CC BY
135
диагностические, лечебно-профилактические, преемственные функции общей лечебной сети.
Совершенствование санитарно-просветительной работы среди населения с изменением и формированием новых взглядов для своевременного обращения за медицинской помощью, повышение онкологической настороженности у врачей общей лечебной сети вместе с проведением регулярных ежеквартальных врачебных конференций, посвященных исключительно региональным аспектам онконастороженности, проведение качественной диспансеризации с правильным заполнением документации, участие в организации канцер-регистра, выполнение профилактических мероприятий - одни из основных направлений по устранению существующих причин повышения онкологической заболеваемости и выявлению запущенных форм злокачественных новообразований.
ЛИТЕРАТУРА
1. Аксель Е.М., Давыдов М.И. Статистика заболеваемости и смертности от злокачественных новообразований в 2000 году // Злокачественные новообразования в России и странах СНГ в 2000 г. - Москва: РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, 2002. - С. 85-106.
2. Голубчиков В.А., Алексеев М.Я., Ситников Н.В., Кочетов А.Г. и др. Сравнительная оценка консервативного лечения хронического простатита с применением аппаратно-програмного комплекса "Андро-Гин" // Урология. - 2000. - № 1. - С. 20-24.
3. Калуцкий П.В., Бельский В.В. Экологическая характеристика геомагнитного поля региона КМА // Экологическая безопасность и проблемы питания. - Курск, 1997. - С. 22-66.
4. Камалов А.А. Современные взгляды на проблему хронического простатита // Современные аспекты диагностики и лечения хронического простатита. - Курск, 2000. - С. 66-71.
5. Сивков А.В. Диагностика и лечение доброкачественной гиперплазии предстательной железы // Урология Consilium Medicum. - 2002. -(Приложение). - С. 9-18.
6. Monnier N., Romero N.B., Lerale J. et al. An autosomal dominant congenital myopathy with cores and rods is associated with a neomutation in the RYR1 gene encoding the skeletal muscle ryanodine receptor // Hum. Mol. Genet. - 2000. -N 9. - P. 2599-2608.
7. Von der Maase H., Hansen S.W., Roberts J.T. et al. Gemcitabine and cisplatin versus methotrexate, vinblastine, doxorubicin, and cisplatin in advanced or metastatic bladder cancer: results of a large, randomized, multinational, multicenter, phase III study // J. Clin. Oncol. - 2000. - N 18. - P.3068-3073.
Общественное здоровье УДК 615:322:547.56:577.114
ФЕНОЛЬНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ И ПОЛИСАХАРИДЫ ПОДМАРЕННИКА ЦЕПКОГО
(GALIUM APARINE L.)
© Бубенчикова В.Н., Старчак Ю.А.
Кафедра фармакогнозии и ботаники Курского государственного медицинского университета, Курск
E-mail: [email protected]. ru
В статье приведены результаты исследования фенольных соединений и полисахаридов надземной части подмаренника цепкого методом бумажной хроматографии, тонкослойной хроматографии и ВЭЖХ. Указанными методами обнаружено 25 веществ фенольной природы, которые представлены флавоноидами, кумаринами, фенолкарбоновыми кислотами. Фенольные соединения в данном растении идентифицированы впервые. Установлено, что углеводный комплекс надземной части подмаренника цепкого представлен водорастворимыми полисахаридами, пектиновыми веществами, гемицеллюлозами; установлен их моносаха-ридный состав. Полисахаридный состав травы подмаренника цепкого выделен и исследован впервые.
Ключевые слова: полисахариды, фенольные соединения, подмаренник цепкий.
PHENOLIC COMPOUNDS AND POLYSACCHARIDES OF GALIUM APARINE L.
ABOVE-GROUND PART
Bubenchikova V.N., Starchak Yu.A.
Pharmacognosy & Botanic Department of the Kursk State Medical University, Kursk
The article runs about the results of investigation of phenolic compounds and polysaccharides of Galium apa-rine L. above-ground part by means of paper chromatography, TLC, HPLC. Due to these methods 25 phenolic substances consisting of flavonoids, coumarins, and phenolcarbolic acids have been revealed. The phenolic compounds in the plant given have been identified for the first time. It has been established that carbohydrate complex of Galium aparine L. above-ground part is represented by water-soluble polysaccharides, pectins, hemicelluloses; besides their monosaccharide composition has been determined. Polysaccaride composition has been extracted from Galium aparine L. above-ground part and investigated for the first time.
Key words: polysaccharides, phenolic compounds, Galium aparine L.
Растения рода Подмаренник во флоре Центральной России представлены 14 видами, наиболее распространенными являются подмаренник цепкий, подмаренник мягкий, подмаренник северный, подмаренник болотный и подмаренник настоящий [6].
Химический состав их изучен недостаточно. Довольно хорошо исследована подземная часть растений рода подмаренник на содержание антраценпроизводных, другие классы биологически активных соединений практически не изучены, особенно у подмаренника цепкого [9].
Целью нашей работы было изучение фенольного и полисахаридного состава подмаренника цепкого.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Объектом исследования служила воздушно-сухая измельченная надземная часть под-
маренника цепкого, заготовленная в 20062007 гг. в Курской области (окр. г. Курска).
Для выделения полифенольных соединений воздушно-сухое сырье подмаренника цепкого измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм. 100,0 г сырья экстрагировали 70% спиртом этиловым при соотношении сырье-экстрагент 1:5 путем нагревания на кипящей водяной бане в колбе с обратным холодильником до полного истощения сырья. Объединенные извлечения упаривали под вакуумом до водного остатка, охлаждали, фильтровали (для отделения хлорофилла и смол). Фильтрат использовали для последовательной жидкостной экстракции органическими растворителями: хлороформом, этилацетатом,
бутанолом. Водный остаток спирто-водного извлечения обрабатывали 7-8 раз в делительной воронке равным объемом хлороформа.
Объединенные хлорофомные извлечения упаривали (хлороформная фракция). Водные остатки после экстракции хлороформом нагревали на водяной бане для удаления хлороформа, охлаждали и обрабатывали этила-цетатом. Аналогично получали этилацетат-ную и бутанольную фракции.
Для обнаружения фенольных соединений анализировали хлороформную, этилацетат-ную, бутанольную фракции, а также водный остаток с помощью качественных реакций и хроматографическими методами.
Обнаружение кумаринов проводили в хлороформных фракциях спирто-водных извлечений методом тонкослойной хроматографии на пластинках "Силуфол" с использованием в качестве подвижной фазы системы растворителей: бензол-этилацетат (2:1). Хроматограммы просматривали в УФ-свете до и после обработки их специфическими реактивами (пары аммиака, 10% раствор калия гидроксида в спирте этиловом) [5].
Наличие флавоноидов определяли в эти-лацетатных фракциях и водном остатке извлечения из травы подмаренника цепкого с помощью характерных качественных реакций (цианидиновой пробы и цианидиновой пробы по Брианту, с 2% раствором алюминия хлорида, с 10% раствором натрия гидроксида) [2, 13, 14,]. Положительные реакции свидетельствуют о присутствии флавоноидов в исследуемом сырье.
Для обнаружения фенолкарбоновых кислот использовали этилацетатную фракцию. Определение проводили путем хроматографирования на бумаге восходящим способом в системе растворителей: 2% раствор кислоты уксусной. Хроматограммы обрабатывали специфическими реактивами: парами аммиака, 1% спиртовым раствором железа хлорида окисного, диазотированным п-нитроанили-ном [1, 11].
Также нами была использована хроматография на бумаге в системах растворителей: 15% раствор кислоты уксусной, бензол-этилацетат-кислота уксусная (50:50:1) с использованием для проявления специфических реактивов (пары аммиака, 10% раствор натрия гидроксида в спирте этиловом, 2% раствор циркония оксихлорида в спирте метиловом) [11]. Хроматограммы просматрива-
ли в УФ-свете до и после обработки хромогенными реактивами.
Для детального изучения компонентного состава фенольных соединений надземной части подмаренника цепкого применяли метод ВЭЖХ [3]. Анализ проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы "ОГЬБТОК" (Франция) с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы " МультиХром" для Windows. В качестве неподвижной фазы была использована металлическая колонка размером 4,6*250 мм Kromasil С 18, размер частиц 5 микрон. В качестве подвижной фазы использовали смесь: спирт метиловый - вода - концентрированная кислота фосфорная в соотношении 400:600:5. Анализ проводили при комнатной температуре. Скорость подачи элюента 0,8 мл/мин. Продолжительность анализа 82,62 мин. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора И1Ь-БТОК ЦУК1 151 при длине волны 254 нм.
Для исследования надземную часть подмаренника цепкого измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм по ГОСТ 214-83. 4,0 г сырья помещали в колбу объемом 250 мл, прибавляли 50 мл 70% спирта этилового, присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 2 часов с момента закипания спирто-водной смеси в колбе. После охлаждения смесь фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводили объем 70% спиртом этиловым до метки (исследуемый раствор). Параллельно готовили серию 0,05% растворов сравнения флавоноидных соединений, кумаринов и фенолкарбоновых кислот в спирте метиловом. Объем вводимой пробы элюата и растворов сравнения 20 мкл. Идентификацию проводили путем сопоставления времен удерживания компонентов смеси и растворов сравнения.
Из шрота, оставшегося после получения полифенольных соединений, последовательно выделяли полисахариды: водорастворимые полисахаридные комплексы, затем пектиновые вещества и гемицеллюлозы (ГЦ А, ГЦ Б).
Для получения водорастворимых полисахаридных комплексов (ВРПС) использовали воздушно-сухой шрот сырья после экстрак-
ции полифенольных соединений 70% спиртом этиловым [4]. 100,0 г воздушно-сухого шрота экстрагировали 4 л горячей воды при нагревании до 95°С в течение 1 часа при постоянном перемешивании. Повторное извлечение полисахаридов проводили дважды при соотношении сырье-экстрагент 1:10. Растительный материал отделяли центрифугированием, а объединенные экстракты упаривали до 1/5 первоначального объема. Полисахариды осаждали трехкратным (по отношению к извлечению) объемом 96% спирта этилового при комнатной температуре. Выпавшие плотные осадки отфильтровывали, промывали спиртом этиловым, ацетоном, затем высушивали и взвешивали.
Из шрота, оставшегося после получения ВРПС, выделяли пектиновые вещества (ПВ). Экстракцию сырья проводили трехкратно смесью 0,5% растворов кислоты щавелевой и аммония оксалата (1:1) в соотношении 1:20 при 80-85°С в течение 2 часов. Объединенные экстракты концентрировали и осаждали пятикратным объемом 96% спирта этилового. Полученные осадки отфильтровывали, промывали спиртом этиловым, высушивали и взвешивали.
Из шрота, оставшегося после выделения пектиновых веществ, выделили гемицеллюлозы А и Б (ГЦ А и ГЦ Б). Экстракцию проводили 10% раствором натрия гидроксида в соотношении 1:5 при комнатной температуре в течение 12 часов. При добавлении ледяной кислоты уксусной образовался осадок ГЦ А, который отфильтровывали, высушивали и взвешивали. К фильтрату добавляли двукратный объем 96% спирта этилового, при этом образовывался осадок ГЦ Б, который промывали спиртом, высушивали и взвешивали [7].
Для установления моносахаридного состава ВРПС, ПВ, ГЦ проводили их гидролиз кислотой серной (1 моль/л) [10].
Моносахариды определяли в гидролизатах методом хроматографии на бумаге в системах растворителей: н. бутанол - пиридин -вода (6:4:3) и этилацетат - кислота уксусная -кислота муравьиная - вода (18:3:1:4) параллельно с достоверными образцами моносахаридов. Хроматограммы после высушивания на воздухе, обрабатывали анилинфталатным реактивом и нагревали в сушильном шкафу
при 100-105°С; моносахариды проявлялись в виде красновато-коричневых пятен.
Определение количественного содержания сахаров в гидролизатах выделенных ВРПС и ПВ проводили денситометрически после хроматографии в тонком слое сорбента [12].
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В результате хроматографического анализа в надземной части подмаренника цепкого обнаружено 2 соединения в виде пятен с голубой флуоресценцией, отнесенные к соединениям кумариновой природы, 3 вещества в виде пятен с голубой и голубовато-фиолетовой флуоресценцией в УФ-свете, отнесенные к фенолкарбоновым кислотам, 3 вещества в виде пятен с желтой и темной флуоресценцией, отнесенные к флавоноидным соединениям.
В траве подмаренника цепкого методом ВЭЖХ было установлено наличие 25 соединений фенольной природы, которые в основном представлены флавоноидами, кумаринами и фенолкарбоновыми кислотами. По времени удерживания стандартных растворов 14 веществ были идентифицированы как кемпферол, дигидрокверцетин, кверцетин, гиперозид, рутин, феруловая кислота, хлорогеновая кислота, кофейная кислота, галловая кислота, цикориевая кислота, скополетин, эс-кулетин, кумарин, эпикатехин (табл. 1). Методом внутренней нормализации определено, что среди кислот преобладает галловая кислота, среди флавоноидов - кверцетин, из ку-маринов - скополетин.
В траве подмаренника цепкого все фенольные соединения: кемпферол, дигидро-кверцетин, кверцетин, гиперозид, рутин, феруловая кислота, хлорогеновая кислота, кофейная кислота, галловая кислота, цикорие-вая кислота, эскулетин, кумарин, скополетин, эпикатехин идентифицированы впервые.
В результате проведенных исследований были выделены ВРПС, ПВ, ГЦ А, ГЦ Б. Выход ВРПС составил 5,9%, ПВ - 13,2 %, ГЦ А - 19,5%, ГЦ Б - 1,4% от воздушносухого сырья (табл. 2).
ВРПС, выделенный из изучаемого растения, представляет собой аморфный порошок
Таблица 1
Характеристика веществ, выделенных из травы подмаренника цепкого
Вещество Время удерживания, сек. Количественное соотношение, %
Скополетин 2,S42 S,77
Галловая кислота 3,301 13,б5
Хлорогеновая кислота 3,7S0 1,SS
Эпикатехин 4,457 1,00
Эскулетин 4,930 0,99
Кофейная кислота 5,5б5 0,72
Цикориевая кислота б,29б 1,1б
Неидентифиц б,971 0,5S
Феруловая кислота 7,3б5 0,7б
Рутин S,451 3,29
Гиперозид 10,б70 0,99
Неидентифиц. 11,0S0 0,45
Кумарин 11,S40 0,б4
Неидентифиц. 13,300 2,55
Неидентифиц. 14,7S0 0,47
Неидентифиц. 15,330 1,21
Неидентифиц. 17,210 2,23
Неидентифиц. 1S,620 2,7S
Неидентифиц. 21,010 3,75
Неидентифиц. 23,б10 2,14
Кверцетин 2б,950 5,21
Дигидрокверцетин 29,7S0 3,90
Неидентифиц. 32,000 2S,16
Кемпферол 54,S30 3,24
Неидентифиц. 70,930 9,51
S2,620 100,00
Таблица 2
Характеристика полисахаридов, выделенных из травы подмаренника цепкого
Полиса- хариды Выход, % от воздушносухого сырья Моносахаридный состав, % к полисахаридному комплексу
глюко- за галактоза кси- лоза араби- ноза рам- ноза галакту- роновая кислота глюкуро- новая кислота
ВРПС 5,9 3,44 1S,42 0,б1 1б,93 0,09 б,30 -
ПВ 13,2 - 2,б7 - 2,91 - 91,23 -
ГЦ А 19,5 1,S3 2,47 9,23 1,71 - - -
ГЦ Б 1,4 2,11 1,9S S,74 1,42 - - -
" - отсутствие моносахарида.
Примечание. "+" - присутствие моносахарида; "коричневого цвета; при растворении в воде образует опалесцирующий раствор (рН 1% водного раствора находится в пределах 5-6); растворяется также в водных растворах кислот и щелочей и не растворяется в органиче-
ских растворителях. Полисахаридный комплекс дает положительные реакции осаждения со спиртом, ацетоном, реакцию с реактивом Фелинга после кислотного расщепления полисахаридов [10].
