CC BY
26
Фармакология, токсикология
УДК 619:615.9
ФАРМАКОТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ВИГИСОЛА
Н.Б. ЕМЕЛЬЯНОВА соискатель
Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина, e-mail: vigis@ncport.ru
Изучена острая токсичность вигисола при введении в желудок белым мышам и крысам. ЛД50 равна 5000 мг/кг. Вигисол в терапевтической дозе не обладает раздражающим действием, не влияет на гематологические и биохимические показатели крови крыс, прирост массы тела и не вызывает патологических изменений в органах и тканях.
Ключевые слова: вигисол, мыши, крысы, кролики, токсичность.
Гельминтозы диких животных причиняют большой экономический ущерб [3]. Наиболее эффективным методом борьбы с гельминтозами диких животных является применение кормолекарственных смесей.
В ВИГИСе разработан препарат вигисол на основе фенбендазола. Препарат в виде белого порошка, без вкуса и запаха, обладает нематодоцидным действием и эффективен против акантоцефал [1].
Цель нашей работы - изучение фармакотоксикологических свойств ви-гисола.
Материалы и методы
Работу проводили в виварии и на базе лаборатории фармакологии, токсикологии и терапии ВИГИС согласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2005).
Для определения острой пероральной токсичности вигисола использовали 36 белых крыс и 60 белых мышей обоего пола массой 180-200 и 18-20 г соответственно. Препарат вводили однократно, через внутрижелудочный зонд в дозах 1000, 3000 и 5000 мг/кг по ДВ на 1%-ном крахмальном геле. На каждую дозу отбирали по 6 крыс и 10 мышей. За животными вели наблюдение в течение 14 сут; учитывали общее состояние, прием корма и воды, реакцию на внешние раздражители [2, 4].
Раздражающее действие препарата на кожу в дозе 5000 мг/кг определяли сразу после нанесения, далее через 1, 2, 24, 48 и 72 ч. Наблюдали за возможным проявлением местных признаков воспаления: покраснения, отека, эритемы и т. д., руководствуясь «Методическими указаниями по изучению раздражающих свойств» [4].
Действие вигисола на слизистые оболочки глаз оценивали при постановке конъюнктивальной пробы на трех клинически здоровых кроликах. 1 каплю суспензии препарата (5 г вигисола разводили в 10 мл 1%-ного крахмального геля) с помощью пипетки закапывали однократно в конъюнктивальный мешок левого глаза; в правый глаз вносили 1 каплю дистиллированной воды и он служил контролем. Поведение животных, состояние глаз и реакцию слизистой оболочки века оценивали визуально сразу после закапывания и через 15 мин, 1, 24, 48 и 72 ч. Оценку реакции слизистой оболочки выражали в баллах [4].
Подострую токсичность вигисола изучали на 24 крысах-самцах массой 100-120 г. Животных разделили на 4 группы: 3 подопытные и 1 контроль-
ную. Животные контрольной группы в течение опыта получали 1%-ный крахмальный гель в соответствующих объемах.
Вигисол вводили животным 1, 2 и 3-й подопытных групп ежедневно в течение двух месяцев с помощью внутрижелудочного зонда в дозах: 1/10, 1/20, 1/50 от ЛД50 (500 мг/кг, 250 и 100 мг/кг от ДД50 = 5000 мг/кг).
Во время проведения опыта учитывали прирост массы тела животных. По истечении двух месяцев всех животных подвергли эвтаназии путем дека-питации. Были отобраны основные органы для определения массовых коэффициентов и для гистологических исследований, а также пробы крови для определения основных биохимических и морфологических показателей.
Гематологические показатели исследовали на анализаторе SWELAB-970, биохимические - на анализаторе CLIMA MC-15 (Испания).
Результаты и обсуждение
За время проведения опытов гибели и признаков интоксикации не наблюдали; все животные адекватно реагировали на внешние раздражители, принимали корм и воду.
Результаты изучения острой токсичности вигисола на лабораторных животных обобщены в таблице 1.
1. Результаты изучения острой токсичности виисола при внутрижелудочном _введении_
Доза, мг/кг Число животных (павших/выживших)
крысы мыши
самцы самки самцы самки
1000 0/6 0/6 0/10 0/10
3000 0/6 0/6 0/10 0/10
5000 0/6 0/6 0/10 0/10
Введение вигисола в дозе 5000 мг/кг оказалось максимально возможным для внутрижелудочного введения крысам и мышам. С учетом этого обстоятельства значение ЛД50 будет превышать 5000 мг/кг. Согласно общепринятой гигиенической классификации ГОСТ 12.1.007-76 вигисол относится к 4 классу опасности.
Результаты проведенных исследований позволяют сделать вывод о том, что крысы и мыши не обладают видовой и половой чувствительностью.
Во время и после аппликации вигисола у крыс отсутствовало беспокойство или другие признаки, которые свидетельствовали бы о раздражающем действии препарата. Через 4-5 сут кожа крыс на участке нанесения препарата начала покрываться ровным шерстным покровом.
Раздражающее действие препарата на слизистые оболочки глаза оценивали на кроликах, которые являются наиболее адекватной моделью для подобных тестов. После закапывания одной капли суспензии вигисола не наблюдали какого-либо отрицательного действия, за исключением естественной реакции кроликов на внесение чужеродного вещества. Через 1 ч отмечали незначительное покраснение конъюнктивы, которое полностью проходило через сутки. Других признаков раздражающего действия не наблюдали. Следовательно, при однократном нанесении вигисол не обладает раздражающим действием на неповрежденную кожу крыс, но вызывает слабое покраснение конъюнктивы глаз кроликов.
При изучении подострой пероральной токсичности установлено, что ви-гисол при ежедневном введении в течение 2-х месяцев в дозах 1/10, 1/20 и 1/50 от ЛД50 (500 мг/кг, 250 и 100 мг/кг от ЛД50 = 5000 мг/кг) не оказывает влияние на прирост и массу тела по сравнению с показателями контрольных животных (табл. 2).
Неделя
100
Дозы, мг/кг
250
500
Контроль
0 1 2
3
4
5
6
7
8
124,2±4,9 168,3±7,1 200,0±10,2 240,8±10,3 275,8±14,2 305,0±16,7 316,7±14,5 325,0±15,4 337,5±16,2
127,5±3,6 171,6±3,3
220,0±4,7 250,0±6,1 281,7±7,6 302,5±6,7 308,3±7,7 318,3±6,9 325,8±8,0
121,6±3,6
168,3±7,4
193,3±7,7
253,0±8,8
265,0±13,3
288,3±12,6
301,7±14,3
310,8±16,2
317,5±16,4
125,8±3,5 175,0±8,0 200,8±12,2 245,0±14, 280,0±17, 300,8±18, 322,5±14, 324,2±23, 330,8±23,
% к исходной массе
274,4±17,6 t = 0,48
256,0±5,9 t = 0,34
262,9±17,9 t = 0,03
262,1±15,3 t = 2,23
Массовые коэффициенты основных органов находились в пределах нормы для данного вида животных (табл. 3).
3. Влияние вигисола на массовые коэффициенты органов (п = 6, Р > 0,05)
Орган Дозы, мг/кг Контроль
100 250 500
Сердце Печень Легкие Селезенка Почки 3,2±0,2 27,1±0,8 6,3±0,3 2,2±0,1 6,7±0,1 3,2±0,2 27,5±1,0 6,3±0,5 2,5±0,2 6,9±0,2 3,3±0,1 27,6±0,8 5,9±0,3 2,2±0,1 6,7±0,2 3,3±0,1 28,0±1,3 5,1±0,5 2,0±0,1 6,6±0,3
При гистологическом исследовании установлено, что вигисол не вызывает патологических микроскопических изменений в тканях основных органов.
Препарат в указанных дозах не оказал достоверного влияния на гемато-
логические показатели и не изменил лейкоцитарную формулу крови (табл. 4). 4. Влияние вигисола на гематологические показатели крови белых крыс
Показатель Дозы, мг/кг Контроль
100 250 500
Эритроциты, 1012/л 6,6±1,6 7,8±0,2 7,9±0,1 7,6±0,21
Гематокрит, % 35,3±6,7 41,9±0,8 42,9±0,4 41,8±1,3
Средний объем эритроцитов, £/л 53,7±0,4 53,4±0,3 54,2±0,5 54,5±0,9
Ширина распределения эритроцитов, % 7,5±0,1 7,4±0,1 7,7±1,6 7,8±0,1
Гемоглобин, г/л 134,8±25,6 161,7±3,13 164,3±0,8 158,0±4,5
Среднее содержание НЬ в эритроцитах, Рg 20,9±0,43 20,6±0,1 20,8±0,2 20,6±0,4
Средняя концентрация НЬ в эритроцитах, г/л 389,7±6,7 385,5±2,5 383,5±2,0 378,8±1,07
Тромбоциты, 109/л 829,8±158,3 1044,3±50,0 941,0±25,4 903,2±165,6
Тромбокрит, % 0,6±0,1 0,8±0,04 0,7±0,03 0,7±0,1
Средний объем тромбоцитов, г/л 6,4±0,1 6,5±0,1 6,43±0,1 6,2±0,1
Ширина распределения тромбоцитов, г/л 9,8±0,2 9,9±0,1 9,9±0,2 9,7±0,1
Лейкоциты, 109/л 9,0±2,0 13,2±1,1 11,6±0,7 11,9±1,5
Лимфоциты, % 83,5±1,22 82,1±1,6 77,5±2,0 82,2±2,1
Моноциты, эозинофилы, % 9,3±0,6 9,8±0,7 11,5±0,9 9,1±0,8
Гранулоциты, % 7,2±0,7 8,1±0,9 7,4±2,1 8,0±1,6
В таблице 5 приведены результаты определения биохимических показателей сыворотки крови после многократного введения вигисола. При введении препарата в дозе 500 мг/кг повышалась концентрация общего белка и мочевины (соответственно 73,3±1,9 г/л и 7,7±0,3 моль/л против контрольных значений 64,1±0,8 г/л и 5,5±0,8 моль/л). Остальные биохимические показатели не претерпели значимых изменений.
Повышение уровня белка (69,2±1,2 г/л) и концентрации креатинина (49,5±1,0 мкмоль/л) при введении вигисола соответственно в дозах 100 и 250 мг/кг было незначительным.
5. Влияние вигисола на биохимические показатели крови (n = 6, Р > 0,05)
Показатель Дозы, мг/кг Контроль
100 250 500
Общий белок, г/л 69,2±1,2 t = 2,9 65,5±2,2 73,3±1,9 t = 3,6 64,6±0,8
Альбумин, г/л 36,8±0,6 29,3±1,3 37,8±1,2 33,0±1,6
Креатинин, мкмоль/л 52,8±2,2 49,5±1,0* t = 3,8 58,0±1,7 57,6±1,7
Мочевина, моль/л 5,4±0,6 5,0±0,7 7,7±0,3 t = 2,4* 5,5±0,8
Глюкоза, моль/л 6,3±0,4 5,6±0,4 6,4±0,4 6,58±0,7
Билирубин, моль/л 1,0±0,1 0,5±0,4 0,8±0,09 0,9±0,1
Аланинаминотрансфераза, Ед/л 55,2±3,5 51,2±2,3 58,5±4,0 65,8±8,6
Аспартатаминотрансфераза, Ед/л 4,6±1,5 2,2±0,4 2,0±0,4 4,0±1,0
Щелочная фосфатаза, Ед/л 296,4±41,1 226,8±17,5 264,1±23,4 196,6±11,9
Амилаза Ед/л 426,0±33,1 421,8±41,3 366,6±22,3 414,4±24,8
- p<0,05 при tKpm =2,23
Из приведенных данных следует, что доза 100 мг/кг является недействующей, 250 мг/кг - пороговой и доза 500 мг/кг - токсичной.
Литература
1. Архипов И.А., Емельянова Н.Б. Производственные испытания вигисола при нематодозах кабанов // Рос. паразитол. журнал. - 2009. - № 2. - С. 97-100.
2. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. - Л.: Госмедиздат, 1963.
3. Кучерук В.В. Воздействие человека на окружающую среду и природ-ноочаговые болезни // Тез. докл. 9-й Всес. конф по природной очаговости болезней человека и животных. - Омск, 1976. - С. 21-24.
4. Методические указания к постановке исследований по изучению раздражающих свойств и обоснованию предельно допустимых концентраций избирательно действующих раздражающих веществ в воздухе рабочей зоны. - М., 1980. - 18 с.
5. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2005.
Pharmacotoxicological estimation of vigisol N. B. Yemelyanova
Acute toxicity of vigisol at introduction in a stomach to white mice and rats is investigated. LD50 is 5000 mg/kg. Vigisol in therapeutic doze has no irritating action, does not influence on haematological and biochemical parameters of blood of rats, a gain of weight and does not cause pathological changes in bodies and tissues.
Keywords: vigisol, mice, rats, rabbits, toxicity.
