CC BY
159
ИММУНОЛОГИЯ № 1, 2014
КЛЕТОЧНАЯ ИММУНОЛОГИЯ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014 УДК 618.3-008.6-092:612.017.1]-078.33
B. А. Михайлова, О.М. Овчинникова, Я.С. Онохина, А.А. Чугунова, М.С. Зайнулина,
C. А. Сельков, Д.И. Соколов
ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ NK-КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ ГЕСТОЗЕ
Лаборатория иммунологии, Учреждение РАМН НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта СЗО РАМН, 199034, г Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д. 3; +7(812)328-98-50; [email protected]
Физиологическое течение беременности сопровождается миграцией NK-клеток в децидуальную ткань, где происходит подавление их цитотоксической активности. При гестозе происходит увеличение количества NK-клеток как в децидуальной ткани, так и в периферической крови. Данные о функциональной активности NK-клеток при гестозе на сегодняшний день носят противоречивый характер. Целью настоящей работы явилось изучение функциональной активности NK-клеток периферической крови при гестозе. Установлено, что при гестозе становится иной функциональная активность NK-клеток, что проявляется в изменении стратегии индукции гибели у клеток-мишеней. Преобладающей становится TRAIL-опосредованная индукция апоптоза, а механизм индукции гибели клеток, основанный на высвобождении гранзимов и перфорина, отступает на второй план. Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки рФ ГК №02.740.11.0711 и грантов Президента РФ № НШ-3594.2010.7, МД-150.2011.7.
Ключевые слова: NK-клетки; функциональная активность; CD107a; TRAIL; гестоз
V.A. Mikhaylova, O.M. Ovchinnikova, Y.S. Onohina, A.A.Chugunova, M.S. Zainulina, S.A. Selkov, D.I. Sokolov
functional activity of peripheral blood nk-cells at preeclampsia
Abstract. During healthy pregnancy NK-cells migrate to decidual tissue where their cytotoxic activity decreases. Preeclampsia is associated with increasing amount of NK-cells in decidual tissue and in peripheral blood. The data on NK-cells' functional activity at preeclampsia are controversial. The aim of the study was to assess functional activity of peripheral blood NK-cells at preeclampsia. We observed that NK-cells changed the strategy of their functional activity: TRAIL-connected induction of apoptosis dominated while cytotoxicity associated with lytic granules release decreased. This work was supported by grants НШ-3594.2010.7, ГК №02.740.11.0711, МД-150.2011.7.
Key words: NK-cells; functional activity; CD107a; TRAIL; preeclampsia
Введение. NK-клетки обеспечивают элиминацию из организма вирусинфицированных и трансформированных клеток [1]. Для NK-клеток характерно проявление цитотоксической активности за счет образования иммунологического синапса с клеткой-мишенью [2] и выделения в область контакта гранзимов и перфорина
[1]. При этом происходит слияние лизосомальной и цитоплазматической мембран NK-клеток, что приводит к появлению на цитоплазматической мембране cD107a гликопротеина, ассоциированного с лизосомальными мембранами (LAMP-1) [3]. Таким образом, экспрессия cD107a NK-клетками отражает степень проявления ими цитотоксической активности, опосредованной гранзимами и перфорином [3, 4].
В образовании иммунологического синапса участвуют такие адгезионные молекулы, как LFA -1 со стороны NK-клеток и IcAM-1 со стороны клеток-мишеней [5]. Однако NK-клетки также экспрессируют IcAM-1, и экспрессия этих адгезионных молекул NK-клетками усиливается при активации IL-12. Блокирование с помощью антител IcAM-1 NK-клеток приводит к снижению их цитотоксической активности в отношении клеток К562, ингибирует цитотоксичность NK-клеток, вызванную PMA и иономицином, угнетает поток ионов ca2+, что указывает на участие IcAM-1 в регуляции внутриклеточного сигналинга NK-клеток при
активации [6]. Цитотоксический эффект NK-клеток в отношении клеток-мишеней может быть не связан с эффектами гранзимов и перфорина, и реализовываться за счет связывания рецептора TRAIL-активированных NK-клеток с его лигандами (TRAIL-R) на поверхности клеток-мишеней [7]. При взаимодействии TRAIL и его рецептора в клетке-мишени индуцируется каскад сигнальных реакций, активирующих каспазу-8 и каспазу-10, инициирующих апоптоз клетки-мишени [8].
При физиологическом течении беременности NK-клетки постоянно присутствуют в децидуальной ткани. Пул децидуальных NK-клеток может пополняться за счет миграции NK-клеток из периферической крови в децидуальную ткань в ответ на секретируемые тканью плаценты хемокины [9]. За счет связывания рецепторов KIR2DL4 NK-клеток с молекулами локуса HLA-G, экспрессируемыми клетками трофобласта, цитотоксическая активность NK-клеток подавляется. Связывание KIR2DL4 и HLA-G стимулирует секрецию NK-клетками интерферона (IFN)y, индуцирующего экспрессию генов различных хемокинов (например, CXCL10), цитокинов и транскрипционных факторов клетками децидуальной ткани, что способствует поддержанию сосудистой сети ткани плаценты [10]. Так же IFNy индуцирует выработку макрофагами индоламин-2,3-доиксигеназы, что приводит к де-
- 4 -
КЛЕТОЧНАЯ ИММУНОЛОГИЯ
привации триптофана в клеточном микроокружении и как следствие к развитию иммуносупрессии. Кроме того, IFNy стимулирует экспрессию и секрецию неклассических молекул главного комплекса гистосовместимости HLA-G и HLA-E эндотелиальными клетками и клетками трофобласта [11, 12], что также способствует поддержанию состояния иммунологической толерантности в системе мать-плод.
Гестоз - осложнение беременности, развивающееся после 20-й недели беременности, для которого характерно развитие полиорганной недостаточности [13]. При гестозе происходит увеличение количества NK-клеток как в децидуальной ткани [14, 15], так и в периферической крови [14]. Для оценки цитотоксической активности NK-клеток при гестозе ранее использовали метод совместной инкубации NK-клеток и клеток линии K652 с последующим учетом количества погибших клеток-мишеней К562. Указанный метод оценки цитотоксического потенциала NK-клеток дает возможность оценить результат цитотоксической активности этих клеток, однако не позволяет проанализировать механизм ее реализации. Кроме того, результаты, полученные разными исследовательскими группами, носят противоречивый характер. Так, в одном случае активность NK-клеток, полученных от беременных с гестозом, была выше, чем в контрольной группе [16]. В другой группе было установлено, что активность NK-клеток у женщин при гестозе снижена по сравнению с активностью NK-клеток женщин с физиологической беременностью и у небеременных женщин [17]. Также есть данные, что при ге-стозе и при физиологической беременности цитотоксическая активность NK-клеток периферической крови не имеет различий [18]. Учитывая противоречивые данные о функциональном состоянии NK-клеток при беременности, целью настоящего исследования явилась оценка цитотоксической активности NK-клеток периферической крови и экспрессии ими молекул CD54 (ICAM-1) и TRAIL у беременных женщин.
Материал и методы. Объект исследования. Анализ экспрессии CD107a и CD54 NK-клетками периферической крови был проведен у 64 женщин (20 здоровых небеременных женщин, 20 женщин с физиологическим течением беременности, 24 беременных с гестозом средней степени). Анализ экспрессии NK-клетками периферической крови TRAIL был проведен у 62 женщин (22 здоровые небеременные женщины, 18 женщин с физиологическим течением беременности, 22 беременные с гестозом) . Возраст женщин в каждой группе 19-40 лет, и в среднем составил 28,5 ± 5,3 года. Различий по возрасту женщин между группами не выявлено. Критериями исключения являлись сахарный диабет 1-го типа, многоводие, маловодие, урогенитальная инфекция, острая инфекция или обострение хронической инфекции, аутоиммунные заболевания, гипертоническая болезнь и заболевания системы кровообращения. Диагноз гестоза у беременных установлен на основании ведущих клинических симптомов в соответствии с классификацией по ГМ. Савельевой (2005). Материалом для исследования являлась периферическая кровь из локтевой вены, забор которой осуществляли в пробирки с антикоагулянтом №2ЭДТА. Получено информированное согласие пациенток на обследование.
Оценка содержания NK-клеток в периферической крови. Для оценки содержания NK-клеток в периферической крови здоровых небеременных женщин, женщин с физиологической беременностью и с гестозом использовали стандартный набор для определения относительного и абсолютного состава лимфоцитов периферической крови (BD Multitest with Trncount tubes, США). Анализ проводили на проточном ци-тофлюориметре FACS Canto II (BD, США).
Оценка активности NK-клеток. Для анализа активности NK-клеток мононуклеары периферической крови выделяли на градиенте плотности фиколл-верографин (Sigma, США) стандартным методом [19]. Затем мононуклеары инкубировали в пробирках 4 ч в культуральной среде RPMI-1640 (Sigma, США), 10% ЭТС (Sigma, США), 1% стрептомицина и пенициллина (Sigma, США), 1% глютамина (Sigma, США) во влажной атмосфере при 37°С и 5% CO2 в концентрации 1 млн клеток/мл. Для оценки дегрануляции клеток использовали метод, предложенный G. Alter и соавт. [3]. Часть клеток от каждой пациентки инкубировали в присутствии антител к CD107a (в соответствии с указанием производителя BD, США) и 8 мкг/ мл монензина (BD, США). Вторую часть клеток от тех же пациенток инкубировали в присутствии антител к CD107a, 8 мкг/мл монензина и стандартного реагента для активации лейкоцитов (далее - активатора), содержащего 2,5 мкг/мл РМА и 0,5 мкг/мл иономицина (BD, США). После инкубации мононуклеары центрифугировали при 200g в течение 10 мин и ресуспендировали в растворе Хенкса. Затем клетки в соответствии с указанием производителя (BD, США) обрабатывали специфическими антителами к CD3, CD56, CD54, а часть клеток - изотипическими антителами. Анализ флюоресценции проводили при помощи проточного цитофлюориметра FACS Canto II (BD, США). Для этого выполняли гейтирование лимфоцитов в координатах прямого и бокового светорассеяния FSC-SSC. События, попавшие в регион лимфоцитов, анализировали, выделяя NK-клетки по фенотипу CD3'CD56+. Затем оценивали количество NK-клеток периферической крови, экспрессирующих CD107a и CD54, среди всех NK-клеток (рис.1, на 3-й полосе обложки).
Оценка экспрессии TRAIL. При анализе экспрессии TRAIL NK-клетками периферической крови применяли антитела к CD3, CD16, CD56 (Bd, США) и антитела к TRAIL (BD, США). Обработку клеток цельной периферической крови антителами осуществляли в соответствии с указаниями производителя. Анализ флюоресценции проводили при помощи проточного цитофлюориметра FACS Canto II (BD, США). Последовательно гейтируя в координатах FSC-SSC, CD3-CD16/CD56, дифференцировали NK-клетки по фенотипу CD3-CD16+CD56+. Границы устанавливали на основании предшествующего измерения флюоресценции клеток, окрашенных изотипическими антителами. Анализировали как относительное содержание TRAIL + NK-клеток, так и интенсивность их флюоресценции (рис.2 на 3-й полосе обложки).
Статистический анализ данных проводили в компьютерной программе AtteStat 12.1.7, используя непараметрический критерий Манна-Уитни.
Результаты и обсуждение. NK-клетки присутствуют в децидуальной ткани в течение всего срока физиологической беременности [20]. При гестозе по сравнению с физиологической беременностью количество NK-клеток повышено в децидуальной ткани [21], а также в периферической крови [14]. Наши результаты дополняют полученные ранее данные и указывают на то, что гестоз по сравнению с физиологической беременностью характеризуется как повышенным относительным количеством, так и абсолютным количеством NK-клеток в периферической крови (табл. 1).
Функциональную активность NK-клеток в настоящей работе оценивалась по экспрессии клетками CD107a, гликопротеина, ассоциированного с лизосо-мальными мембранами клеток. Подобный метод измерения активности NK-клеток дает возможность непосредственно оценивать количество дегранулиро-вавших NK-клеток [3, 22]. Данный метод сопоставим с классическим методом оценки активности NK-клеток, включающим инкубацию в присутствии клеток К562. Кроме того, результаты, полученные методом оценки экспрессии CD107a, коррелируют с активностью
- 5 -
ИММУНОЛОГИЯ № 1, 2014
Таблица 1
Содержание NK-клеток в периферической крови
Содержание NK-клеток в периферической крови
Здоровые небеременные (n = 20)
Женщины с физиологическим течением беременности (n = 20)
Женщины с гестозом (n = 24)
Относительное, % 11,7 (7,9-15,9)
Абсолютное, тыс./мкл 0,180 (0,149-0,215)
9,3 (7,2-10,3) 12,25 (10,2-14,2)*
0,141 (0,100-0,179) 0,215 (0,183-0,250)*
Примечание. Достоверность отличия группы беременных с гестозом от группы женщин с физиологическим течением беременности: * - p < 0,01.
продукции NK-клетками IFNy и TNFa, что позволяет считать экспрессию CD107a полноценно отражающей степень функциональной активности NK-клеток [3].
При инкубации клеток без активатора количество активированных NK-клеток с фенотипом CD3-CD56+CD107a+ не различалось между группами обследованных женщин. Интенсивность экспрессии CD107a NK-клетками в этом случае также не различалась между группами (табл. 2). Инкубация монону-клеаров периферической крови в присутствии активатора увеличивала количество CD107a+ NK-клеток по сравнению с их начальным количеством во всех группах обследованных женщин (см. табл. 2). Интенсивность экспрессии CD107a активированными NK-клетками также была выше, чем до активации во всех группах (см. табл. 2). Повышенное количество активированных NK-клеток и повышенная интенсивность экспрессии ими молекулы CD107a при инкубации в присутствии активатора во всех группах указывает на способность NK-клеток отвечать на стимуляцию.
При сравнении групп здоровых небеременных женщин и женщин с физиологической беременностью не выявлено различий в количестве CD107a+ NK-клеток и интенсивности экспрессии ими CD107a (см. табл. 2), что указывает на одинаковую функциональную активность NK-клеток в этих двух группах. При гесто-
зе по сравнению с физиологическим течением беременности количество активированных CD107a+ NK-клеток было ниже после инкубации в присутствии активатора (см. табл. 2). Различий между группами пациенток по интенсивности экспрессии CD107a стимулированными NK-клетками не выявлено (см. табл. 2). Сниженное количество активированных NK-клеток при гестозе по сравнению с физиологической беременностью при одинаковом уровне интенсивности экспрессии этими клетками CD107a объясняет данные о сниженной активности NK-клеток в отношении клеток линии К562 при гестозе [17], а также свидетельствует о сниженной гранзимопосредованной цитотоксичности NK-клеток при гестозе.
Среди прочих адгезионных молекул NK-клетки экспрессируют молекулы CD54, блокирование которых антителами приводит к снижению цитотоксической активности NK-клеток в отношении клеток линии К562, а также к снижению цитотоксичности NK-клеток, вызванной PMA и иономицином [6]. Установлено, что инкубация мононуклеаров в присутствии активатора приводила к снижению интенсивности экспрессии CD54 активированными NK-клетками у здоровых небеременных женщин (табл. 3), а у женщин с физиологической беременностью - к уменьшению количества активированных CD54+ NK-клеток (см. табл. 3). Перечисленные факты указывают на то, что у небеременных женщин инкубация лимфоцитов в присутствии активатора приводит к снижению роли молекулы CD54 в регуляции цитотоксической активности NK-клеток. При физиологической беременности эта тенденция сохраняется. При сопоставлении характера экспрессии молекулы CD54 NK-клетками установлено, что ко-
Экспрессия CD107a NK-клетками периферической крови
Таблица 2
Экспрессия CD107a NK-клетками периферической крови в группах
Инкубация здоровые небеременные (n = 20) женщины с физиологическим течением беременности (n = 20) женщины с гестозом (n = 24)
относительное количество, % средняя интенсивность флюоресценции, отн. ед. относительное количество, % средняя интенсивность флюоресценции, отн.ед. относительное количество, % средняя интенсивность флюоресценции, отн. ед.
Без активатора В присутствии активатора 0,5 (0,2-2,4) 10,8 (5,6 -18,2)** 1754(1240-2172) 2957 (2282-3417)* 1,1 (0,4-2,7) 7,4 (4,0- 11,0)** 1744(649-1873) 3447 (2550-4621)** 1,1 (0,6-1,7) 4,5 (2,6-6,0)*V 1170(824-1604) 3292 (2056-3618)**
Примечание . Достоверность различий внутри группы: * - p < 0,01, ** - p < 0,001; между группой беременных с гестозом и группой женщин с физиологическим течением беременности: • - p < 0,05.
Экспрессия CD54 активированными CD107a+ NK-клетками периферической крови
Таблица 3
Экспрессия CD54 активированными CD107a+ NK-клетками периферической крови в группах
Инкубация здоровые небеременные (n = 20) женщины с физиологическим течением беременности (n = 20) женщины с гестозом (n = 24)
относительное количество, % средняя интенсивность флюоресценции, отн.ед. относительное количество, % средняя интенсивность флюоресценции, отн. ед. относительное количество, % средняя интенсивность флюоресценции, отн.ед.
Без активатора В присутствии активатора 89,4 (83,3-93,9) 89,8 (78,6-92,0) 7166(4775-8717) 5033 (4084-5892)** 93.5 (991,0 -95,6) 87.5 (74,1-92,8)* 5811(4381-10112) 4957 (3753- 5642) 86,4 (80,5-92,5)^ 88,8 (84,8-91,4) 4207 (3196-4862)" 4676(3810-5617)*
Примечание. Достоверность различий внутри группы: * - p < 0,05; ** - p < 0,01; между группой беременных с гестозом и группой женщин с физиологическим течением беременности: • - p < 0,05; •• -p < 0,01.
- 6 -
КЛЕТОЧНАЯ ИММУНОЛОГИЯ
Таблица 4
Экспрессия TRAIL NK-клетками периферической крови
Экспрессия TRAIL NK-клетками периферической крови в группах
Параметры экспрессии здоровые небеременные женщины (n = 22) женщины с физиологическим течением беременности (n = 18) женщины с гестозом (n = 22)
Относительное количество TRAIL+ NK-клеток, % 8,7 19,8 29,7 5,3 12,8 20,4 11,9 25,9 43,9^
Средняя интенсивность флюоресценции TRAIL+ NK-клеток, отн.ед. 774 1122 1243 760 876 1091 741 810 892
Примечание. Группа беременных с гестозом отличается от группы женщин с физиологическим течением беременности: • -p < 0,05.
личество CD107a+CD54+ NK-клеток и интенсивность экспрессии ими CD54 не различались между группами здоровых небеременных женщин и женщин с физиологической беременностью независимо от условий инкубации (см. табл. 3). Полученные результаты указывают на одинаковую функциональную активность NK-клеток в этих двух группах.
При гестозе по сравнению с физиологической беременностью в случае инкубации мононуклеа-ров без активатора выявлено сниженное количество CD54+CD107a+ NK-клеток (см. табл. 3). Интенсивность экспрессии CD54 CD107a+ NK-клетками также была снижена при гестозе по сравнению с физиологической беременностью в случае инкубации без активатора (см. табл. 3). Полученные данные свидетельствуют о снижении способности интактных NK-клеток при гестозе отвечать на ингибирующие цитотоксичность сигналы, опосредованные молекулой CD54. Вместе с тем после активации NK-клеток беременных с гестозом интенсивность экспрессии ими молекулы cD54 усиливается и достигает уровня интенсивности экспрессии этой молекулы NK-клетками женщин с физиологической беременностью (см. табл. 3). Таким образом, активация NK-клеток может приводить к восстановлению роли молекулы cD54 в регуляции цитотоксических эффектов NK-клеток при данной патологии. Однако сниженная экспрессия CD107a активированными NK-клетками и изменение регуляции экспрессии молекулы CD54 указывают на нарушение механизма гранзимопосредованной цитотоксичности NK-клеток при гестозе.
Помимо механизма высвобождения гранзимов и перфорина NK-клетки также могут индуцировать гибель клеток-мишеней за счет экспрессии TRAIL [12]. Рецепторы для TRAIL присутствуют на клетках ворсинчатого трофобласта в течение всего срока беременности [23]. При сравнении женщин с гестозом и женщин с физиологической беременностью выявлено, что количество TRAIL+ NK-клеток повышено при гесто-зе (табл. 4), что свидетельствует об интенсификации именно этого механизма индукции апоптоза, который может лежать в основе отмеченной ранее повышенной гибели клеток плаценты при гестозе. Ингибирование гранзимопосредованной цитотоксичности NK-клеток может сопровождаться активацией альтернативных
механизмов реализации цитотоксичности, например за счет повышенной экспрессии CD95L и TRAIL, благодаря которой NK-клетки активно уничтожают опухолевые клетки [24]. Мы предполагаем, что нарушение механизма гранзимопосредованной цитотоксичности NK-клеток при гестозе может быть результатом продукции цитокинов клетками плаценты и децидуальной оболочки в условиях воспаления. Так, установлено, что TGFP в присутствии простагландина Е2 подавляет гранзимопосредованную цитотоксичность NK-клеток [25]. Несмотря на это NK-клетки в условиях патологического процесса сохраняют цитотоксическую активность за счет повышенной экспрессии TRAIL.
Заключение. Такимобразом,при физиологическом течении беременности функциональная активность NK-клеток, связанная с высвобождением перфорина и гранзимов и с экспресией TRAIL, не отличается от таковой у небеременных женщин. При стимуляции активность NK-клеток при физиологической беременности повышается так же, как и у небеременных, что указывает на отсутствие изменений в функциональном состоянии этих клеток в периферической крови. При гестозе изменяется функциональная активность NK-клеток, что проявляется в изменении стратегии индукции гибели у клеток-мишеней. В этом случае на первый план выходит TRAIL-опосредованная индукция апоптоза, а механизм индукции гибели клеток, основанный на высвобождении гранзимов и перфо-рина, отступает на второй план.
Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки РФ ГК №02.740.11.0711 и грантов Президента РФ № НШ-3594.2010.7, МД-150.2011.7.
литература
5. Ярилин А.А. Иммунология: Учебник. М.: ГЭОТАР-Медиа; 2010.
13. Айламазян Э.К., Мозговая Е.В. Гестоз: Теория и практика. М.: Медпресс-информ; 2008.
14. Соколов Д.И., Селютин А.В., Лесничия М.В., Аржанова О.Н., Сельков С.А. Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови беременных женщин с гестозом. Журнал акушерства и женских болезней. 2007; 56 (4): 17-23.
REFERENCES
1. Orange J.S., Ballas Z.K. Natural killer cells in human health and disease. Clin. Immunol. 2006; 118 (1): 1-10.
2. Krzewski K., Strominger J.L. The killer’s kiss: the many functions of NK cell immunological synapses. Curr. Opin. Cell Biol. 2008; 20 (5): 597-605.
3. Alter G., Malenfant J.M., AltfeldM. CD107a as a functional marker for the identification of natural killer cell activity. J. Immunol. Meth. 2004; 294 (1-2): 15-22.
4. Tomescu C., Chehimi J., Maino V.C., MontanerL.J. Retention of viability, cytotoxicity, and response to IL-2, IL-15, or IFN-alpha by human NK cells after CD107a degranulation. J. Leukoc. Biol. 2009; 85 (5): 871-6.
5. Yarilin A.A. Immunology: A textbook. Moscow: GEOTAR-Media; 2010 (in Russian).
6. Cho D.H., SongH.K., KangH.S., Yoon S.R., LeeH.G., Pyun K.H. et al. Ligation of ICAM-1 molecules inhibits target cell-induced granule exocytosis of IL-12-activated natural killer cells. Cell. Immunol. 2000; 199 (1): 1-7.
7. MirandolaP., Ponti C., Gobbi G., SponzilliI., VaccarezzaM., CoccoL. et al. Activated human NK and CD8+ T cells express both TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) and TRAIL receptors but are resistant to TRAIL-mediated cytotoxicity. Blood. 2004; 104 (8): 2418-24.
8. SprickM.R., WeigandM.A., Rieser E., Rauch C.T., Juo P., Blenis J. et al. FADD/MORT1 and caspase-8 are recruited to TRAIL receptors 1 and 2 and are essential for apoptosis mediated by TRAIL receptor 2. Immunity. 2000; 12 (6): 599-609.
- 7 -
ИММУНОЛОГИЯ № 1, 2014
9. Hanna J., Wald O., Goldman-Wohl D., Prus D., Markel G., Gazit
R. et al. CXCL12 expression by invasive trophoblasts induces the specific migration of CD16- human natural killer cells. Blood. 2003; 102 (5): 1569-77.
10. KitayaK., Yasuo T., Yamaguchi T., Fushiki S., HonjoH. Genes regulated by interferon-gamma in human uterine microvascular endothelial cells. Int. J. Mol. Med. 2007; 20 (5): 689-97.
11. Coupel S., Moreau A., Hamidou M., Horejsi V, Soulillou J.P., Charreau B. Expression and release of soluble HLA-E is an immunoregulatory feature of endothelial cell activation. Blood. 2007; 109 (7): 2806-14.
12. Lefebvre S., Moreau P., Guiard V., Ibrahim E.C., Adrian-Cabestre F., Menier C. et al. Molecular mechanisms controlling constitutive and IFN-gamma-inducible HLA-G expression in various cell types. J. Reprod. Immunol. 1999; 43 (2): 213-24.
13. Ajlamazjan E.K., Mozgovaja E.V Preeclampsia: Theory and practice. Moscow: Medpress-inform; 2008 (in Russian).
14. Sokolov D.I., Seljutin A.V, Lesnichija M.V, Arzhanova O.N., Sel’kov
S. A. Subpopulations of lymphocytes in peripheral blood of pregnant women with preeclampsia. Zhurnal akusherstva i zhenskih bolezney. 2007; 56 (4): 17-23 (in Russian).
15. Wilczynski J.R., Tchorzewski H., Glowacka E., Banasik M., Lewko-wicz P., Szpakowski M. et al. Cytokine secretion by decidual lymphocytes in transient hypertension of pregnancy and pre-eclampsia. Mediators Inflamm. 2002; 11 (2): 105-11.
16. Zhang Z., Gong F., Jia L., Chang C., Hou L., Yang R. et al. Studies on activity of NK cells in preeclampsia patients. Jki Huazhong Univ. Sci. Technol. Med. Sci. 2004; 24 (5): 473-5.
17. Alanen A., Lassila O. Deficient natural killer cell function in
preeclampsia. Obstetr. and Gynecol. 1982; 60 (5): 631-4.
18. Hill J.A., HsiaS., DoranD.M., Bryans C.I. Natural killer cell activity and antibody dependent cell-mediated cytotoxicity in preeclampsia. J. Reprod. Immunol. 1986; 9 (3): 205-12.
19. Boyum A. Separation of leukocytes from blood and bone marrow. Introduction. Scand. J. Clin. Lab. Invest. Suppl. 1968; 97: 7.
20. Gomez-Lopez N., Guilbert L.J., Olson D.M. Invasion of the leukocytes into the fetal-maternal interface during pregnancy. J. Leukoc. Biol. 2010; 88 (4): 625-33.
21. Wilczynski J.R., Tchorzewski H., Banasik M., Glowacka E., Wiec-zorekA., LewkowiczP. et al. Lymphocyte subset distribution and cytokine secretion in third trimester decidua in normal pregnancy and preeclampsia. Eur. J. Obstetr. Gynecol. Reprod. Biol. 2003; 109 (1): 8-15.
22. Orozco A.F., Jorgez C.J., Ramos-Perez W.D., Popek E.J., Yu X., Kozinetz C.A. et al. Placental release of distinct DNA-associated micro-particles into maternal circulation: reflective of gestation time and preeclampsia. Placenta. 2009; 30 (10): 891-7.
23. ChenL., LiuX., Zhu Y., Cao Y., SunL., JinB. Localization and variation of TRAIL and its receptors in human placenta during gestation. Life Sci. 2004; 74 (12): 1479-86.
24. Kim H.R., Lee K.H., Park S.J., Kim S.Y., Yang Y.K., Tae J., et al. Anticancer activity and mechanistic features of a NK cell activating molecule. Cancer Immunol. Immunother. 2009; 58 (10): 1691-700.
25. Malygin A.M., Meri S., Timonen T. Regulation of natural killer cell activity by transforming growth factor-beta and prostaglandin E2. Scand. J. Immunol. 1993; 37 (1): 71-6.
Поступила 15.06.12
© с.с. ОБЕРНИХИН, н.в. ЯГЛОВА, 2014 УДК 612.017.1.084-053.31
С.С. Обернихин, Н.В. Яглова
структурно-функциональные изменения органов иммунной системы при развитии системного воспалительного ответа у потомства самок мышей, перенесших стимулирующее воздействие на иммунную систему в ранние сроки беременности
ФГБУ «НИИ морфологии человека» РАМН, 117418, г. Москва
Связь между пренатальным воздействием на органы иммунной системы плода и их функционированием в постнатальном периоде изучены недостаточно хорошо. Цель исследования - изучить структурно-функциональные изменения органов иммунной системы при развитии системного воспалительного ответа у потомства самок мышей C57BL/6, перенесших воздействие на иммунную систему в ранние сроки беременности до начала формирования органов иммунной системы плода. Установлено, что пренатальное воздействие приводит к изменениям реагирования тимуса и селезенки на введение LD50 липополисахарида E. coli и менее выраженному системному воспалительному ответу, что обусловливает большую выживаемость животных. Акцидентальная инволюция тимуса потомства развивается медленнее. Морфофункциональные изменения селезенки выражены в меньшей степени, что связано с замедленным развитием селезенки как органа иммунной системы. Особенностью функционирования селезенки является нарушение кооперации клеток в маргинальной зоне, что связано с отсутствием миграции нейтрофилов.
Ключевые слова: тимус; селезенка; пренатальное воздействие; конканавалин А; системный воспалительный ответ; беременность
S.S. Oberhikhin, N.V Yaglova
MORPHOLOGICAL AND FUNCTIONAL ALTERATIONS IN IMMUNE SYSTEM OF OFFSPRING OF MURINE DAMS EXPOSED TO STIMULATION OF THE IMMUNE SYSTEM IN EARLY PREGNANCY INDUCED BY SYSTEMIC INFLAMMATORY RESPONSE
Federal budgetary state institution “Scientific research Institute of Human Morphology” of the Russian Academy of Medical Science 117418, Tzurupa st., 3, Moscow, Russian Federation
The relationship between prenatal influence on the organs of the immune system of the fetus and their functioning in the postnatal period insufficiently studied. Objective : to study the structural-functional changes of organs of the immune system in the development of the systemic inflammatory response in the offspring of female mice of C57BL/6 undergoing impact on the immune system in the early stages of pregnancy until the beginning of the formation of the organs of the immune system of the fetus. Found that prenatal exposure leads to changes in the response of the thymus and spleen on the introduction LD50 of lipopolysaccharide of E. coli and less pronounced systemic inflammatory response that causes the survival of animals. Акцидентальная involution of the thymus offspring has been slower. Morphofunctional changes of the spleen are less pronounced, which is associated with slowing the development of the spleen as organ of the immune system. The peculiarity of the functioning of the spleen is a violation of cooperation of cells in the marginal zone, which lacked the migration of neutrophils.
Key words: thymus; spleen; prenatal exposure; concanavalin A; a systemic inflammatory response; pregnancy
- 8 -
