклеаров периферической крови, так и в присутствии фактора некроза опухоли а (TNF-а). Для этого в нижнюю камеру (лунка 24-луночного планшета) вносили 700 мкл среды DMEM/F12 с добавлением 10% ЭТС (см. рис.
1). В часть нижних камер также вносили TNF-а в концентрации 50 Ед/мл. Затем клетки инкубировали в течение 24 ч при 37°C во влажной атмосфере с 5% содержанием CO2. После инкубации все содержимое нижней камеры собирали в пробирки, клетки осаждали путем центрифугирования (200 g) и окрашивали антителами к рецепторам CD45, CD3, CD4, CD8, CD16, CD56, CD14 (BD, США) в соответствии с указаниями производителя. Оценивали как относительное, так и абсолютное количество лимфоцитов и моноцитов периферической крови. Содержание лимфоцитов и моноцитов изучали по распределению клеток в координатах малого углового (FSC) и бокового (SSC) светорассеяния. Уровень отдельных
Таблица 1
Относительное количество (в %) клеток периферической крови, мигрировавших в нижнюю камеру
Мононуклеары периферической крови Спонтанная миграция Миграция в присутствии TNF-a
здоровые небеременные женщины (n = 27) физиологическая беременность (n = 27) гестоз (П = 31) здоровые небеременные женщины (n = 27) физиологическая беременность (n = 27) гестоз (П = 31)
Лимфоциты 88,3 ± 1,3 78,2 ± 3,2** 69,9 ± 3,3*** 91,7 ± 0,9* 79,2 ± 3,7** 73,0 ± 3,5
Моноциты 9,6 ± 1,2 19,7 ± 3,1** 26,0 ± 3,1 6,5 ± 0,8* 18,2 ± 3,5** 22,3 ± 3,6
CD45+CD3+ 81,4 ± 0,9 82,0 ± 1,3 80,3 ± 1,4 81,5 ± 0,9 80,7 ± 1,5 80,3 ± 1,2
CD45+CD3+CD4+ 53,3 ± 1,1 51,8 ± 1,1 52,1 ±1,5 52,9 ± 1,3 52,0 ± 1,5 51,7 ± 1,4
CD45+CD3+CD8+ 23,0 ± 1,0 25,2 ± 1,3 24,3 ± 1,0 23,3 ± 1,1 24,6 ± 1,2 24,7 ± 0,9
CD45+CD3-CD16+CD56+ 7,9 ± 0,6 6,8 ± 0,7 8,1 ± 0,9 8,4 ± 0,9 6,8 ± 0,6 8,5 ± 0,9
CD45+CD3+CD16+CD56+ 0,6 ± 0,1 0,8 ± 0,1 1,3 ± 0,3 0,6 ± 0,1 0,8 ± 0,1 1,1 ± 0,2
Примечание. * - p < 0,05 (количество спонтанно мигрировавших клеток отличается от количества клеток, мигрировавших в присутствии TNF-а, внутри группы). Здесь и в табл. 2: ** -p < 0,05 (показатели у женщин с физиологическим течением беременности достоверно отличаются от таковых у здоровых небеременных женщин); *** -p < 0,05 (показатели у женщин с гестозом достоверно отличаются от таковых у женщин с физиологическим течением беременности).
- 237 -
ИММУНОЛОГИЯ № 5, 2012
Таблица 2
Абсолютное количество клеток периферической крови, мигрировавших в нижнюю камеру, на 1000 стандартных частиц TruCount
Мононуклеары периферической крови Спонтанная миграция Миграция в присутствии TNF-a
здоровые небеременные женщины (п = 27) физиологическая беременность (п = 27) гестоз (п = 31) здоровые небеременные женщины (п = 27) физиологическая беременность (п = 27) гестоз (п = 31)
Лимфоциты 1981±220 2126± 184 1281± 161** 1956± 187 2024± 194 1189± 128**
Моноциты 216 ± 32 396 ± 70 507 ± 95 145 ± 23 268 ± 55 549± 110
CD45+CD3+ 1607± 179 1723 ± 167 1020± 125** 1584± 155 1636± 166 940± 100**
CD45+CD3+CD4+ 1045 ± 124 1103± 97 656 ± 81** 1028± 101 1032± 101 593 ± 63**
CD45+CD3+CD8+ 464 ± 55 558 ± 66 313±42*** 435 ± 45 496 ± 63 314 ± 37*
CD45+CD3-CD16+CD56+ 159 ± 20 153 ± 20 110±21* 163 ± 22 144 ± 16 111± 17*
CD45+CD3+CD16+CD56+ 12 ± 2 18 ± 2* 7 ± 1*** 12 ± 2 17 ± 2 7 ± 5*
Примечание.* - p < 0,05 (группа женщин с физиологическим течением беременности достоверно отличается от группы здоровых небеременных женщин); ** -p < 0,01; *** -p < 0,001 (показатели у женщин с гестозом достоверно отличаются от таковых у женщин с физиологическим течением беременности).
популяций лимфоцитов оценивали по характеру экспрессии рецепторов CD45, CD3, CD4, CD8, CD16, CD56, CD14. Абсолютное количество мигрировавших клеток определяли в пробирках для подсчета абсолютного количества клеток Trncount (BD, США), содержащих известное количество стандартных частиц. В качестве контроля неспецифического связывания антител использовали окрашивание клеток неспецифическими изотипическими антителами.
Результаты и обсуждение. В настоящей работе изучали как спонтанную миграцию лимфоцитов и моноцитов через эндотелий, так и индуцированную (под воздействием TNF-a). TNF-a является хемоаттрактантом для лимфоцитов [14] и моноцитов [19], кроме того, он активирует эндотелиальные клетки, индуцирует экспрессию ими адгезионных молекул ICAM-1 [21] и таким образом стимулирует миграцию лимфоцитов и моноцитов через эндотелий. Установлено, что у здоровых небеременных женщин относительное количество лимфоцитов, мигрировавших в нижнюю камеру в присутствии TNF-a, выше, чем количество спонтанно мигрировавших лимфоцитов (табл. 1), что согласуется с данными о влиянии TNF-a на миграцию лимфоцитов [14]. Установлено, что у здоровых небеременных женщин количество моноцитов, спонтанно мигрировавших в нижнюю камеру, выше по сравнению с их количеством, мигрировавшим в ответ на TNF-a (табл. 1). Ранее показано, что в условиях совместного культивирования при трансмиграции моноцитоподобных клеток линии THP-1 через монослой эндотелиальных клеток, активированных TNF-a, снижается уровень секреции
100л
90807060504030 -L
—г~
2
я Медиана !=□ 35-65%
I Минимум-максимум
Рис. 2. Медианный тест относительного количества (в %) лимфоцитов, мигрировавших в нижнюю камеру в присутствии TNF-a.
1 - физиологическая беременность; 2 - гестоз.
цитокинов, привлекающих моноциты [11]. Выявленная нами сниженная миграция моноцитов в ответ на TNF-a может являться следствием снижения секреции хемокинов в данной модельной системе в присутствии TNF-a.
Клетки иммунной системы при прохождении зоны маточно-плацентарного кровообращения подвергаются воздействию цитокинов и хемокинов, секретируемых децидуальной тканью [15], что определяет изменение их фенотипических и функциональных характеристик [20]. Ранее установлено, что лимфоциты и моноциты периферической крови экспрессируют рецепторы к ряду хемокинов, секретируемых тканью плаценты при беременности [2, 3, 6, 9]. В децидуальной ткани при физиологическом течении беременности присутствуют NK-клетки, CD8+-T-лимфоциты, CD4+-T-лимфоциты [23], децидуальные макрофаги [17]. Формирование и пополнение пула этих клеток происходят за счет миграции клеток из периферической крови, что подтверждается полученными нами данными о высоком уровне трансэндотелиальной миграции лимфоцитов и моноцитов через эндотелий при физиологической беременности. Однако если трансэндотелиальная миграция моноцитов у женщин с физиологической беременностью была выше, чем у небеременных женщин, то миграция лимфоцитов была снижена (см. табл. 1). Ранее установлено, что у женщин при физиологической беременности по сравнению с небеременными женщинами также снижена функция адгезии лимфоцитов к эндотелию [8], что коррелирует с отмеченным нами снижением функции трансэндотелиальной миграции лимфоцитов. Подобное снижение может быть связано с предотвращением избыточной миграции лимфоцитов в децидуальную ткань. Сходный характер трансэндотелиальной миграции наблюдается также в присутствии TNF-a: у женщин с физиологическим течением беременности по сравнению со здоровыми небеременными женщинами относительное количество лимфоцитов также снижено, а моноцитов повышено по сравнению с таковым у здоровых небеременных женщин (см. табл. 1). Эти изменения частично согласуются с ранее полученными данными по адгезии мононуклеаров к активированному TNF-a эндотелию: функция адгезии лимфоцитов у женщин при физиологической беременности не изменялась по сравнению с аналогичным показателем у небеременных женщин, а функция адгезии моноцитов была выше при физиологической беременности [8]. Таким образом, присутствие TNF-a не оказывало влияния на характер трансэндотелиальной миграции лимфоцитов и моноцитов здоровых небеременных женщин и женщин с физиологическим течением беременности. Это может быть связано с пропорциональным увеличением секреции хемокинов для лимфоцитов (RANTES, IP-10) и моноцитов (интерлейкин (IL)-8, MCP-1), отмеченной в модельной системе трансэндотелиальной миграции клеток линии THP-1 [11].
- 238 -
КЛЕТОЧНАЯ ИММУНОЛОГИЯ
У женщин с физиологическим течением беременности по сравнению с небеременными женщинами также выявили повышенное абсолютное количество NKT-клеток, спонтанно мигрировавших в нижнюю камеру (табл. 2). Содержание NKT-клеток повышается в децидуальной ткани при физиологической беременности, что сопровождается повышенной продукцией этими клетками интерферона (IFN)-y и IL-4 [22]. Вероятно, увеличение количества NKT-клеток в децидуальной ткани при физиологической беременности обусловлено повышенной миграцией этих клеток из периферической крови.
Ранее нами показано, что при гестозе экспрессия адгезионных молекул VLA-4 основными популяциями лимфоцитов ниже, а экспрессия CD11c NK-клетками и CD8+-T-лимфоцитами CD18 выше, чем при физиологической беременности [3, 5, 6]. У моноцитов экспрессия рецептора к IFN-y (CD119) выше при гестозе по сравнению с таковой при физиологической беременности [4].
Выявили, что у женщин с беременностью, осложненной гестозом, по сравнению с женщинами с физиологической беременностью снижено как относительное, так и абсолютное количество лимфоцитов, спонтанно мигрировавших в нижнюю камеру. Также при гестозе по сравнению с физиологической беременностью в нижней камере после трансмиграции снижено абсолютное количество таких популяций лимфоцитов, как T-лимфоциты, CD4+-T-лимфоциты, CD8+-T-лимфоциты, NK-клетки и NKT-клетки (см. табл. 2). При добавлении TNF-a характер трансэндотелиальной миграции лимфоцитов в целом, а также миграции отдельных популяций лимфоцитов у пациенток с гестозом сохранялся. Так, по результатам медианного теста относительное количество лимфоцитов, мигрировавших в нижнюю камеру в присутствии TNF-a, снижено при гестозе по сравнению с аналогичным показателем при физиологической беременности (рис.
2). Абсолютное количество лимфоцитов, T-лимфоцитов, хелперных и цитотоксических T-лимфоцитов, NK-клеток и NKT-клеток также снижено при гестозе по сравнению с таковым при физиологической беременности (см. табл. 2). Таким образом, присутствие TNF-a также не влияло на характер трансэндотелиальной миграции лимфоцитов периферической крови у женщин с гестозом. Ранее установлено, что трансэндотелиальная миграция моноцитоподобных клеток линии THP-1 в присутствии кондиционированных сред плацент повышена при гестозе по сравнению с аналогичным показателем при физиологической беременности [12]. Поскольку в настоящей работе функция трансэндотелиальной миграции моноцитов у пациенток с гестозом не отличалась от таковой у женщин с физиологической беременностью, вероятно, изменение трансэндотелиальной миграции при гестозе определяют секретируемые клетками децидуальной ткани и ткани плаценты цитокины.
Ранее установлено, что адгезия моноцитов и лимфоцитов к активированному TNF-a эндотелию повышена при гесто-зе по сравнению с таковой при физиологической беременности [8]. Так как мы не выявили повышения трансэндотелиальной миграции лимфоцитов и моноцитов при гестозе, по-видимому, клетки остаются связанными с эндотелием. Например, нейтрофилы при гестозе за счет экспрессии адгезионных молекул взаимодействуют с эндотелиальными клетками капилляров, однако далее не переходят к этапу трансэндотелиальной миграции, а остаются в связанном состоянии, приводя к нарушению микроциркуляции и развитию клинических проявлений гестоза [13]. Вероятно, лимфоциты и моноциты могут способствовать нарушению микроциркуляции сходным образом.
Несмотря на снижение количества клеток, мигрировавших в нижнюю камеру, при гестозе в целом все популяции лимфоцитов и моноциты мигрируют в нижнюю камеру как спонтанно, так и в присутствии TNF-y. В условиях in vivo механизмы индукции иммунологической толерантности при физиологической беременности предотвращают активацию
клеток иммунной системы, мигрирующих в децидуальную ткань, и способствуют секреции ими цитокинов, необходимых для физиологического развития беременности. При гестозе наблюдается некоторое снижение миграции лимфоцитов, что, вероятно, приводит к уменьшению в децидуальной ткани количества отдельных популяций лимфоцитов, индуцирующих иммунологическую толерантность, что, в свою очередь, вызывает развитие воспалительной реакции в децидуальной ткани.
Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки РФ ГК № 02.740.11.0711 и грантов Президента РФ НШ № 131.2012.7, МД-150.2011.7.
ЛИТЕРАТУРА
1. Айламазян Э. К., Мозговая Е. В. Гестоз: теория и практика. -М., 2008.
2. Михайлова В. А., Климовская Я. С., Аманова Н. В. и др. Экспрессия адгезионных молекул моноцитами периферической крови при беременности // Мед. иммунол. - 2010. - Т. 12, № 4-5. - С. 337-342.
3. Михайлова В. А., Овчинникова О. М., Еремеева Д. Р. и др. Цитотоксические T-лимфоциты периферической крови матери при гестозе: экспрессия адгезионных молекул, хемокиновых рецепторов, активационных маркеров // Иммунология. -2011. - Т. 32, № 5. - С. 256-260.
4. Михайлова В. А., Овчинникова О. М., Максимова И. М. и др. Адгезионные молекулы и хемокиновые рецепторы периферической крови при беременности, осложненной гестозом // Мед. иммунол. - 2011. - Т. 13, № 4-5. - С. 432.
5. Михайлова В. А., Овчинникова О. М., Онохина Я. С. и др. Поверхностные маркеры хелперных T-лимфоцитов периферической крови при гестозе // Материалы XII Всероссийского науч. форума «Мать и дитя». - М., 2011. - С. 148.
6. Михайлова В. А., Онохина Я. С., Сельков С. А. и др. Экспрессия адгезионных молекул и хемокиновых рецепторов NK-клетками периферической крови при беременности // Иммунология. - 2011. - № 2. - С. 78-81.
7. Соколов Д. И., Селютин А. В., Лесничия М. В. и др. Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови беременных женщин с гестозом // Журн. акуш. и жен. бол. - 2007. - Т 56, № 4. - С 17-23.
8. Соколов Д. И., Лесничия М. В., Селютин А. В. и др. Оценка функции адгезии к эндотелиальным клеткам различных субпопуляций мононуклеаров периферической крови беременных женщин в норме и при гестозе // Регионар. кровообращ. и микроцирк. - 2008. - Т 7, № 4. - С. 34-41.
9. Соколов Д. И., Лесничия М. В., Селютин А. В. и др. Роль цитокинов в контроле развития плаценты в норме и при гестозе // Иммунология. - 2009. - № 1. - С. 22-27.
10. Соколов Д. И., Сельков С. А. Иммунологический контроль формирования сосудистой сети плаценты. - СПб., 2012.
11. Старикова Э. А., Соколов Д. И., Сельков С. А. и др. Изменения профиля секретируемых хемокинов эндотелиальных клеток и моноцитов при разных условиях кокультивирования // Бюл. экспер. биол. - 2010. - Т 150, № 10. - С. 420-423.
12. Степанова О. И., Львова Т. Ю., Сафронова Н. Ю. и др. Влияние секреторных продуктов ткани плаценты на трансэндотелиальную миграцию моноцитоподобных клеток линии THP-1 // Мед. иммунол. - 2011. - Т 13, № 4-5. - С. 439-440.
13. Cadden K. A., Walsh S. W. Neutrophils, but not lymphocytes or monocytes, infiltrate maternal systemic vasculature in women with preeclampsia // Hypertens. Pregnancy. - 2008. - Vol. 27, N
4. - P. 396-405.
14. de Jong A. L., Green D. M., Trial J. et al. Focal effect of mononuclear leukocyte thransendothelial migration: TNFa production by migrating monocytes promotes subsequent migration of lymphocytes // J. Leukocyte Biol. - 1996. - Vol. 60. - P. 129-136.
15. Denison F. C., Kelly R. W., Calder A. A. et al. Cytokine secretion by human fetal membranes, decidua and placenta at term // Hum. Reproduct. - 1998. - Vol. 13. - P. 3560-3565.
16. Goldman-Wohl D. S., Ariel I., Greenfielt C. et al. Lack of hu-
- 239 -
ИММУНОЛОГИЯ № 5, 2012
man leukocyte antigen-G expression in extravillous trophoblasts is associated with preeclampsia // Mol. Hum. Reproduct. - 2000. - Vol. 6, N 1. - P. 88-95.
17. Gomez-LopezN., GuilbertL., OlsonD. M. Invasion of leukocytes into the fetal-maternal interface during pregnancy // J. Leukocyte Biol. - 2010. - Vol. 88, N 4. - P. 625-633.
18. Hunt J. S., PetroffM. G., McIntire R. H. et al. HLA-G and immune tolerance in pregnancy // FASEB J. - 2005. - Vol. 9. - P. 681-693.
19. Issekutz A. C., Issekutz T. B. Quantitation and kinetics of blood monocyte migration to acute inflammatory reactions, and IL-1 alpha, tumor necrosis factor-alpha, and IFN-gamma // J. Immunol. - 1993. - Vol. 151, N 4. - P. 2105-2115.
20. Sacks G. P., Studena K., Sargent I. L. et al. Normal pregnancy and preeclampsia both produce inflammatory changes in periph-
eral blood leukocytes akin to those of sepsis // Am. J. Obstetr. Gynecol. - 1998. - Vol. 179. - P. 80-86.
21. Sumagin R., Sarelius I. H. TNFa activation of arterioles and venules alters distribution and levels of ICAM-1 and affects leukocyte-endothelial cell interactions // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. - 2006. - Vol. 291. - P. H2116-H2125.
22. Tsuda H., SakaiM., Michimata T. et al. Characterization of NKT cells in human peripheral blood and decidual lymphocytes // Am. J. Reproduct. Immunol. - 2001. - Vol. 45, N 5. - P. 295-302.
23. Wilczynski J. R., Tchorzewski H., BanasikM. et al. Lymphocyte subset distribution and cytokine secretion in third trimester decidua in normal pregnancy and preeclampsia // Eur. J. Obstetr. Gynecol. Reprod. Biol. - 2002. - Vol. 109. - P. 8-15.
Поступила 17.03.12
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2012 УДК 616-092:612.112.95.017.1
И. И. Долгушин, О. Б. Прокопьева, Т. Г. Смирнова, Е. А. Мезенцева, О. Л. Колесников,
А. Ю. Савочкина, К. В. Никушкина
изучение способности моноцитов, выделенных из периферической крови, образовывать внеклеточные ловушки спонтанно и после активации
ГБОУ ВПО Челябинская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития России, НИИ иммунологии (454092, г Челябинск, ул. Воровского, д. 64)
Целью исследования стало изучение способности моноцитов крови образовывать внеклеточные ловушки при действии на них различных микробных и немикробных факторов. Был разработан метод двухступенчатого выделения моноцитов из периферической крови, который позволяет получить клеточную суспензию, которая состоит на 2/3 из моноцитов, находящихся в неактивированном состоянии. В ходе работы выявлено, что активация моноцитов пи-рогеналом, взвесью Candida albicans при температуре 37C в течение 30 мин и форбол-12-миристат-13-ацетатом при 37C в течение 60 мин приводит к образованию ими внеклеточных ловушек. При 50C происходит спонтанная тотальная активация моноцитов, стимулирующая их к выбросу экстрацеллюлярных сетей. Результаты данной работы представляют интерес для клинической иммунологии и открывают перспективы для дальнейшего изучения способности моноцитов к образованию внеклеточных ловушек.
Ключевые слова: моноциты, выделение моноцитов, внеклеточные моноцитарные ловушки
I.I. Dolgushin, O.B. Prokopyeva, T.G. Smirnova, E.A. Mezentseva, O.L. Kolesnikov, A.U. Savochkina, K.V Nikushkina
THE STUDY OF THE ABILITY OF THE MONOCYTES EXTRACTED FROM PERIPHERAL BLOOD TO FORM EXTRACELLULAR TRAPS SPONTANEOUSLY AND AFTER ACTIVATION
The aim of the research is the study of the ability of the monocytes extracted from peripheral blood to form extracellular traps after their activation by microbal and non-microbal factors. The method of two-step extraction of monocytes from peripheral blood was developed. Due to this method it is possible to get cell suspension containing two thirds of monocytes in nonactivated state. The activation of monocytes by pyrogenal and C. аlbicans cell suspension under + 37оС during 30 minutes and FMA under + 37оС during 60 minutes leads to the formation of extracellular traps. The temperature of + 50оС provocates spontaneous total activation of monocytes followed by the secret of extracellular traps. The results of this research are of interest for clinical immunology and stimulate further study of monocytes ability to form extracellular traps.
Key words: monocytes, monocytes extraction, monocyte extracellular traps
Введение. На сегодняшний день существует огромное количество заболеваний, в патогенезе которых дефект моноцитарно-макрофагального звена играет существенную роль и выступает как маркер тяжести их течения [3, 5]. Это и бактериальные инфекции - сифилис, бруцеллез, сепсис, туберкулез [11, 16], и инфекции вирусной этиологии - инфекционный мононуклеоз, грипп, ВИЧ [6]. Кроме того, функция
Долгушин Илья Ильич - д-р мед. наук, проф., член-корр. РАМН, зав. каф. микробиологии, вирусологии, иммунологии и клинической лабораторной диагностики, ректор Челябинской гос. мед. академии, тел. 8(912) 891-26-95, e-mail: [email protected]
моноцитов и макрофагов страдает при некоторых заболеваниях неинфекционной природы, к которым можно отнести злокачественные солидные опухоли, лейкозы, миелопроли-феративные заболевания, гемолитические анемии [17]. Некоторым аутоиммунным заболеваниям (АИТ, СКВ, рассеянный склероз) также присущи специфические дефекты моноцитов и макрофагов [4]. В связи с этим изучение моноцитов и их функций остается актуальным направлением в иммунологии и представляет интерес как для диагностики, так и для прогнозирования течения заболевания и выбора возможных способов лечения в практической медицине.
Функции моноцитов/макрофагов разнообразны и оказывают значительное влияние на иммунную реактивность ор-
- 240 -
