CC BY
71
УДК 615.322:616.36-002
Ж.Б. Дашинамжилов, П.Б. Лубсандоржиева
ГЕПАТОЗАЩИТНОЕ ВЛИЯНИЕ ЛЕКАРСТВЕННОГО СБОРА «КАЛЕНДУЛА-6» ПРИ КОМБИНИРОВАННОМ ПОВРЕЖДЕНИИ ПЕЧЕНИ У БЕЛЫХ КРЫС
Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН (Улан-Удэ)
Растительное лекарственное средство «календула-6» при. курсовом внутрижелудочном введении лабораторным, животным, с комбинированным (этанол+тетрациклин) повреждением печени, ингибирует процессы, перекисного окисления липидов, тормозит, развитие синдромов цитолиза и холестаза, стимулирует, процессы, холатообразования, способствуя ускоренной нормализации ее функционального состояния. Полученные результаты, доказывают, перспективность дальнейшего изучения, этого средства для. профилактики, и. лечения, алкогольного гепатита и. его осложнений. Ключевые слова: комбинированное поражение печени, «календула-6», холосас
HEPATOPROTECTIVE EFFECT OF HERBAL DRUG "CALENDULA-6" ON COMBINED LIVER DAMAGE IN WHITE RATS
Zh.B. Daschinamzhilov, P.B. Lubsandorzhiyeva
Institute of General and Experimental Biology SB RAS, Ulan-Ude
The herbal drug «calendula-6» inhibits the process of peroxide oxidation of lipids and impedes the development of syndromes of citolysis and cholestasis at laboratory animals. This remedy stimulated, the processes of bile formation, promoting the accelerated, normalization of its functional state. Obtaining results prove the further study of this remedy for preventive treatment of combined, hepatitis. Key words: combined hepatitis, "calendula-6", cholosasum
Основными этиологическими факторами гепатитов признаны инфицирование гепатотропными вирусами, действия ксенобиотиков и, в первую очередь, алкоголя и лекарств [2, 3, 4].
Существующее представление о молекулярных механизмах гепатотоксического действия этилового спирта и тетрациклиновых антибиотиков обусловливает поиск лекарственных средств, способных мобилизовать защитные ресурсы организма и снижать интенсивность процессов перекисного окисления липидов. При токсических поражениях печени применяют антиоксидантную терапию, направленную на ограничение ПОЛ и стабилизацию мембран.
В последние годы внимание ученых, занимающихся разработкой гепатопротекторов, привлечено к соединениям с выраженной антиоксидантной активностью. Такими свойствами обладают лекарственные средства растительного происхождения.
Ранее показано, что лекарственный сбор «кален-дула-6» обладает широким спектром фармдействия, особенно при повреждениях печени алкоголем [7].
Цель настоящей работы — определить ге-патозащитное влияние лекарственного сбора «календула-6», состоящего из цветков календулы лекарственной (Calendula officinalis L.), побегов пятилистника кустарникового (Pentaphylloides fruti-cosa (L.) O. Schwarz), листьев мяты перечной (Mentha piperita L.), черных листьев бадана и корней бадана толстолистного (Bergenia crassifolia (L.) Fritsch.), корней шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis Georgi.) при экспериментальном комбинированном (этанол + тетрациклин) повреждении печени.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Эксперименты проводили на белых крысах линии Wistar c исходной массой тела 150—170 г.
Животных содержали в условиях вивария на стандартном рационе питания. Из эксперимента животных выводили в соответствии с правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей.
Лекарственные растения, входящие в состав сбора, были собраны в летне-осенний период 2008 г. в Прибайкальском районе Республики Бурятия, в Читинской области, а некоторые средства были приобретены в аптечной сети. Качество сырья соответствовало требованиям Государственной Фармакопеи XI издания [5].
Отвар готовили в соотношении сырье : вода — 1 : 10 [5]. При исследовании острой токсичности отвара комплексного растительного средства «ка-лендула-6» было установлено, что при однократном внутрижелудочном введении его в максимально возможном объеме белым крысам гибели животных не наблюдалось в течение всего периода наблюдения (14 суток).
Модель комбинированного поражения печени у крыс вызывали введением внутрижелудочно тетрациклина гидрохлорида в виде взвеси с Т"№ееп-80 (1 : 10) в дозе 0,5 г/кг массы животного. Через 3 часа после введения тетрациклина вводили белым крысам внутрижелудочно 40% водный раствор этанола в объеме 12,5 мл/кг массы животного 1 раз сутки в течение 7 дней [6].
Животным 1-й опытной группы вводили лекарственный сбор «календула-6» в виде отвара. Отвар «календула-6» вводили в желудок белым крысам в объеме 1 мл на 100 г массы животных 1 раз сутки на протяжении 7 дней. Второй опытной группе животных по аналогичной схеме вводили препарат сравнения — водный раствор сиропа холосаса в объ-
еме 0,1 мл на 100 г массы тела животного (доза, проявляющая оптимальный фармакотерапевтический эффект установленный опытным путем). Животным контрольной группы по аналогичной схеме вводили дистиллированную воду в эквивалентном объеме. Интервал между введениями этанола с тетрациклином, лекарственных средств и дистиллированной воды составлял 6 ч. Исследования проводили на 7 сутки с начала экспериментов. О гепатозащитном действии изучаемого средства и препарата сравнения судили по активности ферментов в сыворотке крови — аланинаминотрансферазы (АлТ) и аспарта-таминотрансферазы (АсТ), по содержанию в сыворотке крови общего билирубина, холестерина и активности щелочной фосфатазы [10]. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивали по содержанию малонового диальдегида (МДА) в гомогенате печени [13]. Состояние антиок-сидантной защиты организма оценивали по уровню активности каталазы в сыворотке крови [1]. Желче-образовательную и желчевыделительную функции печени определяли по скорости секреции и общему количеству выделенной желчи и концентрации желчных кислот по методу Я.И. Карбач [9], содержание холестерина в желчи — по методу С.М. Дро-
говоз [8], билирубина в желчи — по методу Ван ден Берга в модификации Н.П. Скакуна [11]. Желчь для исследования получали в условиях острых опытов по методике Н.П. Скакуна и А.Н. Олейник [12]. В работе использован стандартный набор реактивов для биохимической лаборатории ЗАО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск, Россия). Результаты обрабатывали по параметрическому t-критерию Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
При комбинированном введении тетрациклина и этанола отмечается ухудшение общего состояния лабораторных животных, потеря двигательной активности и отказ от корма. У животных контрольной группы (тетрациклин + этанол) на 7-е сутки эксперимента наибольшие изменения претерпевают биохимические показатели, характеризующие развитие синдромов цитолиза и холестаза. Анализ полученных данных показывает (табл. 1), что на этом фоне достоверно увеличиваются по сравнению с показателями у животных интактной группы, активности АЛТ — на 33 %, АСТ — на 32 %, а содержание билирубина и p-липопротеидов возрастает в 3 раза, концентрация холестерина в сыворотке крови — в 2 раза и активность ЩФ — 20 %. Активность каталазы
Таблица 1
Влияние фитосредства «календула-6» на биохимические показатели крови у белых крыс при комбинированном
повреждении печени этанолом и тетрациклином
Показатели Интактные животные (n = 7) Тетрациклин + этанол (контроль) (n = 7) Тетрациклин + этанол + «календула-6» (n = 7) Тетрациклин + этанол + холосас (n = 7)
МДА, нмоль/г ткани 1,65 ± 0,01 2,77 ± 0,05 1,81 ± 0,02* 1,99 ± 0,01*
АЛТ, мкМ/млч 2,63 ± 0,12 3,91 ± 0,10 2,91 ± 0,11* 3,36 ± 0,12
ACT, мкМ/млч 1,42 ± 0,11 2,08 ± 0,15 1,50 ± 0,06* 1,88 ± 0,11
Холестерин, мМ/л 1,41 ± 0,10 2,94 ± 0,02 1,77 ± 0,03* 1,82 ± 0,02
Щелочная фосфатаза, ед. 7,40 ± 0,68 9,20 ± 0,87 7,20 ± 0,32* 8,70 ± 0,29
Общий билирубин, мкМ/л 5,81 ± 0,51 18,52 ± 1,06 11,90 ± 1,15* 16,38 ± 1,54
p-липопротеиды, усл. ед. 1,60 ± 0,10 5,00 ± 0,50 4,00 ± 0,32 4,30 ± 0,20
Каталазная активность сыворотки крови, мг/ Н202 3,36 ± 0,22 2,17 ± 0,18 3,00 ± 0,13* 2,86 ± 0,28
Примечание: * - различия статистически значимы по сравнению с контролем при р < 0,05.
Таблица 2
Влияние «календула-6» на желчеобразовательную ижелчевыделительную функции печени белых крыс при комбинированном повреждении печени этанолом и тетрациклином
Условия опыта Скорость секреции желчи в течение 4 часов, мг/мин на 100 г массы Общее кол-во желчи за 4 ч, мг/100 г массы Содержание в желчи:
желчных кислот билирубина холестерина
1 ч 2 ч 3 ч 4 ч мг/100 г массы
7 сутки
Интактные (п = 5) 4,9 ± 0,3 5,5 ± 0,2 6,6 ± 0,4 5,9 ± 0,2 1398±51 0,106 0,100 1,80
Контроль (тетрациклин + этанол) (п = 5) 4,6 ± 0,4 4,2 ± 0,3 5,7 ± 0,2 5,5 ± 0,1 1187±19 0,044 0,085 1,54
Тетрациклин + этанол + «календула-6» (п = 5) 5,4 ± 0,3* 5,8 ± 0,1* 6,6 ± 0,5* 5,7 ± 0,3 1342 ± 17* 0,064 0,100 1,87
Тетрациклин + этанол + холосас (п = 5) 4,8 ± 0,4 5,2 ± 0,1* 5,1 ± 0,1 5,0 ± 0,2 1254±75 0,043 0,095 1,55
Примечание: * - различия статистически значимы по сравнению с контролем при р < 0,05.
в сыворотке крови в контрольной группе животных уменьшается на 35 %. Содержание МДА в гомогена-те печени повышается по отношению к исходному фону (интактные животные) на 40 % (табл. 1).
Изменения биохимических показателей, указывающих в сторону развития цитолиза и холестаза, а также активация ПОЛ характеризуют нарушения функций печени, таких как желчеобразовательная, желчевыделительная и др. Так, на 7-е сутки скорость секреции желчи у крыс возрастает только к 4-му часу наблюдения. При этом общее количество желчи снижается на 15 %. Концентрация основных ингредиентов желчи на этом фоне уменьшается в среднем: желчных кислот на — 58 %, билирубина на — 15 %, холестерина на —15 % (табл. 2).
Курсовое применение отвара «календула-6» в экспериментально-терапевтической дозе, на 7-е сутки эксперимента, значительно снижает проявления патологического процесса в печени. В частности, содержание МДА в гомогенате печени снижается на 35 %, достоверно уменьшаются активности АЛТ на 26 %, АСТ — на 28 %, так же уровни содержания ß-липопротеидов, холестерина и общего билирубина были ниже, чем у животных в контрольной группе.
Более выраженное позитивное влияние «ка-лендула-6» оказывает на специфическую функцию печени у животных, в частности, на холеретическую реакцию. Так, на 7-е сутки эксперимента скорость секреции желчи у крыс возрастает уже через час на 15 % по отношению к контролю и остается выше все 4 часа наблюдения. Следует отметить, что «ка-лендула-6» оказывает более выраженное влияние на желчеотделительную функцию печени, чем холосас.
Выявленный фармакотерапевтический эффект «календулы-6» можно объяснить ее способностью уменьшать явление цитолиза и холестаза, угнетением ПОЛ, уменьшением интенсивности воспалительных процессов, которые в комплексе обеспечивают позитивные условия для ускорения регенераторных процессов в поврежденной печени. Очевидно, что реализация указанного действия «календулы-6» обеспечивается высоким содержанием в нем биологически активных веществ, таких как флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, дубильные вещества, органические кислоты, тритерпеноиды, антоцианы, полисахариды и другие вещества. Известно, что указанные биологически активные вещества оказывают антиоксидантное, мембраностабилизирующее, противовоспалительное действие [6, 7]. Этим можно объяснить гепатозащитное влияние «календула-6».
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Растительное лекарственное средство «кален-дула-6» при курсовом внутрижелудочном введении лабораторным животным с комбинированным (этанол + тетрациклин) повреждением печени, ингибирует процессы перекисного окисления
липидов, тормозит развитие синдромов цитолиза и холестаза, стимулирует процессы холатообразо-вания и способствует ускоренной нормализации ее функционального состояния. Полученные результаты доказывают перспективность дальнейшего изучения этого средства для профилактики и лечения повреждений печени и его осложнений.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бобенко Г.А., Гайнацкий М.Н. Определение активности каталазы в эритроцитах и сыворотке крови // Лабораторное дело. — 1976. — № 3. — С. 72.
2. Буеверов А. О. Лекарственные поражения печени // Рус. мед. журн. — 2001. — № 13—14. — С. 608-610.
3. Буеверов А.О. Современные аспекты патогенеза алкогольной болезни печени // Матер. симп. «Новое в изучении патогенеза и лечения алкогольной болезни печени». — М., 2003. — С. 9-12.
4. Буеверов А.О., Маевская М.В., Ивашкин В.Т. Алкогольная болезнь печени // Русский мед. журн. — 2001. — Т. 3, № 2. — С. 61—65.
5. Государственная фармакопея СССР. — 11-е изд. — М., 1990. — Вып. 2. — 398 с.
6. Дашинамжилов Ж. Б. Экспериментальная фармакотерапия полифитохолом этанолового, тетрациклинового и комбинированного повреждений печени: автореф. дис. ... канд. мед. наук. — Улан-Удэ, 1997. — 28 с.
7. Дашинамжилов Ж.Б., Лубсандоржиева П.Б., Лоншакова К.С., Баторова С.М. Гепатозащитное действие лекарственного растительного сбора «Гексахолефит» при повреждении печени этанолом // Патол. физиология и экспериментальная терапия. — 2008. — № 1. — С. 25 — 26.
8. Дроговоз С.М. Нарушение интенсивности желчеотделения и химического состава желчи при дистрофии печени, вызванной четыреххлористым углеродом // Вопр. мед. химии. — 1971. — Вып. 4. — С. 397 — 400.
9. Карбач Я.И. Количественное определение желчных кислот в желчи и крови с применением хроматографического метода // Биохимия. — 1961. — Т. 26, № 2. — С. 305 — 309.
10. Колб В.Г., Камышников В.С. Справочник по клинической биохимии. — Минск, 1982. — 366 с.
11. Скакун Н.П. Нейрогуморальный механизм желчегонного действия инсулина // Пробл. эндокринологии. — 1956. — № 6. — С. 75 — 78.
12. Скакун Н.П., Олейник А.Н. Сравнительное действие атропина и метацина на внешнесекретор-ную функцию печени // Современные методы в биохимии. — М., 1967. — С. 66 — 68.
13. Стальная И.Д., Гаришвили Г.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты // Современные методы в биохимии. — М., 1977. — С. 66 — 68.
Сведения об авторах
Дашинамжилов Жаргал Балдуевич - к.м.н., старший научный сотрудник Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (670031, г. Улан-Удэ, ул. Солнечная, 39, кв. 57; раб. тел.: 43-37-13, дом. тел.: 43-59-76; e-mail: [email protected]). Лубсандоржиева Пунцик-Нима Базыровна - к.фарм.н., с.н.с. Института общей и экспериментальной биологии СО РАН, (670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6; тел.: 8(3012)434211, факс: 8(3012)433034; e-mail: [email protected]).
