CC BY
92
УДК 581.84. 577:543.53 ЭЛЕМЕНТНЫЙ СОСТАВ AGRIMONIA PILOSA LEDEB.
© М.Г. Ханина, М.А. Ханина , А.П. Родин
Новосибирский государственный медицинский университет, ул. Красный проспект, 52, Новосибирск, 630091 (Россия) e-mail:[email protected]
Методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой исследован состав и содержание макро- и микроэлементов в образцах надземной части репейничка волосистого, собранных из разных точек ареала (Юго-Западная и Северо-Восточная Сибирь, европейская часть России), и в сухом экстракте, полученном из надземной части растения. Обнаружено 64 элемента. По качественному составу элементов исследуемые образцы надземной части растения и сухого экстракта не различаются, различие наблюдается в количественном содержании отдельных компонентов.
Ключевые слова: макро- микроэлементы, Agrmomа pilosa Ledeb., надземная часть, сухой экстракт.
Введение
Впервые на особую роль химических элементов в биологических процессах указал основатель отечественной геохимии академик В.И. Вернадский. Им создано учение, согласно которому химические элементы неживой и живой материи связаны, ряд элементов жизненно необходим любому живому организму и без их достаточного количества не могут протекать основные физиолого-биохимические реакции живого организма. Столь ответственная роль микроэлементов объясняется тем, что они входят в состав дыхательных пигментов, витаминов, гормонов, ферментов и коферментов, участвующих в регуляции жизненных процессов. Микроэлементы влияют на направленность действия ферментов и их активность, в связи с этим их называют катализаторами катализаторов. В настоящее время накоплено множество данных, подтверждающих зависимость элементного состава живых организмов, в том числе человека, от содержания химических элементов в среде обитания [1].
Изучение элементного состава растений необходимо для более полной характеристики распределения химических элементов в природных и антропогенных ландшафтах, поскольку растения являются важнейшим звеном биологического круговорота веществ. С практической точки зрения сведения о химическом составе пищевых и лекарственных растений необходимы как для сбалансированного питания человека, так и для профилактики и лечении заболеваний, связанных с дисэлементозами.
В растениях обнаружено свыше 80 химических элементов, их классифицируют на макро- и микроэлементы. Такое деление осуществляют по принципу количественного содержания элемента в тканях организма. Закономерности распространения химических элементов в растениях аналогичны таковым в земной коре, что свидетельствует о «земном» генезисе элементов в растительных тканях и тесной связи между распространенностью элементов в растениях и земной коре с атомным номером элемента. [2]. Согласно другой классификации химические элементы условно объединяют в три группы: к первой отнесены необходимые для жизни (Са, №, К, Mg, 2п, Си, Fe, Si, Сг, Ва, Li, № и др.), вторая объединяет - не включенные в биохимические процессы организмов (Ве, Sc, Y, 2г, N4 №, Та, ТЬ, ТЪ, Ег, Sm, Но, Щ La и др), третья - токсичные даже в низких концентрациях (РЬ, As, Se, Ag, ^, W, С4 Т1, Bi и др.) [3].
В организме человека обнаружено более 80 элементов, 30 из которых являются обязательными - жизненно необходимыми, роль других к настоящему времени еще не достаточно изучена. Для нормального функционирования организма человека макро- и микроэлементы требуются лишь в оптимальных количествах, отсутствие
* Автор, с которы следует вести переписку.
или недостаток минеральных веществ в питании так же, как и их избыток, вызывают резкое нарушение обмена веществ и как следствие - заболевание и даже гибель [4, 5]. Изменения состава и содержания макро- и микроэлементов в организме человека вызывает немедленный отклик отдельных его систем. Например, выявлены зависимости между содержанием кадмия в крови и НСТ-тестом (выраженностью «респираторного взрыва»), содержанием в крови магния и кальция и фагоцитарной активностью лейкоцитов, и обратная зависимость между концентрацией марганца в крови с уровнем сывороточных иммуноглобулинов [6]. При обнаружении признаков дисэлементозов на ранней стадии можно провести коррекцию элементного баланса в организме путем медикаментозной терапии или введением в рацион питания различных микронутриентов.
Выявлено, что биологической ценностью обладают лишь доступные биогенные элементы, содержащиеся в пищевых продуктах, лекарственном растительном сырье и продуктах их переработки в виде солей органических кислот и других растворимых химических соединениях, чаще всего комплексных. К биогенным элементам отнесены: К, №, Mg, Са, Р, N О, С, С1, Fe, Мп, 2п, Со, V, Сг, №, Си, Мо, I, Se, Si, F, Вг, А и, возможно, Sn [7].
Исследование элементного состава сырьевой части перспективных для внедрения в медицинскую практику лекарственных растений является востребованным, так как известно, что макро- и микроэлементы, входящие в состав растения оказывают немаловажное влияние на проявление биологической активности суммарных извлечений, получаемых из них [2]. В этом плане представляет интерес репейничек волосистый (Agrimonia рйова Ledeb.) сем. Rosaceae.
Р. волосистый - многолетнее травянистое растение, широко распространенное в европейской части России, на территории Западной и Восточной Сибири, Дальнего Востока [8, 9]. В народной и традиционной медицине все части растения применяются при широком спектре заболеваний (желчегонное, противовоспалительное, антиаритмическое, гипогликемическое, антигельминтное, анальгетическое, гемостатическое, антигипертоническое, антитоксическое, противораковое) [10-14]. В европейских странах виды Agrimonia являются официнальными лекарственными растениями и используются в практической медицине как вяжущее, противовоспалительное средство [15].
Надо отметить, что Agrimonia pilosa привлекает внимание ученых. Экспериментально доказано, что данный вид обладает антиоксидантной [16], противовирусной [17], сосудорасширяющей [18], гепатопротектор-ной [19, 20], противораковой [21], иммуномоделирующей [22], антибактериальной [23] активностью, улучшает реологические свойства крови [24], восстанавливает нарушенный в мозге крыс при экспериментальном гепатите баланс ионов натрия, кальция и калия [25]. Столь широкий спектр биологической активности обусловлен комплексом биологически активных веществ. В надземной части А. pilosa обнаружены вещества фенольной природы (флавоноиды, дубильные вещества, кумарины, изокумарины, оксикоричные кислоты), тритерпеноиды, эфирное масло, полисахариды и др. [14, 26-31]. В подземных органах растения обнаружены медь, цинк, железо, ванадий, никель, хром, титан, марганец, стронций, цирконий, серебро [32]. Сведения о качественном составе и количественном содержании макро- и микроэлементов в надземной части в доступных источниках информации нами не установлены.
При оценке перспективности лекарственного растения важно изучить компонентный состав и количественное содержание основных групп биологически активных веществ и химических элементов не только сырьевой части данного растения, но и суммарных комплексов (экстемпоральных, галеновых), получаемых из него.
Цель нашего исследования - изучение элементного состава надземной части р. волосистого и сухого экстракта, полученного из него.
Материалы и методы
Материал для исследований (надземная часть A.pilosa) был собран в естественных местах произрастания в лесостепной и степной зонах Республики Бурятия, Алтайского края и Ярославской области. Характеристика образцов, взятых для анализа, представлена в таблице 1.
Определение качественного состава и количественного содержания макро- и микроэлементов проводилось методом масс-спектроскопии с индуктивно связанной плазмой на приборе «ELAN-DRC» в ООО «Химикоаналитический центр «ПЛАЗМА» (Томск). Высушенные образцы сырья и экстракта измельчали до частиц размером менее 1 мм, предварительно подвергали мокрому озолению смесью кислот в фарфоровых тиглях. Контроль проводился методом добавок. [33]. Сухой экстракт получали по следующей методике: воздушносухое сырье трижды экстрагировали на водяной бане при кипении экстрагента (20% спирт этиловый) в течение 30 мин., объединенные фильтраты лиофилизировали при щадящем температурном режиме (40 °С).
Таблица 1. Характеристика исследованных образцов Agrimoma ріІо.\а ЬесІеЬ.
№ образца Характеристика места и времени сбора образцов, фазы развития и частей растения Влажность, % Зола общая, % Зола нерастворимая в 10% НС1, %
1 Надземная часть, фаза цветения, Республика Бурятия, северо-восточное побережье Байкала, окр. с. Кумора, подножье г. Шаман (18.07.2006) 6,5 7,8 0,45
2 Надземная часть, фаза цветения, Ярославская область, правый берег Волги, окр. п. Скобыкино, смешанный лес (04.06.06) 6,7 8,3 0,43
3 Надземная часть, фаза цветения, Алтайский край, окр. Белоку-рихи, склон г. Церковка (02.09.06) 7,0 8,5 0,41
4 Сухой экстракт 14,9 19,7 0,00
Примечания: содержание золы общей и золы, нерастворимой в 10% растворе хлороводородной кислоты приведен в % в пересчете на вес абсолютно сухого сырья.
Результаты и обсуждение
Образцы растений, собранные из разных точек ареала, не имели отклонений во внешних признаках вегетативных и генеративных органов и визуально не различались.
Сухой экстракт, полученный из надземной части. 1.рИо.\а. представляет собой аморфный порошок коричневого цвета, со слабым запахом и приятным горьковатым вкусом. Легко растворяется в воде, гигроскопичен.
Показатели зольности (зола общая и зола нерастворимая в 10% растворе кислоты хлористоводородной) у анализируемых образцов надземной части растения близки вне зависимости от места сбора. В сухом экстракте золы общей содержится в 2 раза больше чем в исходном сырье и выявлено отсутствие золы нерастворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной (табл. 1).
В надземной части р. волосистого обнаружены 64 элемента (табл. 2), из них: 4 макроэлемента (№,
К, Са), 9 жизненно необходимых (Бе, Zn. Си, Мп, Мо, Со, Сг, 8е, I), 7 условно жизненно необходимых (В, 81, №, V, Вг, Ав, 1л), 15 токсичных микроэлементов (8п, Ag, 8г, Т1 А1, РЬ, Сс1, Т1, РЬ, Вк Ве, Те, Аи, Ва) и 29 элементов, физиологическая роль которых в настоящее время не изучена.
Известно, что содержание макро- и микроэлементов в растениях варьирует в широких пределах в зависимости от анализируемого органа, фазы развития растения и при изменении ландшафтно-геохимических условий их произрастания [34]. При сравнительном анализе образцов р. волосистого, собранных на территории Юго-Западной (Алтайский край), Северо-Восточной Сибири (Республика Бурятия) и в европейской части России (Ярославская область), нами было установлено, что они по качественному составу элементов не различаются; отмечено варьирование в содержании отдельных жизненно важных и токсичных элементов (Бе, Мо, Сс1, Ва, 1л, РЬ) в зависимости от места сбора (табл.2). Содержание необходимых для жизни элементов (Са, №, К, 1У^, Zn. Си, Бс. 81, Сг, Ва, П, N1) в исследуемых образцах р. волосистого сопоставимо и соответствует значениям среднего содержания элементов в растениях по В.В. Добровольскому [35].
Известно, что в живых организмах существуют определенные корреляционные зависимости между отдельными элементами, в соответствии с которыми содержание одного элемента обусловливает содержание другого [34]. В надземной части р. волосистого нами выявлена прямая корреляционная связь между содержанием стронция и бария и обратная - между содержанием молибдена и свинца (табл. 2). Для элементов, не включенных в биохимические процессы (8с, У, Ъх, N(1, №>, Та, ТЬ, ТИ. Ег, 8т, Но, НГ. Ьа и др.), в р. волосистом отмечено незначительное варьирование содержания в зависимости от места произрастания.
Содержание токсичных элементов в надземной части А.рйова не превышает ПДК, принятых для чая и напитков (табл. 2) за исключением свинца в образце 3 [36].
Сухой экстракт по качественному составу элементов соответствует надземной части (табл. 2). При сравнительном анализе надземной части р.волосистого и сухого экстракта по количественному содержанию элементов, выявлено следующее: сухой экстракт превосходит исходное сырье по содержанию макроэлементов (№, К, М£), отдельных жизненно важных элементов (Ъ\\. Мп, 8е, I, Вг) и токсичных (Ав), уступает по содержанию Са.
Содержание токсичных элементов в экстракте из надземной части А/>/7о.га не превышает ПДК, принятых для чая и напитков.
Таблица 2. Содержание макро- и микроэлементов в надземной части Agrimoniapilosa в зависимости от места сбора и в сухом экстракте (в % на воздушно-сухое сырье)
Элемент Порядок величин Исследуемые образцы ПДК (СанПиН 2.3.2.560-96)
1 2 3 4 Чай Напитки
1 2 3 4 5 6 7 8
Li 10-5 0,43 0,43 4,1 1,3
Be 10-5 <0,01 0,094 0,27 0,44 - -
В 10-4 20,0 14,6 33,2 47,7 - -
№ 10-3 7,54 4,76 10,5 17,6 - -
Mg 10-2 23,17 37,71 23,61 63,95 - -
А1 10-2 1,06 0,791 5,08 1,67 - -
Si 10-2 8,05 6,11 12,40 52,58 - -
К 10-2 29,16 40,17 37,89 555,53 - -
Са 10-2 76,75 90,14 93,70 63,59 - -
Sc 10-4 0,26 0,45 0,41 - - -
Ti 10-4 4,4 3,6 16,5 11,3 - -
V 10-4 0,35 0,68 0,80 1,58 - -
Сг 10-4 3,7 5,6 5,08 2,09 - -
Мп 10-4 15,9 29,8 26,66 41,3 - -
Fe 10-2 1,06 1,27 2,51 1,01 - -
Со 10-4 0,77 1,1 1,0 1,25 - -
Ni 10-4 1,2 1,2 0,89 4,89 - -
Си 10-4 5,7 10,3 8,19 6,54 -
7п 10-4 16,1 26,3 16,49 44,7 - 10,0
Ga 10-4 0,042 0,038 0,133 0,21 - -
Ge 10-5 0,019 0,056 0,13 0,09 - -
А8 10-4 0,23 0,51 0,46 2,32 - -
Se 10-4 0,140 0,037 0,122 0,46 - -
Вг 10-4 70,8 18,0 20,3 108,3 - -
ЯЬ 10-4 8,4 14,7 6,0 19,9 - -
Sг 10-4 89,7 15,0 102 17,5 - -
У 10-5 0,37 0,22 1,07 0,42 - -
гг 10-4 0,070 0,167 0,39 0,35 - -
NЬ 10-5 0,12 0,20 0,69 0,27 - -
Мо 10-4 3,9 0,29 0,24 0,091 - -
Ag 10-5 0,38 0,19 0,51 3,9 - -
Cd 10-4 0,024 0,016 0,30 0,049 1,0 0,03
1п 10-5 <0,1 <0,1 0,06 0,02 - -
Sn 10-4 0,018 0,015 0,040 1,57 - -
SЬ 10-4 0,010 0,016 0,013 0,318 - -
Te 10-4 0,0019 <0,01 <0,01 <0,01 - -
I 10-4 0,40 0,25 0,23 1,73 - -
С8 10-5 0,18 0,11 0,62 0,17 - -
Ва 10-4 12,0 4,2 40,0 13,5 - -
La 10-4 0,129 0,049 0,52 0,072 - -
Ce 10-4 0,183 0,071 0,77 0,16 - -
Рг 10-5 0,19 0,11 0,68 0,14 - -
Nd 10-4 0,069 0,029 0,23 0,047 - -
Sm 10-5 0,11 0,060 0,36 0,076 - -
Еи 10-5 0,40 0,10 0,80 <0,1 - -
Gd 10-5 0,11 0,063 0,36 0,121 - -
ТЬ 10-5 0,13 0,10 0,47 0,16 - -
Бу 10-5 0,063 0,047 0,22 0,061 - -
Но 10-6 0,09 0,08 0,43 0,15 - -
Ег 10-6 0,30 0,17 0,97 0,44 - -
Тт 10-6 0,05 0,03 0,15 0,07 - -
УЬ 10-6 0,24 0,20 0,90 0,43 - -
Lu 10-5 0,04 0,04 0,15 0,06 - -
Ш 10-6 0,18 0,45 0,94 0,46 - -
Та 10-6 0,09 0,09 0,44 0,54 - -
W 10-4 0,90 0,024 0,010 0,034 - -
Re 10-5 <0,01 <0,01 <0,01 <0,1 - -
Продолжение таблицы 2
1 2 3 4 5 6 7 8
Au 10-6 0,11 0,07 <0,1 0,10 - -
Hg 10-5 0,060 0,39 0,048 0,076 - -
Tl 10-5 0,12 0,12 0,62 0,54 - -
Pb 10-4 0,091 0,135 0,89 0,27 10,0 0,3
Bi 10-4 0,018 0,0078 0,018 0,14 - -
Th 10-4 0,014 0,0074 0,110 0,020 - -
U 10-5 0,045 0,044 0,19 0,087 - -
Заключение
Таким образом, проведенные исследования элементного состава надземной части Agrimonia pilosa показали, что исследуемый вид растения является перспективным источником макро- и микроэлементов. В надземной части р. волосистого установлено наличие 64 элементов, включающих макроэлементы (4 элемента), жизненно необходимые (9 элементов), условно жизненно необходимые (7 элементов), токсичные (15 элементов) и элементы, биологическая роль которых для человека в настоящее время не установлена (29 элементов). По качественному составу и количественному содержанию элементов образцы растений, собранные из разных точек ареала (Юго-Западная Сибирь, Северо-Восточная Сибирь, Европейская часть России) существенно не различаются. Сухой экстракт A. pilosa по качественному составу элементов соответствует надземной части растения, но превосходит ее по содержанию макроэлементов (Na, Mg, K) и жизненно важных элементов (Zn, Mn, Se, I). По содержанию токсичных элементов надземная часть и экстракт A.pilosa не превышают ПДК, принятых для чая и напитков.
Список литературы
1. Скальный А.В. Химические элементы в физиологии и экологии человека. М., 2004. 215 с.
2. Кукушкин Ю.Н. Химические элемнты в организме человека // Соросовский образовательный журнал. 1998. №5. С. 54-58.
3. Битюцкий Н.П. Необходимые микроэлементы растений. СПб., 2005. 256 с.
4. Авцын А.П., Жаворонков А.А., Риш М.А., Строчкова Л.С. Микроэлементозы человека. М., 1991. 496 с.
5. Скальный А.В., Быков А.Т. Эколого-физиологический аспект применения макро- и микроэлементов в восстановительной медицине. Оренбург, 2003. 198 с.
6. Туматова А.Л., Канунова Р.А. Способ определения изменений в биологической системе макро- и микроэле-ментного гомеостаза у человека при различных заболеваниях // Успехи современного естествознания. 2006. №9. С. 64-65.
7. Крисс Е.Е., Волченскова И.И., Григорьева А.С., Коханович Н.Ф. Координационные соединения металлов в медицине. Киев, 1986. 216 с.
8. Крылов П.Н. Флора Западной Сибири. Томск, 1949. Вып. 2 . С. 284-287.
9. Шретер А.И. Лекарственная флора Советского Дальнего Востока. М., 1975. С. 152.
10. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование. Семейства Hydrangeaceae - Haloragaceae / под ред. П.Д. Соколова. Л., 1987. C. 19-21.
11. Фроули Давид. Аюрведическая терапия: пер. с англ. 2-е изд. М., 2001. 448 с.
12. Минаева В.Г. Лекарственные растения Сибири. Новосибирск, 1991. 431 с.
13. «Джуд-ши» - памятник средневековой тибетской культуры: пер.с тиб. / предисл. Д.Б. Дашиева, С.М. Николаева. Новосибирск, 1988. 349 с.
14. Hong G., Dai Y.-H., Liu P.-X., Shen X., Wei Y.-Y., Li G. Advances in research on chemical constituents and pharmacological activities of Agrimonia pilosa // Pharmaceutical Care and Research. 2008. V. 8. N5. Pp. 362-366.
15. British Herbal Pharmacopoeia, 1996. 212 p.
16. He C., Ji X., Pan Y. , Wang H., Wang K., Liang M., Yang L. Antioxidant activity of alcoholic extract of Agrimonia pilosa Ledeb // Medicinal Chemistry Research. 2009. Pp. 1-14.
17. Kwon D.H. , Kwon H.Y., Kim H.J., Chang E.J., Kim M.B., Yoon S.K., Song E.Y., Yoon D.Y., Lee Y.H., Choi I.S., Choi Y.K. Inhibition of hepatitis B virus by an aqueous extract of Agrimonia eupatoria L. // Phytotherapy Research. 2005. V. 19. N4. Pp. 355-358.
18. Hua C.L., Lee J.K., Cho K.H., Kang D.G. , Kwon T.O., Kwon J.W., Kim J.S., Sohn E.J., Lee H.S. Mechanism for the vascular relaxation induced by butanol extract of Agrimonia pilosa // Korean Journal of Pharmacognosy, 2006. V. 37. N2. Pp. 67-73.
19. Park E.-J., Oh H., Kang T.-H., Sohn D.-H., Kim Y.-C. An isocoumarin with hepatoprotective activity in Hep G2 and primary hepatocytes from Agrimonia pilosa // Archives of Pharmacal Research. 2004. V. 27. N9. Pp. 944-946.
20. Дудко В.В., Дегиль Н.Ю., Сапрыкина Э.В., Краснов Е.А., Бабиков В.Ю. Гепатопротекторная активность экстракта травы репешка волосистого // Фармация. 2009. №3. C. 41-43.
21. Murayama T., Kishi N., Koshiura R., Takagi K., Furukawa T., Miyamoto K.-I. Agrimoniin, an antitumor tannin of Agrimonia pilosa Ledeb., induces interleukin-1 // Anticancer Research, 1992. V. 12. N5. Pp. 1471-1474.
22. Bukovsky M., Blanarik P. Immunomodulative effects of ethanolic-aqueous extracts of Herba agrimoniae, Flos chamo-millae and Flos calendulae cum calyce // Farmaceuticky Obzor. 1994. V. 63. N4. Pp. 149-156
23. Карташова Г.С., Керашева С.И., Романова Г.В. Антибактериальная активность сухого экстракта из надземной части Agrimonia pilosa Ledeb. // Растительные ресурсы. 1998. Т. 34. Вып. 3. С. 100-103.
24. Хапкин И.С. Перспективы использования препаратов из растений для регуляции агрегатного состояния крови // Растительные ресурсы. 1994. Т. 30. Вып. 1-2. С. 86-90.
25. Дудко В.В., Новицкая Л.Н., Новожеева Т.П., Бабиков В.Ю., Марьясова Е.Ю. Влияние экстракта репешка волосистого на концентрацию ионов калия, натрия, кальция в мозге крыс на фоне экспериментального гепатита // Бюллетень сибирской медицины. 2006. С. 89-91.
26. Карташова Г.С., Гравель И.В., Таран Е.Г. Содержание дубильных веществ в Agrimonia pilosa Ledeb. // Растительные ресурсы. 1991. Т. 27. Вып. 1. С. 139-143.
27. Шухободский Б.А., Маркова Л.П., Кузьмина Л.В. Обследование растений флоры северо-запада РСФСР на содержание флавоноидов, кумаринов, проазуленов и других физиологически активных соединений // Биология и химия растений - источников фенольных соединений и алкалоидов. Л., 1972. Вып. 16. С. 117-135.
28. Wei Y., Ito Y. Isolation of hyperoside and luteolin-glucoside from agrimonia pilosa ledeb using stepwise elution by high-speed countercurrent chromatography//Journal of Liquid Chromatography and Related Technologies. 2007. V. 30. N9-10. Pp. 1465-1473.
29. Xu X., Qi X., Wang W., Chen G. Separation and determination of flavonoids in Agrimonia pilosa Ledeb. by capillary electrophoresis with electrochemical detection // Journal of Separation Science. 2005. V. 28. N7. Pp. 647-652.
30. Li Y.-W., Huang L.-F., Liang C., Guo Z.-M., Dai Y.-H., Wu M.-J., Zhong K.-J., Guo F.-Q., Liang Y.-Z. Analysis of the volatile components of Agrimonla Pilosa Ledeb by gas chromatography-mass spectrometry // Journal of Central South University (Science and Technology). 2007. V. 38. N3. Pp. 502-506.
31. Макарова Д.Л., Величко В.В., Ким Н.Е., Ханина М.Г., Ханина М.А. Фитохимическое исследование растений флоры Сибири // Фармация. 2008. №3. С. 19-22.
32. Лавренов В.К., Лавренова Г.В. 500 важнейших лекарственных растений. М., 2003. 510 с.
33. Томпсон М., Уолш Д.Н. Руководство по спектрометрическому анализу с индуктивно-связанной плазмой. М., 1988. 288 с.
34. Алексеенко В.А. Основные факторы накопления химических элементов организмами // Соросовский образовательный журнал. 2001. Т. 7. №8. С. 20-24.
35. Добровольский В.В. Основы биогеохимии. М., 1998. 413 с.
36. СанПиН 2.3.2.560-96 Продовольственное сырье и пищевые продукты. Гигиенические требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов. М., 1997. 270 с.
Поступило в редакцию 20 ноября 2009 г.
