CC BY
45
от индивидуальной стресс-устойчивости животного. Дальнейшие работы по уточнению данных закономерностей, по нашему мнению, позволят с помощью малоинвазивных методик динамически оценивать структурно-функциональное состояние нервных клеток и ЦНС в целом в условиях стресса различного генеза и при использовании фармакологических препаратов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Апчел В.Я., Цыган В.Н. Стресс и стрессустойчи-вость человека-СПб.: ВМА, 1999. - 86 с.
2. Владимиров Ю.А. Дизрегуляция мембран митохондрий, некроз и апоптоз. //Дизрегуляционная патология. Под ред. Г.Н. Крыжановского. — М.: Медицина, 2002. — С. 127—157.
3. Исмайлова Х.Ю., Агаев Т.М., Семенова Т.П. Индивидуальные особенности поведения (моноаминерги-
УДК 618.11 -006.6: 615.277.3
ческие механизмы). — Баку :Нурлан, 2007. — 228 с.
4. Комаров Ф.И., Коровкин В.Ф., Меньшиков В.В. Биохимические исследования в клинике. Элиста: Джан-гар, 1999. - 249 с.
5. Курашвили Л.В., Васильков В.Г. Липидный обмен при неотложных состояниях. — Пенза, 2003. — 198 с.
6. Новицкий В.В., Рязанцева Н.В., Степовая Е.А и др. Молекулярные нарушения мембраны эритроцитов при патологии разного генеза являются типовой реакцией организма: контуры проблемы. //Бюлл. Сибирск. мед. — 2006. — №2. — С. 62-69.
7. Покровский Е.А., Каргаполов А.В. Модификация метода тонкослойной хроматографии фосфолипидов // Лаб. дело. — 1971. — №6. — С. 337—341.
8. Пшенникова М.Г. Стресс: регуляторные системы и устойчивость к стрессорным повреждениям. /Дизре-гуляционная патология. Под ред. Г.Н. Крыжановско-го.— М.: Медицина, 2002. — С. 307—329.
9. Судаков К.В. Индивидуальная устойчивость к эмоциональному стрессу.— М.: Горизонт, 1998. — 267 с.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ОСНОВЫ РЕГИОНАРНОЙ ХИМИОТЕРАПИИ
ПРИ РАКЕ ЯИЧНИКОВ
Виталий Алексеевич Лиходед1, Гульшат Валиевна Хамитова2, Феликс Шамилевич Зайнуллин1 *, Шамиль Масгутович Хуснутдинов1
башкирский государственный медицинский университет, г. Уфа, Казанский государственный медицинский университет
Реферат
Изучен морфогенез перевивной опухоли меланомы В16 на мышах при локальном воздействии пролонгированного химиопрепарата 5-фторурацила. В подопытной группе животных при раннем введении данной лекарственной формы выявлена ее существенная противоопухолевая активность. Полученные результаты могут явиться предпосылкой для апробации лекарственной формы в клинике онкологии у больных раком яичников.
Ключевые слова: 5-фторурацил, рак, локорегионарная химиотерапия, пролонгированная лекарственная форма.
EXPERIMENTAL BASIS OF REGIONAL CHEMOTHERAPY FOR OVARIAN
CANCER
V. A. Likhoded', G. V. Khamitova2, F. Sh. Zainullin' *, Sh. M. Khusnutdinov' 1 Bashkir State Medical University, Ufa city,2 Kazan State Medical University
Summary
Studied was the morphogenesis of transplanted B16 melanoma tumors in mice by local effects of prolonged chemotherapy drug 5-fluorouracil. In the experimental group of animals with early introduction of this medicine revealed was its significant antitumor activity. The obtained results can be used as a precondition for testing this drug form in the oncology clinic in patients with ovarian cancer.
Key words: 5-fluorouracil, cancer, local chemotherapy, prolonged drug form.
Основной причиной смертности жен- репродуктивной системы. В структуре ского населения России от злокачест- онкогинекологической смертности жен-венных новообразований в последнее ского населения Российской Федерации десятилетие являются опухоли органов первое место занимает рак яичников [1].
В связи с низкой эффективностью резуль-
--татов комбинированного лечения — хи-
* Автор для переписки: fszu@mail.ru рургической резекции и адъювантной
химиотерапии, в последние годы многие исследователи обратились к внутри-брюшной химиотерапии для создания максимального накопления химиопре-парата в опухолевой ткани и снижения системной токсичности [4, 5]. Однако эффект данного метода проявляется в результате диффузии химиопрепарата только в поверхностном слое опухоли и достигается при размерах образования в пределах 1 см [3]. Результативность химиотерапии в послеоперационном периоде определяется многими факторами, среди которых превалирующее значение имеет объем остаточной опухоли. При наличии остаточных опухолей размерами более 2 см пятилетняя выживаемость составляет 9%, менее 2 см — 38%. Применение только системной послеоперационной химиотерапии в таких случаях не влияет на повышение выживаемости больных. Перспективным направлением в комплексном лечении больных раком яичников является дополнение системной химиотерапии локальными методами длительного направленного воздействия депонированных химиопрепаратов с использованием новых лекарственных форм.
С точки зрения создания высокой концентрации цитостатиков в опухоли альтернативой можно рассматривать локальную химиотерапию. Ее использование делает возможным создание высоких доз противоопухолевого препарата в очаге поражения при низкой концентрации противоопухолевого препарата в общем кровотоке. Повышение эффекта локальной химиотерапии может быть достигнуто за счет создания депо цитостатика, что исключает необходимость повторных курсов лекарственной терапии. Местное введение лекарственной формы химиопрепара-та с модифицированным освобождением обеспечивает повышение эффективности химиотерапии за счет увеличения как продолжительности действия лекарственного вещества путем замедленного его высвобождения, так и увеличения площади диффузии препарата.
С этой целью нами разработана технология инъекционной пролонгированной лекарственной формы с 5-фторурацилом 104
на основе современных вспомогательных веществ для локальной химиотерапии рака яичников в комплексном лечении. Изучение влияния пролонгированной лекарственной формы с 5-фторурацилом на перевивные опухоли, особенностей морфогенеза перевивной опухоли при локальном воздействии пролонгированного химиопрепарата является предпосылкой для клинической апробации лекарственной формы химиопрепарата.
Лекарственная форма для регионарной химиотерапии была разработана на кафедре фармацевтической технологии с курсом биотехнологии Башкирского государственного медицинского университета совместно с сотрудниками кафедры хирургии и онкологии (патент РФ №2366423) и содержит 5-фторурацил и инъекционный пролонгированный растворитель. При оценке лекарственной формы в экспериментах in vitro и in vivo наблюдалось равномерное высвобождение 5-фторурацила в течение 4 недель [2]. Для изучения ее влияния на перевивные опухоли проводились эксперименты на 20 взрослых 2-3-месячных мышах линии С57В1/6 разводки питомника РАМН «Пу-щино». Мыши содержались в виварии в соответствии с правилами Этического комитета РАМН. Животные получали стандартный гранулированный корм и имели свободный доступ к воде. Наблюдение за ними велось ежедневно, при этом оценивались активность питания, питья, чистки (грумминг), состояние шерстистого покрова, двигательная активность, масса тела. Меланотическая меланома В16 доставлена из НИИ ЭД и ТО ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН в контейнере с жидким азотом. Штаммы хранились в жидком азоте при температуре -196°С. После размораживания опухоли поддерживали в сингенных условиях на мышах линии B6 подкожными пассажами каждые 2 недели. День инокуляции опухолевых клеток принимали за 0. Определяли среднюю продолжительность жизни (СПЖ) после гибели всех мышей в группах, массу и размеры первичной опухоли. Объем опухолей вычисляли по формуле Vcp (см3) = а х b х с, в различные сроки после окончания ле-
чения. Вычисляли процент торможения роста опухоли (ТРО%) по формуле:
ТРО%= УУ х100,
УК
где Уо и Ук — значения Уср в опытной и контрольной группе. Кроме того, определяли увеличение продолжительности жизни (УПЖ%):
СПЖо-СПЖкх100,
УПЖ% СПЖк
где СПЖо и СПЖк — средняя продолжительность жизни в опыте и в контроле.
Патоморфоз перевивной опухоли изучали при локальном воздействии пролонгированного химиопрепарата. Опыты проводились на 20 трансгенных мышах линии С57В16, которым имплантировали перевивную опухоль — меланому В16 — под кожу правого бока. Подопытные животные были подразделены на 2 группы по 10 особей: 1-ю, контрольную, не лечили; мышам 2-й группы вводили по 1 мл нагретой до температуры 50оС лекарственной формы на следующий день после инокуляции, т.е. в 1-й день. После гибели животных проводилось их пато-морфологическое исследование.
Статистическую обработку материала производили с использованием пакета прикладных программ, оценивали среднюю арифметическую вариационного ряда (М), среднюю ошибку, среднюю арифметическую (т). Статистическую достоверность определяли методом вариационной статистики с применением t критерия Стьюдента. Достоверным считали различие между данными в основной группе и группе сравнения с уровнем доверительной вероятности 95% и выше.
Результаты, характеризующие противоопухолевую активность лекарственной формы при локальном ее введении, представлены в табл 1.
У всех мышей контрольной группы наблюдались быстрый рост перевивной опухоли, уменьшение двигательной активности, чистки (грумминга); продолжительность жизни составляла в среднем 18,4 дня.
После гибели животных обеих групп проводилось гистологическое исследование опухолевой ткани. По периферии
Таблица 1
Влияние лекарственной формы с 5-фторурацилом на рост и метастазирование меланомы В16
Показатели Контроль Эксперимент
Масса опухоли на 20-е сутки эксперимента, г 10,0±0,8 5,3±0,8*
Торможение роста опухоли, % — 68%*
Частота метастазирования % 100 66
Количество метастазов 20,5+2,3 8,7±2,6*
Увеличение продолжительности жизни — 78%
*р<0,05.
опухоли определялась соединительнотканная капсула с гранулематозным валом и небольшим количеством поли-морфноядерных лейкоцитов. Слой грануляций в ряде случаев достигал ширины 300 мкм. Эпидермис над опухолью был резко истонченным. В опухолях подопытных животных, подвергшихся воздействию химиотерапии, имел место довольно выраженный лечебный пато-морфоз, более сильный, чем в контроле, отек паренхимы. После введения лекарственной формы препарата нарастала дистрофия опухолевых клеток. Многие клетки содержали гиперхромные ядра. Появлялись клетки с микроядрами, усиливался внутриклеточный отек. Количественная плотность опухолевых клеток снизилась в 1,5 раза по сравнению с таковой в контроле.
Большинство ядер опухолевых клеток были увеличены в размерах, ядрышки гипертрофированы. Реже встречались клетки с конденсированным хроматином, наблюдались клетки с рассеиванием хромосом, мосты, многополюсные и асимметричные митозы. Количество патологических митозов составляло около 70%. Патологические митозы, как правило, являются летальными для клетки. В опухолях животных отмечались тяжи из некротизированных клеток, простиравшиеся в поверхностные отделы опухолевой ткани с образованием обширных массивов. В центре опухоли визуализировался преимущественно субтотальный некроз. В некоторых случаях некрозы занимали около 75% всей площади срезов. Вокруг зоны введения препарата определялся четкий некротический вал, отграниченный плазматическими клетками.
105
Таблица 2
Количественные характеристики исследованных параметров меланомы В16 (M±m)
Показатели, % Контрольная группа Экспериментальная группа
Митозы I МИТ 2,28±0,6 2,31±0,6
Апоптоз I АП 0,28±0,09 1,50±0,18*
Площадь некрозов (%) 30,2±30 54,7±7,8
*p<0,05 по сравнению с контролем.
Вокруг опухоли были сформированы выраженный гранулематозный вал и вал из отечной нежной соединительной ткани. В некоторых участках наблюдалось очаговое разрастание соединительной ткани. Между некротическими участками присутствовали скопления клеток с активной пролиферацией. Количество апоптозных клеток было увеличенным. Апоптозный индекс почти в 8 раз превышал уровень спонтанной гибели опухолевых клеток в контрольной группе (табл.2). В паренхиме выявлялось значительное количество клеток в ранней стадии апоптоза. В периферической зоне
индекс апоптоза достигал 2,5%.
Таким образом, по результатам экспериментов и морфологических исследований продемонстрирована противоопухолевая активность пролонгированной лекарственной формы с 5-фторурацилом в отношении перевивных опухолей. Полученные результаты могут послужить экспериментальным обоснованием для клинической апробации разработанной лекарственной формы.
ЛИТЕРАТУРА
1. Злокачественные новообразования в России и странах СНГ в 2005 г. / Под ред. М.И.Давыдова, Е.М. Аксель. — М.: Мед. информ. агентство, 2007 — 268 с.
2. Хамитова Г.В. Идентификация освобождения 5-фторурацила из пролонгированной лекарственной формы для локорегионарной химиотерапии рака яичников в эксперименте in vivo // Перм. мед. ж. — 2008. — №5 (25). — С. 55-58.
3. Markman M. The role of intraperitoneal chemotherapy in ovarian cancer // Clin. Adv. Hematol. Oncol. — 2006. — Vol.4(11). — P.809—810.
4. Runowicz C.D. Intraperitoneal chemotherapy in ovarian cancer: an update // Cancer J. — 2008. — Vol. 14(1).—P.7—9.
5. Vergote I., Amant F, Leunen K et al. Intraperitoneal Chemotherapy in Patients with Advanced Ovarian Cancer // Oncologist. — 2008. — Vol.13(4). — P.410—414.
