CC BY
137
ВЛИЯНИЕ ВИГИСОЛА НА ПРЕ- И ПОСТНАТАЛЬНОЕ РАЗВИТИЕ КРЫС
Емельянова Н.Б.
ВНИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина
Введение. Применение лекарственных средств нередко представляет серьезную опасность для развития потомства (1; 2). Воздействие различных химических соединений во время беременности может привести к нарушениям в физиологических процессах и патологическим изменениям в развитии плода.
Возможный тератогенный и эмбриотоксический эффект зависит от свойств и дозы препарата, пути его введения и воздействия на определенный срок эмбриогенеза (5; 6).
Отрицательное влияние препаратов может проявится как в пренатальном, так и в постнатальном периодах развития эмбрионов.
Целью настоящих исследований была оценка вигисола на пре- и постнатальное развитие у крыс.
Материалы и методы. Эмбриотоксическое действие вигисола оценивали на 24 крысах-самках массой 200-220 г и 6 крысах-самцах (самцов содержали отдельно). Животных раздели на четыре группы: 3 подопытных и 1 контрольная. На ночь самцов подсаживали к самкам (один самец на четыре самки), утром обнаружение сперматозоидов во влагалищном мазке принимали за первый день беременности.
Чувствительность эмбрионов к вводимому веществу в различные периоды эмбриогенеза не одинакова (8). Поэтому препарат вводится во все периоды эмбриогенеза, с целью выявления наиболее уязвимой стадии эмбрионального развития.
Антигельминтик вводили беременным самкам перорально в виде суспензии на 1% крахмальном клейстере с добавлением Твина-80 в трехкратной терапевтической дозе - 6000 мг/кг (терапевтическая доза 2000 мг/кг) в периоды 1-6, 7-14 и 15-19. Дозу 6000 мг/кг разводили в двойном объеме крахмального клейстера, и вводили в два этапа с интервалом примерно 15 минут. Животные, не получавшие препарат, служили "чистым контролем".
На 20 день беременности все животные были подвергнуты эвтаназии. Из матки извлекали плоды, внимательно осматривали на наличие каких-либо внешних аномалий, взвешивали и определяли краниокаудальные размеры. Так же измеряли массу и размер плаценты. Определяли общую эбриональную смертность, пред- и постимплантационную гибель.
Для выявления внутренних аномалий воспользовались методом Вильсона (7) в модификации отдела эмбриологии ИЭМ АМН СССР (3); плоды помещали на две недели в жидкость Буэна (насыщенный водный раствор пикриновой кислоты, 40% формалин, ледяная уксусная кислота -
165
15:5:1). По методу Вильсона в модификации А.П. Дыбана по схеме лезвием бритвы сделали 9 сагиттальных срезов. Все срезы анализировали под стереомикроскопом МБС-2 на наличие внутренних аномалий.
Для проведения опыта по изучению влияния препарата на постнатальное развитие использовали 10 белых беспородных крыс. Вигисол вводили беременным самкам с нормальным эстральным циклом, массой 200-220 г. Животных разделили на 2 группы. Опытным животным препарат вводили перорально в трехкратной терапевтической дозе 6000 мг/кг (терапевтическая доза 2000 мг/кг) с 7 по 14 дни эмбриогенеза, в период когда эмбрионы наиболее чувствительны к бензимидазолкарбаматам к которым и относится вигисол (4). Животные второй группы препарат не получали и служили «чистым контролем». Отбор беременных проводили также как и при изучении эмбриотоксических и тератогенных свойств.
За несколько дней до родов самок рассаживали в отдельные клетки по одной в каждую. Регистрировали дату родов, длительность беременности, количество родившихся крысят, живых, мертвых и уродливых, взвешивали и измеряли краниокаудальный размер.
Далее в течение 1 месяца проводили наблюдение за развитием крысят: учитывали их массу на 3; 5; 14 и 30 сутки, краниокаудальных размер на 3 и 5 сутки; определяли специфические показатели: сроки отлипания ушей, появление шерстного покрова, открытие глаз и т.д.
Результаты. Введение вигисола беременным крысам во все сроки эмбриогенеза с 1-6; 7-14 и 15-19 дни не изменяло их общее состояние и поведение животных.
Исследование эмбрионального материала свидетельствует о том, что показатели опытных животных существенно не отличаются от показателей контрольных (табл. 1).
Таблица 1
Влияние вигисола на пренатальное развитие крыс при многократном пероральном введении в различные сроки эмбриогенеза (n=10; p>0,05)
Показатели M±m Стадия эмбриогенеза, сутки
1-6 7-14 15-19 контроль
Предиплантационная гибель, % 22,4±0,6 t=1,4 12,1±4,3 t=1,1 32,3±7,4 t=0,4 5,9±3,3 t=2,78
Постиплантационная гибель, % 5,5±3,3 t=0,04 0±4,1 t=0,2 3,2±2,8 t=0,2 6,3±3,4 t=2,78
Общая эмбриональная смертность, % 26,5±6,4 t=1,9 12,1±4,3 t=0,05 26,8±2,8 t=0,4 11,8±4,6 t=2,78
Случаи полной внутриутробной гибели 0 0 0 0
Масса плода, г 2,4±0,1 t=1,6 2,9±0,1 t=1,5 2,8±0,1 t=0,7 2,7±0,1 t=2,02
166
Размер плода, см 3,1±0,1 t=1,3 3,3±0,04 t=1,7 3,4±0,1 t=1,1 3,2±0,04 t=2,02
Масса плаценты, г 0,6±0,03 t=0 0,7±0,01 t=2,5* 0,7±0,04 t=0,1 0,6±0,04 t=2,02
Размер плаценты, см 1,5±0,03 t=0,3 1,6±0,03 t=0 1,5±0,04 t=2,0 1,6±0,03 t=2,02
Число плодов с аномалиями 0 0 0 0
Примечание: * - p<0,05 при t критическом = 2,02
Показатели гибели плодов во все периоды введения препарата были сравнимы с соответствующими контрольными значениями (табл. 1).
Единственным исключением, пожалуй, была достоверна более высокая масса плаценты в случае введения препарата на 7-14 сутки эмбриогенеза, что мы рассматриваем в качестве ответной реакции на введение большого количества чужеродного вещества.
Состояние внутренних органов плодов на всех стадиях эмбриогенеза было в норме. Все основные органы, головной и спинной мозг, артерии и вены были без дефектов.
При оценке влияния вигисола на постнатальное развитие крыс гибель и внешние уродства отсутствовали. Все крысята родились нормальными, хорошо реагировали на внешние раздражители. Краниокаудальный размер крысят от опытных самок при рождении и на 5 сутки был меньше, чем у контрольных, масса новорожденных крысят также была ниже (соответственно 3,2±0,03 и 3,9±0,02 г против контрольных значений 3,3±0,04 и 4,0±0,04 г), кроме того, масса новорожденных крысят также была ниже (опыт 2,6±0,04 против контроля 2,8±0,07) (табл. 2). Однако мы связываем это с большим количеством крысят в помете у опытных крыс.
Остальные интегральные и специфические показатели на протяжении всего периода наблюдения не отличались от контрольных.
Таблица 2
Влияние вигисола на постнатальное развитие крыс при пероральном введении в дозе 6000 мг/кг (n=5; p>0,05)
Показатели Опыт Контроль
Количество родивших самок в группе 5 5
Количество резорбций - -
Продолжительность беременности, дни 23,3±0,88 t=0,8 24,3±0,88
167
Количество крысят в помете 10,3±0,88 t=0,3 9,3±2,33
Количество мертвых крысят - -
Краниокаудальный 3,2±0,03 3,3±0,04
размер новорожденных, см t=2,9*
на 3 сутки, см 3,6±0,03 t=0,6 3,6±0,04
на 5 сутки, см 3,9±0,02 t=2,8* 4,0±0,04
Масса 2,6±0,04 2,8±0,07
новорожденных, г t=2,7*
на 3 сутки 5,0±0,07 t=0,5 4,95±0,08
на 5 сутки 7,5±0,07 t=1,5 7,4±0,09
на 14 сутки 15,2±0,3 t=0,6 15,5±0,3
на 30 сутки 85,5±1,2 t=0,8 84,1±1,4
Отлипание ушей, 4,0±0,6 4,3±0,9
сутки t=0,6
Появление 8,0±0,6 6,7±0,3
шерстного покрова, сутки t=1,6
Открытие глаз, 17,0±0,6 16,7±0,9
сутки t=0,6
Примечание: * - p<0,05 при t критическом=2,77
Заключение. Вигисол в трехкратной терапевтической дозе 6000 мг/кг при многократном пероральном введении беременным самкам в 1-6; 7-14 и 1519 дни эмбриогенеза не обладает эмбриотоксическим и тератогенным действием. Препарат в аналогичной дозе не оказывает отрицательного влияния на постнатальное развитие крыс.
Литература. 1. Веселова Т.П. //В кн.: Материалы Второй Закавказской конф. по паразитологии. Ереван 1981.- С. 64-66. 2. Динерман А.А. Роль загрязнителей окружающей среды в нарушении эмбрионального развития. -М.: Медицина, 1980, 191с. 3. Дыбан А.П., Баранов В.С., Акимова И.М. // Арх. анатом. гистол. эмбриол. - 1970. - Т. 59. - №10 С. 89-100. 4. Новик Т.С., Рябова В.А. и др. // Авторское свидетельство № 1473133, 1985. 5. Саноцкий И.В., Пашкова Г.А., Фоменко В.Н. К вопросу экстраполяции данных,
168
полученных в эксперименте относительно человека, при изучении влияния химических соединений на репродуктивную функцию. - В кн.: Основные вопросы проблемы отдаленных последствий воздействия промышленных ядов./Под ред. А.К. Плясунова и Г.А. Пашковой. - М.: Медицина, 1976.- С. 2227. 6. Саноцкий И.В., Фоменко В.Н. Отдаленные последствия влияния химических соединений на организм. - М.: Медицина, 1979, 231с. 7. Wilson
J.G. // Ann. N.Y. Acad. Sci. - 1965. - V. 123. - №1. - P. 219-227. 8. Wilson J.G. Environmental chemicals. - In: Handbook of therapy, 1977.
Effects of vigisol on pre- and postimplantation development of rats.
Emeljanova N.B. All-Russian K.I. Institute of Helminthology.
Summary. Vigisol administered per os to pregnant rats at dose level of 6000 mg/kg of body weight (3-fold therapeutic dose level) didn’t show any negative effects on pre- and postnatal development of fetuses.
ОЦЕНКА ВИГИСОЛА НА КУМУЛЯТИВНОЕ И АНТИМИТОТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ
Емельянова Н.Б.
ВНИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина
Введение. Многим препаратам присущи кумулятивные свойства, т.е. они обладают способностью накапливаться в организме. Кумулятивные свойства, главным образом, зависят от химического состава препарата, от его физических и химических свойств.
Для изучения кумулятивных свойств предложен целый ряд методик: Н.С. Правдин, 1974; А.Ф. Ларионова, В.А. Гришко, 1963; Ю.С. Каган, 1965, 1970; R.K.S. Lim et al., 1961; P.K. Gupta, 1980.
В полноценную характеристику препарата обычно входит оценка его влияния на клеточное деление.
Таким образом, ниже приводим результаты исследований, посвященных характеристике вигисола в отношении кумулятивных свойств и специфического антимитотического эффекта.
Материалы и методы. При оценке кумулятивного действия вигисола мы применили два метода.
Согласно методу Ю.С. Кагана и В.В. Станкевича (1964) животных разделили на 2 группы по 6 крыс-самцов в каждой массой 140-160 г. Препарат вводили в течение 2 месяцев ежедневно перорально на 1% крахмальном клейстере в дозах 1/10 и 1/20 от LD50 (500 и 250 мг/кг) (1; 2).Этот метод дает возможность установить коэффициент кумуляции, который является основным критерием оценки кумулятивных свойств химических веществ (3).
По методу Lim (1961) была сформирована одна группа из 10 крыс-
169
