CC BY
37
Эпидемиологические и иммунопатологические особенности Beijing-туберкулеза в Томской области
Р.Р. Хасанова ([email protected]), О.В. Воронкова, О.И. Уразова, В.В. Новицкий, И.О. Наследникова, З.К. Хаитова, Е.Г. Чурина, И.Е. Есимова
ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, г. Томск
Резюме
В статье приводятся результаты генетического MIRU-VNTR-типирования 76-ти клинических изолятов Mycobacterium tuberculosis, выделенных из мокроты больных инфильтра-тивным и диссеминированным туберкулезом легких, проживающих на территории Томской области. Установлено, что среди генетически неоднородных штаммов M. tuberculosis 19% проявляют множественную лекарственную устойчивость. Штаммы семейства Beijing («пекинская» группа) составляют 27% от общей популяции возбудителя, имеют высокий показатель кластеризации (74%), уровень их множественной лекарственной устойчивости в три раза превышает таковой у «непекинских» штаммов, для которых доля кластеризующихся штаммов составляет 11%. Проведен анализ некоторых параметров иммунного статуса у больных туберкулезом легких, инфицированных Beijing-штаммами M. tuberculosis. У больных Beijing-туберкулезом установлено значимое повышение количества CD16+-лимфоцитов в крови и уровня продукции IFNy мононуклеарами крови, а также более выраженное угнетение базальной секреции IL-2, чем при «не Beijing'-туберкулезе. Ключевые слова: M. tuberculosis, генотипирование, лекарственная устойчивость, Beijing-штаммы, иммунитет
Epidemiological and Immunopathological Features of Beijing-Tuberculosis from Tomsk Region
R.R. Hasanova ([email protected]), O.V. Voronkova,
O.I. Urazova, V.V. Novtsky, I.O. Naslednikova, Z.K Haitova,
E.G. Churina, I.E. Esimova
Siberian State Medical University, Tomsk
Abstract
In this article are presented results of genetics MIRU-VNTR-typing of 76 clinics isolates of Mycobacterium tuberculosis, allocated from patients with extensive destructive infiltrative and disseminated pulmonary tuberculosis, who lives on the area in Tomsk region. It is established that among genetically non-uniform strains of M. tuberculosis, 19% from this strains shows multidrug resistance. Strains from Beijing family compose 27% from general population of infection agent, have a high index of clusterization (74%), level of their multidrug resistance in three times exceeds that at non Beijing-strains for which the share of clustering strains makes 11%. We lead the analyze of some parameters of immune status at the patients with lung tuberculosis, infected with Beijing-strains of M. tuberculosis. At the Beijing-tubercular patients we set significant raise quantity of lymphocytes CD16+ in blood and the level of production of IFNy by mononuclear of blood cells, as well as more meaning depress of basal production of IL-2, than by non Beijing-tuberculosis.
Key words: M. tuberculosis, genetic typing, drug resistance, Beijing-strains, immunity system
Введение
Несмотря на доступность антимикобактери-альных препаратов, во всем мире туберкулез по-прежнему занимает одно из лидирующих мест по уровню заболеваемости и количеству летальных исходов среди инфекционных заболеваний. В настоящее время отмечается неуклонный рост в структуре заболеваемости им доли тяжелых форм, вызываемых лекарственно-устойчивыми штаммами M. tuberculosis (МБТ), характеризующимися высокой вирулентностью [3, 10, 29, 31]. Создание в последние десятилетия библиотек генов микобак-терий, а также накопление информации по нуклеиновым кислотам, видовой специфичности белков возбудителей туберкулеза, открытие вставочных элементов в генном материале МБТ предоставляют возможность для внутривидовой дифференциации штаммов микобактерий и изучения их полиморфизма [5, 7]. Важной проблемой на сегодняш-
ний день является распространение в человеческой популяции лекарственно-устойчивых «пекинских» штаммов МБТ (генотип Beijing). Российскими учеными установлены селективные преимущества данного типа микобактерий, связанные с доминированием мутаций 531TCG/TTG в гене rpoB, возможными компенсаторными мутациями, восстанавливающими способность патогена к репродукции вследствие развития лекарственной устойчивости, что обусловливает доминирование генотипа Beijing в структуре популяции МБТ, инфицирующих человека [9, 11, 12, 20, 23 - 25, 28]. Предполагается также, что тяжесть и течение специфического процесса в легких во многом обусловливаются генотипом МБТ. В литературе представлена достаточно разрозненная информация о связи гено-типических свойств возбудителя с вариацией клинически и патогенетически значимых признаков туберкулеза, при том что ограниченное число из-
вестных маркеров лекарственной резистентности M. tuberculosis в условиях постоянной модификации генотипических свойств возбудителя под химиоте-рапевтическим воздействием оказываются в некоторой степени «устаревшими».
Цель настоящего исследования - изучение молекулярно-эпидемиологических и иммунопатологических особенностей туберкулеза легких, вызванного M. tuberculosis семейства Beijing.
Материалы и методы
Для генетического типирования нами были отобраны клинические изоляты M. tuberculosis, выделенные от 76 больных (женщин - 34,2%, мужчин -65,8%; возраст - 18 - 55 лет) распространенным деструктивным туберкулезом легких (ТЛ), проживающих на территории Томской области (включая городские и сельские территории). Диагноз устанавливали на основании клинической картины заболевания, рентгенологического обследования легких, данных микроскопического и бактериологического исследования мокроты. Контрольную группу составили 35 здоровых доноров (15 женщин, 20 мужчин). Материалом исследования служили мононуклеарные лейкоциты периферической крови, а также M. tuberculosis, выделенные из мокроты больных. Для видовой идентификации и определения чувствительности M. tuberculosis к противотуберкулезным химиопрепаратам (методом абсолютных концентраций) производили посев мокроты на плотные питательные среды Левенштейна-Йенсе-на и Финн-2.
Типирование клинических изолятов M. tuberculosis проводили методом MIRU-VNTR-анализа, используя 12 пар праймеров для амплификации локусов ми-кобактериального генома: MIRU [2, 4, 10, 16, 20, 23, 24, 26, 27, 31]. Аликвоты амплификатов фракционировали в 2%-ном агарозном геле в присутствии бромистого этидия в трис-ацетатном буферном растворе в течение 45 минут при 100 В.
Обработку полученных электрофореграмм и определение числа прямых повторов в локусах осуществляли с помощью программы Quantity one (версия 4.3.1, BioRad). Кластерный анализ М. tuberculosis проводили с помощью программы BioNumerics (Applied Math, США). Дендрограмму рассчитывали с применением категориального коэффициента подобия методом UPGMA - невзвешенного попарного арифметического среднего.
Мононуклеарные лейкоциты из периферической крови больных туберкулезом легких выделяли методом градиентного центрифугирования. Далее клетки отмывали и стандартизировали их количество до 2,5 х 106/мл. Культивирование клеток проводили в полной питательной среде в течение 24 часов при 37 °С в атмосфере 5%-ного СО2. Для стимуляции мононуклеарных лейкоцитов в пробы вносили комплексные белковый и липид-ный антигены, выделенные из M. tuberculosis семейства Beijing, в дозе 20 и 50 мкг/мл соответ-
ственно. В контрольные пробы добавляли полную среду RPMI-1640. Для определения уровня цито-кинов в супернатантах культуральных суспензий применяли твердофазный иммуноферментный «сэндвич»-метод (ELISA). Исследование проводили с использованием коммерческих наборов ProCon IL2 (ООО «Протеиновый контур», Санкт-Петербург) и «Интерферон гамма» (ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск).
Определение дифференцировочных антигенов лимфоцитов человека (CD3, CD4, CD8, CD16, CD45RA) проводили лимфоцитотоксическим методом с использованием соответствующих монокло-нальных антител (НПО «Сорбент», Москва).
Статистический анализ полученных данных осуществляли с помощью программы Statistica, версия 6.0 (StatSoft Inc., США). Для оценки достоверности различий выборок применяли непараметрический критерий Манна-Уитни. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез принимали равным 0,05.
Результаты и обсуждение
В настоящее время используемые методы генетического маркирования различных штаммов M. tuberculosis позволяют детально исследовать структуру бактериальной популяции и проводить глубокий эпидемиологический анализ в очагах туберкулезной инфекции. Для генетического типирования нами были отобраны клинические изоляты M. tuberculosis, выделенные от 76 больных с распространенным деструктивным ТЛ, проживающих на территории Томской области, включая городские и сельские территории. На рисунке 1 представлены дендрограмма кластеризации, отражающая степень генетического родства штаммов (слева), и схематическое изображение VNTR-паттернов (справа) с указанием номера клинического изолята по лабораторному журналу.
В исследуемой выборке доля лекарственно-чувствительных изолятов M. tuberculosis составляла 62%, лекарственно-устойчивых - 38%. Спектр лекарственной устойчивости M. tuberculosis был представлен девятью вариантами, при этом на долю изолятов с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) (IRS + IRSK + IRSKE) приходилось 19% (табл. 1).
Анализ дендрограммы позволил выявить четыре крупные ветви (кластера), условно обозначенные буквами A, B, C и D (см. рис. 1).
Ветвь А (10,5% изолятов) оказалась наиболее гетерогенной, в нее входили изоляты со средней гомологией около 48%. В данной ветви не было кластеризующихся (сходных по генотипу) изолятов, то есть все штаммы M. tuberculosis, входящие в кластер А, были уникальными.
Ветвь B объединяла 23 (30,3%) штамма со средней степенью гомологии 75%. Несмотря на высокую степень гомологии, штаммы ветви В в большинстве случаев были уникальными. Мы зарегистрировали
Рисунок 1.
Дендрограмма кластеризации M. tuberculosis (по результатам MIRU-VNTR-типирования 76-ти клинических изолятов)
только два кластера, идентичных по VNTR-профилю штаммов M. tuberculosis.
Ветвь С оказалась наиболее многочисленной. В нее входили 43 (56,6%) клинических изолята, характеризовавшихся высокой степенью гомологии генотипического профиля - 82%. Эта ветвь содержала в своем составе крупные кластеры изолятов с одинаковыми генотипами. Самый крупный из них состоял из шести изолятов M. tuberculosis, самый мелкий - из трех.
Ветвь D оказалась самой малочисленной, состоящей из двух (2,6%) клинических изолятов с уникальным VNTR-профилем и средней степенью гомологии 83%.
Для оценки степени распространения штаммов генетического семейства Beijing в Томской области были сопоставлены MIRU-коды штаммов из анализируемой выборки с кодами штаммов, относящих-
ся к «пекинскому» семейству. При детальном анализе дендрограммы (см. рис. 1) было установлено, что лекарственно-устойчивые штаммы M. tuberculosis чаще встречались среди клинических изолятов, принадлежащих к семейству Beijing. Номера изо-лятов, выделенные на дендрограмме рамкой черного цвета, показывают распределение в древе штаммов M. tuberculosis с МЛУ. Среди 43 изолятов в клинических образцах, входящих в состав ветви С, достоверно чаще (P < 0,005 по критерию х2), чем в среднем по выборке, обнаруживались изо-ляты с МЛУ (всего 11 изолятов). По свидетельству многих авторов, как уже отмечалось выше, штаммы M. tuberculosis «пекинского» семейства характеризуются преимущественно множественной лекарственной устойчивостью [2, 18-20, 28, 29, 32, 33 -35]. Однако сопоставление данных определения спектра лекарственной устойчивости и генотипиче-
Таблица 1.
Спектр лекарственной устойчивости 76-ти клинических изолятов M. tuberculosis, выделенных от больных туберкулезом легких
Спектр устойчивости Количество изолятов Номера изолятов в дендрограмме
Монорезистентность I 3 2966, 5712, 5524
S 3 2884, 9619, 1565
R 1 2685
Полирезистентность IS 4 3764, 5841, 15799, 1931
RS 2 2245, 10477
RSK 1 5079
Множественная лекарственная устойчивость IRS 10 2431, 803, 3546, 4862, 4912, 5769, 5771, 1570, 4985, 5529
IRSK 2 8915, 4818
IRSE 2 5295, 405
IRSKE 1 1033
I - изониазид, S - стрептомицин, R - рифампицин, K - канамицин, E - этамбутол.
ского профиля позволило выявить, что из 21-го клинического изолята МБТ с VNTR-профилем, характерным для BejVng-семейства, только 12 оказались лекарственно-резистентными (спектр устойчивости представлен в табл. 1), а остальные девять были чувствительными к противотуберкулезным препаратам первого ряда, то есть штаммы с МЛУ среди BejVng-семейства встречались не чаще, чем лекарственно-чувствительные (P > 0,05 по критерию х2).
Для оценки зависимости параметров иммунного статуса больных ТЛ от варианта генотипа инфицирующего штамма M. tuberculosis все обследованные нами пациенты были разделены на две группы: первую составили больные, инфицированные штаммами M. tuberculosis Beijing-семейства, вторую - больные, выделяющие микобактерии, по генотипиче-ским характеристикам не относящиеся к «пекинскому» семейству.
При изучении CD-фракционного состава лимфоцитов периферической крови у больных ТЛ в обеих исследуемых группах в острый период заболевания было выявлено статистически значимое снижение относительного и абсолютного числа клеток, экспрессирующих CD3-, CD4- и CD45RA-антигены, по сравнению с соответствующими показателями в контрольной группе. При этом у больных ТЛ, инфицированных штаммами, не принадлежащими к «пекинскому» семейству, было установлено достоверное увеличение абсолютного и относительного количества CD8- и CD16-позитивных лимфоцитов по отношению к соответствующим значениям в контроле. У больных ТЛ, выделяющих МБТ BejVng-семейства, на фоне повышения численности натуральных киллеров количество клеток CD8+ в крови сохранялось в пределах нормы (табл. 2).
Исследование продукции IFNy in vitro позволило выявить у больных ТЛ, инфицированных штаммами M. tuberculosis Beijing-семейства, более высокий уровень базальной секреции цито-кина, который оказался в 6,2 раза выше нормы и в 1,5 раза - значений у пациентов 2-й группы (табл. 3).
Однако уровень белок-стимулированной продукции IFNy соответствовал таковому у здоровых доноров и был на 67% ниже базального уровня наработки данного цитокина. Вместе с этим у больных, инфицированных МБТ «не Bej'/'n^-семейства, добавление в культуральную среду белкового антигена МБТ вызывало статистически значимое повышение выработки IFNy (относительно базальной и соответствующих значений в группах сравнения) (см. табл. 3). В обеих группах обследуемых лиц регистрировалось повышение относительно нормы липид-индуцированной продукции IFNy, наиболее значимое у больных, инфицированных M. tuberculosis «непекинского» семейства (см. табл. 3).
Дефицит общего количества Т-лимфоцитов (CD3+ Т-клеток) у обследованных нами больных ТЛ, вероятно, является следствием недостаточной ба-зальной продукции IL-2 (см. табл. 3). Известно также, что в ранний период развития туберкулезной инфекции увеличение концентрации IL-12 опосредует активацию продукции IFNy натуральными киллерами в несколько раз [4, 6, 8, 13, 14, 16, 20 - 22, 33, 36]. Поскольку у больных Bej'ing-туберкулезом повышение количества лимфоцитов CD16+ в крови сочеталось с высоким уровнем продукции IFNy, можно предположить, что клетки адекватно воспринимают стимул активации со стороны IL-12, основными продуцентами которого являются моноциты/макрофаги. При «не Be/j/'ng»-туберкулезе
Таблица 2.
Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови у больных туберкулезом легких в зависимости от генотипических свойств M. tuberculosis, Ме (Q1 - Q3)
Группы обследованных лиц Количество лимфоцитов, презентирующих ОЭ-маркеры (в числителе - в %, в знаменателе - в абсолютных числах, х 109/л)
CD3+ CD4+ CD8+ CD16+ CD45RA+
Здоровые доноры 69,5 (65,0 - 74,5) 37,0 (33,5 - 41,0) 25,0 (22,5 - 27,0) 15 (12,5 - 18,0) 59,0 (37,5 - 68,5)
1,2(0,9 - 1,4) 0,2 (0,2 - 0,3) 0,5 (0,4 - 0,6) 0,3 (0,2 - 0,4) 0,9 (0,6 - 1,5)
Больные, инфицированные МБТ Беу1пд-семейства 24,0 (20,0 - 49,0) Pi < 0,0005 22,0 (19,0 - 31,0) P1 < 0,005 28,1 (15,0 - 30,0) 23,1 (17,0 - 28,5) P1< 0 05 26,1 (18,0 - 29,5) P1 < 0,001
0,6 (0,4 - 0,9) Р1 < 0,001 0,1 (0,1 - 0,2) Р1 < 0,05 0,5 (0,3 - 0,7) 0,4 (0,2 - 1,0) 0,5 (0,4 - 0,6) Р1 < 0,05
Больные, инфицированные МБТ «не Бецпд»-семейства 21,3 (18,9 - 27,5) Р1 < 0,0005 24,5 (21,2 - 3,0) Р1 < 0,005 33,1 (29,6 - 40,0) P1 < 0,05, P2 < 0,05, 27,3 (22,5 - 32,8) Р1 < 0,001 28,6 (22,5 - 36,1) P1 < 0,001
0,4 (0,3 - 0,6) Р1 < 0,001 0,1 (0,1 - 0,2) Р1 < 0,05 0,7 (0,6 - 0,8) Р1 < 0,05 0,5 (0,4 - 0,6) Р1 < 0,05 0,5 (0,4 - 0,6) Р1 < 0,05
Здесь и в таблице 3: Р - уровень статистической значимости различий по сравнению с соответствующими показателями у здоровых доноров; Р2 - по сравнению с соответствующими показателями у больных, выделяющих МБТ, принадлежащие к семейству Beijing; Р3 - по сравнению с соответствующими показателями на базальном (спонтанном) уровне.
Таблица 3.
Продукция IL-2 и IFNy в культуре мононуклеарных лейкоцитов периферической крови у больных туберкулезом легких в зависимости от генотипических свойств M. tuberculosis, Ме (Q1 - Q3)
Группы обследованных лиц
Концентрация цитокина, пг/мл здоровые доноры больные, инфицированные МБТ Beijing-семейства больные, инфицированные МБТ «не Beijing-семейства
Спонтанная(базальная) 38,7 (25,6 - 46,7) 11,0 (7,4 - 15,1) Р1 < 0,001 25,0 (11,5 - 26,9) Р1 < 0,05, Р2 < 0,05
Z LL При действии индукторов Белковый антиген M. tuberculosis 86,7 (66,6 - 129,6) Р3 < 0,001 23,0 (14,4 - 30,4) Р1 < 0,005, Р3 < 0,05 24,1 (16,6 - 32,8) Р1 < 0,005
Липидный антиген M. tuberculosis 27,1 (14,0 - 30,8) Р3 < 0,05 28,3 (19,4 - 29,2) Р3 < 0,005 29,2 (20,0 - 30,3)
Спонтанная(базальная) 31,9 (16,3 - 40,6) 197,1 (147,0 - 385,7) Р1 < 0,0005 133,4 (79,6 - 142,9) Р1 < 0,0005, Р2 < 0,05
. ■ m sjo дио Белковый антиген M. tuberculosis 57,8 (51,7 - 87,0) Р3 < 0,05 64,9 (42,4 - 86,6) Р3 < 0,0001 295,1 (171,2 - 353,0) Р1 < 0,0001, Р2 < 0,0001, Р3 < 0,05
СцЧ Липидный антиген M. tuberculosis 43,3 (40,3 - 56,8) Р3 < 0,05 175,3 (136,7 - 193,5) Р1 < 0,0005 214,4 (204,0 - 224,4) Р1 < 0,0001, Р2 < 0,05, Р3 < 0,05
повышенный уровень секреции IFNy in vitro, на наш взгляд, поддерживался не только за счет лимфоцитов CD16+, но и за счет цитотоксических Т-клеток, уровень которых у больных «не Beijing»-туберкулезом превышал соответствующие значения в группах сравнения в 1,2 - 1,3 раза (см. табл. 2) и, кроме того, положительно коррелировал с базальным уровнем продукции IFNy (r = 0,77, Р < 0,05).
Анализ процесса индуцирования продукции IL-2 мононуклеарными лейкоцитами периферической крови in vitro показал, что добавление в культу-ральную среду белкового антигена M. tuberculosis
не сопровождалось увеличением наработки цито-кина у больных ТЛ (в обеих исследуемых группах) в отличие от здоровых доноров, у которых количество IL-2 возрастало в 2,2 раза и становилось более чем в 3,5 раза выше, чем у страдающих ТЛ (см. табл. 3). При этом у больных ТЛ видимых отклонений в IL-2-секреторной реакции лейкоцитов на индукцию липидным антигеном в сравнении с группой здоровых доноров замечено не было. Между тем у больных, инфицированных Beijing-МБТ, уровень секреции IL-2 в ответ на липидный антиген M. tuberculosis повышался в сравнении с базальным более чем в 2 раза (см. табл. 3).
Обращал на себя внимание факт, что добавление в качестве индуктора в культуральные суспензии белкового микобактериального антигена, выделенного из МБТ Ве//'/п£-штаммов, приводило к угнетению уровня продукции исследуемых цитоки-нов, что свидетельствует о том, что избыток антигена способствует блокированию выработки цитоки-нов клетками.
Из литературных источников известно, что токсическое действие МБТ на иммуноциты обусловливается также и угнетением внутриклеточного энергетического метаболизма и проявляется подавлением активности ферментов митохондриального окисления, анаэробного гликолиза (НАДФН-дегидрогеназы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы) и глицерофосфатного шунта (а-глицерофосфатдегидрогеназы), ведущим к нарушению синтеза АТФ, ДНК, рибосомаль-ной ДНК, аминокислот и белка - в итоге происходит сбой в образовании новых клеток, цитокинов и рецепторов к ним [1, 5, 14, 15, 17, 18, 33, 37, 38]. Патологические процессы в клетках в последующем приводят к агрегации и лабилизации ли-зосом, с выходом их содержимого в цитозоль и повреждением внутриклеточных структур (а затем к апоптозу самой клетки), и как итог - к снижению синтеза цитокинов.
Выводы
Как показывают результаты исследования, среди генетически неоднородных штаммов Mycobacterium tuberculosis, циркулирующих на территории г. Томска и Томской области, 19% проявляют множественную лекарственную устойчивость. Штаммы семейства Beijing составляют 27% от общей популяции возбудителя, уровень их множественной лекарственной устойчивости в 3 раза превышает таковой у «непекинских» штаммов. В основе дисбаланса субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови при Beijing-туберкулезе лежит снижение числа клеток CD3+, CD4+, CD45RA+ на фоне повышения количества лимфоцитов CD16+. Уровень продукции IL-2 клетками периферической крови при Bej'ing-туберкулезе значительно ниже, а уровень секреции IFNy, напротив, достоверно выше, чем при «не Be/j/'ng»-инфекции.
Таким образом, биологические свойства возбудителя в значительной степени сказываются на особенностях реагирования иммунокомпетентных клеток крови в процессе туберкулезного воспаления, модулируя характер специфического иммунного ответа. ш
Исследования выполнены в рамках реализации Федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009 - 2013 годы.
Литература
10.
11.
12.
Аксенова В.А., Леви Д.Т., Фонина Е.В., Вундцеттель Н.Н. Вакцинопро-филактика туберкулеза: значение и проблемы // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 2009. № 1. С. 10 - 16. Балабанова Я.М., Николаевский В.В., Радди М. и др. Преобладание штаммов Mycobacterium tuberculosis семейства Beijing и факторы риска их трансмиссии в Самарской области // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 2006. № 2. С. 31 - 36.
Баранов А.А., Марьяндышев А.О. Применение методов молекулярной биологии для исследования микобактерий туберкулеза // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 2008. № 4. С. 3 - 7. Бурмейстер Г.-Р., Пецутто А. Наглядная иммунология. - М.: БИНОМ, Лаборатория знаний, 2007. - 320 с.
Воронкова О.В., Уразова О.И., Новицкий В.В. и др. Иммунопатология туберкулеза легких. - Томск: Изд-во Томского ун-та, 2007. - 194 с. Ешану В.С. Цитокины и их биологические эффекты при некоторых болезнях печени // Клинические аспекты гастроэнтерологии и гепато-логии. 2004. № 5 . С. 11 - 16.
Иванов И.Ю., Степаншина В.Н., Липин М.Ю. и др. Сполиготипы клинических штаммов Mycobacterium tuberculosis, выделенных у больных туберкулезом в Центральном регионе России // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 2004. № 4. С. 23 - 27. Костромин А.П. Влияние различных доз туберкулина на реакцию бласт-трансформации лимфоцитов при экспериментальном туберкулезе у морских свинок // Проблемы туберкулеза. 1980. № 9. С. 66 - 69.
Лихошвай Е.Ю., Курепина Н.Е., Синсаймер Д. и др. Анализ хромосомных делеций TBD1, RD6 и PKS15/1 клинических штаммов Mycobacterium tuberculosis // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2006. № 3. С. 30 - 35.
Маничева О.А., Ласунская Е.Б., Журавлев В.Ю. Лекарственная чувствительность Mycobacterium tuberculosis в сопоставлении с их жизнеспособностью, цитотоксичностью, генотипом и течением процесса у больных туберкулезом органов дыхания // Проблемы туберкулеза. 2008. № 12. С. 18 - 22.
Марьяндышев А.О., Тунгусова О.С., Баранов А.А. Молекулярная эпидемиология туберкулеза в Баренц-регионе Российской Федерации // Медицинский академический журнал. 2007. Т. 7. № 4. С. 59 - 69. Медведева Т.В., Огарков О.Б., Кипелов О.М. и др. MIRU-VNTR-генотипирование штаммов Mycobacterium tuberculosis в Восточной Сибири: семейство Beijing против Kilimanjaro // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2004. № 4. С. 33 - 37. Мишин В.Ю., Круглова Е.Г. Ферменты лимфоцитов, активность пе-рекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты у больных туберкулезом легких // Проблемы туберкулеза. 1992. № 9 - 10. С. 38 - 41.
14. Мишин В.Ю., Чуканов В.И. Клинические проявления и особенности лечения остро прогрессирующих форм туберкулеза легких в современных условиях // Российский медицинский журнал. 2000. № 5. С. 13 - 17.
15. Новицкий В.В., Воронкова О.В., Уразова О.И. и др. К вопросу о патологии иммунитета при туберкулезе легких // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2008. № 1. С. 15 - 18.
16. Огарков О.Б., Медведева Т.В., Zozio T. и др. Молекулярное типирова-ние штаммов микобактерий туберкулеза в Иркутской области (Восточная Сибирь) в 2000 - 2005 гг. // Молекулярная медицина. 2007. № 2. С. 33 - 38.
17. Салина Т.Ю., Худзик Л.Б. Иммунопатогенетические механизмы в течении туберкулезной инфекции // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 2001. № 8. С. 32 - 34.
18. Слабнов Ю.Д., Визель А.А., Черепнев Г.В. и др. Применение системного иммуномодулятора ксимедона при деструктивных формах туберкулеза легких // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 2000. № 3. С. 28 - 32.
19. Сурикова О.В., Войтих Д.В., Кузьмичева Г.А. и др. Дифференциация микобактерий туберкулеза семейства W-Beijing, распространенных на территории Российской Федерации, на основании VNTR-типирования // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2005. № 3. С. 23 - 29.
20. Тунгусова О.С., Марьяндышев А.О., Каугант Д.А. и др. Влияние лекарственной устойчивости на фитнес микобактерий туберкулеза генотипа W-Beijing // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 2005. № 8. С. 46 - 50.
21. Фрейдлин И.С., Тотолян А.А. Клетки иммунной системы. - СПб.: Наука, 2001. - 390 с.
22. Фрейдлин И.С. Современные представления о фагоцитарной теории // Иммунология. 2008. № 5. С. 4 - 10.
23. Черноусова Л.Н., Андреевская С.Н., Смирнова Т.Г. и др. Генотипиро-вание микобактерий, выделенных от больных туберкулезом из пенитенциарного учреждения // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 2001. № 7. С. 60 - 62.
24. Шемякин И.Г., Степаншина В.Н. Генетические особенности современных микобактерий туберкулезного комплекса // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2006. № 6. С. 71 - 76.
25. Шемякин И.Г., Степаншина В.Н., Иванов И.Ю. и др. Характеристика клинических изолятов Mycobacterium tuberculosis с использованием молекулярно-биологических методов // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2003. № 1. С. 32 - 40.
26. Cowan L. S., Mosher L., Diem L. et al. Variable-number tandem repeat typing of Mycobacterium tuberculosis isolates with low copy numbers of IS6110 by using mycobacterial interspersed repetitive units // J. Clin. Microbiol. 2002. V. 40 (5). P. 1592 - 1602.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
27. Djelouadji Z., Arnold C., Gharbia S. et al. Multispacer sequence typing for Mycobacterium tuberculosis genotyping // PLoS ONE. 2008. V. 3 (6). P. e2433 - e2439.
28. Drobniewski F., Balabanova Y., Ruddy M. et al. Rifampicin and multidrug-resistant tuberculosis in Russian civilians and prison inmates: dominance of the Beijing strain family // Emerg. Infect. Dis. 2002. V. 8. P 1320 - 1326.
29. Glynn J.R., Whiteley J., Pablo J. et al. Worldwild occurrence of Beijing/W strains of Mycobacterium tuberculosis: A systematic review // Emerg. Infect. Dis. 2002. V. 8 (8). P. 843 - 849.
30. Han H., Wang F., Xiao Y. et al. Utility of mycobacterial interspersed repetitive unit typing for differentiating M. tuberculosis isolates in Wuhan, China // J. Clin. Microbiol. 2007. V. 56. P. 1219 - 1223.
31. Mazars E., Lesjean S., Banuls A.L. et al. High-resolution minisatellite-based typing as a portable approach to global analysis of Mycobacterium tuberculosis molecular epidemiology // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. V. 98 (4). P. 1901 - 1906.
32. Mokrousov I., Narvskaya O., Otten T. et al. Phylogenetic reconstruction within Mycobacterium tuberculosis Beijing genotype in north-western Russia // Res. Microbial. 2002. V. 153. P. 629 - 637.
33. Morris S.C., Heidorn S.M., De'Broskl R. et al. Endogenously produced IL-4 nonredundantly stimulates CD8+ T cell proliferation // The Journal of Immunology. 2009. V. 182. P. 1429 - 1438.
34. Rad M.E., Bifani P., Martin C. et al. Mutations in putative mutator genes of Mycobacterium tuberculosis strains of the W-Beijingfamily // Emerg. Infect. Dis. 2003. V. 9 (7). P. 838 - 845.
35. Shemyakin I.G., Stepanshina V.N., Ivanov I.Y. et al. Characterization of drug-resistant isolates of Mycobacterium tuberculosis derived from Russian inmates // Int. J. Lung Dis. 2004. V. 8 (10). P. 1194 - 1203.
36. Supply P., Lesjean S., Savine E. et al. Automated high-through put genotyping for study of global epidemiology of Mycobacterium tuberculosis based on mycobacterial interspread repetitive units // J. Clin. Microbiol. 2001. V. 39 (10). P. 3563 - 3571.
37. Van Rie A., Warren R., Richardson M. et al. Exogenous reinfection as a cause of recurrent tuberculosis after curative treatment // N. Engl. J. Med. 2001. V. 341. P. 1174 - 1179.
38. Ulmer A.J., Flad H., Rietschel T. et al. Induction of proliferation and cytokine production in human T-lymphocytes by lipopolysaccharide (LPS) // Toxicology. 2000. V. 152. P. 37 - 45.
ИНФОРМАЦИЯ РОСПОТРЕБНАДЗОРА
О взаимодействии территориальных органов и учреждений Роспотребнадзора с Референс-центром по мониторингу за бактериальными менингитами
Письмо от 29.06.2010 г. № 01/9620-0-32
В целях повышения качества и эффективности эпидемиологического надзора за менингококковой инфекцией (МИ) и гнойными бактериальными менингитами (ГБМ) приказом Роспотребнадзора от 17.03.2008 № 88 «О мерах по совершенствованию мониторинга за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней» на базе ФГУН «Центральный НИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора создан Референс-центр по мониторингу за бактериальными менингитами (далее - Центр).
Ежегодно рядом субъектов Российской Федерации в Центр представляется информация о заболеваемости МИ и ГБМ в соответствии с единой формой персонифицированного учета больных, разработанной и внедренной Центром. Обработка специалистами Центра полученных углубленных данных о заболеваемости наряду с данными формы № 2 федерального государственного статистического наблюдения позволяет проводить многофакторный эпидемиологический анализ случаев заболеваний МИ и ГБМ, определять наиболее неблагополучные территории, выявлять группы риска и готовить рекомендации по совершенствованию эпидемиологического надзора за МИ и ГБМ. Аналитический материал, подготовленный Центром, направляется во все регионы страны для использования в работе.
Анализ заболеваемости МИ в Российской Федерации, проведенный Центром, показал, что, несмотря на продолжающийся межэпидемический период, заболеваемость регистрируется практически повсеместно, за исключением некоторых субъектов (Республики Тыва, Калмыкия, Ингушетия, Чеченская Республика, Чукотский и Ненецкий автономные округа), где в течение двух-трех последних лет генерализованные формы менингококко-вой инфекции (ГФМИ) не выявлялись.
По данным формы № 2 федерального государственного статистического наблюдения, за последние три года (2007 - 2009 гг.) число ГФМИ в целом по Российской Федерации снизилось с 2246 (1,58 на 100 тыс. населения) до 1795 (1,26 на 100 тыс. населения), а число ле-
тальных исходов уменьшилось с 293 (0,21 на 100 тыс. населения) до 239 случаев (0,17 на 100 тыс. населения). Снижение заболеваемости ГФМИ за указанный период отмечено в большинстве (54 - 62%) субъектов Российской Федерации, вместе с тем на отдельных территориях уровни заболеваемости ГФМИ превышают средний показатель по стране в два и более раза. Так, в Астраханской области, в Еврейской автономной области и Хабаровском крае в 2008 - 2009 годах зарегистрированы наиболее высокие показатели заболеваемости ГФМИ - от 2,35 до 8,2 на 100 тыс. населения при среднефеде-ральном уровне 1,3 - 1,5. При этом в Астраханской области и Хабаровском крае устойчиво высокие показатели заболеваемости отмечаются на протяжении последних восьми лет наблюдения, в связи с чем для оценки степени напряженности эпидемического процесса МИ в этих субъектах требуется углубленное изучение ситуации.
Результаты обработки данных, поступивших в Центр в порядке взаимодействия с 47 субъектами страны (опорными базами Центра), показали, что абсолютное число случаев ГФМИ и ГБМ за 2008 год составило 2641, из которых 1455 случаев - ГФМИ, а 1186 - ГБМ не менингококковой этиологии (вызванные пневмококками, гемофильной палочкой типа Ь и другими возбудителями).
По результатам анализа установлено, что в этиологической структуре бактериальных менингитов (БМ) преобладали менингококки - 65%, на долю пневмококков пришлось 14%, гемофильной палочки типа Ь - 8%, доля прочих возбудителей составила 13%. Вместе с тем этиологическая структура БМ у детей до 5 лет, по обобщенным данным опорных баз Центра за 2008 год, отличалась от этиологического пейзажа суммарных показателей по всем возрастным группам. Так, в этиологии «детских» расшифрованных менингитов (дети до 5 лет) преобладали менингококки - 65,9%, на втором месте - гемофильная палочка типа Ь - 17,5%, на третьем - пневмококки - 6,0% и далее прочие возбудители - 10,6%.
(Продолжение на стр. 23)
