CC BY
37
Литература
1. Зенкевич ИТ. Косман В.М. Методы количественного хроматографического анализа лекарственных веществ: Пособие для фармацевтических работников. - СПб.: С11XФА. - 1999. - 80 с.
2. Настойки, экстракты, :>ликсиры и их стандартизация / Под ред. проф. В Л. Багировой, проф. В.А. Се-верцева. - СПб.: СпецЛит, 2001. -223 с.
3. Растения для нас. Справочное издание / К.Ф. Блинова, В.В. Вандышев, М.П. Комарова и др.; Под
ред. Г.II. Яковлева и К.Ф. Блиновой. - СПб.: Учебная книга, 1996. - 654 с.
4. Ткжавкина H.A., Самылина H.A., Багирова В.Л. К вопросу методологии стандартизации жидких спиртосодержащих многокомпонентных фитопрепаратов // Первый международный съезд "Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения", 11-13 июля 1997 года: Материалы съезда. - СПб., 1997. -С.71-85.
© ДАШИНАМЖИЛОВ Ж.Б., ДИЛЬ A.A., ЛОНШАКОВА КС., НИКОЛАЕВ С.М. -
ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ФИТОСРЕДСТВА "АЛКОФОБ” ПРИ ПОВРЕЖДЕНИИ ПЕЧЕНИ ЭТАНОЛОМ
Ж. Б. Даишнстжилов, A.A. Диль, К.С. Лонишкова, С.М. Николаев.
(Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ, директор - проф. В.М. Кор-сунов)
Резюме. Экспериментально показано гепатозащитное и антиоксидантное действие комплексного фитосредства "алкофоб" при гепатите, вызванном этанолом. Выявлено, что курсовое введение отвара "алкофоб" ингибирует процессы перекисного окисления липидов, стимулирует желчеобразовательную и желчевыделительную функции печени, способствует активации внутриклеточных регенераторных процессов и нормализует морфофункциональное состояние печени.
Ключевые слова: фотосредство "алкофоб", гепатопротектор, желчегонное, протектор, анти-
оксидант, этаноловое повреждение печени.
Известно, что этанол существенным образом влияет на течение биохимических и биофизических процессов в организме, активно вмешивается в процессы биотрансформации эндо- и экзогенных соединений, оказывая повреждающее действие на гепатобилиарную систему [8,15]. С учетом указанного действия этилового спирта проведены исследования по определению фармакотерапевти-ческой эффективности комплексного фитосредства "алкофоб", состоящего из травы тысячелистника обыкновенного, травы чабреца, травы полыни горькой, листьев крапивы двудомной, соцветий пижмы обыкновенной и корня аира болотного, назначаемого как гепатозащитное средство при заболеваниях гепатобилиарной системы.
Задачей настоящих исследований явилось определение гепатозащитного и желчегонного действия фитосредства "алкофоб" при этаноловом повреждении печени.
Материалы и методы
Эксперименты проведены на белых крысах обоего пола с исходной массой 140-160 г. Алкогольный гепатит вызывали у животных введением в желудок 40% этилового спирта по 0,7 мл на 100 1' массы животных один раз в сутки в течение 21 дня [1,6]. Животным 1 опытной группы внут-рижелудочно вводили фитосредство "алкофоб" в виде отвара. Отвар готовили по ГФ XI [14], исходя из соотношения сырья: вода 1:10, и вводили в желудок белым крысам в объеме 1 мл на 100 г массы животных 1 раз в сутки на протяжении 21 дня. Животным 2 опытной группы по анало-
гичной схеме вводили препарат сравнения - водный раствор сиропа холосаса в объеме 0,1 мл на 100 г массы животного (доза, проявляющая оптимальный фармакотерапевтический эффект). В контроле по аналогичной схеме вводили дистиллированную воду в эквивалентном объеме. Интервалы между введениями этанола, лекарственных средств и дистиллированной воды соответствовал 6 ч. О фармакотерапевтической эффективности лекарственных средств судили по активности ферментов в сыворотке крови: аланинами-
нотрансферазы (Ал Т) и аспартатаминотрансфера-зы (АсТ), которые определяли по Райтману и Френкелю, содержанию общего билирубина - по Ендрашику-Клегорну-Грофу, р-липопротеидов -по Бурштейну и Самай, активности щелочной фосфатазы - по Боданскому, а также по показателю тимоловой пробы - по Хуэрго и Поппер [5]. Интенсивность перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивали по содержанию малонового диальдегида (МДА) в гомогенате печени [13]. Желчь для исследования получали в условиях острых опытов по методике Н.П. Скакуна и А.Н. Олейник [15]. Оценку желчеобразовательной и желчевыделительной функции печени проводили по скорости секреции и общему количеству выделенной желчи, концентрации желчных кислот [3], а концентрацию холестерина в желчи определяли по методу С.М. Дроговоз [2], билирубина - по методу Ван ден Берга в модификации Н.П. Скакуна [10]. Для патоморфологических исследований кусочки печени животных фиксировали в 10% раст-
Влияние "алкофоба " на биохимические показатели сыворотки крови V белых крыс при повреждении печени этанолом
Показатели Средние величины показателей в группах
Интактные животные Этанол-контроль Этанол+ "алкофоб" Этанол+ Холосас
7 сутки
МДА, н-моль/г ткани 1,22±0,17 2,11+0,18 1,65+0,12* 1,94+0,15
АлТ, мкМ/мл-ч 0,54±0,11 2,46+0,08 1,80+0,11* 2,00+0,12
АсТ, мкМ/мл-ч 0,28±0,11 1,31+0,13 1,00+0,06* 1,0210,09*
Щелочная фосфатаза, ед. Бод. 7,40+0,68 16,73+1,40 11,00+1,03* 10,66+1,01*
р-линонротеиды, уел. ед. 1,60±0,10 5,00+0,50 4,20+0,30 4,30+0,20
Общий билирубин, МкМ/л 11,0±1,12 17,72+0,61 12,68±0,54* 13,40+0,58*
Тимоловая проба, ед. помутнения 1,28±0,31 5,50+0,57 4,20+0,64 3,20+0,52*
14 сутки
МДА, н-моль/г ткани 1,22±0,17 2,63+0,21 1,88+0,16* 1,90+0,14*
АлТ, мкМ/мл-ч 0,54*0,11 1,86+0,13 1,42+0,11* 0,60+0,12*
АсТ, мкМ/мл-ч 0,28+0,11 0,86+0,10 0,76+0,08 0,50+0,05*
Щелочная фосфатаза, ед. Бод. 7,40±0,68 11,57+0,31 9,79+0,60* 11,37+0,75
Р-линонротеиды, уел. ед. 1,6040,10 2,60+0,21 2,90+0,20 3,20+0,10
Общий билирубин, МкМ/л 11,0+1,12 22,80+0,18 20,40+0,24* 21,20+0,24*
Тимоловая проба, ед. помутнения 1,28+0,31 1,54+0,28 0,94+0,04* 0,90+0,03
21 сутки
МДА, н-моль/г ткани 1,22+0,17 2,71+0,21 1,50+0,28* 1,91+0,24*
АлТ, мкМ/мл-ч 0,54+0,11 0,95+0,04 0,80+0,08 0,84+0,10
АсТ, мкМ/мл-ч 0,28+0,11 0,76+0,11 0,64+0,14 0,60+0,11
Щелочная фосфатаза, ед. Бод. 7,40+0,68 12,70+0,40 9,13+0,56* 9,20+0,10*
Р-линонротеиды, уел. ед. 1,60+0,10 2,90+0,54 0,90+0,03* 1,50+0,10*
Общий билирубин, МкМ/л 11,0+1,12 16,28+1,44 12,00+0,38* 13,20+0,58
Тимоловая проба, ед. помутнения 1,28+0,31 1,78+0,18 1,42+0,26 1,48+0,28
Примечание: * - здесь и далее означает, что различия достоверна по отношению к контролю при Р<0,05.
воре нейтрального формалина. Для оценки морфофункционального состояния печени использовали гистологические, а также гистохимические методы исследования [4,9]. Статистическая обработка полученных данных проведена с использованием коэффициента Молденгаура [7].
Результаты и обсуждение Введение per os этилового спирта белым крысам характеризуется на 7 сутки ускорением ПОЛ в биомембранах генатоцитов. Содержание МДА в гомогенате печени белых крыс в контроле увеличивалось вдвое и оставалось во все последующие сроки наблюдения на высоком уровне (табл.1). Интенсификация ПОЛ влекло за собой нарушение окислительных процессов, баланса электролитов, снижения АО концентрации АТФ (аденозинтри-фоефат) и изменяло проницаемость клеточных мембран. Эти нарушения окислительного фоефо-рилирования вели к распаду мембранных структур и некрозу генатоцитов, что характеризовалось синдромом цитолиза. Установлено, что уже на 7 сутки наблюдения на фоне введения этанола повышались в сыворотке крови уровни активности АлТ и АсТ в 4,6 раза. Одновременно с этим отмечались признаки холестаза - содержание билирубина и холестерина возрастали на 65%, активность щелочной фоефатазы - в 2,2, р-линонро-теидов - в 3,1 (табл.1). В носледуклцие сроки на-
блюдения (14-21 сутки) изменения биохимических показателей в сыворотке крови крыс также свидетельствовали о наличии признаков синдрома холестаза. Развитие цитолиза на фоне усиления ПОЛ сопровождалось угнетением внешнесекреторной функции печени. Так у животных, получавших этанол, на 7 сутки опыта скорость секреции желчи снижалась на 15%, концентрация желчных кислот в желчи - на 33%, билирубина -на 35%, холестерина - на 11% но сравнению с контролем, и на 14 сутки опыта эти показатели также были ниже данных показателей у интакт-ных животных.
Курсовое введение "алкофоба" белым крысам с этаноловым гепатитом в экспериментальнотерапевтической дозе с лечебно-нрофилактиче-ской целью значительно снижало токсическое действие этанола. Уже на 7 сутки эксперимента наблюдали торможение процессов ПОЛ: содержание МДА в гомогенате печени животных, получавших "алкофоб", было достоверно ниже, чем у крыс в контроле. Наряду с этим, отмечали снижение уровней активности АлТ, АсТ. Наиболее выраженное фармакотераневтичеекое влияние "алкофоб" оказывал на проявления холеетатичеекого синдрома и диенротеинемию. Кроме того, наблюдали снижение активности щелочной фоефатазы на 35%, уменьшение концентрации билирубина -
на 29%, а показателей тимоловой пробы - на 24% по сравнению с соответствующими показателями в контроле. В последующие сроки наблюдения (14-21 сутки) изменения биохимических показателей в опыте свидетельствовали о благоприятной динамике инволюции признаков холестаза у животных, получавших "алкофоб", чем при использовании препарата сравнения - холосаса в другой группе крыс.
При курсовом применении "алкофоба" на 7 сутки наблюдения скорость секреции желчи у животных во все часы наблюдения была выше, чем в контроле. Общее количество выделенной желчи превышало данный показатель контроля на 22%, тогда как при применении холосаса оно оставалось на уровне показателей животных у контрольной группы. На этом фоне отмечена стимуляция синтеза холатов и секреции билирубина с желчью. На 14 сутки опыта положительные изменения в процессах желчеобразования в печени сохранялись. В частности, во все часы наблюдения суммарная концентрация желчных кислот повышалась на 23%, билирубина - на 20% и холестерина - на 18% по сравнению с показателями у животных, получавших только этанол (табл.2).
При патоморфологическом исследовании печени на 7 сутки наблюдения установлено, что у крыс, получавших этанол, характерны гемодина-мические нарушения с диапедезом форменных элементов крови. Выраженная зернистая дистрофия гепатоцитов имела диффузный характер распространения в дольке. На 14 сутки исследований наблюдали, наряду с зернистой дистрофией гепатоцитов, микроостровки дегенеративно-некротических изменений, которые в последующем (на 21 сутки) увеличивались в размерах и подвергались инфильтрированию мононуклеарными клет-
ками. На 21 сутки находили гемосидерин в цитоплазме гепатоцитов, дезорганизацию микроархитектоники органа. Эти изменения нередко сочетались с жировой дистрофией и снижением активности окислительно-восстановительных ферментов (лактат- и сукцинатдегидрогеназы). Также было отмечено значительное снижение содержания гликогена в клетках печени, и нередко вокруг центральных долек гликоген в клетках отсутствовал.
При курсовом введении животным "алкофоба" в печени животных гемодинамические нарушения были выражены в меньшей степени и проявлялись в виде полнокровия сосудов мелкого и среднего калибра, очагов из гепатоцитов со слабо выраженной зернистой дистрофией и умеренной внут-ридольковой инфильтрацией круглоклеточными элементами. При введении отвара "алкофоб" животным уже на ранних сроках интоксикации этанолом находили большое количество фигур митозов. У животных же, получавших водный раствор сиропа холосаса, регенераторные процессы были менее выражены.
Таким образом, курсовое введение животным комплексного растительного средства "алкофоб" при экспериментальном гепатите подавляет процессы ПОЛ, стимулирует желчеобразовательную и желчевыделительную функции печени, способствует более ранней активации внутриклеточных регенераторных процессов с нормализацией морфофункционального состояния печени. Наличие в использованном средстве фенольных соединений, витаминов, минеральных веществ, органических кислот [12], очевидно, обеспечивает торможение ПОЛ, повышает устойчивость мембранных структур клеток печени к действию этанола.
Таблица 2
Влияние "алкофоба" на скорость секреции и биохимический состав желчи у белых крыс
при эта половом гепатите
Условия опыта Средние величины, М±т
Скорость секреции желчи в течение 4 часов, мг/мин. на 100 1'массы Общее количество желчи за 4 часа, мг/100 г массы Содержание в желчи, мг/100 г массы
1 ч 2ч Зч 4ч Желчных кислот Билируб ина Холе- стерина
Интактные животные 6,7±0,5 6,0±0,5 6,1±0,5 5,8±0,3 1476±96 9,27 0,164 0,136
7 сутки
Контроль (этанол) 5,9±0,5 5,4±0,5 5,1+0,3 4,7±0,4 1266±64 6,23 0,107 0,122
Этанол+ "алкофоб" 6,6±0,5 7,3±0,5 6,7±0,3* 5,2±0,5 1548±83* 9,22 0,153 0,126
Этанол+ холосас 5,8±0,1 5,9±0,2 5,5±0,1* 5,0-ЮЛ 1332±27 5,96 0,109 0,106
14 сутки
Контроль (этанол) 5,4±0,1 5,7±0,1 5,0±0,2* 4,5±0,5* 1236±34 6,16 0,124 0,101
Этнол+ "алкофоб" 6,2±0,3 5Л ±0,2* 5,0±0,1* 4,7±0,05 1260±37 7,59 0,150 0,120
Этанол+ холосас 6.310,1 5,2±0,1 5,4±0,5 4,110,1 1260±41 6,34 0,125 0,128
PHARMACOTHERAPEUTIC EFFECTIVENESS OF THE COMPLEX VEGETABLE PHITOMEANS
"ALCOPHOB" IN ETHANOL-INJURED LIVER
Zh.B. Dashinamzlhlov, A,A. Oil, K.S. Lonshakova, S.M. Nikolaev (Institute of General and Experimental Biology, Siberian Division, Russian Academy of Sciences, Ulan-Ude)
The hepatoprotective and antioxidant action of the complex vegetable phitomeans "alcophob" is experimentally shown in hepatitis, caused by ethanol. It is revealed, that the course introduction of decoction of "alcophob" inhibites processes of lipid peroxidation, stimulates chologenic and cholagogic functions of liver, contributes to activation of intracellular regenerative processes and nOimalizes ffiorphofunetional status of the liver.
Литература
1. Дашинамжилов Ж.Б. Экспериментальная фармакотерапия полифитохолом этанолового, тетрацикли-нового и комбинированного повреждений печени: Автореф. дисс. ... канд. мед. наук. / Ж.Б. Дашинамжилов. - Улан-Удэ, 1997. - 18 с.
2. Дроговоз С.М. Нарушение интенсивности желче= отделения и химического состава желчи при дистрофии печени, вызванной четыреххлориетым углеродом / С.М. Дроговоз // Вопросы медицинской химии. - 1971. - Вып.4. - С.397-400.
3. Карбач Я.И. Количественное определение желчных кислот в желчи и крови с применением хроматографического метода. / Я.И. Карбач // Биохимия. - 1961. - Т.26, №2. - С.305-309.
4: Киселева А:Ф: Морфофункциональные методы ие= следования в норме и при патологии / А.Ф. Киселева., А.Я. Житников, Л.В. Кейсевич и др. - Киев, 1982. - 161 с.
5. Колб В.Г. Справочник по клинической биохимии. / В.Г. Колб, B.C. Камышников. - Минск, 1982. -366 с.
6. Мансурова И.Д. Активность микросомальной эта-нолокисляющей системы при алкогольной интоксикации / И,Д, МансуроваА С О Олимова Н Экспе-риметальная гепатология. - Рига, 1985. - С.41-42.
7. Монцевичюте-Эрингене Е.В. Упрощенные математико-статистические методы в медицинской исследовательской работе / Е.В. Монцевичюте-Эрин-
гене // Патол. физиология и эксперим. терапия. -1964. -№4. -С.71-78.
8. Николаев С.М. Растительные лекарственные препараты при повреждениях гепатобилиарной системы. / С.М. Николаев. - Новосибирск, 1992. - 153 с.
9. Пирс Э. Гистохимия. Теоретическая и прикладная / Э. Пирс. - М: Медицина, 1962. - 962 с.
* 10. Скакун Н.П. Нейрогуморальный механизм желчегонного действия инсулина / Н.П. Скакун // Проблемы эндокринологии. - 1956. - №6. - С.75-78.
11. Скакун Н.П., Олейник А.Н. Сравнительное действие атропина и метацина на внешнесекреторную функцию печени / Н.П, Скакун, А.Н, Олейник // Современные методы в биохимии. - М.: Медицина, 1967. -С.66-68.
12. Соколов С.Я. Справочник по лекарственным растениям. / С.Я. Соколов, И.П. Замотаев - М.: Металлургия, 1990. - 482 с.
13. Стальная И.Д., Гаришвили Г.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарби-туровой кислоты / И.Д. Стальная, Г.Г. Гаришвили // Современные методы в биохимии. - М.: Медицина, 1977. - С.66-68.
14. Государственная фармакопея СССР. Вып. 1. Общие методы анализа / М3 СССР. - 11-е изд., доп, - М„ 1 987.-336 с.
15. Олейник А.Н. Поражение печени ксенобиотиками и алкоголем, пути повышения эффективности их фармакотерапии: Автореф. дисс. ... докт. мед. наук/ А.Н. Олейник. - Москва, 1984, - 50 с,
